CN105218625A - 异喹啉类衍生物,其制备,纳米结构,活性和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl諅及其制备方法，公开了它们的纳米结构，公开了它们抑制肿瘤细胞增殖的活性，进一步公开了它们抑制S180实体瘤在小鼠体内的肿瘤增值抑制活性。因而本发明阐明了它们在制备抗肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl。涉及它们的制备方法，涉及它们体外抑制肿瘤细胞增殖的活性，进一步涉及它们对荷S180小鼠肿瘤生长的抑制作用。因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
技术背景
癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效、低毒、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。
随着对肿瘤特性和发病本质的认识，最近几年抗肿瘤药物不断从传统的细胞毒药物向发展非细胞毒药物过渡。β-咔啉是天然来源的细胞毒性抗肿瘤化合物。发明人认识到，β-咔啉抗肿瘤的细胞毒性本质是与肿瘤细胞DNA之间的嵌插。这种形式的扦插可造成细胞毒性。发明人曾经发现，β-咔啉可以插入肿瘤细胞DNA之间的双螺旋碱基之间。在进一步的研究中，发明人认识到，β-咔啉的抗肿瘤活性来自嵌插。发明人还认识到，在β-咔啉的1位引入二肽生成β-咔啉-3-羧酸苄酯及衍生物可增强β-咔啉与肿瘤细胞的作用，增强抗肿瘤活性。根据这些认识，发明人提出下式的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl。与发明人前期的发明的异喹啉-3-甲酰氨基酸苄酯相比，本发明的突出创造性在于在3-甲酰基与氨基酸苄酯基之间插入Arg(NG-NO2)，保留了异喹啉-3-甲酰氨基酸苄酯与肿瘤细胞DNA之间的嵌插作用，又可以通过插入Arg(NG-NO2)延缓代谢，使得它们的有效剂量大幅度降低。于是，异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl可以显示更好的细胞毒作用和抗肿瘤活性。
发明的内容
本发明的第一个内容是提供下式的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl。通式中AA代表L-丙氨酸残基，L-精氨酸残基，L-天冬酰胺残基，L-天冬氨酸残基，L-谷氨酸残基，L-赖氨酸残基，L-脯氨酸残基，L-丝氨酸残基，L-苏氨酸残基，L-色氨酸残基，L-酪氨酸残基，L-蛋氨酸残基，L-亮氨酸残基和甘氨酸残基。
本发明的第二个内容是提供异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)将L-苯丙氨酸在35％盐酸的催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合，得到四氢异喹啉-3-羧酸；
(2)将四氢异喹啉-3-羧酸在甲醇溶液中，冰浴下用氯化亚砜催化得到四氢异喹啉-3-羧酸甲酯；
(3)将四氢异喹啉-3-羧酸甲酯在无水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，用高锰酸钾为氧化剂得到异喹啉-3-羧酸甲酯；
(4)在NaOH存在下，在甲醇中将异喹啉-3-羧酸甲酯皂化为异喹啉-3-羧酸；
(5)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，Boc-Arg(NO2)在无水DMF中与AA-OBzl缩合为Boc-Arg(NO2)-AA-OBzl(AA为L-丙氨酸残基，L-精氨酸残基，L-天冬酰胺残基，L-天冬氨酸残基，L-谷氨酸残基，L-赖氨酸残基，L-脯氨酸残基，L-丝氨酸残基，L-苏氨酸残基，L-色氨酸残基，L-酪氨酸残基)；
(6)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Ala-OBzl；
(7)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Ala-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ala-OBzl(5a)；
(8)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Arg-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Arg-OBzl；
(9)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Arg-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Arg-OBzl(5b)；
(10)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Asn-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Asn-OBzl；
(11)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Asn-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asn-OBzl(5c)；
(12)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl；
(13)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asp(OBzl)-OBzl(5d)；
(14)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Gly-OBzl；
(15)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Gly-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Gly-OBzl(5e)；
(16)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl；
(17)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Glu(OBzl)-OBzl(5f)；
(18)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Lys-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Lys-OBzl；
(19)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Lys-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Lys-OBzl(5g)；
(20)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Leu-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Leu-OBzl；
(21)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Leu-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Leu-OBzl(5h)；
(22)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Pro-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Pro-OBzl；
(23)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Pro-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Pro-OBzl(5i)；
(24)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Ser-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Ser-OBzl；
(25)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Ser-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ser-OBzl(5j)；
