CN105211502A - 绿色饲料添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种绿色饲料添加剂，重量份数组成为：复合多糖提取物8-15，海洋红酵母发酵培养物8-20，杜仲叶提取物5-10，甘草3-8，酸角3-8，鱼腥草1-5，蒲公英1-5；复合多糖提取物来自黄芪、枸杞和紫花苜蓿；海洋红酵母保藏编号为CCTCC？NO：M？2014592。本发明海洋红酵母既能高产类胡萝卜素又能富集铜，通过静止培养方法有效的提高了酵母中类胡萝卜素产量和铜含量，作为饲料添加剂应用于饲料中，可以提供类胡萝卜素、B族维生素和铜离子，其高效的富铜能力取代了常规饲料中使用的无机铜离子，稳定性好，与多种中草药配伍，可取代抗生素在饲料中使用，提高肉制品安全性，提高饲料利用率，增强动物机体免疫力，调节肠道健康，改善动物代谢机能和繁殖能力，提高饲养效益。

Description

绿色饲料添加剂

技术领域

本发明属于饲料添加剂领域，尤其涉及一种能够提高饲料利用率和改善动物肠道健康的绿色饲料添加剂产品及其制备方法。

背景技术

目前养殖业普通存在饲料利用率不高，营养成分消化不完全，保管不善导致饲料吸湿霉变或生虫等问题，这些问题的存在不仅大大增加了饲养成本，而且也导致了资源浪费。

解决上述问题，控制养殖成本，降低养殖风险是养殖业快速发展的一大瓶颈。使用化学合成添加剂会造成动物耐用性、残留等问题，危害人类健康，同时还有大量的排泄物，如氨气、硫化氢等有害气体，污染环境。中草药饲料添加剂作为新兴研究的热点，具有天然、营养、副作用小等优点。研究表明，许多中草药本身就具有良好的体外抑菌能力，中草药饲料抗菌保健剂无残留、无耐药性，其作用机理不仅仅在于对病原微生物的抑杀作用，更重要的是对机体抗病修复能力的调整，即提高机体的抗应激能力、提高机体免疫功能和抗病防御机能，从而达到提高肉制品质量和提高动物饲料利用效率的目的。

