CN105218330A - 一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用途，属于药物领域，具体涉及从南天竹的干燥叶中分离得到的一种新的木脂素类化合物、制备方法和该化合物的医药用途。该化合物为首次报道，可以从南天竹的干燥叶中提取、分离纯化得到，纯度高。体外试验证明该化合物对H₂O₂氧化损伤细胞具有保护作用，且具有清除自由基和活性氧的抗氧化特性，可以进一步研究开发成制备血管保护的药物。

Description

一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用途

技术领域

本发明属于药物领域，具体涉及从南天竹的干燥叶中分离得到的一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用途。

背景技术

南天竹为小檗科南天竹属Nandina南天竹NandinadomesticaThunb.植物，原产于我国及东亚，是一种具有观赏、生态、药用等多种价值的树种。据《本草纲目拾遗》记载，其根、茎、叶、果均可入药。根、茎苦寒，入肺、肝经。具有清热除湿、通经活络、强筋骨、消炎解毒，主治感冒发热、肺热咳嗽、结膜炎、湿热黄疸、尿路感染、跌打损伤等功效。现代药理研究表明南天竹具有抗菌、降压、止咳、平喘等药理作用，为其在临床上的应用提供了理论支持。

国内学者对南天竹研究主要集中在种质资源、组织培养、育苗、栽培等方面，而对其化学成分及药理研究涉及较少。在国外20世纪70年代日本学者Kunitomo与Morita对其化学成分进行了较为系统的研究，报道了生物碱、黄酮、木脂素及挥发油类化学成分。报道的生物碱有南天竹碱(nandinine)、小檗碱(berberine)、原阿片碱(protopine)等，大部分属于原小檗碱生物碱类为母核的衍生物，此类成分具有较好的生物活性，是该植物中主要的活性成分之一。南天竹植物中含有较多的黄酮类成分，其叶总黄酮的含有量在4.63％。所报道的黄酮如蹄纹天竺素-3-木糖葡萄糖苷、翠菊苷、黄芩素等，此植物中黄酮类成分主要是以花色素类为母核的衍生物，此类成分具有较好的抗炎、抗病毒的活性。南天竹植物中还有木脂素类化合物的报道，如(－)episyringaresinol，这种木脂素成分以骈双四氢呋喃类为母核的衍生物。此外，南天竹植物中还含有挥发油和微量元素。

药理学研究表明，南天竹在止咳平喘、抗菌、降压等方面均有明显活性，主要活性成分为以南天竹宁碱、南天竹碱、小檗碱为代表的原小檗碱生物碱类成分。南天竹各个部位的挥发油和南天竹叶正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇提取物均具有抗菌作用，并且其抗真菌作用更为突出，具有较好的开发治疗皮肤真菌感染的新药前景。南天竹甲醇粗提物具有明显的抑制组胺收缩大动脉血管的作用，经过活性追踪显示提取物非竞争性抑制组胺收缩血管作用主要成分是南天竹宁碱。南天竹还具有解毒的作用，清代赵学敏著《本草纲目拾遗》中有记载：“解吡毒刘霞裳云：凡人食吡垂死者，用南天竹种子四两，擂水服之立活”。另在杨仓良著《毒药本草》中也有相同的记载。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从南天竹的干燥叶中分离得到的一种新的木脂素类化合物；

本发明的另一目的在于提供该新化合物的制备方法；

本发明的再一目的在于提供该化合物用于制备血管保护药物的医药用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，

所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将南天竹的干燥叶粉碎，用70～80％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10％乙醇洗脱10个柱体积，再用75％乙醇洗脱12个柱体积，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩得75％乙醇洗脱物浸膏；(c)步骤(b)中75％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集9～13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(Ⅰ)。

进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。

进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75％。

一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(Ⅰ)和药学上可接受的载体。

所述的化合物(Ⅰ)在制备血管保护的药物中的应用。

所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。

该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物(Ⅰ)，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

附图说明

图1为化合物(Ⅰ)结构式；

图2为化合物(Ⅰ)理论ECD值与实验ECD值比较。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证

药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。南天竹的干燥叶购于安徽亳州中药材市场，产地广东。

制备方法：(a)将南天竹的干燥叶(8kg)粉碎，用75％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(315g)和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用纯净水溶解至2L，医用脱脂棉过滤，滤液用AB-8型大孔树脂(1.5kg)分离，依次用10％乙醇(10L)和75％(12L)乙醇洗脱，收集75％乙醇洗脱液，减压浓缩得75％乙醇洗脱物浸膏(155g)；(c)步骤(b)中75％乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(10个柱体积)、40:1(8个柱体积)、20:1(8个柱体积)、10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分3(36g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(8个柱体积)、20:1(8个柱体积)和10:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2(12g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶ODS-C18分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集9～13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(Ⅰ)(25mg)。