(26)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Thr-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Thr-OBzl；
(27)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Thr-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Thr-OBzl(5k)；
(28)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Trp-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Trp-OBzl；
(29)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Trp-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Trp-OBzl(51)；
(30)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Tyr-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Tyr-OBzl；
(31)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Tyr-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Tyr-OBzl(5m)；
(32)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Met-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-Met-OBzl；
(33)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-Met-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Met-OBzl(5n)。
本发明的第三个内容是评价异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的体外肿瘤细胞增殖抑制的作用。
本发明的第四个内容是评价异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的抑制S180肿瘤小鼠的肿瘤生长作用。
本发明的第五个内容是测定异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的纳米结构。
附图说明
图1化合物5a-n的合成路线.i)HCHO，35％HCl；ii)SOCl2，CH3OHiii)DMF，KMnO2；iv)NaOH，CH3OH；v)DCC，HOBt，DMF；vi)2NHCl/EtOAc.5a中AA＝L-丙氨酸残基；5b中AA＝L-精氨酸残基；5c中AA＝L-天冬酰胺残基；5d中AA＝L-天冬氨酸残基；5e中AA＝甘氨酸残基；5f中AA＝L-谷氨酸残基；5g中AA＝L-赖氨酸残基；5h中AA＝L-亮氨酸残基；5i中AA＝L-脯氨酸残基；5j中AA＝L-丝氨酸残基；5k中AA＝L-苏氨酸残基；5l中AA＝L-色氨酸残基；5m中AA＝L-酪氨酸残基；5n中AA＝L-蛋氨酸残基。
图2化合物5a-n在纯水环境中10-5M浓度下的透射电镜照片。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1制备四氢异喹啉-3-羧酸
称取L-苯丙氨酸1g，加入2.4mL的甲醛，再加入8mL35％的盐酸，溶液先澄清后析出白色物质，油浴80℃，反应8小时。反应结束后，除去溶剂，置于茄瓶中。加入乙醚超声搅拌1小时，反复磨洗，过滤，得到0.91g(85％)四氢异喹啉-3-羧酸，为无色固体。熔点246-247℃。ESI-MS(m/e)：176[M-H]-。
实施例2制备四氢异喹啉-3-羧酸甲酯
向50ml的茄型瓶中加入6ml的甲醇，0.4ml的二氯亚砜，搅拌，活化30min，冰浴。加入四氢异喹啉-3-羧酸239mg，冰浴下反应12小时。抽干溶剂，再加甲醇，反复抽干3次；加入乙醚3次，抽干，得到213mg(82.5％)四氢异喹啉-3-羧酸甲酯，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：192[M+H]+。
实施例3制备异喹啉-3-羧酸甲酯
用无水DMF将四氢异喹啉-3-羧酸甲酯213mg溶解，加入蒸馏水溶解的高锰酸钾溶液，在冰浴下缓慢加入，室温下反应24小时。反应结束后，将DMF吹干，用甲醇将黑色粉末溶解后过滤，滤液旋干。柱层析分离纯化。得到77mg(37％)异喹啉-3-羧酸甲酯，为微黄色固体。Rf＝0.25(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)；ESI-MS(m/e)：188[M+H]+；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ/ppm＝9.421(s，1H)，8.666(s，1H)，8.258(d，J＝4Hz，1H)，8.22(d，J＝4Hz，1H)，7.897(m，2H)，3.944(s，3H)。
实施例4制备异喹啉-3-羧酸
将1g异喹啉-3-羧酸甲酯用甲醇溶解，调PH值为12，室温下反应。反应4小时结束后，调PH值为7，旋除甲醇，调PH值为4，有固体析出，过滤，得到370mg(40％)异喹啉-3-羧酸，为无色固体。Mp231-232℃；ESI-MS(m/e)：172[M-H]-。
实施例5制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-OBzl
(1)制备Arg(NO2)
20mL浓硫酸与20mL发烟硝酸混合后，冰盐浴下搅拌，缓慢分批加入11.8g(67.8mmol)L-精氨酸，冰浴反应4h。加入24mL冰水后浓氨水调pH8有白色沉淀生成，再用冰醋酸调pH6，4℃结晶过夜。冷热水重结晶，得到8.74g(58.7％)硝基精氨酸，为无色固体。ESI-MS(m/e)：218[M-H]-。
(2)制备Arg(NO2)-OBzl
将8.2g(37.6mmol)Arg(NO2)与9.3g(48.9mmol)对甲苯磺酸溶于40mL苄醇与40mL环己烷中，油浴90℃加热反应，TLC监测原料点消失后，反应液中加入大量乙醚反复磨洗，得到12g(66.3％)硝基精氨酸苄酯，为无色膏状固体。Rf＝0.25(二氯甲烷∶甲醇，10∶1)；ESI-MS(m/e)：482[M+H]+。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-OBzl
将异喹啉-3-羧酸173mg溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和EDC的无水DMF溶液，冰浴搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将硝基精氨酸苄酯432.8mg溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9，得到溶液B。将B倒入A中，室温反应6小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用5％的碳酸氢钠、饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶液各洗3遍。分出酯层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到黄色油状物。柱层析纯化，得到116mg(25％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-OBzl，为无色固体。Rf＝0.2(二氯甲烷∶甲醇，25∶1)；Mp124-125℃；(c＝0.55，CH3OH)；ESI-MS(m/e)：465[M+H]+。
实施例6制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ala-OBzl(5a)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl
将Boc-Arg(NO2)3g溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和DCC的无水DMF溶液，冰浴搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将Ala-OBzl1.7g溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9，得到溶液B。将B倒入A中，室温反应12小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶液各洗3遍。分出酯层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到1.6g(35.5％)Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl，为无色固体。Rf＝0.25(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)；ESI-MS(m/e)：481[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Ala-OBzl
称取Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl1g于茄瓶中，加入3NHClEtOAc约10mL。TLC监测反应进度，反应4小时反应结束。水泵抽干液体，加入无水乙酸乙酯溶解，反复3次；再用无水乙醚磨洗抽干3次，得到860mg(99％)Arg(NO2)-Ala-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：381[M+H]+。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ala-OBzl(5a)
将异喹啉-3-羧酸0.366g溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和DCC的无水DMF溶液，冰浴搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将Arg(NO2)-Ala-OBzl0.88g溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9，得到溶液B。将B倒入A中，室温反应14小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶液各洗3遍。分出酯层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到0.36g(31.8％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ala-OBzl，为无色固体。Rf＝0.25(二氯甲烷∶甲醇，20∶1)；ESI-MS(m/e)：536[M+H]+；mp：96-97℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3311.78，3064.89，2937.59，1739.39，1647.21，1624.06，1597.06，1512.19，1452.40，1390.68，1267.23，1149.57，952.84，908.47，750.31；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.805(d，J＝9Hz，1H)，8.71(d，J＝6Hz，1H)，8.57(s，1H)，8.26(d，J＝6Hz，1H)，8.205(d，J＝9Hz，1H)，7.796-7.918(m，3H)，7.33(m，5H)，5.13(s，2H)，4.67(m，1H)，4.38(m，1H)，3.15(d，J＝6Hz，2H)，1.77(m，2H)，1.58(d，J＝6Hz，2H)，1.345(d，J＝9Hz，3H)；纯度：99.1％流动相：CH3OH∶H2O＝75∶25，保留时间：8.419min。
实施例7制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Arg-OBzl(5b)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl
按制备Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的方法，由0.64gBoc-Arg(NO2)和0.74gArg(NO2)-OBzl得到0.25g(21％)Boc-Arg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：611[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl
按制备Arg(NO2)-Ala-OBzl的方法，由0.21gBoc-Arg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl得到0.19g(97％)Arg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Arg-OBzl(5b)
按照5a的制备方法，由0.47gArg(NO2)-Arg(NO2)-OBzl和0.147g异喹啉-3-羧酸接肽得到0.1g(17％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Arg-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：666[M+H]+；mp：103-105℃；(c＝0.48，CH3OH)；IR(KBr)：3307.92，2939.52，2873.94，1735.93，1653.00，1624.06，1597.06，1521.84，1436.97，1419.61，1390.68，1267.23，1147.65，1109.07，954.76，910.40；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.815(d，J＝9Hz，1H)，8.67(d，J＝6Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.23(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，2H)，7.87(m，3H)，7.33(m，5H)，5.13(s，2H)，4.685(m，1H)，4.66(m，1H)，4.36(m，1H)，4.095(dd，J1＝5.1Hz，J2＝10.5Hz，1H)，3.175(d，J＝6Hz，7H)，1.74(m，4H)，1.55(s，4H)；纯度：95％流动相：CH3OH∶H2O＝70∶30，保留时间：11.816min。
实施例8制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asn-OBzl(5c)
(1)制备Boc-Asn-OBzl
用无水乙醇将9.26gBoc-Gln和8.29gCsCO3溶解，室温下反应8h，将乙醇旋干，加入无水DMF溶解，加入0.7mL的溴苄，反应6h，反应结束后，将无水DMF吹干，用饱和氯化钠溶解，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化，得到6g(47.6％)Boc-Asn-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：337[M+H]+。
(2)制备Asn-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3.36gBoc-Asn-OBzl得到3g(99.8％)Asn-OBzl，为无色粉末。
(3)制备Boc-R(NO2)-Asn-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由4.75gBoc-Arg(NO2)和3gAsn-OBzl接肽，得到3g(41.4％)Boc-R(NO2)-Asn-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：524[M+H]+。
(4)制备Arg(NO2)-Asn-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由2gBoc-R(NO2)-Asn-OBzl得到1.6g(99.3％)Arg(NO2)-Asn-OBzl，为无色粉末。
(5)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asn-OBzl(5c)