中草药是具有特定功效的一些植物，这些植物各有功效，例如部分植物的效用如下：(1)杜仲是我国传统中药材，资源丰富。中兽医药界传统上把杜仲皮、叶作为畜禽促生长剂，促生长、增蛋、催乳和动物免疫增强剂应用。农民对杜仲喂动物的好处已有所认识，感情上较易接受。近些年的试验已初步证实，杜仲皮、叶提取物、杜仲叶粉有提高畜、禽、鱼健康水平和生产性能的作用；对改善高日龄鸡健康，延缓产蛋力下降有一定效果，并具有改善动物肉、蛋品质的可能。已有试验初步证实，杜仲叶提取物作为饲料防霉剂具有与化学防霉剂相同的效果，并具有开发饲料新型抗氧化剂的潜力。从饲料行业发展和绿色养殖的要求出发，杜仲叶它优越的抗菌促生长性能已经得到了大家的广泛认可。试验证明，杜仲叶提取物具有广谱抑菌、抗氧化、清除自由基和提高免疫力等作用，具有促进畜禽快速生长；防病治病；替代抗生素等效用。(2)黄芪多糖(AstragalusPolysacharin，APS)黄芪多糖是黄芪发挥作用的主要成分。黄芪有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难溃，久溃不敛，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等。黄芪多糖由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等组成，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。(3)枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharides，LBP)是一种水溶性多糖，已明确该多糖系蛋白多糖，分子量为22～25kD，由阿拉伯糖、葡萄糖、醋多糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。LBP可明显增加小鼠外周T淋巴细胞百分数，其作用强，用量小，对T淋巴细胞免疫反应具有选择性作用，它是一种T淋巴细胞免疫佐剂。LBP对体液免疫也有促进作用。LBP对辐射损伤小鼠的免疫功能的受抑有恢复作用，还可逆转氢化可的松所致的小鼠免疫低下，使胸腺质量和抗体生成增加(黎雪加，1994)。王永吉(2004)研究表明，饲料中添加45mg/kg枸杞多糖能显著增强鲫鱼的溶菌酶活力，提高其非特异性免疫力。(4)苜蓿多糖(alfalfapolysaccharides,APS)是豆科牧草紫花苜蓿中提取的植物活性多糖,性质稳定,含葡萄糖、甘露糖、鼠李糖等活性成分,通过促进畜禽免疫器官的生长和淋巴细胞的增殖转化来提高畜禽的免疫功能,通过清除自由基起到抗氧化作用。另外苜蓿多糖还具有抗肿瘤、抗感染、降血脂、降血糖、抗菌、消炎等多种生物学功能。(5)蒲公英属清热解毒类名药，为防治疮黄、乳痈、目赤肿痛之要药。现代医学研究认为，它不但含有多种营养物质，可作为人们保健蔬菜之用，而且是杀菌抗病毒、消炎常用品。作为动物饲料添加剂，具有促生长、提供动物产品品质，防治疾病等功效，是药饲兼用、无公害绿色饲料添加剂。(6)酸角果肉中含有丰富的还原糖、有机酸、果酸、矿物质(以钙、钾和磷为主，较少为镁和锌)、维生素和89种芳香物质及多种色素，此外，还含有蛋白质、脂肪等。种子占果实的30％，含有蛋白质、脂肪、粗纤维、碳水化合物、灰分、单宁等物质。果肉除直接生食外，还可加工生产营养丰富、风味特殊、酸甜可口的高级饮料和食品，如果汁、果冻、果糖、果酱和浓缩汁、果粉。浓缩汁用于配制生产果汁等，果粉供生产多糖食品，而且种子胚乳加工制成的多糖产品。能清热解暑，生津止渴，消食化积。(7)甘草中具有生物活性的有效成分主要包括三萜皂苷类、黄酮类、多糖类、香豆素类、生物碱类和氨基酸等。甘草具有清热解毒、通筋脉、利血气、止渴祛痰、补脾和胃、调和诸药等功效。甘草在饲料中应用能提高动物生长性能、增强机体能力、改善肠道健康、减少应激反应等。(8)鱼腥草：我国传统中草药，具有清热解毒、利尿通淋、止血、祛痰止咳、阵痛等多种功能。鱼腥草化学成分复杂，具有多种功能活性成分，主要包括挥发油、黄酮类、生物碱等。同时鱼腥草作为天然产物，具有安全、营养、毒副作用小等特点，开始作为新兴的绿色添加剂在饲料中应用。

类胡萝卜素是一类呈黄色、橙色或红色的多烯类化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素，广泛存在于许多动植物中。类胡萝卜素作为一种优良的食品添加剂和改善人类营养的营养增补剂，它的优良品质和效果，很久以来就被世界各国所公认，被誉为最有希望的抗氧化剂。目前，类胡萝卜素被广泛应用于食品、医药、化妆品及饲料添加剂等行业中，由于其良好的应用前景及卓越的功能，长久以来倍受人们青睐。

从天然食物提取类胡萝卜素工艺复杂、成本高并且浪费大量食物，因此通过微生物发酵法生产类胡萝卜素已成为研究热点，特别是用不产生毒素的红酵母作为菌种已被广泛研究。红酵母是酵母菌中的一种，属于隐形球酵母科，为单细胞真菌。红酵母形体为卵圆形或椭圆形，生殖方式为多边形出芽生殖，能产生明显的红色或黄色色素。红酵母能产生β-胡萝卜素、圆酵母素和红酵母红素等多种色素。

铜是动物必需的微量元素，对于动物的健康和生长都有很重要的作用。目前，已有许多试验证实，在断奶仔猪饲粮中以硫酸铜作为铜源添加(250mg/kg)的铜可以提高仔猪的同采食量、日增重以及肉料比。但饲料中添加这种无机态的硫酸铜也存在很多问题，如猪吸收率低、与饲粮中其它组分配伍性差、排泄率高、污染环境等。但是，酵母菌具有鳌合铜粒子的能力，它除了含有高含量和高吸收率的铜元素外，还具有良好稳定性、与饲粮中其它组分配伍性好、吸收率高、排泄率低、环境污染小等优点。