结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]⁺为m/z431.1716，结合核磁特征可得分子式为C₂₁H₂₈O₈，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δ_H(ppm，DMSO-d₆，500MHz)：H-2(6.33，d，J＝2.0)，H-5(6.52，d，J＝8.0)，H-6(6.35，dd，J＝8.0，2.0)，H-7(2.37，dd，J＝13.0，4.5)，H-7(1.74，dd，J＝13.0，4.5)，H-8(1.96，m)，H-9(4.48，d，J＝4.5)，H-2’(6.85，s)，H-5’(6.73，d，J＝8.0)，H-6’(6.74，d，J＝8.0，1.5)，H-7’(4.25，d，J＝8.0)，H-8’(2.19，q，J＝7.5)，H-9’(3.94，d，J＝7.0)，H-9’(3.88，d，J＝7.0)，3-OCH₃(3.68，s)，3’-OCH₃(3.77，s)，9-OCH₃(3.21，s)；核磁共振碳谱数据δ_C(ppm，DMSO-d₆，125Hz)：132.1(C，1-C)，111.5(CH，2-C)，146.9(C，3-C)，143.6(C，4-C)，114.0(CH，5-C)，120.2(CH，6-C)，32.3(CH₂，7-C)，48.9(CH，8-C)，105.1(CH，9-C)，134.8(C，1’-C)，109.4(CH，2’-C)，147.3(C，3’-C)，145.1(C，4’-C)，114.2(CH，5’-C)，118.7(CH，6’-C)，76.0(CH，7’-C)，49.1(CH，8’-C)，68.5(CH₂，9’-C)，54.8(CH₃，3-OCH₃)，54.6(CH₃，3’-OCH₃)，53.1(CH₃，9-OCH₃)；碳原子标记参见图1。¹HNMR谱显示该化合物存在两个1,3,4-三取代芳香环[δH6.33(1H，d，J＝2.0Hz，H-2)，6.52(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)和6.35(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6)以及6.85(1H，s，H-2’)，6.73(1H，d，J＝8.0Hz，H-5’)和6.74(1H，d，J＝8.0，1.5Hz，H-6’)]，两个含氧次甲基[δH4.48(1H，d，J＝4.5Hz，H-9)和4.25(1H，d，J＝8.0Hz，H-7’)]，三个甲氧基[δH3.68(3H，s，3-OCH₃)，3.77(3H，s，3’-OCH₃)，和3.21(3H，s，9-OCH₃)]，一个含氧亚甲基[δH3.94(1H，d，J＝7.0Hz，H-9’a)和3.88(1H，d，J＝7.0Hz，H-9’b)〕，一个亚甲基[δH2.37(1H，dd，J＝13.0，4.5Hz，H-7a)和1.74(1H，dd，J＝13.0，4.5Hz，H-7b)]和两个次甲基[δH1.96(1H，m，H-8)和2.19(1H，q，J＝7.5Hz，H-8’)]。¹³CNMR谱显示有21个碳信号，其中包括两个芳环的12个芳香碳，两个含氧次甲基[δC105.1(C-9)和76.0(C-7’)]，一个含氧亚甲基[δC68.5(C-9’)]，三个甲氧基[δC54.8(3-OCH₃)，54.6(3’-OCH₃)和53.1(9-OCH₃)]，二个次甲基[δC49.1(C-8’)和48.9(C-8)]，以及一个亚甲基[δC32.3(C-7)]。H-8和H-9之间较大的耦合常数(4.5Hz)以及NOESY谱中H-7/H-7’和H-8/H-8’和H-9的相关性表明C-7’，C-8，C-8'以及C-9的绝对构型分别为R，S，R，R。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。

实施例2：化合物(Ⅰ)药理作用试验

一、材料和仪器

血管内皮细胞(ECV-304)由山东大学医学院免疫教研室馈赠。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1，HPLC归一化纯度大于98％。RPMI-1640干粉培养基、胰蛋白酶购于美国Gibeo公司。胎牛血清购于天津TBD公司。MTT、琼脂糖、AnnexinV-FITC购于美国Sigma公司。LDH、MDA、SOD、GSH-Px测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。DMSO购于中国医药(集团)上海化学试剂有限公司。苏木素购于福州迈新生物技术有限公司。Rhodamine123购于美国Solarbic公司。阳性药川芎嗪购自上海源叶生物科技有限公司。