按照5a的制备方法，由1.6gArg(NO2)-Asn-OBzl和0.6g异喹啉-3-羧酸接肽得到0.35g(16％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asn-OBzl(5c)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：579[M+H]+；mp：109-111℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3309.85，3209.55，2935.66，1747.51，1732.08，1681.93，1651.07，1624.06，1519.91，1454.33，1435.04，1415.75，1269.16，1219.01，1192.01，1111.00，906.54，794.67，744.52，698.23；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.41(s，1H)，8.84(d，J＝9Hz，1H)，8.71(d，1H)，8.58(s，1H)，8.24(dd，J1＝9Hz，J2＝18Hz，2H)，7.86(m，2H)，7.44(s，1H)，7.31(m，5H)，6.97(s，1H)，5.10(s，2H)，4.70(d，J＝6Hz，2H)，3.16(s，2H)，2.60(m，2H)，1.75(d，J＝18Hz，2H)，1.55(s，2H)；纯度：95.1％流动相：CH3CN∶H2O＝23∶77，保留时间：7.880min。
实施例9制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asp(OBzl)-OBzl(5d)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和2.9gAsp(OBzl)-OBzl接肽，得到5.6g(70.5％)Boc-Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：605[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由0.5gBoc-Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl得到0.48g(90％)Arg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asp(OBzl)-OBzl(5d)
按照5a的制备方法，由0.439gArg(NO2)-Asp(OBzl)-OBzl和0.141g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.143g(27％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Asp(OBzl)-OBzl(5d)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：670[M+H]+；mp：92-94℃；(c＝0.45，CH3OH)；IR(KBr)：3315.63，2933.73，2854.65，1734.01，1653.00，1624.06，1521.84，1506.41，1456.26，1271.09，1213.23，1201.65，954.76，910.40，750.31，700.16；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.41(s，1H)，8.845(d，J＝9Hz，2H)，8.59(s，1H)，8.265(d，J＝9Hz，1H)，8.21(d，J＝6Hz，1H)，7.86(m，3H)，7.31(s，10H)，5.085(d，J＝9Hz，4H)，4.805(dd，J1＝6Hz，J2＝15Hz，1H)，4.68(m，1H)，3.14(s，2H)，2.975(m，1H)，2.855(m，1H)，1.775(m，2H)，1.55(s，2H)；纯度：95.2％流动相：CH3OH∶H2O＝75∶25，保留时间：10.902min。
实施例10制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Gly-OBzl(5e)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和1.56gGly-OBzl接肽，得到2.2g(50.2％)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：467[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Gly-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1.08gBoc-Arg(NO2)-Gly-OBzl得到0.85g(98％)Arg(NO2)-Gly-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Gly-OBzl(5e)
按照5a的制备方法，由0.87gArg(NO2)-Gly-OBzl和0.37g异喹啉-3-羧酸接肽得到0.505g(45％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Gly-OBzl(5e)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：522[M+H]+；mp：94-95℃；(c＝0.46，CH3OH)；IR(KBr)：3290.56，2958.80，2937.59，2852.72，1747.51，1734.01，1622.13，1598.99，1558.48，1456.26，1386.82，1259.52，1188.15，1028.06，958.62，912.33；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.41(s，1H)，8.85(d，J＝6Hz，1H)，8.73(t，J＝6Hz，1H)，8.59(s，1H)，8.265(d，J＝9Hz，1H)，8.21(d，J＝6Hz，1H)，7.86(m，3H)，7.325(m，5H)，5.13(s，2H)，4.69(m，1H)，4.67(m，1H)，3.98(m，2H)，3.17(d，J＝6Hz，2H)，1.82(m，2H)，1.57(m，2H)；纯度：98.0％流动相：CH3OH∶H2O＝55∶45，保留时间：9.253min。
实施例11制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Glu(OBzl)-OBzl(5f)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和3.1gGlu-OBzl接肽，得到3.3g(56.1％)Boc-Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl，为黄色粉末。ESI-MS(m/e)：629[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1gBoc-Arg(NO2)-Glu-OBzl得到0.9g(98％)Arg(NO2)-Glu(OBzl)-OBzl，为黄色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Glu(OBzl)-OBzl(5f)
按照5a的制备方法，由1.18gArg(NO2)-Glu-OBzl和0.34g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.1g(7％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Glu(OBzl)-OBzl(5f)，为黄色粉末。ESI-MS(m/e)：684[M+H]+；mp：78-80℃；(c＝0.48，CH3OH)；IR(KBr)：3309.85，3061.03，2933.73，1735.93，1732.08，1653.00，1624.06，1597.06，1514.12，1456.26，1390.68，1259.52，860.25，839.03，694.37；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.845(d，J＝9Hz，1H)，8.67(d，J＝6Hz，1H)，8.57(s，1H)，8.23(dd，J1＝6Hz，J2＝21Hz，2H)，7.87(m，3H)，7.315(m，10H)，5.13(s，2H)，5.06(s，2H)，4.67(m，1H)，4.43(dd，J1＝6Hz，J2＝12Hz，1H)，3.145(d，J＝3Hz，2H)，2.47(m，3H)，2.11(m，1H)，1.93(m，1H)，1.79(m，2H)，1.56(s，1H)；纯度：97.9％流动相：CH3OH∶H2O＝65∶35，保留时间：12.532min。
实施例12制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Lys-OBzl(5g)
(1)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)
