CN105209477A - 用于从间-α抑制剂蛋白耗乏的血液制品材料中分离血液制品的方法 - Google Patents
用于从间-α抑制剂蛋白耗乏的血液制品材料中分离血液制品的方法 Download PDFInfo
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Abstract
描述了一种用于从单个起始材料中分离多种血液制品的方法。从单个起始材料中分离多种血液制品使血液制品分离的效率最大化。在本发明中,一种或多种血液制品是分离自先前耗乏间-α抑制剂蛋白(IαIp)的血液制品材料。此方法为提高分离血液组分的效率和提供那些组分的药学上可接受的形式提供了新途径。
Description
发明背景
血液中天然地存在着多种关键性生物化合物。商业上有意义的血液制品包括间-α抑制剂蛋白(IαIp)、白蛋白、免疫球蛋白(IVIg)、因子VII、因子VIII、因子IX、α-1抗胰蛋白酶、抗凝血酶III、C1-抑制剂、蛋白C、冯维勒布兰德因子(vonWillebrandfactor)、因子H、凝血酶原(因子II)以及凝血酶。血液制品在凝血、免疫、炎症以及其他生物学功能中发挥关键作用。缺乏这些化合物中的一种或多种的受试者可能患有多种医学病症;用特定血液化合物进行治疗可以缓解这些病症或其症状。另外,用特定血液制品进行治疗可以产生医学益处,如预防脓毒症或神经元损伤。为此目的,鉴于有限的血液供应,有效纯化血液化合物是特别重要的。
先前方法已经聚焦于从血液分级废弃物中分离IαIp,但是没有方法聚焦于从原始血浆中(即在分级过程之前)进行分离。
发明概述
从单个起始材料中分离多种血液制品使血液制品分离的效率最大化。本发明提供了这样一种方法。在本发明中,一种或多种血液制品分离自先前耗乏一种或多种间-α抑制剂蛋白(IαIp)的血液制品材料。此方法为提高分离血液组分的效率和提供那些组分的药学上可接受的形式提供了新途径,如可以被有需要的受试者所使用。
本发明提供了一种用于从间-α抑制剂蛋白(IαIp)耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法。在第一方面中,该方法包括提供一种IαIp耗乏的血液制品材料,该材料将一种或多种IαIp家族成员耗乏存在于源血液制品材料中的总量的至少约20%并包括存在于源血液制品材料中的至少约20%的IgG。该方法进一步包括从该IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品,该一种或多种血液制品中的至少一种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。在一些实施例中,该IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括3种或更多种非IαIp血液制品,基本上包括10种或更多种非IαIp血液制品,或基本上包括20种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。在一些实施例中,分离步骤包括以下步骤:使该IαIp耗乏的血液制品材料与一种支持体接触,这样使得这些血液制品中的一种或多种被基本上保留在该支持体上,并且随后从该支持体上洗脱富含这些被基本上保留的血液制品中的至少一种的级分。在一些实施例中,该支持体是层析柱。在以上实施例的任一实施例中,该IαIp耗乏的血液制品材料可以是耗乏一种或多种(例如,两种、三种、四种或更多种)IαIp家族成员(如IαI、PαI和/或二库宁肽(bikunin),或IαI和PαI两者)的材料;该一种或多种IαIp家族成员的耗乏是至少约20%或至少约90%或更多。
在本发明的另一个方面中,用于从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的该方法包括使一种血液制品材料与一种第一支持体接触,该血液制品材料至少包括IαIp,IαIp家族∶IgG重量比等于约1∶30、等于约1∶5或介于约1∶30与约1∶5之间的IgG,以及因子VIII∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶106的因子VIII和冯维勒布兰德因子∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶40的冯维勒布兰德因子中的一者,借此IαIp被基本上保留在该第一支持体上并且未被该支持体保留的材料被包括在第一流过物中。此方面进一步包括从该第一流过物中分离该一种或多种血液制品中的至少一种,该一种或多种血液制品中的至少一种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。在一些实施例中,该血液制品材料是全血浆、冷凝蛋白贫乏的血浆(cryo-poorplasma)、液态血浆、新鲜冰冻血浆(FFP)、FFP24、冰冻血浆(FP)、FP24、解冻的FFP、解冻的FFP24、解冻的FP、解冻的FP24、源血浆、回收的血浆、经溶剂/洗涤剂处理的血浆(SDP)、富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)、血清、血液或其稀释或浓缩制剂。在一些实施例中,在接触该第一支持体之前,可以将该血液制品材料与上样缓冲液混合。在某些实施例中,该上样缓冲液包括10至300mM盐,如10、20、30、40、50、100、150、200、250或300mM盐。在某些实施例中,该上样缓冲液包括50至250mM盐,如50、60、70、80、90、100、150、200或250mM盐。
在具体实施例中,该支持体是QA支持体并且该上样缓冲液包括约10至100mM盐,如10、20、30、40、50、60、75、80、85、90、95或100mM盐。在一些情况下,pH是从5.5至6.5,如5.5、5.7、5.9、6.0、6.1、6.3或6.5。在某些实施例中,该支持体是QA支持体,该上样缓冲液包括约50mM盐,并且pH是约6.0。
在具体实施例中,该支持体是DEAE支持体并且该上样缓冲液包括约150至250mM盐,如150、175、200、225或250mM盐。在一些情况下,pH是从7.0至8.0,如7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0。在某些实施例中,该支持体是DEAE支持体,该上样缓冲液包括约200mM盐,并且pH是约7.6。
在一些实施例中,该第一流过物包括处于以下量的三种或更多种非IαIp血液制品、10种或更多种非IαIp血液制品或20种或更多种非IαIp血液制品,该量等于或大于存在于该血液制品材料中的量的约20%,并且其中,所述非IαIp血液制品中的每种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