有效开发利用天然中草药物质或真菌获得绿色饲料添加剂产品对饲料添加剂行业发展具有重要意义。

发明内容

本发明目的是提供一种改善动物肠道健康，提高动物机体免疫力和繁殖能力，提高饲料利用率的绿色饲料添加剂产品，其按照重量份数的组成如下：

复合多糖提取物8-15，海洋红酵母发酵培养物8-20，杜仲叶提取物5-10，甘草3-8，酸角3-8，鱼腥草1-5，蒲公英1-5；所述复合多糖提取物来自黄芪、枸杞和紫花苜蓿；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592。

进一步优选的重量份数组成为：

复合多糖提取物10-12，海洋红酵母发酵培养物10-15，杜仲叶提取物6-8，甘草4-6，酸角4-6，鱼腥草2-3，蒲公英2-3。

所述复合多糖提取物的制备方法如下：

将原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞干燥粉碎过60目筛，添加粉碎物总重量5-8倍沸水，浸提2-3次每次20-40min，过滤将浸提液混合，自然冷却至室温，向浸提液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到70-85％，10℃密闭冷藏沉淀6-8小时，沉淀物真空干燥，粉碎过60目筛，即得复合多糖提取物。

原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞可以任意比例混合，优选的质量比是1-15:1-15:1-5，更优选的质量比是1-12:1-6:1-3。

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：

优选的发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3-8％，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到26-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量3-5wt％的蛋氨酸螯合铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20-30min，然后降温至55-60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30-40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

所述杜仲叶提取物的制备方法如下：

杜仲壮叶粉碎后过30-60目筛，添加杜仲叶重量3-8倍的85-95℃热水连续浸提2-3次，每次30-50分钟；收集提取液，向提取液中添加乙醇使提取液中乙醇浓度达到70-85％，保持2-3小时，收集沉淀干燥后粉碎，过60目筛，即得杜仲叶提取物。

所述酸角主要指酸角果肉，也可以包括酸角叶，酸角果肉需煮熟后干燥粉碎。

本发明所述饲料添加剂的制备方法如下：

将酸角果肉煮熟后(或煮熟后与酸角叶混合)干燥粉碎过60目筛，甘草、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与通过上述方法制得的海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物按比例混合均匀即可。

本发明提供的一株用于饲料添加剂的海洋红酵母WYN1,属于红酵母属(Rhodotorula)，所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCCNO：M2014592，分类命名：海洋红酵母WYN1(Rhodotorulasp.WYN1)。

本发明饲料添加剂产品在一般畜禽和水产饲料中均可以添加使用，尤其在猪饲料中使用效果最佳，添加量以饲料重量1-5‰为宜。

有益效果：

本发明利用从海洋环境中分离获得的一株既能高产类胡萝卜素又能富集铜的海洋红酵母WYN1，通过静止培养方法有效的提高了酵母中类胡萝卜素产量和铜含量。采用本发明方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别达到27g/L以上、35-40mg/L和7240-8000μg/g干菌。研发中，发明人意外发现低温静止培养可以有效提高胡萝卜和铜含量，是本发明的重要成果。

本发明所述海洋红酵母WYN1作为饲料添加剂应用于饲料中，可以提供类胡萝卜素、B族维生素和铜离子，其高效的富铜能力良好地取代了常规饲料中使用的无机铜离子，稳定性好，易于饲料长期有效贮存和运输，与饲粮中其它组分配伍性好，吸收率高，排泄率低，环境污染小，改善动物肤质和毛色，强化饲料的营养价值。

本发明对复合多糖的提取方法简单彻底，极大节省了乙醇用量和提取时间，并且保证了提取物中黄芪多糖、苜蓿多糖、枸杞多糖等有效成分含量。

本发明通过科学复配，将具有富铜能力和高产类胡萝卜素的海洋红酵母菌与多种中草药成分实现了有机组合，可以有效降低抗生素类药物在饲养动物中的使用量，提高肉制品的安全性，提高饲料利用效率，增强猪的机体免疫力，调节肠道健康，改善动物代谢机能和繁殖能力，提高饲养效益。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1：海洋红酵母菌WYN1的获得及耐铜能力驯化

