CN105028954A - 一种饲料添加剂产品 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种饲料添加剂产品，组成如下：低聚果糖10-15％，蜂胶10-20％，女贞子萃取物10-25％，海洋红酵母发酵培养物15-30％，灵芝菌固体发酵培养物30-50％，所述海洋红酵母保藏编号为CCTCC？No：M？2014592，上述比例均为质量百分比。本发明所述海洋红酵母既能高产类胡萝卜素又能富集铜，通过静止培养方法有效的提高了酵母中类胡萝卜素产量和铜含量，作为饲料添加剂应用于饲料中，可以提供类胡萝卜素、B族维生素和铜离子，其高效的富铜能力良好地取代了常规饲料中使用的无机铜离子，稳定性好，与饲粮中其它组分配伍性好，吸收率高，排泄率低，环境污染小，改善动物肤质和毛色，强化饲料的营养价值。

Description

一种饲料添加剂产品

技术领域

本发明属于饲料领域，尤其涉及一种饲料添加剂产品及其制备方法。

背景技术

现代畜禽养殖过程中，为了预防和治疗动物疾病，常使用过量抗生素产品来确保动物健康，但过量抗生素的使用常导致动物肉制品及其产物的品质下降和抗生素耐性增强，通过食物链的传递导致人类健康也受到抗生素问题的严重影响。

源自自然界的一些天然物质不仅具有良好的营养特性，同时还具有抗病毒、消炎、抗氧化、调节机体免疫功能等作用，具有广阔的应用前景。

蜂胶的主要成分是黄酮类化合物、酚类、内酯、香豆精类、醛酮，少量的铁、钙、硅、锰、铅、镍、铝、铜、锌等微量元素及维生素B族、维生素A，以及多种氨基酸、酶、多糖类及丰富的阿散酸等。蜂胶还是国内外专家公认的“天然抗生物质”,因为它不仅具有防御外来的入侵者及感染病原菌扩散的作用，还具有抗病毒、消炎、抗氧化、调节机体免疫功能等作用。

女贞子又称女贞实、冬青子、白蜡树子、鼠梓子。外果皮薄，中果皮较松软，易剥离，内果皮木质，黄棕色，具纵棱，破开后种子通常为1粒，肾形，紫黑色，油性。无臭，味甘、微苦涩。女贞子果实含齐墩果酸(Oleanolicacid)、甘露醇、葡萄糖、棕榈酸、硬脂酸、油酸及亚麻酸。果皮含熊果酸(Ursolicacid)、齐墩果酸、乙酰齐墩果酸(Acetyloleanolicacid)。种子含脂肪油14.9％,油中棕榈酸与硬脂酸为19.5％、油酸及亚麻酸等为80.5％。女贞子中尚含铜、锌、铁、锰等微量元素。女贞子补肝肾阴，乌须明目，现代医学研究认为女贞子可以抑制幽门螺杆菌的作用可以治疗胃病，还具有抑制嘌呤异常代谢用于痛风和高尿酸血症的治疗。用于肝肾阴虚，腰酸耳鸣，须发早白；眼目昏暗，视物昏暗；阴虚发热，胃病及痛风和和高尿酸血症。女贞子是一味临床常用中草药，近几年已经开始研究其作为饲料添加剂在畜禽生产中的作用。

灵芝[Ganoderemalucidum(LeyssexFr.)karst]，又称灵芝草，属担子菌亚门、多孔菌目、灵芝科、灵芝属。历代的医典把灵芝归位于“上上药”，其排位在人参之前。《神农本草经》、《本草纲目》记载，灵芝可明目、补肝气、安神、益精、益心气、益脾气、益肺气、益肾气、通九窍、耳聪、目明、利关节、利尿、养颜美容，是上好的滋补佳品。灵芝多糖能促进蛋白质、核酸的合成，对血清、肝脏及骨髓细胞蛋白质或核酸的更新、合成有促进作用,它是灵芝扶正固本的主要有效成分之一。灵芝多糖主要存在于灵芝真菌子实体、菌核、菌丝体或发酵液中；存在于灵芝中的灵芝酸有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞的功用，是灵芝的主要有效成分之一。