在一些实施例中,分离步骤包括使该第一流过物与一种第二支持体接触,这样使得这些血液制品中的一种或多种被基本上保留在该第二支持体上,并且随后从该第二支持体上洗脱富含这些被基本上保留的血液制品中的至少一种的级分。在一些实施例中,该第一支持体或第二支持体之一或两者是层析柱。在一些实施例中,该第一支持体可以是阴离子交换柱。在某些实施例中,该第一支持体可以是DEAE或QA柱。
另外的实施例包括从该第一支持体上洗脱被基本上保留的IαIp,从而产生富含IαIp的第一洗脱物。该第一洗脱物可以由分离的IαIp组成。在一些另外的实施例中,该方法进一步包括从该第一洗脱物中分离被基本上保留的IαIp。
在以上实施例的一些中,分离的IαIp的产量可以是至少5μg/ml血液制品材料、至少50μg/ml血液制品材料、至少100μg/ml血液制品材料、至少300μg/ml血液制品材料、至少600μg/ml血液制品材料或至少900μg/ml血液制品材料。在以上实施例的一些实施例中,分离的IαIp的纯度可以是至少5%、至少25%、至少50%、是至少75%或100%。在一些实施例中,分离的IαIp可以是IαI、PαI或二库宁肽,或可以包括两种或更多种IαIp家族成员,或可以包括IαI和PαI。在一些实施例中,该被基本上保留的IαIp可以是IαI、PαI或二库宁肽,或可以包括两种或更多种IαIp家族成员,或可以包括IαI和PαI。
在一些实施例中,一种或多种分离的非IαIp血液制品的产量可以是存在于该第一流过物中的总量的至少20%、存在于该第一流过物中的总量的至少50%或存在于该第一流过物中的总量的至少80%。在一些实施例中,该IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαIp(例如,一种或多种(例如,两种、三种、四种或更多种)IαIp家族成员,如IαI、PαI和/或二库宁肽,或IαI和PαI两者)耗乏存在于源血液制品材料中的总IαIp的至少约20%(例如,至少约30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%或更多,或耗乏在20%-90%的范围内)的血液制品材料。在一些实施例中,该IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括3种或更多种非IαIp血液制品,基本上包括10种或更多种非IαIp血液制品,或基本上包括20种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
如在此使用,术语“约”意指引用值的+/-10%。
“血液制品”意指具有商业价值的物质,它可以天然地存在于血液中,例如存在于人类的血液中,并且对它而言,从血液中进行分离在商业上可实践。血液制品包括IαIp、白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
“IαIp”意指由间-α抑制剂蛋白(IαIp)家族的一种或多种或所有成员构成的血液制品,每个成员都由任选地连接至一条或多条重链(例如,重链H1、H2、H3和/或H4)的轻链(亦称二库宁肽)构成。IαIp家族的示例性成员包括:间-α抑制剂(IαI),其由连接至2条重多肽链(例如,两条H1、两条H2或H1和H2)的二库宁肽构成,并且具有约225至约260kDA的分子量;以及前α抑制剂(PαI),其由连接到单条重链(例如,H1、H2、H3或H4)的二库宁肽构成,并且具有约110至约130kDA的分子量。IαIp可以是单独的二库宁肽和/或二库宁肽与一条或多条重链的组合。“IαIp家族”意指IαIp家族的所有成员。“血液制品材料”意指任何血液衍生的组合物,其至少包括IαIp,和IαIp家族∶IgG重量比等于约1∶30、等于约1∶5或介于约1∶30与约1∶5之间(如约1∶30、1∶25、1∶20、1∶15、1∶10或1∶5)的IgG,以及因子VIII∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶106(如约1∶106、1∶107、1∶108、1∶109或1∶1010)的因子VIII和冯维勒布兰德因子∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶40(如约1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80、1∶90、1∶100或1∶200)的冯维勒布兰德因子中的一者。血液制品材料可以是例如全血浆、冷凝蛋白贫乏的血浆、液态血浆、解冻的新鲜冰冻血浆(FFP)、解冻的FFP24、解冻的冰冻血浆(FP)、解冻的FP24、源血浆、回收的血浆、经溶剂/洗涤剂处理的血浆(SDP)、富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)、血清、血液或其稀释或浓缩制剂。
“支持体”意指以取决于血液制品的特性的方式与至少一种血液制品相互作用的任何装置,这样使得该装置可用于将存在于混合物或溶液中的血液制品分级。支持体可以是柱、膜、盘、芯片或用于层析术或亲和捕获的其他装置,其实例在本领域是已知的。
“被基本上保留”意指存在于起始材料中的物质的至少约20%,如约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的量被捕获在支持体上。
“耗乏”意指减少物质的浓度或量。如果物质的浓度或量被减少约20%至约100%,如约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%,则可以将其认为被耗乏。
“IαIp耗乏的血液制品材料”意指来源于以下血液制品材料的任何材料,该血液制品材料耗乏一种或多种或所有IαIp家族成员并且进一步包括IgG。更确切地说,IαIp耗乏的血液制品材料包括一种或多种或所有IαIp家族成员的总量的不多于约80%,如约80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、I%、0.1%、0.01%或0%,以及存在于起始血液制品材料中的总IgG的至少约20%、如约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。IαIp耗乏的血液制品材料还可以包括一种或多种另外的血液制品。