倒置光学显微镜(日本OlymPus公司)，二氧化碳培养箱(美国FormaScientific公司)，电子分析天平(ER-182A型)(日本A&D公司)，超净工作台(ZHJH-1209型)(上海智城分析仪器制造有限公司)，流式细胞仪(FACSVantage型)(美国BeetonDiehnson公司)，恒温振荡器(江苏太仓市实验设备厂)，1420Vietor³多标记分析仪(美国PerkinElmerLifescience公司)，721型可见紫外光栅分光光度计(上海精密科学有限公司)，电热恒温水浴箱(上海医疗仪器三厂生产)，酶联免疫检测仪(MK3Multiskan)(上海ThermoLabsystem分析仪器公司)。

二、试验方法

1、细胞培养

ECV-304细胞以RPMI-1640培养基于37℃，5％CO₂培养箱中传代培养。镜下观察，待细胞汇合率达到70％以上时用胰蛋白酶消化传代，以生长稳定的第3-5代细胞制备细胞悬液。

2、细胞分组及处理

取生长良好的ECV-304细胞制成细胞悬液，接种于96孔、24孔、6孔细胞培养板或培养皿中，37℃，5％CO₂培养24h。随机分为六组：①正常组；②H₂O₂模型组(150μmol/L)；③川芎嗪(TMP)(50μmol/L)+H₂O₂组；④化合物(Ⅰ)(10μmol/L)+H₂O₂组；⑤化合物(Ⅰ)(50μmol/L)+H₂O₂组；⑥化合物(Ⅰ)(100μmol/L)+H₂O₂组。

3、实验项目及检测指标

3.1MTT法检测细胞活力

将生长良好的ECV-304细胞制备成5×10⁴/mL的细胞悬液，按每孔100μL接种于96孔板，置37℃，5％CO₂孵育24h。细胞分组及处理上。继续培养6h和12h后，每孔加入10μLMTT溶液(终浓度0.5mg/L)置37℃，5％CO₂培养箱孵育4h后，每孔加入100μLDMSO，静置10min后振荡60s，30min内置酶联免疫检测仪上检测570nm处吸光度值(OD₅₇₀)。

按公式：细胞损伤抑制率＝(用药组OD₅₇₀-模型组OD₅₇₀)/(正常组OD₅₇₀-模型组OD₅₇₀)×100％，计算细胞损伤抑制率。

3.2LDR释放率测定

取生长良好的ECV-304细胞制成l×10⁵/mL的细胞悬液接种于24孔板，置37℃，5％CO₂孵育24h。细胞分组及处理同上。继续培养6h和12h，收集培养上清液。PBS洗涤2次后，每孔加入0.5mL细胞裂解液(150mmol/LNaCl，150mmol/LTris-HCI，lmmol/LEDTA，1％TritonX-100)，于4℃静置15min后振荡数分钟，10000rpm，4℃离心10min收集细胞裂解液，参照LDH试剂盒说明书分别测定上清液和细胞裂解液中的LDH活性。

按公式：LDH释放率＝上清液中LDH活性/(上清液中LDH活性+细胞裂解液中LDH活性)`×100％，计算LDH释放率。

3.3酶生化法测定MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力

取生长良好的ECV-304细胞制成1×10⁵/mL的细胞悬液接种于24孔板，置37℃，5％CO₂孵育24h。细胞分组及处理同上。继续培养12h，收集培养上清液。按MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒说明书测定细胞MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力。

4、数据处理

MicrosoftExcel自带的统计软件进行处理，实验数据以表示，组间差异用t检验。

三、结果及结论

1、化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞生存率的影响

正常活细胞线粒体能量代谢过程中产生琥珀酸脱氢酶，可将淡黄色MTT还原成不溶于水的蓝紫色的甲腊结晶，结晶数量与活细胞数成正比。本实验结果显示：ECV-304细胞经H₂O₂(150μmol/L)氧化损伤6h和12h后，细胞OD值明显降低且与正常组相比具有统计学意义(P<0.01)，表明细胞活力下降。而化合物(Ⅰ)对细胞具有保护作用，能显著抑制H₂O₂对细胞的氧化损伤，提高存活率。作用6h，50、100μmol/L化合物(Ⅰ)对细胞损伤抑制率分别为16.67％(P<0.05)和28.21％(P<0.01)。作用12h，10、50、100μmol/L化合物(Ⅰ)对细胞损伤抑制率提高为24.85％(P<0.05)，29.64％(P<0.01)和38.47％(P<0.01)。见表1(**P<0.01vsNormal；^#P<0.05，^#P<0.01vsH₂O₂group；^▲P<0.05，^▲▲P<0.01vsTMPgroup，下同)。