(1)将从黄海海边采集新鲜的海虾、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEPD培养基中，挑取红色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝卜素的积累量，筛选类胡萝卜素产量高的菌种。其中类胡萝卜素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形，没有假菌丝；在海水配置的YEPD培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产孢培养基上不产子囊孢子，多边芽殖，无掷孢子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根据上述特点，初步确定属于红酵母属(Rhodotorula)。斜面保存于冰箱中。

(2)海洋红酵母WYN1的发酵培养

将菌种转接到斜面培养基上活化，28℃培养24h后，接种于液体种子培养基中，28℃振荡培养36h得种子液，按10％接种量接入装有60mL发酵培养基的250mL三角瓶中，28℃，振荡培养48h(摇床转速为180r/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母膏1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，盐度20。28℃摇床培养48h，转速为180r/min。

(3)耐铜能力驯化

将海洋红酵母菌WYN1接种于铜离子含量为50mg/L(硫酸铜配置)培养基中，置于28℃，180r/min恒温摇床上震荡培养24h。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜的麦芽汁培养基中，培养24h。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有效地提高细胞生物量、类胡萝卜素的产量及酵母的富铜能力。

(4)细胞生物量的测定

将发酵液3000r/min离心10min，弃上清液，菌体经无菌水洗2～3次后再次离心，所得菌体置于60℃烘箱中干燥至恒重，准确称重。

(5)类胡萝卜素的提取：

将1g干菌体放入100mL三角瓶中，加入5mL3mol/L的盐酸室温浸泡1h，沸水浴4min，迅速冷却，3000r/min离心15min沉淀为细胞残渣，用丙酮定容至20mL萃取，得类胡萝卜素浸提液。

(6)类胡萝卜素的测定

将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下式计算类胡萝卜素含量：

式中：Aλ_max为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酮用量(mL)；0.16为类胡萝卜素的克分子消光系数；W为红酵母菌体干重(g)。

(7)酵母含铜量测定

用原子吸收法测定。

(8)菌种保藏

将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYN1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2014592。

实施例2：(对比试验)海洋红酵母WYN1高产类胡萝卜素的发酵条件研究

发酵培养基组成：葡萄糖2.5％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量300mg/L(硫酸铜配置)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量10％，摇床转速为180r/min，28℃培养24小时后，温度调整为30℃，pH调整为5，补加一次氮源，即再按照2.5％的添加量添加蛋白胨，继续发酵24h。采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27.52g/L、25.12mg/L和6240μg/g干菌。

实施例3：饲料添加剂及其制备

饲料添加剂的重量份数组成如下：

复合多糖提取物10，海洋红酵母发酵培养物15，杜仲叶提取物6，甘草5，酸角5，鱼腥草2，蒲公英3；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592。

所述复合多糖提取物的制备方法如下：

将原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞以质量比4:2:1干燥粉碎过60目筛，添加粉碎物总重量8倍沸水，浸提2次每次30min，过滤将浸提液混合，自然冷却至室温，向浸提液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到70％，10℃密闭冷藏沉淀8小时，沉淀物真空干燥，粉碎过60目筛，即得复合多糖提取物。提取物中多糖总量达到90％以上

所述杜仲叶提取物的制备方法如下：

杜仲壮叶粉碎后过30-60目筛，添加杜仲叶重量3倍的95℃热水连续浸提3次，每次30-40分钟；收集提取液，向提取液中添加乙醇使提取液中乙醇浓度达到75％，保持2.5小时，收集沉淀干燥后粉碎，过60目筛，即得杜仲叶提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物的制备方法如下：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉2％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量180mg/L(硫酸铜配置，以铜离子计算)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量5％，摇床转速为60r/min，26℃培养12小时后调整温度为18℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为4，保持3小时；之后每小时2-4℃阶梯形升温到28℃，pH调整为5.3，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为80r/min，继续发酵12h。发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在低温静止培养阶段向培养基中添加培养基重量4wt％的灭菌蛋氨酸螯和铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20min，然后降温至55℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为28g/L以上、38mg/L和7650μg/g干菌。

饲料添加剂的制备方法如下：

将甘草、酸角、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与通过上述方法制得的海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物按所述比例混合均匀即可