“分离的”意指已经从起始材料中分离约20%至100%(如约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%)的血液制品。起始材料可以是血液制品材料、IαIp耗乏的血液制品材料或已经被进一步耗乏一种或多种非IαIp血液制品的IαIp耗乏的血液制品材料。
“纯度”意指已经被分离的血液制品(如通过本发明的方法分离的血液制品)不合其他组分的程度。将纯度表示为分离的血液制品组合物中的血液制品的重量百分比。
附图简述
图1是一个层析谱,示出了在整体DEAE柱(CIMMULTUSTM)上进行的冷凝蛋白贫乏的血浆分离。将冷凝蛋白贫乏的血浆稀释于20mMTris缓冲液+200mMNaCl(pH7.6)中,并加载到8mLDEAE柱上。加载后,将未结合的蛋白收集为流过级分(F/T)。然后,将该柱用290mMNaCl(W#1)和100mM乙酸盐缓冲液(pH2.95)(W#2)洗涤。然后,用包含750mMNaCl(EL)的缓冲液洗脱间-α抑制剂蛋白。可以将F/T和洗涤级分进一步处理,以分离其他有价值的治疗性血浆蛋白。
图2是通过在整体DEAE柱上分离冷凝蛋白贫乏的血浆而产生的级分的SDS-PAGE分析。将冷凝蛋白贫乏的血浆稀释于20mMTris缓冲液+200mMNaCl(pH7.6)中,并加载到8mLDEAE柱上。加载后,将未结合的蛋白收集为流过级分(F/T)。然后,将该柱用290mMNaCl(W#1)和100mM乙酸盐缓冲液(pH2.95)(W#2)洗涤。最后,用包含750mMNaCl(EL)的缓冲液洗脱间-α抑制剂蛋白。可以将F/T和洗涤级分进一步处理,以分离其他有价值的治疗性血浆蛋白。
详细说明
血液制品材料可以包含许多血液制品,其中的一些或所有制品的分离可以具有医疗或经济价值。本发明是针对一种从单个起始样品中顺序地分离多种血液组分的方法。更确切地说,本发明的发现是针对从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法。
IαIp家族是一组结构上相关的血浆关联的丝氨酸蛋白酶抑制剂。此家族的成员是由通过糖胺多糖共价连接的重和轻多肽亚基构成。轻链(亦称二库宁肽)负责间-α蛋白的丝氨酸蛋白酶抑制活性。名称“二库宁肽”反映存在两个库尼茨(Kunitz)类型的蛋白酶抑制结构域。间-α蛋白的重链(H1、H2、H3、H4)亦称透明质酸(HA)结合蛋白。在正常血浆中,二库宁肽被发现主要处于复合物形式,作为间-α抑制剂(IαI),其具有约225至约260kDa的分子量,以及前α抑制剂(PαI),其具有约110至约130kDa的分子量)。在IαI中,二库宁肽连接至2条重多肽链(例如,H1和H2)上,而在PαI中,仅有单条重链(例如,H3)连接至二库宁肽上。
可以通过使用一种支持体产生IαIp耗乏的血液制品材料,该支持体用于从血液制品材料中分离IαIp(例如,一种或多种(例如,两种、三种、四种或更多种,或所有)IαIp家族成员,如IαI、PαI和/或二库宁肽,或IαI和PαI两者)。在本发明中,可以通过本领域已知的任何可应用的方法从血液制品材料中分离IαIp,包括层析方法,如阴离子交换层析、阳离子交换层析、亲和层析或染料-配体层析。用于分离IαIp的示例性方法可以发现于US20110190194中,其描述了使用DEAE层析与低pH缓冲液,具体是pH小于4.0(例如,pH4.0、3.7、3.5、3.4、3.3、3.1、2.9、2.0),以分离IαIp。该方法可以包括多于一个缓冲步骤,其中随后的缓冲液可以具有低于第一次的pH。该缓冲液可以是乙酸、乙酸钠、柠檬酸、甘氨酸、磷酸盐或盐缓冲液。例如,该第一缓冲液可以是盐浓度物为290mMNaCl的盐缓冲液并且该第二缓冲液可以具有约2.9的pH。将US20110190194通过引用结合在此。可替代地,US20120053113描述了使用肝素亲和层析分离IαIp。分离IαIp的另外的方法在本领域是已知的。该IαIp耗乏的血液制品材料可以包括来自能够捕获IαIp的支持体(如层析柱)的流过物。如果向此支持体施加洗涤液,则该洗涤液可以被任选地包括在该IαIp耗乏的血液制品材料中,或可替代地,它自身可以是一种IαIp耗乏的血液制品材料。
在本发明的一些方法中,在被施加至支持体上之前,可以将血液制品材料与上样缓冲液混合。本发明的上样缓冲液可以是允许或增强一种或多种血液制品在支持体上保留的缓冲液。或可替代地,本发明的上样缓冲液还可以减少支持体上污染物的保留。上样缓冲液可以是具有约10至约300mM盐的盐缓冲液,如具有约10、20、30、40、50、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280或300mM盐的盐缓冲液。
在具体实施例中,该支持体是QA支持体并且该上样缓冲液包括约10至100mM盐,如10、20、30、40、50、60、75、80、85、90、95或100mM盐。在一些情况下,pH是从5.5至6.5,如5.5、5.7、5.9、6.0、6.1、6.3或6.5。在某些实施例中,该支持体是QA支持体,该上样缓冲液包括约50mM盐,并且pH是约6.0。
在具体实施例中,该支持体是DEAE支持体并且该上样缓冲液包括约150至250mM盐,如150、175、200、225或250mM盐。在一些情况下,pH是从7.0至8.0,如7.0、7.2、7.4、7.6、7.8或8.0。在某些实施例中,该支持体是DEAE支持体,该上样缓冲液包括约200mM盐,并且pH是约7.6。
施加与盐缓冲液混合的血液制品材料可以允许或增强IαIp的保留,同时减少污染物的保留。上样缓冲液的其他实例在本领域是已知的。
该IαIp耗乏的血液制品材料可以具有IαIp家族∶IgG重量比小于约1∶30(如约1∶40、1∶50、1∶100、1∶200或1∶300),以及因子VIII∶IαIp家族重量比大于约1∶106(如约1∶105、1∶104、1∶103、1∶102或1∶10)的因子VIII和冯维勒布兰德因子∶IαIp家族重量比大于约1∶40(如1∶30、1∶20、1∶10、1∶5或1∶1)的冯维勒布兰德因子中的一者。
本发明进一步涉及从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品所需或通过从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品得到的组合物。
血液制品
本发明的血液制品包括IαIp、白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、因子III、因子V、VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、抗凝血酶III、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原、肝素捕因子II以及凝血酶。