类胡萝卜素是一类呈黄色、橙色或红色的多烯类化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素，广泛存在于许多动植物中。类胡萝卜素作为一种优良的食品添加剂和改善人类营养的营养增补剂，它的优良品质和效果，很久以来就被世界各国所公认，被誉为最有希望的抗氧化剂。目前，类胡萝卜素被广泛应用于食品、医药、化妆品及饲料添加剂等行业中，由于其良好的应用前景及卓越的功能，长久以来倍受人们青睐。

从天然食物提取类胡萝卜素工艺复杂、成本高并且浪费大量食物，因此通过微生物发酵法生产类胡萝卜素已成为研究热点，特别是用不产生毒素的红酵母作为菌种已被广泛研究。红酵母是酵母菌中的一种，属于隐形球酵母科，为单细胞真菌。红酵母形体为卵圆形或椭圆形，生殖方式为多边形出芽生殖，能产生明显的红色或黄色色素。红酵母能产生β-胡萝卜素、圆酵母素和红酵母红素等多种色素。

铜是动物必需的微量元素，对于动物的健康和生长都有很重要的作用。目前，已有许多试验证实，在断奶仔猪饲粮中以硫酸铜作为铜源添加(250mg/kg)的铜可以提高仔猪的同采食量、日增重以及肉料比。但饲料中添加这种无机态的硫酸铜也存在很多问题，如猪吸收率低、与饲粮中其它组分配伍性差、排泄率高、污染环境等。但是，酵母菌具有鳌合铜粒子的能力，它除了含有高含量和高吸收率的铜元素外，还具有良好稳定性、与饲粮中其它组分配伍性好、吸收率高、排泄率低、环境污染小等优点。

发明内容

本发明提供一种饲料添加剂产品，组成如下：低聚果糖10-15％，蜂胶10-20％，女贞子萃取物10-25％，海洋红酵母发酵培养物15-30％，灵芝菌固体发酵培养物30-50％，所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例均为质量百分比。

所述灵芝菌固体发酵培养物由如下方法制备：

(1)斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，22-28℃培养96-120小时左右，至菌丝长满斜面即可；最佳培养温度25℃。

(2)液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时左右；旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25℃为宜。

(3)液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以5-20％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时左右；合适接种量为10％，旋转式摇床150转/分为宜，培养温度以25℃为宜。

(4)固体发酵培养：将二级摇瓶种子以5-10％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度20-27℃，湿度75-90％，通风量0.3-1.0(V/V),培养时间15-40天。每隔3-10天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐。

(5)发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下。对固体发酵物料进行粉碎过40-60目筛。

上述所用固体发酵培养基的碳源主要选择麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯(粉碎后)等常用原料，氮源可以选择花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉等；需要添加的无机盐有磷酸二氢钾，硫酸镁。

在上述固体发酵培养基中添加有质量比为2-6％的粉碎后过40-50目筛的益母草，3-8％的粉碎后过40-50目筛的黄芪，2-5％的粉碎后过40-50目的枸杞。

所述女贞子萃取物由如下方法制备：

女贞子粉碎，过40-50目筛后，添加女贞子3-6倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度30-45℃，2-4小时后调整温度为55-60℃提取1-2小时，提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女贞子残渣中添加75-85℃热水，热水添加量为女贞子残渣重量的2-4倍，处理时间30-50分钟，连续提取2-3次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：

优选的发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3-8％，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到26-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量3-5wt％的蛋氨酸螯合铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20-30min，然后降温至55-60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30-40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、蜂胶、女贞子萃取物和海洋红酵母发酵培养物按照上述比例混合得到本发明所述的饲料添加剂。

本发明提供的一株用于饲料添加剂的海洋红酵母WYN1,属于红酵母属(Rhodotorula)，所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCCNo：M2014592，分类命名：海洋红酵母WYN1(Rhodotorulasp.WYN1)。

有益效果：

本发明利用从海洋环境中分离获得的一株既能高产类胡萝卜素又能富集铜的海洋红酵母WYN1，通过静止培养方法有效的提高了酵母中类胡萝卜素产量和铜含量。采用本发明方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别达到27g/L以上、35-40mg/L和7240-8000μg/g干菌。研发中，发明人意外发现低温静止培养可以有效提高胡萝卜和铜含量，是本发明的重要成果。

本发明所述海洋红酵母WYN1作为饲料添加剂应用于饲料中，可以提供类胡萝卜素、B族维生素和铜离子，其高效的富铜能力良好地取代了常规饲料中使用的无机铜离子，稳定性好，与饲粮中其它组分配伍性好，吸收率高，排泄率低，环境污染小，改善动物肤质和毛色，强化饲料的营养价值。