将0.21gIQ-Arg(NO2)OBzl用甲醇溶解，调PH值为12，室温下反应。反应4小时结束后，调PH值为7，旋除甲醇，调PH值为2，用乙酸乙酯萃取3次，饱和氯化钠洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂，得到0.06g(35％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)，为无色固体。ESI-MS(m/e)：373[M-H]-。
(2)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)-K(Boc)-OBzl
将IQ-Arg(NO2)OH0.1g溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和DCC的无水DMF溶液，冰浴搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将K(Boc)-OBzl0.336g溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9，得到溶液B。将B倒入A中，室温反应7小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用5％的碳酸氢钠、饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶液各洗3遍。分出酯层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到油状物。柱层析纯化，得到0.07g(37％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)-K(Boc)-OBzl，为无色固体。Rf＝0.2(二氯甲烷∶甲醇，30∶1)；ESI-MS(m/e)：693[M+H]+。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)-K-OBzl
取纯化的IQ-Arg(NO2)-K(Boc)-OBzl0.052g于茄瓶中，加入4NHClEtOAc约2ml。TLC监测反应进度，反应2小时反应结束。水泵抽干液体，加入无水乙酸乙酯溶解，反复3次；再用无水乙醚磨洗抽干3次，得到0.046g(98％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NO2)-K-OBzl，为无色粉末。Rf＝0.2(二氯甲烷∶甲醇，25∶1)；ESI-MS(m/e)：693[M+H]+；mp：137-139℃；(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3309.85，3066.82，2931.80，2866.22，1735.93，1654.92，1624.06，1519.91，1454.33，991.41，952.84，910.40，748.38，698.23；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.745(m，3H)，8.265(d，J＝9Hz，1H)，8.205(d，J＝9Hz，1H)，7.86(m，2H)，7.29(m，5H)，5.13(m，2H)，4.725(m，1H)，4.32(d，J＝6Hz，1H)，3.89(m，3H)，3.17(d，J＝6Hz，4H)，2.56(t，J＝6Hz，1H)，1.72(m，3H)，1.56(s，2H)，1.36(s，4H)，1.19(m，2H)。纯度：95.0％流动相：CH3OH∶H2O＝55∶45，保留时间：9.619min。
实施例13制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Leu-OBzl(5h)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Leu-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和2.1gLeu-OBzl接肽，得到2.27g(46.3％)Boc-Arg(NO2)-Leu-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：523[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Leu-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1gBoc-Arg(NO2)-Leu-OBzl得到0.865g(98％)Arg(NO2)-Leu-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Leu-OBzl(5h)
按照5a的制备方法，由0.865gArg(NO2)-Leu-OBzl和0.33g异喹啉-3-羧酸接肽得到0.3g(27.6％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Leu-OBzl(5h)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：578[M+H]+；mp：88-89℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3294.42，2954.95，2870.08，1743.65，1654.92，1624.06，1593.20，1516.05，1438.90，1388.75，1338.60，1269.16，1149.57，952.84，906.54，748.38，698.23；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ/ppm＝9.377(s，1H)，8.801(d，J＝8.5Hz，1H)，8.589(d，J＝2.5Hz，1H)，8.556(s，1H)，8.208(dd，J1＝8Hz，J2＝28.5Hz，2H)，7.866(m，1H)，7.799(m，1H)，7.288(m，5H)，5.1(s，2H)，4.66(dd，J1＝8Hz，J2＝13.5Hz，1H)，4.36(dd，J1＝9.5Hz，J2＝13Hz，1H)，3.132(s，2H)，1.796(s，1H)，1.722(s，1H)，1.571(m，5H)，0.865(d，J＝6.5Hz，3H)，0.806(d，J＝6.5Hz，3H)；纯度：98.7％流动相：CH3OH∶H2O＝75∶25，保留时间：11.901min。
实施例14制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Pro-OBzl(5i)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Pro-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由2gBoc-Arg(NO2)和1.5gPro-OBzl接肽，得到1.75g(55.5％)Boc-Arg(NO2)-Pro-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：507[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Pro-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1.5gBoc-Arg(NO2)-Thr-OBzl得到0.8g(66.7％)Arg(NO2)-Pro-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Pro-OBzl(5i)
按照5a的制备方法，由1gArg(NO2)-Thr-OBzl和0.426g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.25g(18.1％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Pro-OBzl(5i)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：562[M+H]+；mp：101-103℃；(c＝0.49，CH3OH)；IR(KBr)：3365.78，2953.02，2877.79，1739.79，1641.42，1624.06，1514.12，1433.11，1340.53，1263.37，1170.79，1109.07，954.76，910.40，790.81，769.60，750.31；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.40(s，1H)，8.86(d，J＝6Hz，1H)，8.57(s，1H)，8.23(m，2H)，7.86(m，3H)，7.37(m，5H)，5.14(s，2H)，4.87(t，J＝6Hz，1H)，4.46(dd，J1＝6Hz，J2＝9Hz，1H)，3.81(m，1H)，3.69(m，1H)，3.16(s，2H)，2.24(m，1H)，1.98(dd，J1＝6Hz，J2＝12Hz，2H)，1.88(m，2H)，1.74(m，1H)，1.62(d，J＝6Hz，2H)；纯度：97.4％流动相：CH3OH∶H2O＝50∶50，保留时间：10.326min。