间-α抑制剂蛋白(IαIp)家族是一组血浆相关的丝氨酸蛋白酶抑制剂。此家族的成员是由通过糖胺多糖共价连接的重链和轻链(二库宁肽)多肽亚基构成。在这些重和轻链形式中,二库宁肽仍是无活性的,直到通过部分蛋白水解降解将其释放,这是一种作为调节活性的手段的机制。IαIp可以抑制炎症中涉及的丝氨酸蛋白酶,例如,弹性蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶G。IαIp可以有用于治疗某些疾病和障碍,例如,脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、弥散性血管内凝血以及纤维增生。
白蛋白是血浆的主要蛋白。白蛋白的基本生物学功能是调节血液的胶态渗透压。白蛋白能够与水、阳离子、脂肪酸、激素、胆红素、甲状腺素以及其他化合物相互作用。白蛋白可以用于治疗患有失血、休克、严重烧伤或其他医学病症的患者。它还可以用作细胞生长培养基的组分或用作药理活性化合物的赋形剂。
免疫球蛋白或抗体是在血液中循环并执行各种功能的内源性蛋白。它们对于免疫功能而言是关键的。免疫球蛋白由四条多肽链(两条轻链和两条重链)构成。免疫球蛋白类型由重链决定,并且包括IgM、IgD、IgG、IgE以及IgA。可以通过其具体组成或功能进一步定义免疫球蛋白。
凝血因子是通过指导凝血过程而控制出血的血液蛋白。循环性凝血因子是无活性的,但是损伤启动凝血级联。凝血过程涉及在损伤部位附近的血管的收缩,随后积聚血小板。血小板释放导致形成血小板栓的化学信号。在血小板表面上,凝血因子形成纤维蛋白凝块。凝血因子包括因子I(纤维蛋白原)、II(凝血酶原)、III(组织因子)、IV(钙)、V(不稳定因子)、VII(稳定因子)、VIII(抗血友病因子A)、IX(抗血友病因子B)、X(斯图亚特(StuartPrower)因子)、XI(抗血友病因子C)、XII(哈格曼(Hageman)因子)以及XIII(纤维蛋白稳定因子)。
纤维蛋白原是在钙离子存在下由凝血酶转化为纤维蛋白的血浆糖蛋白。在血液中发现的大部分纤维蛋白原在肝脏中合成。在凝血过程中,纤维蛋白线形成促进血凝块形成的交联网络。纤维蛋白原水平增加与炎症、止血胁迫、妊娠以及其他医学病症相关。
组织因子是一种细胞表面糖蛋白。组织因子与稳定因子(一种丝氨酸蛋白酶)相互作用,从而催化由凝血酶原形成凝血酶。一些细胞响应于血管损伤而释放组织因子。
抗血友病因子A是一种与冯维勒布兰德因子复合而循环的糖蛋白辅因子,通过凝血酶它可以从冯维勒布兰德因子中释放。分开地,哈格曼因子(一种丝氨酸蛋白酶)激活抗血友病因子C,这反过来激活抗血友病因子B。当凝血酶从冯维勒布兰德因子中解离抗血友病因子A时,抗血友病因子A可以在钙离子和磷脂的存在下与抗血友病因子B相互作用,以形成激活斯图亚特因子(一种维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶)的复合物。斯图亚特因子裂解凝血酶原,以产生活性凝血酶,从而增强凝血。
纤维蛋白稳定因子是负责稳定化血凝块形成的蛋白。没有它的话,血凝块形成,但发生分解,抑制了伤口愈合。纤维蛋白稳定因子是通过在纤维蛋白分子之间形成酰胺交联而发挥功能的凝血酶激活的转谷氨酰胺酶。
α-1抗胰蛋白酶是一种蛋白酶抑制剂。当发生炎症时,它在血液中的浓度可以上升。它保护组织免于经受炎性细胞的酶并且抑制多种多样的蛋白酶。例如,它抑制嗜中性粒细胞弹性蛋白酶,否则嗜中性粒细胞弹性蛋白酶将分解弹性蛋白并潜在地导致呼吸系统并发症,如成年人的肺气肿或慢性阻塞性肺病或儿童的肝硬化。
抗凝血酶(III)是一种凝血级联抑制剂。它是一种靶向凝血酶和因子X的蛋白酶。凝血抑制剂(如肝素)部分地通过增强抗凝血酶而起作用。
C1-抑制剂蛋白是一种阻止补体系统的自发激活的蛋白酶抑制剂。在炎症过程中它在血液中的浓度增加。靶标可以包括补体途径的C1复合物的C1r和C1s,凝集素途径的MBL复合物的MASP-1和MASP-2,激肽释放酶,FXI,FXII以及纤维蛋白溶解、凝血或激肽途径的蛋白酶。C1-抑制剂的活性可以间接防止产物(如C2、C4和MBL)的裂解。蛋白C还可以抑制因子V和VIII。
蛋白C是一种可以通过结合凝血酶而激活的酶原性丝氨酸蛋白酶。激活后,蛋白C可以蛋白质裂解地钝化因子V和因子VIII。蛋白C促进血液凝固、炎症和细胞死亡的调节。它还促进血管渗透性。因为蛋白C作为一种抗凝血剂发挥重要作用,蛋白C缺乏增加了血栓形成的风险。
冯维勒布兰德因子对于血液凝固而言是关键的。它是一种胶样蛋白,与血小板相互作用以形成栓,引导血液在损伤处或附近流动。如果此因子缺少或异常,可以发生出血障碍。
因子H调节补体旁路途径。它具有三个肝素结合位点。因子H的突变可以导致非典型溶血性尿毒症综合征,即一种血小板被耗乏的病症。
凝血酶原是一种具有许多功能的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶糖蛋白。凝血酶原的蛋白水解可以产生凝血酶。
凝血酶是一种裂解纤维蛋白原的Arg-Gly键从而导致形成纤维蛋白并释放纤维蛋白肽A和B的蛋白酶。凝血酶是凝血级联的一部分并促进形成止血栓。它通过激活因子V、VIII、XI以及XIII而增强凝血。凝血酶还通过与血栓调节素相互作用并激活蛋白C而促进抗凝作用。凝血酶还可以促进炎症和伤口愈合活动,例如通过激活嗜中性粒细胞或血小板。
分离血液制品的方法
本申请描述了用于从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法。用于纯化血液制品的起始血液制品材料可以是例如全血浆、冷凝蛋白贫乏的血浆、液态血浆、新鲜冰冻血浆(FFP)、FFP24、冰冻血浆(FP)、FP24、解冻的FFP、解冻的FFP24、解冻的FP、解冻的FP24、源血浆、回收的血浆、经溶剂/洗涤剂处理的血浆(SDP)、富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)、血清、血液或其稀释或浓缩制剂。
在本发明的一些方法的第一步中,可以使血液制品材料与能够保留IαIp的第一支持体接触。例如,可以使血液制品材料与DEAE层析柱接触,如US20110190194所述,或与肝素亲和层析柱接触,如US20120053113所述。本发明方法的支持体可以是用于在层析方法中使用的支持体,这些层析方法是如阴离子交换层析、阳离子交换层析、亲和层析、免疫亲和层析、固定化肝素层析或染料-配体层析。可以在本发明的方法中使用的层析设备的实例包括DEAE柱,如DEAE(GE医疗公司(GEHealthcare))、DEAECeramic(颇尔公司(Pall),例如,20067-C001)以及EMDDEAE(默克密理博公司(MerckMillipore),1.16888)。另外的实例包括肝素亲和,如肝素(GE医疗公司)、肝素HyperD(颇尔公司,例如,20029-021)以及肝素(东曹(Tosoh),例如,14444)。可替代地,该支持体可以是适于纳米过滤的支持体。在本发明的一些方法中,该支持体显著地保留存在于该血液制品材料中的IαIp。