本发明女贞子进行粉碎破壁处理，使女贞子中功能因子实现全价溶出和高效提取利用，分别采用有机溶剂和热水实现其中不同功效成分的有效提取，特别是控制温度分段提取更是有效提高了女贞子提取物的提取效率和质量。

低聚果糖除具有一般功能性低聚糖的物理化学性质外，最引人注目的生理特性是它能明显改善肠道内微生物种群比例，它是肠内双歧杆菌的活化增殖因子，可减少和抑制肠内腐败物质的产生，抑制有害细菌的生长，调节肠道内平衡；能促进微量元素铁、钙的吸收与利用，以防止骨质疏松症；可减少肝脏毒素，能在肠中生成抗癌的有机酸，有显著的防癌功能。

本发明通过科学复配，将海洋红酵母菌、灵芝菌实现了有机组合，特别是灵芝菌培养中添加了中药成分，本发明产品可以有效降低抗生素类药物在饲养动物中的使用量，提高动物肉制品的安全性，提高动物的饲料利用效率，增强动物的免疫力，提高饲养效益。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1：海洋红酵母菌WYN1的获得及耐铜能力驯化

(1)将从黄海海边采集新鲜的海虾、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEPD培养基中，挑取红色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝卜素的积累量，筛选类胡萝卜素产量高的菌种。其中类胡萝卜素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形，没有假菌丝；在海水配置的YEPD培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产孢培养基上不产子囊孢子，多边芽殖，无掷孢子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根据上述特点，初步确定属于红酵母属(Rhodotorula)。斜面保存于冰箱中。

(2)海洋红酵母WYN1的发酵培养

将菌种转接到斜面培养基上活化，28℃培养24h后，接种于液体种子培养基中，28℃振荡培养36h得种子液，按10％接种量接入装有60mL发酵培养基的250mL三角瓶中，28℃，振荡培养48h(摇床转速为180r/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母膏1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，盐度20。28℃摇床培养48h，转速为180r/min。

(3)耐铜能力驯化

将海洋红酵母菌WYN1接种于铜离子含量为50mg/L(硫酸铜配置)培养基中，置于28℃，180r/min恒温摇床上震荡培养24h。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜的麦芽汁培养基中，培养24h。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有效地提高细胞生物量、类胡萝卜素的产量及酵母的富铜能力。

(4)细胞生物量的测定

将发酵液3000r/min离心10min，弃上清液，菌体经无菌水洗2～3次后再次离心，所得菌体置于60℃烘箱中干燥至恒重，准确称重。

(5)类胡萝卜素的提取：

将1g干菌体放入100mL三角瓶中，加入5mL3mol/L的盐酸室温浸泡1h，沸水浴4min，迅速冷却，3000r/min离心15min沉淀为细胞残渣，用丙酮定容至20mL萃取，得类胡萝卜素浸提液。

(6)类胡萝卜素的测定

将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下式计算类胡萝卜素含量：

式中：Aλ_max为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酮用量(mL)；0.16为类胡萝卜素的克分子消光系数；W为红酵母菌体干重(g)。

(7)酵母含铜量测定

用原子吸收法测定。

(8)菌种保藏

将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYN1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNo：M2014592。

实施例2：(对比试验)海洋红酵母WYN1高产类胡萝卜素的发酵条件研究

发酵培养基组成：葡萄糖2.5％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量300mg/L(硫酸铜配置)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量10％，摇床转速为180r/min，28℃培养24小时后，温度调整为30℃，pH调整为5，补加一次氮源，即再按照2.5％的添加量添加蛋白胨，继续发酵24h。采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27.52g/L、25.12mg/L和6240μg/g干菌。

实施例3：饲料添加剂制备

一种饲料添加剂的组成如下：

低聚果糖15％，蜂胶10％，女贞子萃取物25％，海洋红酵母发酵培养物15％，灵芝菌固体发酵培养物35％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。

低聚果糖为市售产品。

灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：

(1)斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，25℃培养110小时左右，至菌丝长满斜面即可；

(2)液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床100转/分，26℃培养100小时左右；培养温度26℃。

(3)液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以10％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床100转/分，26℃培养130小时左右；培养温度26℃。

(4)固体发酵培养：将二级摇瓶种子以8％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度26℃，湿度85％，通风量0.5(V/V),培养时间20天。每隔3天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐。