实施例15制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ser-OBzl(5j)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Ser-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由2gBoc-Arg(NO2)和1.25gSer-OBzl接肽，得到1.65g(53％)Boc-Arg(NO2)-Ser-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：497[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Ser-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1gBoc-Arg(NO2)-Ser-OBzl得到0.9g(98％)Arg(NO2)-Ser-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ser-OBzl(5j)
按照5a的制备方法，由0.7gArg(NO2)-Ser-OBzl和0.3g异喹啉-3-羧酸接肽得到0.56g(58％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Ser-OBzl(5j)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：552[M+H]+；mp：90-93℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3309.85，2939.52，2885.51，1743.65，1643.35，1624.06，1600.92，1519.91，1454.33，1435.04，1388.75，1338.60，1261.45，1195.87，1083.99，952.84，906.54，790.81，748.38，698.23；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.855(d，J＝9Hz，1H)，8.68(d，J＝6Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.23(dd，J1＝6Hz，J2＝18Hz，2H)，7.86(m，3H)，7.33(m，5H)，5.15(s，3H)，4.79(m，1H)，4.49(dd，J1＝6Hz，J2＝12Hz，1H)，3.79(m，1H)，3.71(t，J＝6Hz，1H)，3.165(d，J＝3Hz，2H)，1.815(m，2H)，1.57(s，2H)；纯度：99.2％流动相：CH3OH∶H2O＝50∶50，保留时间：16.870min。
实施例16制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Thr-OBzl(5k)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Thr-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由2gBoc-Arg(NO2)和1.35gThr-OBzl接肽，得到2.5g(79％)Boc-Arg(NO2)-Thr-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：511[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Thr-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1gBoc-Arg(NO2)-Thr-OBzl得到0.85g(97％)Arg(NO2)-Thr-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Thr-OBzl(5k)
按照5a的制备方法，由1.5gArg(NO2)-Thr-OBzl和0.58g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.5g(26％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Thr-OBzl(5k)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：566[M+H]+；mp：98-99℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3325.28，2939.52，1735.93，1718.58，1654.92，1600.92，1560.41，1508.33，1274.95，1145.72，954.76，912.33；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.905(d，J＝9Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.44(d，J＝6Hz，1H)，8.26(d，J＝6Hz，1H)，8.205(d，J＝9Hz，1H)，7.87(m，3H)，7.335(m，5H)，5.14(s，2H)，5.105(d，J＝3Hz，1H)，4.83(m，1H)，4.415(m，1H)，4.22(s，1H)，3.17(d，J＝6Hz，2H)，1.79(m，2H)，1.59(d，J＝6Hz，2H)，1.09(m，3H)；纯度：98.8％流动相：CH3OH∶H2O＝50∶50，保留时间：22.753min。
实施例17制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Trp-OBzl(5l)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Trp-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和2.76gTrp-OBzl接肽，得到3.4g(60.8％)Boc-Arg(NO2)-Trp-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：596[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Trp-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1.2gBoc-Arg(NO2)-Trp-OBzl得到1.1g(98％)Arg(NO2)-Trp-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Trp-OBzl(5l)
按照5a的制备方法，由1gArg(NO2)-Trp-OBzl和0.32g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.35g(29％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Trp-OBzl(5l)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：651[M+H]+；mp：110-112℃；(c＝0.50，CH3OH)；IR(KBr)：3305.99，3059.10，2931.80，2862.36，1735.93，1654.92，1624.06，1516.05，1438.90，1388.75，1338.60，1261.45，1153.43，1099.43，1010.70，952.84，906.54，794.67，744.52，698.23；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.39(s，1H)，8.805(d，J＝9Hz，1H)，8.75(d，J＝6Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.24(dd，J1＝9Hz，J2＝18Hz，2H)，7.87(m，3H)，7.505(d，J＝9Hz，1H)，7.295(m，4H)，7.18(m，3H)，7(m，2H)，5.76(s，1H)，5.04(dd，J1＝12Hz，J2＝18Hz，2H)，4.68(m，2H)，3.185(m，4H)，1.75(m，2H)，1.52(s，2H)；纯度：96.8％流动相：CH3OH∶H2O＝65∶35，保留时间：9.346min。