在第二步中,从该第一支持体中收集第一流过物。该第一流过物是实质上包含一种或多种非IαIp血液制品的IαIp耗乏的血液制品材料。如果随后洗涤该支持体,则可以将洗涤缓冲液流过物包括在该IαIp耗乏的血液制品中或它自身可以是一种IαIp耗乏的血液制品。IαIp耗乏的血液制品可以包括存在于起始血液制品材料中的三种或更多种、大部分、基本上所有或所有非IαIp血液制品。
在一些方法中,可以从该第一支持体上洗脱IαIp,从而产生富含IαIp的第一洗脱物。此第一洗脱物还可以包括一种非IαIp血液制品组分。可以应用本领域已知的多种方法进一步分离IαIp。
分离自血液制品材料的IαIp的产量百分比可以是存在于该血液制品材料中的总量的至少约20%,如约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或100%。
来自血液制品材料的IαIp的产量可以是至少约5μg/ml,如约5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml或1500μg/ml。
在一些替代性方法中,提供该IαIp耗乏的血液制品。
在本发明中,至少一种非IαIp血液制品分离自该IαIp耗乏的血液制品材料。分离非IαIp血液制品可以涉及将该IαIp耗乏的血液制品材料施加至捕获一种或多种非IαIp血液制品的第二支持体上,并且随后从该第二支持体上洗脱那些产物。用于分离非IαIp血液制品的方法在本领域是已知的。下面提供了示例性方法。
分离白蛋白的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离白蛋白,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US2011137283描述了通过渗滤纯化白蛋白,US4156681描述了通过醇萃取纯化白蛋白,并且US4043997描述了通过用多羟基聚合物选择性吸收而纯化白蛋白。在另外的实例中,US4177188描述了通过聚乙二醇沉淀、随后是热凝固来纯化白蛋白,并且US4086222描述了通过层析纯化白蛋白。另外的方法在本领域也是已知的。
分离免疫球蛋白的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离免疫球蛋白,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,USRE31268描述了通过分级沉淀纯化免疫球蛋白,US20120053325描述了通过染料-配体亲和层析纯化免疫球蛋白,并且US4623541描述了通过应用离心和离子耗乏的两步硫酸铵分级过程纯化免疫球蛋白。在本领域已知的一些方法中,通过针对IgM、IgD、IgG、IgE以及IgA中的一种或多种或其具体免疫球蛋白具有特异性的技术分离单独的免疫球蛋白类型。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子I(纤维蛋白原)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子I(纤维蛋白原),包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US7041790描述了通过轭合至亲和配体的固定化纤维蛋白原结合部分分离纤维蛋白原。铃木(Suzuki)等人(ThrombosisResearch(血栓形成研究),18:707-715,1980)描述了通过亲和层析并吸附至利托菌素-琼脂糖柱而分离纤维蛋白原。还可以通过冷沉淀,随后使用乙醇或硫酸铵进行化学沉淀而分离纤维蛋白原(伊斯梅尔(Ismail),从人类血浆中纯化纤维蛋白原(PurificationofFibrinogenfromHumanPlasma).化学与生物分子工程毕业论文,学位论文与学生研究(Chemical&BiomolecularEngineeringTheses,Dissertations,&StudentResearch.)2012)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子II(凝血酶原)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子II(凝血酶原),包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5143838描述了通过阴离子交换分离凝血酶原并且US20120122179描述了通过脱氧核糖核酸适体分离凝血酶原。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子V(不稳定因子)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子V,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,赵(Chiu)等人描述了通过聚乙二醇沉淀、随后是免疫亲和柱来分离因子V(赵(Chiu)等人,临床研究杂志(J.ClinInvest.)72:493-503,1983)。伊思努夫(Esnouf)和若宾(Jobin)描述了通过吸附至磷酸化的纤维素柱、任选地随后是超滤而分离因子V(伊思努夫和若宾,生物化学杂志(Biochem.J.)102:660-665,1967)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子VII(稳定因子)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子VII,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,巴贾杰(Bajaj)等人描述了通过吸附至柠檬酸钡,随后是硫酸铵分级,DEAE-层析和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳分离因子VII(巴贾杰(Bajaj)等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)256:253-259,1981)。