(5)发酵培养结束，选择流化床干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下，对固体发酵物料进行粉碎过40-60目筛。

本发明所用灵芝菌种购于中国工业微生物菌种保藏中心，菌号CICC14080。

本发明中斜面培养基组成可以为PDA斜面培养基或其他合适培养基。

本发明中液体发酵种子培养基组成：淀粉2-3％，蔗糖3-5％，葡萄糖1-3％，蛋白胨0.5％，脱脂大豆蛋白粉2-3％，磷酸二氢钾0.13-0.2％，硫酸镁0.1-0.15％，维生素B₁2PPm，pH6-7。

所述固体发酵培养基组成如下：60％麸皮、1.4％蔗糖、10％玉米粉、16％玉米芯(粉碎后)，0.1％蛋白胨、2％脱脂大豆蛋白粉、0.5％酵母粉；3％粉碎后过50目筛的益母草、5％的粉碎后过40目筛的黄芪，2％粉碎后过40目筛的枸杞；培养基pH自然，121℃灭菌2小时。

所述女贞子萃取物制备方法如下：

女贞子粉碎过50目筛后，添加女贞子3倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度45℃，2小时后，调整温度为55℃1小时，提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女贞子残渣中添加85℃热水，热水添加量为女贞子残渣重量的4倍，处理时间50分钟，连续提取3次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物的制备方法如下：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉2％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量180mg/L(硫酸铜配置，以铜离子计算)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量5％，摇床转速为60r/min，26℃培养12小时后调整温度为18℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为4，保持3小时；之后每小时2-4℃阶梯形升温到28℃，pH调整为5.3，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为80r/min，继续发酵12h。发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在低温静止培养阶段向培养基中添加培养基重量4wt％的灭菌蛋氨酸螯和铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20min，然后降温至55℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为28g/L以上、38mg/L和7650μg/g干菌。

粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、蜂胶、女贞子萃取物和海洋红酵母发酵培养物按照上述比例混合得到饲料添加剂产品。

实施例4：饲料添加剂制备

饲料添加剂组成如下：低聚果糖10％，蜂胶15％，女贞子萃取物15％，海洋红酵母发酵培养物30％，灵芝菌固体发酵培养物30％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。

灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：

(1)斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，22℃培养120小时左右，至菌丝长满斜面即可；

(2)液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床80转/分，22℃培养130小时左右；

(3)液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以5％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床80转/分，22℃培养96小时左右；

(4)固体发酵培养：将二级摇瓶种子以5％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度22℃，湿度75％，通风量0.3(V/V),培养时间15天。每隔3天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐；

(5)发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在6％。对固体发酵物料进行粉碎过40-60目筛。

固体发酵培养基组成如下：70％麸皮、1.4％蔗糖、8％玉米粉、8％玉米芯(粉碎后)，0.1％蛋白胨、2％脱脂大豆蛋白粉、0.5％酵母粉；培养基PH自然。灭菌条件121℃，2小时。4％粉碎后过50目的益母草、3％的粉碎后过40目的黄芪，3％粉碎后过40目的枸杞；

所述女贞子萃取物制备方法如下：

女贞子粉碎过45目筛后添加女贞子5倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度35℃，3小时后调整温度为57℃1.5小时，提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女贞子残渣中添加80℃热水，热水添加量为女贞子残渣重量的3倍，处理时间40分钟，连续提取2次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物的制备方法如下：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量8％，摇床转速为80r/min，24℃培养10小时后调整温度为16℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为5，保持2小时；之后阶梯形升温到26℃，pH调整为5.5，按照2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉；摇床转速为50r/min，继续发酵15h。发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在低温静止培养阶段向培养基中添加培养基重量3wt％的蛋氨酸螯和铜。

所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解30min，然后降温至60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27g/L以上、35mg/L和7350μg/g干菌。

粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、蜂胶、女贞子萃取物和海洋红酵母发酵培养物按照上述比例混合得到饲料添加剂产品。

实施例5：饲料添加剂制备

饲料添加剂组成如下：低聚果糖10％，蜂胶10％，女贞子萃取物10％，海洋红酵母发酵培养物20％，灵芝菌固体发酵培养物50％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。

灵芝菌固体发酵培养物制备方法如下：

(1)斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，28℃培养96小时左右，至菌丝长满斜面即可；

(2)液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床180转/分，28℃培养96小时左右；

(3)液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以20％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床180转/分，28℃培养96小时左右；