实施例18制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Tyr-OBzl(5m)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Tyr-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由2gBoc-Arg(NO2)和1.9gTyr-OBzl接肽，得到1.65g(46.4％)Boc-Arg(NO2)-Tyr-OBzl，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：573[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Tyr-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1.38gBoc-Arg(NO2)-Tyr-OBzl得到1g(87.8％)Arg(NO2)-Tyr-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Tyr-OBzl(5m)
按照5a的制备方法，由1.gArg(NO2)-Thr-OBzl和0.37g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.35g(26.5％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Tyr-OBzl(5m)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：628[M+H]+；mp：103-104℃；(c＝0.48，CH3OH)；IR(KBr)：3305.99，2931.80，2858.51，1735.93，1647.21，1624.06，1593.20，1516.05，1438.90，1388.75，1350.17，1269.16，1111.00，952.84，906.54，794.67，748.38，698.23；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ/ppm＝9.368(s，1H)，9.150(s，1H)，8.766(d，J＝8.5Hz，1H)，8.634(d，J＝7.5Hz，1H)，8.550(s，1H)，8.209(dd，J1＝8Hz，J2＝27.5Hz，2H)，7.834(m，2H)，7.266(m，5H)，6.566(d，J＝8Hz，2H)，5.728(s，1H)，5.043(dd，J1＝12Hz，J2＝17.5Hz，2H)，4.639(m，1H)，4.475(dd，J1＝7.5Hz，J2＝14.5Hz，1H)，3.114(s，2H)，2.890(m，2H)，1.716(m，2H)，1.489(s，2H)；纯度：96.2％流动相：CH3OH∶H2O＝50∶50，保留时间：12.563min。
实施例19制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Met-OBzl(5n)
(1)制备Boc-Arg(NO2)-Met-OBzl
按照Boc-Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由3gBoc-Arg(NO2)和2.3gMet-OBzl接肽，得到2.9g(58.2％)Boc-Arg(NO2)-Met-OBzl，为白色粉末。ESI-MS(m/e)：541[M+H]+。
(2)制备Arg(NO2)-Met-OBzl
按照Arg(NO2)-Ala-OBzl的制备方法，由1.08gBoc-Arg(NO2)-Met-OBzl得到0.94g(99％)Arg(NO2)-Met-OBzl，为无色粉末。
(3)制备异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Met-OBzl(5n)
按照5a的制备方法，由0.95gArg(NO2)-Met-OBzl和0.34g异喹啉-3-羧酸接肽，得到0.5g(42％)异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-Met-OBzl(5n)，为无色粉末。ESI-MS(m/e)：596[M+H]+；mp：77-79℃；(c＝0.49，CH3OH)；IR(KBr)：3294.42，2916.37，2870.08，1735.93，1651.07，1624.06，1597.06，1516.05，1438.90，1388.75，1265.20，1165.00，1111.00，952.84，910.40，794.67，744.52，698.23；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ/ppm＝9.4(s，1H)，8.54(d，J＝6Hz，1H)，8.67(d，J＝6Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.26(d，J＝6Hz，1H)，8.205(d，J＝9Hz，1H)，7.85(m，3H)，7.33(m，5H)，5.12(d，J＝12Hz，2H)，4.68(dd，J1＝7.8Hz，J2＝13.5Hz，1H)，4.5(m，1H)，3.16(d，J＝6Hz，2H)，2.5(t，J＝9Hz，3H)，2(m，5H)，1.83(m，2H)，1.57(s，2H)；纯度：98.2％流动相：CH3OH∶H2O＝60∶40，保留时间：12.242min。
实验例1评价化合物5a-n的抑制肿瘤细胞增殖的作用
化合物5a-n用0.5％DMSO1640培养基配制成所需浓度。分别将生长状态良好、处于对数生长期的A549，S180，MCF-7细胞按照5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL。在37℃，5％CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μM、50μM、25μM和12.5μM加入经灭菌处理的化合物5a-n的溶液，对照组加入等体积溶解样品的含0.5％DMSO的1640培养基。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100μlDMSO，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD(吸光度)值。按抑制率＝[(含0.4％DMSO的1640培养基组的OD平均值-化合物5a-n组的OD平均值)/含0.4％DMSO的1640培养基组的OD值]×100％”计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a-n的浓度作图，计算本发明化合物的IC50(半数有效抑制浓度)值。
化合物5a-n用含0.4％DMSO的DMEM培养基配制成所需浓度。分别将生长状态良好、处于对数生长期的U2OS、SH-sy5y和HacaT细胞按照5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL。在37℃、5％CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度100μM，50μM，25μM和12.5μM加入经灭菌处理的化合物5a-n的溶液，对照组加入等体积溶解样品的含0.5％DMSO的DMEM培养基。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃孵育4小时，小心除去上清液后每孔加入100μlDMSO，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定OD(吸光度)值。按抑制率＝[(含0.4％DMSO的DMEM培养基组的OD平均值-化合物5a-n组的OD平均值)/含0.5％DMSO的DMEM培养基组的OD平均值]×100％计算抑制率。实验平行重复3次，以抑制率对化合物5a-n的浓度作图，计算IC50(半数有效抑制浓度)值。
结果列入表1和表2。从结果可看出，化合物5a，c，h，i，m，n对MCF-7细胞，化合物5h对A549细胞，化合物5h，i，m对S180细胞，化合物5a，h，i对SH-Sy5y细胞，化合物5a，h，i，n对U2OS细胞，化合物5a，h，i，n对HacaT细胞有抑制肿瘤细胞增殖的作用。其他化合物的IC50值均在100μM以上，无细胞毒作用。
表1化合物5a-n的抑制肿瘤细胞增殖的作用(IC50，μM)
a)ADR＝Adriamycin，n＝18，IC50isrepresentedbymean±SDμM.