克兹尔(Kisiel)和戴维(Davie)通过硫酸钡吸附,随后是洗脱DEAE-分批吸附和洗脱,苯甲酰胺-琼脂糖柱层析,肝素-琼脂糖柱层析和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳圆盘来分离因子VII(克兹尔和戴维,生物化学(KisielandDavie,Biochem.)14:4928-4934,1975)。US4637932描述了使用二价金属盐吸附剂、随后是阴离子交换树脂分离因子VII。布罗泽(Broze)和马耶鲁斯(Majerus)描述了通过柠檬酸钡吸附和洗脱以及硫酸铵分级,随后是两步QAE-柱层析、G-100柱层析以及在G-25柱上进行凝胶过滤而分离因子VII(布罗泽和马耶鲁斯,生物化学杂志(BrozeandMajerus,J.Biol.Chem.)255:1242-1247,1980)。赫德纳(Hedner)和克兹尔(Kisiel)描述了通过DEAE-层析,超滤,透析,QAE-A-50层析,超滤,透析以及制备电泳分离因子VII(赫德纳和克兹尔,临床研究杂志(HednerandKisiel,JClin.Invest.)71:1836-1841,1983)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子VIII(抗血友病因子A)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子VIII,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US4758657描述了通过吸附在疏水性相互作用基质上而分离因子VIII:C。US4798675描述了通过吸附在主要是磷脂酰丝氨酸的磷脂包衣支持结构上而分离因子VIII:C。US4789733描述了通过用硫酸多糖(尤其是肝素)进行沉淀而分离因子VIII。US5288853描述了使用肝素偶联的层析介质,并且进一步通过甘氨酸和NaCl沉淀而分离因子VIII复合物。US6143179描述了通过用固定化细胞血管性血友病因子或其衍生物进行亲和层析而分离因子VIII。US5259951描述了通过离子交换柱层析分离因子VIII。EP0317279和US4361509描述了通过免疫亲和分离因子VIII。US4758657描述了使用疏水性相互作用基质分离因子VIII:C。US5245014描述了通过在组分离条件下进行凝胶过滤层析而分离因子VIII。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子IX(抗血友病因子B)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子IX,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5457181描述了通过DEAE-层析、随后顺序地是在DEAE-上进行离子交换层析和在肝素-上进行亲和层析而分离因子IX。US5919909描述了通过沉淀步骤(优选使用硫酸铵)分离因子IX,将因子IX留在上清液中,从上清液中将因子IX进一步通过层析纯化。还可以通过单克隆抗体柱分离因子IX,如US6732716所述。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子X(斯图亚特因子)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子X,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5378365描述了通过重复离子交换层析分离、随后是在金属离子上进行吸附层析而分离因子X。巴贾杰(Bajaj)等人描述了一种用于纯化凝血酶原、因子IX和因子X的程序,通过吸附在柠檬酸钡上并从上洗脱的初始步骤,硫酸铵分级和DEAE-层析,随后是在pH7.5的柠檬酸(钠)盐缓冲剂中进行肝素-琼脂糖层析(巴贾杰等人,制备型生物化学(Bajajetal.Prep.Biochem.)11(4):397-412,1981)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子XI(抗血友病因子C)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子XI,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US20100062512描述了通过疏水电荷诱导层析分离因子XI。US5252217通过过滤-吸附步骤并在阳离子交换树脂上进行单步层析而分离了因子XI。另外的方法在本领域也是已知的。
分离XII(哈格曼因子)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子XII,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,高桥(Takahashi)和西户(Saito)描述了通过单克隆抗体-免疫亲和柱层析,随后是凝胶过滤而分离因子XII(高桥和西户,生物化学杂志(TakahashiandSaito,J.Biochem.)103:641-643,1988)。罗宾(Robin)和科尔曼(Colman)描述了通过硫酸铵分级,两个锌螯合物亲和层析步骤和凝胶过滤而分离因子XII(罗宾和科尔曼,血栓形成研究(RobinandColman,ThrombosisRes.)41:89-98,1986)。陈(Chan)和莫瓦特(Movat)描述了通过用氢氧化铝吸附,用聚乙二醇沉淀,在QAE-上进行阴离子交换层析,以及在G-100上进行凝胶过滤或在免疫吸附柱上进行亲和层析的最后步骤而分离因子XII(陈和莫瓦特,血栓形成研究(ChanandMovat,ThrombosisRes.)8:337-349,1976)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子XIII(纤维蛋白稳定因子)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子XIII,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5047506描述了通过亲和层析分离因子XIII。US20080176789描述了通过顺序的阴离子交换层析和疏水相互作用层析而分离因子XIII多肽。US5688919描述了通过免疫亲和层析分离因子XIII。US20080281080描述了通过固定化金属亲和层析并且任选地进一步通过各种层析方法进行分级而分离因子XIII。US5204447描述了通过将生物学流体的pH调节至约pH5.5至6.5而沉淀并回收沉淀的因子XIII而分离因子XIII。另外的方法在本领域也是已知的。