(4)固体发酵培养：将二级摇瓶种子以10％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度27℃，湿度90％，通风量1.0(V/V),培养时间40天。每隔10天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵罐；

(5)发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7％以下。对固体发酵物料进行粉碎过40-60目筛。

固体发酵培养基组成如下：66％麸皮、1.4％蔗糖、8％玉米粉、8％玉米芯(粉碎后)，0.1％蛋白胨、2％脱脂大豆蛋白粉、0.5％酵母粉；培养基PH自然。灭菌条件，121℃，2小时。6％粉碎后过50目的益母草、6％的粉碎后过40目的黄芪，2％粉碎后过40目的枸杞；

所述女贞子萃取物制备方法如下：

女贞子粉碎过40-50目筛后，添加女贞子6倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度35℃，2小时后，调整温度为60℃，2小时，提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女贞子残渣中添加75℃热水，热水添加量为女贞子残渣重量的2倍，处理时间50分钟，连续提取3次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：

发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150mg/L(硫酸铜配置，以铜离子计算)，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3％，摇床转速为50r/min，28℃培养15小时后调整温度为20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3，保持4小时；之后阶梯形升温到30℃，pH调整为4.8，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为100r/min，继续发酵10h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

优选的，在所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量5wt％的蛋氨酸螯合铜。

所述酶解玉米粉的制备方法同实施例4。

粉碎后灵芝菌培养物、低聚果糖、蜂胶、女贞子萃取物和海洋红酵母发酵培养物按照上述比例混合得到饲料添加剂产品。

实施例6：产品抑菌效果试验

通过实验研究表明：本发明产品具有良好的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、等致病菌的特性。采用杯碟法对饲料添加剂产品的抑菌效果进行了研究，试验采用饲料添加剂的10倍水浸提液进行研究。实验结果见表1，结果表明本发明产品具有抑制致病菌生长的良好特性。

表1饲料添加剂产品的抑菌效果

致病菌	金黄色葡萄球菌	大肠杆菌
			抑菌圈直径(mm)	26	32

本发明产品的性能稳定，使用安全，与其它饲料添加剂均无配合禁忌。本发明产品在饲料中的添加量为1-2％，它完全可以替代抗生素药物，且无残留，不污染环境。饲用后，可显著增强动物机体的免疫力和抗病力，促进生长，提高日增重和饲料转化率，并有抗应激、抗氧化效果；同时对肠道细菌性疾病有较强的预防作用。据试验，饲用本发明饲料添加剂的水产品，品质得到改善，符合动物性食品的绿色化生产要求，社会效益和经济效益十分显著。

本发明产品以生物发酵法生产的中国传统食用菌为原料，产品质量稳定可控，产品在体内无残留、无环境污染、无抗药性，而且可以提高免疫力、具有强的抑菌作用，能够提高养殖效益。产品完全符合绿色饲料添加剂的要求。

实施例7：产品使用效果

本发明实施例4饲料添加剂产品在断奶仔猪中的使用效果试验。

试验方法：

试验动物选择宁夏饲料有限公司下属养殖场平均体重为(7.20±0.15)kg的健康断奶仔猪120头，经统计分析体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康断奶仔猪，按公母各半，分成2组(对照组和试验组)，每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例4制得的本发明产品，对照组不添加本发明产品。连续饲喂30天，与对照组相比，使用本发明饲料添加剂可获得如下效果：

项目	对照组	试验组	偏差
				始重(kg)	7.18	7.23	--
末重(kg)	18.28	21.52	--
				日增重(g/d﹒头)	370	476	28.6％
日采食量(g/d﹒头)	600	628	4.7％
				料肉比	1.62	1.32	-18.5％
腹泻率(％)	10	0.5	-95％

试验结果表明，在断奶仔猪日粮中添加本产品，仔猪的日增重比对照组有28.6％的显著提高；料肉比有18.5％显著降低；腹泻率降低了95％，本产品试验组的腹泻率控制在1％以下。

对试验仔猪的毛色外观进行感官评分，“0分”表示肤色苍白、毛长，“1分”表示肤色较红润、毛较长，“2分”表示肤色非常红润、毛短，饲喂试验开始前均为“0分”，试验结束评分结果如下：