实施例4：饲料添加剂及其制备

饲料添加剂的重量份数组成如下：

复合多糖提取物12，海洋红酵母发酵培养物20，杜仲叶提取物10，甘草8，酸角8，鱼腥草5，蒲公英8；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592。

所述复合多糖提取物的制备方法如下：

将原料黄芪、紫花苜蓿、枸杞以质量比6:5:1干燥粉碎过60目筛，添加粉碎物总重量6倍沸水，浸提3次每次30min，过滤将浸提液混合，自然冷却至室温，向浸提液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到85％，10℃密闭冷藏沉淀6小时，沉淀物真空干燥，粉碎过60目筛，即得复合多糖提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物的制备方法如下：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量8％，摇床转速为80r/min，24℃培养10小时后调整温度为16℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为5，保持2小时；之后阶梯形升温到26℃，pH调整为5.5，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为50r/min，继续发酵15h。发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在低温静止培养阶段向培养基中添加培养基重量3wt％的蛋氨酸螯和铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解30min，然后降温至60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27g/L以上、35mg/L和7350μg/g干菌。

所述杜仲叶提取物的制备方法如下：

杜仲壮叶粉碎后过30-60目筛，添加杜仲叶重量8倍的85℃热水连续浸提2次，每次40-50分钟；收集提取液，向提取液中添加乙醇使提取液中乙醇浓度达到80％，保持3小时，收集沉淀干燥后粉碎，过60目筛，即得杜仲叶提取物。

饲料添加剂的制备方法如下：

将甘草、酸角、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与通过上述方法制得的海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物按所述比例混合均匀即可。

实施例5：饲料添加剂及其制备

饲料添加剂的重量份数组成如下：

复合多糖提取物15，海洋红酵母发酵培养物8，杜仲叶提取物5，甘草3，酸角6，鱼腥草3，蒲公英1；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592。

所述复合多糖提取物的制备方法如下：

将原料黄芪、紫花苜蓿、枸杞以质量比8:12:5干燥粉碎过60目筛，添加粉碎物总重量7倍沸水，浸提2次每次40min，过滤将浸提液混合，自然冷却至室温，向浸提液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到80％，10℃密闭冷藏沉淀7小时，沉淀物真空干燥，粉碎过60目筛，即得复合多糖提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150mg/L(硫酸铜配置，以铜离子计算)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3％，摇床转速为50r/min，28℃培养15小时后调整温度为20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3，保持4小时；之后阶梯形升温到30℃，pH调整为4.8，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为100r/min，继续发酵10h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量5wt％的蛋氨酸螯合铜。

所述酶解玉米粉的制备方法同实施例4。

所述杜仲叶提取物的制备方法如下：

杜仲壮叶粉碎后过30-60目筛，添加杜仲叶重量5倍的90℃热水连续浸提2次，每次45分钟；收集提取液，向提取液中添加乙醇使提取液中乙醇浓度达到85％，保持2小时，收集沉淀干燥后粉碎，过60目筛，即得杜仲叶提取物。

饲料添加剂的制备方法如下：

将甘草、酸角、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与通过上述方法制得的海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物按所述比例混合均匀即可

实施例6：饲料添加剂及其制备

饲料添加剂的重量份数组成如下：

复合多糖提取物8，海洋红酵母发酵培养物10，杜仲叶提取物8，甘草6，酸角3，鱼腥草1，蒲公英5；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592。

饲料添加剂的制备方法如下：

将甘草、酸角、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物的制备方法基本与实施例3相同，各组分按比例混合均匀即可。

实施例7：产品抑菌效果试验

本发明饲料添加剂产品具有良好的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、等致病菌的特性。采用杯碟法对饲料添加剂产品的抑菌效果进行了研究，试验采用饲料添加剂的10倍水浸提液进行研究。实验结果见表1，结果表明本发明产品具有抑制致病菌生长的良好特性。

表1饲料添加剂产品的抑菌效果

致病菌	金黄色葡萄球菌	大肠杆菌
			抑菌圈直径(mm)	30	36

本发明产品的性能稳定，使用安全，与其它饲料添加剂均无配合禁忌。本发明产品在饲料中的添加量为1-5‰，它完全可以替代抗生素药物，且无残留，不污染环境。饲用后，可显著增强动物机体的免疫力和抗病力，促进生长，提高日增重和饲料转化率，并有抗应激、抗氧化效果；同时对肠道细菌性疾病有较强的预防作用。据试验，饲用本发明饲料添加剂的水产品，品质得到改善，符合动物性食品的绿色化生产要求，社会效益和经济效益十分显著。