表2化合物5a-n的抑制肿瘤细胞增殖的作用(IC50，μM)
a)ADR＝Adriamycin，n＝18，IC50isrepresentedbymean±SDμM.
实验例2评价化合物5a-n抑制S180小鼠肿瘤生长的活性
测定前将本发明衍生物加吐温80助溶，用生理盐水将样品溶解；将阿霉素溶于生理盐水。无菌条件下取接种于ICR小鼠7-10天的S180肉瘤，加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为1×107个/mL，接种于健康雄性ICR小鼠前肢腋皮下，每只小鼠注射0.2mL。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日腹腔注射0.2mL本发明衍生物的水溶液，连续给药9天，剂量为5μmol/kg。空白组小鼠每日腹腔注射0.2mL生理盐水。以阿霉素(剂量为2μmol/kg)作阳性对照。实验进行至第10天，称小鼠体重，并剖取各组小鼠的肿瘤称重，最后统计各组动物的抑瘤率。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示，计算如下：瘤重抑制率％＝[1-(化合物5a-n组瘤重/空白组瘤重)]×100％。结果列入表3。表3结果表明化合物5a-n中，除去5a，c，d，i，j，k，m外，其他组瘤重与空白组相比都显著低，说明它们有明确的抗肿瘤活性，它们这个有效剂量(5μmol/kg)比发明人前期的发明的异喹啉-3-甲酰氨基酸苄酯的有效剂量(100μmol/kg)低20倍。其中化合物5l组瘤重与阿霉素相比没有显著性差异，说明它的抗肿瘤活性比其它化合物还突出。
表3化合物5a-n对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
n＝12；a)与空白组相比，p＜0.05；b)与空白组相比，p＜0.01；c)与空白组相比，p＜0.01，与阿霉素相比p＞0.05。
实验例3测定化合物血药浓度下的透射电镜照片
将5a-n按照1×10-5M的浓度配置化合物的水溶液，均匀的铺在铜网上，在透射电镜(TEM，JEM-1230，JEOL)下观察化合物的自组装性质。得到的照片见图2。结果表明，化合物在水中均可形成纳米颗粒，直径大部分在26-300nm之间。
Claims (4)
1.下式的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl，式中AA代表L-丙氨酸残基，L-精氨酸残基，L-天冬酰胺残基，L-天冬氨酸残基，L-谷氨酸残基，L-赖氨酸残基，L-脯氨酸残基，L-丝氨酸残基，L-苏氨酸残基，L-色氨酸残基，L-酪氨酸残基，L-蛋氨酸残基，L-亮氨酸残基，甘氨酸残基，L-蛋氨酸残基，L-亮氨酸残基和甘氨酸残基。
2.权利要求1的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的制备方法，该方法包括：
(1)将L-苯丙氨酸在35％盐酸的催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合，得到四氢异喹啉-3-羧酸；
(2)将四氢异喹啉-3-羧酸在甲醇溶液中，冰浴下用氯化亚砜催化得到四氢异喹啉-3-羧酸甲酯；
(3)将四氢异喹啉-3-羧酸甲酯在无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中用高锰酸钾氧化得到异喹啉-3-羧酸甲酯；
(4)在NaOH存在下，在甲醇中将异喹啉-3-羧酸甲酯皂化为异喹啉-3-羧酸；
(5)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)存在下，Boc-Arg(NO2)在无水DMF中与AA-OBzl缩合为Boc-Arg(NO2)-AA-OBzl(AA为L-丙氨酸残基，L-精氨酸残基，L-天冬酰胺残基，L-天冬氨酸残基，L-谷氨酸残基，L-赖氨酸残基，L-脯氨酸残基，L-丝氨酸残基，L-苏氨酸残基，L-色氨酸残基，L-酪氨酸残基，L-蛋氨酸残基，L-亮氨酸残基和甘氨酸残基)；
(6)在氯化氢的乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-AA-OBzl脱去Boc生成Arg(NO2)-AA-OBzl；
(7)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(NO2)-AA-OBzl缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl。
3.权利要求1的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl的纳米结构。
4.权利要求1的异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-NO2)-AA-OBzl在制备抗肿瘤药物中的应用。
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