2、化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞LDH释放率的影响

乳酸脱氢酶能催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕红色，通过比色测定反应产物可间接求出乳酸脱氢酶活力。结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞LDH释放率显著增高(P<0.01)。与模型组比，化合物(Ⅰ)各组细胞LDH释放率均减少：10、50、100μmol/L化合物(Ⅰ)作用6h，细胞的LDH释放率降为20.54％(P<0.01)和21.22％(P<0.01)；50、100μmol/L化合物(Ⅰ)作用12h，细胞的LDH释放率降为33.64％(P<0.01)和29.53％(P<0.01)。化合物(Ⅰ)随浓度的增加，对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用也逐渐增强，呈现出一定的量效关系。结果见表2。

3、化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞MDA含量、SOD、GSH-Px活力的影响

实验结果表明：与正常组比模型组ECV-304细胞培养液中MDA含量显著增高(P<0.01)。与模型组相比，10、50、100μmol/L化合物(Ⅰ)组细胞MDA生成量均明显减少，分别为3.00±0.79nmol/mL(P<0.05)，2.86±0.75nmol/mL(P<0.05)和2.69±0.45nmol/mL(P<0.01)。化合物(Ⅰ)各浓度组组间对照显示，随浓度的增加，化合物(Ⅰ)对ECV-304细胞脂质过氧化损伤的保护作用也逐渐增强，呈现一定的量效关系。结果见表3。

实验结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞SOD活性显著降低(P<0.01)。与模型组相比，50、100μmol/L化合物(Ⅰ)均可增强ECV-304细胞的SOD活性，SOD活性分别提高为17.9±l.34U/mL(P<0.05)和19.25±0.81U/mL(P<0.01)。且随浓度的增加，细胞的SOD活性也逐渐提高，表明化合物(Ⅰ)可增强ECV-304细胞的抗氧自由作用，具一定量效关系；10μmol/L化合物(Ⅰ)虽也可提高SOD活性，但不具有显著统计学意义。见表3。

实验结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞培养液中GSH-Px活性显著降低(P<0.01)。与模型组相比，10、50、100μmol/L化合物(Ⅰ)组细胞GSH-Px活性均显著提高，分别为73.8±10.3U/mL(P<0.05)，92.2±8.5U/mL(P<0.01)和102.5±10.3U/mL(P<0.01)。且随化合物(Ⅰ)浓度的增加，ECV-304细胞的GSH-Px活性也逐渐提高，表明细胞抗氧化作用的能力也逐渐增强，呈现一定的量效关系。结果见表3。

总结：本实验采用H₂O₂作为外源性自由基生成系统，能够诱导血管内皮细胞(ECV-304)氧化应激损伤，促进细胞凋亡。通过MTT法和LDH活性检测证实化合物(Ⅰ)对H₂O₂氧化损伤细胞具有保护作用；通过细胞上清液MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性的测定，证实化合物(Ⅰ)有清除自由基和活性氧的抗氧化特性。

表1化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞生存率的影响(n＝8)

表2化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞LDH释放率的影响(n＝8)

表3化合物(Ⅰ)对H₂O₂损伤ECV-304细胞MDA含量、SOD、GSH-Px活力的影响(n＝8)

实施例3

片剂的制备：按实施例1方法先制得化合物(Ⅰ)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例4

口服液的制备：按实施例1方法先制得化合物(Ⅰ)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。

实施例5

胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物(Ⅰ)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例6

注射液的制备：按实施例1方法先制得化合物(Ⅰ)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例7

无菌粉针的制备：按实施例1方法先制得化合物(Ⅰ)，以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (7)

1.具有下述结构式的化合物（Ⅰ），

。

2.权利要求1所述的化合物（Ⅰ）的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：（a）将南天竹的干燥叶粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱10个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c）步骤（b）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d）步骤（c）中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9~13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（Ⅰ）。

3.根据权利要求2所述的化合物（Ⅰ）的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。

4.根据权利要求2所述的化合物（Ⅰ）的制备方法，其特征在于：所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。

5.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（Ⅰ）和药学上可接受的载体。

6.权利要求1所述的化合物（Ⅰ）在制备血管保护的药物中的应用。

7.权利要求5所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。