评分	对照组	实验组	偏差
				肤色	0.8	1.6	100％
毛况	1.2	2.0	66.7％

试验结果表明，本发明产品对仔猪生长过程中的毛色外观有明显改善，这与本发明产品的配伍合理和营养特点有关。

Claims (10)

1.一种饲料添加剂，组成如下：低聚果糖10-15％，蜂胶10-20％，女贞子萃取物10-25％，海洋红酵母发酵培养物15-30％，灵芝菌固体发酵培养物30-50％，所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例均为质量百分比；

所述海洋红酵母发酵培养物由如下方法制备：发酵培养基组成为葡萄糖1％，酶解玉米粉1-3％，蛋白胨2.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.15％，铜含量150-200mg/L，氯化钠20％，其余为水；初始pH为8，接种量3-8％，摇床转速为50-80r/min，24-28℃培养10-15小时后调整温度为16-20℃进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为3-5，保持2-4小时；之后阶梯形升温到26-30℃，pH调整为4.6-5.5，按照初始培养基2.5％的添加量添加蛋白胨，按照2％的量添加酵母粉，摇床转速为50-100r/min，继续发酵10-15h；发酵液干燥粉碎过50-60目筛后即得海洋酵母发酵培养物。

2.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，其特征在于，所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉与水混合，湿法粉碎制备细微玉米粉料液，加入α-淀粉酶和氯化钙，调节pH5.5-6.0，72℃保温15min，再加热至90℃酶解20-30min，然后降温至55-60℃，调节pH4.5-5.0，添加酸性蛋白酶水解30-40min，酶解液离心洗涤后即得浓缩的酶解玉米粉。

3.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，其特征在于，在海洋红酵母所述低温静止培养阶段向培养基中添加初始培养基重量3-5wt％的蛋氨酸螯合铜。

4.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，其特征在于，所述女贞子萃取物由如下方法制备：女贞子粉碎，过40-50目筛后，添加女贞子3-6倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度30-45℃，2-4小时后调整温度为55-60℃提取1-2小时，提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的女贞子残渣中添加75-85℃热水，热水添加量为女贞子残渣重量的2-4倍，处理时间30-50分钟，连续提取2-3次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。

5.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，其特征在于，所述灵芝菌固体发酵培养物由如下方法制备：

(1)斜面菌种活化培养：将保藏的灵芝斜面菌种转接到斜面培养基上，22-28℃培养96-120小时，至菌丝长满斜面即可；

(2)液体一级种子培养：将上述灵芝斜面菌种挑取一块接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行一级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时；

(3)液体二级种子培养：将一级摇瓶种子以5-20％接种量接入装有100毫升培养基的500毫升摇瓶中进行二级种子培养，培养条件：旋转式摇床80-180转/分，22-28℃培养96-130小时；

(4)固体发酵培养：将二级摇瓶种子以5-10％接种量接入装有灭菌后固体发酵培养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50％，培养温度20-27℃，湿度75-90％，通风量0.3-1.0(V/V),培养时间15-40天，每隔3-10天开启搅拌10分钟，采用SGF固体发酵罐；

(5)发酵培养结束，将物料干燥到水分含量在7％以下，对固体发酵物料进行粉碎过40-60目筛。

6.如权利要求5所述的一种饲料添加剂，其特征在于，上述所用固体发酵培养基的碳源选择自麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、粉碎后玉米芯，氮源选择自花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉，需要添加的无机盐有磷酸二氢钾、硫酸镁。

7.如权利要求5或6所述的一种饲料添加剂，其特征在于，所述固体发酵培养基中添加有质量比为2-6％的粉碎后过40-50目筛的益母草，3-8％的粉碎后过40-50目筛的黄芪，2-5％的粉碎后过40-50目的枸杞。

8.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，组成如下：低聚果糖15％，蜂胶10％，女贞子萃取物25％，海洋红酵母发酵培养物15％，灵芝菌固体发酵培养物35％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。

9.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，组成如下：低聚果糖10％，蜂胶15％，女贞子萃取物15％，海洋红酵母发酵培养物30％，灵芝菌固体发酵培养物30％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。

10.如权利要求1所述的一种饲料添加剂，组成如下：低聚果糖10％，蜂胶10％，女贞子萃取物10％，海洋红酵母发酵培养物20％，灵芝菌固体发酵培养物50％；海洋红酵母保藏编号为CCTCCNo：M2014592，上述比例为质量百分比。