实施例8：产品使用效果

选择宁夏某饲料有限公司下属猪场，选择日龄、体重相近(偏差≤0.1kg)的健康母猪、仔猪和公猪各60头，均随机等量分成2组(试验组和对照组)，试验组添加本发明实施例1制得的饲料添加剂产品，对照组不添加本发明产品；本发明产品的添加量为饲料用量的1-5‰，连续饲喂60天。

与对照组相比，使用发明饲料添加剂可获得如下效果：

(1)母猪产仔数平均增加1.6头；

(2)公猪精子数平均增加23％，提高受胎率；

(3)分娩前后，母猪便秘次数减少43％以上；

(4)断奶仔猪体重平均增加8.6kg/头，比对照组(平均7.1kg/头)提高21.1％；

(5)仔猪腹泻率平均降低68％，死亡率降低90％；

(6)仔猪期抗生素使用量减少了99％以上；

(7)显著降低料肉比平均22％以上。

此外，对试验仔猪的肤色、毛况进行感官评分，“0分”表示肤色苍白、毛长，“1分”表示肤色较红润、毛较长，“2分”表示肤色非常红润、毛短，饲喂试验开始前均为“0分”，试验结束评分结果如下：

评分	对照组	实验组	偏差
				肤色	0.85	1.8	111.8％
毛况	1.06	2.0	88.7％

试验结果表明，本发明产品对仔猪生长过程中的毛色外观有明显改善，肤色红润、毛短且顺滑亮泽，这与本发明产品的配伍合理尤其是添加海洋红酵母的营养特点有关。

Claims (10)

1.一种绿色饲料添加剂，其按照重量份数的组成如下：复合多糖提取物8-15，海洋红酵母发酵培养物8-20，杜仲叶提取物5-10，甘草3-8，酸角3-8，鱼腥草1-5，蒲公英1-5；所述复合多糖提取物来自黄芪、枸杞和紫花苜蓿；所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO：M2014592；

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3-8％，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到26-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

2.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20-30min，然后降温至55-60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30-40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

3.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，在海洋红酵母所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量3-5wt％的蛋氨酸螯合铜。

4.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述复合多糖提取物的制备方法如下：将原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞干燥粉碎过60目筛，添加粉碎物总重量5-8倍沸水，浸提2-3次每次20-40min，过滤将浸提液混合，自然冷却至室温，向浸提液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度达到70-85％，10℃密闭冷藏沉淀6-8小时，沉淀物真空干燥，粉碎过60目筛，即得复合多糖提取物。

5.如权利要求4所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞的质量比为1-15:1-15:1-5。

6.如权利要求4所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述原料黄芪、紫花苜蓿和枸杞的质量比为1-12:1-6:1-3。

7.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述杜仲叶提取物的制备方法如下：杜仲壮叶粉碎后过30-60目筛，添加杜仲叶重量3-8倍的85-95℃热水连续浸提2-3次，每次30-50分钟；收集提取液，向提取液中添加乙醇使提取液中乙醇浓度达到70-85％，保持2-3小时，收集沉淀干燥后粉碎，过60目筛，即得杜仲叶提取物。

8.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述酸角为酸角果肉或酸角果肉与酸角叶的混合物，酸角果肉需煮熟后干燥粉碎。

9.如权利要求1所述的一种绿色饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂的重量份数的组成如下：复合多糖提取物10-12，海洋红酵母发酵培养物10-15，杜仲叶提取物6-8，甘草4-6，酸角4-6，鱼腥草2-3，蒲公英2-3。

10.权利要求1-9所述绿色饲料添加剂的制备方法，其特征在于，将煮熟的酸角果肉或煮熟的酸角果肉与酸角叶混合物、甘草、鱼腥草和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与分别制得的海洋红酵母发酵培养物、复合多糖提取物和杜仲叶提取物按比例混合均匀即可。