分离α-1抗胰蛋白酶的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离α-1抗胰蛋白酶,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US20090292114描述了通过至少两个金属螯合层析步骤纯化α-1抗胰蛋白酶并且CN101274956描述了通过沉淀、凝胶层析和超滤纯化α-1抗胰蛋白酶。另外的方法在本领域也是已知的。
分离抗凝血酶(III)的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离抗凝血酶(III),包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US3842061描述了通过吸附至主要包含交联硫酸碳水化合物的水不溶性凝胶基质上而纯化抗凝血酶(III)并且US4510084描述了通过与肝素或类肝素相互作用,随后用阴离子交换剂吸附而纯化抗凝血酶(III)。另外的方法在本领域也是已知的。
分离C1-抑制剂蛋白的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离C1-抑制剂蛋白,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5030578描述了通过PEG分级,木菠萝凝集素-琼脂糖层析和在苯基-上进行疏水相互作用层析而纯化C1-抑制剂蛋白。在另一个实例中,US07/815870描述了通过抗体捕获而分离C1-抑制剂蛋白。另外的方法在本领域也是已知的。
分离冯维勒布兰德因子的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离冯维勒布兰德因子,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US5854403描述了通过季胺阴离子交换而分离冯维勒布兰德因子。US7939643描述了通过羟基磷灰石层析而分离冯维勒布兰德因子。另外的方法在本领域也是已知的。
分离因子H的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离因子H,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US20120053113描述了通过冷沉淀和阴离子交换而纯化因子H。另外的方法在本领域也是已知的。
分离凝血酶的方法
可以通过本领域已知的任何可应用的方法从IαIp耗乏的血液制品材料中分离凝血酶,包括沉淀、过滤、层析、液固萃取以及吸收或其组合。例如,US4965203描述了通过DEAE琼脂糖柱纯化凝血酶。可替代地,可以由已经分离自IαIp耗乏的血液制品材料的凝血酶原产生凝血酶。例如,US5393666和US5677162描述了用钙离子处理凝血酶原以产生凝血酶并且US5151355描述了在钙的存在下用促凝血酶原激酶处理凝血酶原,随后过滤,阴离子交换琼脂糖柱以及阳离子交换琼脂糖柱以产生凝血酶。在另一个实例中,US5432062描述了在洗涤剂或某些离液序列高的物质的存在下用蛋白酶处理凝血酶原,以产生凝血酶。另外的方法在本领域也是已知的。
纯度与产量
血液制品的分离可以产生存在于起始血液制品材料中的血液制品的总量的至少约10%,如约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。分离自血液制品材料的具体血液制品的产量将部分取决于存在于血液制品起始材料中的血液制品的数量。在一些情况下,分离自血液制品材料的血液制品的产量可以是至少约1pg/ml起始材料,如约1pg/ml、5pg/ml、10pg/ml、20pg/ml、30pg/ml、40pg/ml、50pg/ml、60pg/ml、70pg/ml、80pg/ml、100pg/ml、200pg/ml、300pg/ml、400pg/ml、500pg/ml或1ng/ml。在一些情况下,分离自血液制品材料的血液制品的血液制品可以是至少约5ng/ml起始材料,如约10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml或1μg/ml。在一些情况下,分离自血液制品材料的血液制品的产量可以是至少约5μg/ml起始材料,如约10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、400μg/ml、或500μg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、200mg/ml、500mg/ml或1g/ml起始材料。分离自血液制品材料的血液制品的产量还可以在至少约1pg/ml至至少约1g/ml的范围内。
组合物
除从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法之外,本发明的特征还在于可以通过描述的方法产生的组合物。这些组合物之一是IαIp耗乏的血液制品材料。
已知分离的血液制品可治疗特定医学病症。通过本发明的方法分离的血液制品(包括IαIp)可以用于治疗此类病症。可以按药学上可接受的剂量向需要的受试者给予或向其提供通过本发明的方法分离的血液制品的药物组合物。
实例1
在本发明的一个实例中,冯维勒布兰德因子分离自IαIp耗乏的FFP24。将FFP24解冻并以1∶10稀释于血浆稀释缓冲液(25mMTris,200mMNaCl,pH7.6)中并施加至DEAE整体柱上。收集流过物并施加另外的血浆稀释缓冲液,以允许起始材料完全穿过该柱。然后,另外的血浆稀释缓冲液可以被包括在流过物中。当流过物峰值返回基线时,将该柱用低pH缓冲液(150mM乙酸,pH4.0,或200mM乙酸,pH3.3)洗涤并收集峰。在低pH洗涤后,将该柱进一步用高pH缓冲液(100mMTris,100mMNaCl,pH7.6)洗涤,以恢复pH。将结合的蛋白用高盐洗脱缓冲液(25mMTris,1000mMNaCl,pH7.6)洗脱。收集峰并且此级分包含高纯度的IαIp。然后可以将IαIp进一步纯化至交换缓冲液中并且通过使用30kDa的膜截值超滤或渗滤除去低分子量溶质和盐。
冯维勒布兰德因子分离自该流过物。通过已经用缓冲液(20mMTris-HCl,pH7.4)平衡的阴离子交换柱(EMD-TMAE-(默克公司(Merck)))过滤流过物。随后,将该柱用另外的缓冲液洗涤。通过用200mMNaCl缓冲液洗涤该柱除去异物。然后,用另一种缓冲液(280mMNaCl20mMTris-HCl,pH7.4)从该柱上洗脱冯维勒布兰德因子。随后,用1MNaCl从该柱上洗脱可能存在的残余材料。
实例2
在本发明的第二个实例中,白蛋白分离自IαIp耗乏的冷凝蛋白贫乏的血浆。将冷凝蛋白贫乏的血浆以1∶10稀释于稀释缓冲液(40mMTris,200mMNaCl,pH7.6)中并施加至DEAE整体柱上。收集流过物并将另外的缓冲液(25mMTris,200mMNaCl,pH7.6)施加至该柱上,以允许起始材料完全穿过该柱。然后,另外的缓冲液可以被包括在第一流过物中。当流过物峰值返回基线时,将该柱用包含盐的洗涤缓冲液(40mMTris-HCl,290mMNaCl,pH7.6)洗涤并收集峰。盐洗涤后,将该柱另外用低pH缓冲液(200mM乙酸钠,pH2.95)洗涤并收集峰。第二次洗涤后,将结合的蛋白用高盐洗脱缓冲液(40mM柠檬酸钠,1000mMNaCl,pH6.50)洗脱。收集峰;此级分包含高纯度的IαIp。
白蛋白分离自该流过物。将流过物施加至已经被允许在0.075MNaCl溶液中膨胀并且已经被倾析3次的DEAE-A-50(DEAE取代的交联葡聚糖)上,在121℃下高压灭菌0.5小时,用1MNaCl洗涤,并悬浮于0.075MNaCl中。将悬浮液搅拌45分钟并且然后滤掉DEAE-A-50凝胶,而将滤液冷冻并存储在-20℃下。将此冷冻的悬浮液在+4℃下解冻并用0.5MNaOH溶液调节至pH8.0,之后将聚乙二醇4000(MW3000-3700)添加至经pH调节的血浆级分中。在+4℃下搅拌30分钟后,通过在+4℃下以1800g离心10分钟除去沉淀物。在+4℃下,用0.5MHCl将上清液调节至pH4.8,并且添加另外的聚乙二醇4000至终浓度为22%(w/v)。将混合物在+4℃下搅拌30分钟并且通过在+4℃下以1800g离心10分钟而收集包含白蛋白的沉淀物。在+4℃下,将沉淀物溶解于蒸馏水中并用0.5MNaOH将pH调节至7.0。该溶液包含白蛋白。任选地通过施加至阴离子交换器上,随后施加至阳离子交换器上而实现进一步纯化白蛋白。
实例3
在本发明的第三个实例中,α-1抗胰蛋白酶分离自IαIp耗乏的全血浆。将全血浆以1∶10稀释于稀释缓冲液(40mMTris,200mMNaCl,pH7.6)中并施加DEAE整体柱上。收集流过物并将另外的缓冲液(25mMTris,200mMNaCl,pH7.6)施加至该柱上,以允许起始材料完全穿过该柱。然后,另外的缓冲液可以被包括在第一流过物中。当流过物峰值返回基线时,将该柱用包含盐的洗涤缓冲液(40mMTris-HCl,290mMNaCl,pH7.6)洗涤并收集峰。盐洗涤后,将该柱另外用低pH缓冲液(200mM乙酸钠,pH2.95)洗涤并收集峰。第二次洗涤后,将结合的蛋白用高盐洗脱缓冲液(40mM柠檬酸钠,1000mMNaCl,pH6.50)洗脱。收集峰;此级分包含高纯度的IαIp。
为了从流过物中分离α-1抗胰蛋白酶,将流过物冷冻并使其经受-0.5℃至2℃的受控解冻,期间一些蛋白沉淀下来。收集上清液,用处理,并且然后过滤,以除去不想要的蛋白。用乙酸盐缓冲液将所得上清液调节至5.85的pH并添加乙醇至17%v/v-21%v/v。将接着发生的沉淀的温度维持在-4℃与-6℃之间,这样使得沉淀物包括奇石(Kistler)和聂克曼妮(Nitschmann)过程的级分1和沉淀物A(同上)。将上清液用缓冲液(10mMNaH2PO4,10mMNaOH,pH11)以1∶1稀释。所得溶液的pH在6与7之间,并且电导率小于7mS/cm。就在加载到用缓冲液(20mM磷酸盐,30mMNaCl,pH6.2)平衡的CaptoQ柱上之前,用稀乙酸将pH降低至5.5与6.5之间。然后,用缓冲液(包含170mMNaCl的20mM磷酸盐,pH6.2)洗脱α-1抗胰蛋白酶。将2.5mM的咪唑添加至从CaptoQ柱上洗脱的α-1抗胰蛋白酶级分中,然后将其加载到HisTrap柱上,该HisTrap柱已经去除其镍离子并重新填充上二价铜阳离子。在此咪唑浓度下并且使用此种类型的螯合固相支持体,一些污染物而非α-1抗胰蛋白酶结合至该固相支持体上。因此,该流过物包含α-1抗胰蛋白酶。
为了减少α-1抗胰蛋白酶级分的病毒载量,根据EP-A0131740添加聚山梨酯20/磷酸正三丁酯混合物。将经溶剂洗涤剂(SD)处理的α-1抗胰蛋白酶级分加载到填充有铜的固相支持体(亚氨基二乙酸螯合配体)上。在加载条件下(包含30mMNaCl的20mM磷酸盐缓冲液(pH6.2)中的2.5mM咪唑),α-1抗胰蛋白酶被该固相支持体所结合,而污染物未被结合。然后,用10mM咪唑溶液洗脱α-1抗胰蛋白酶。
其他实施例
在本说明书中提及的所有公开物、专利申请以及专利都通过引用结合在此。
虽然已经结合具体实施例描述了本发明,但应该理解的是能够对本发明进行进一步修改。因此,本申请旨在涵盖总体上遵循本发明的原理的任何变化、用途或改编,包括在本领域内已知或是本领域中的惯常操作内的偏离本披露的内容。
权利要求书:
Claims (70)
1.一种用于从间-α抑制剂蛋白(IαIp)耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法,该方法包括:
(a)提供一种IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将一种或多种IαIp家族成员耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%并且包括存在于该源血液制品材料中的至少约20%的IgG的血液制品材料;
(b)从所述IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品,其中所述一种或多种血液制品中的至少一种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括3种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
3.如权利要求2所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括10种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
4.如权利要求3所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括20种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述分离步骤(b)包括以下步骤:使所述IαIp耗乏的血液制品材料与一种支持体接触,这样使得所述血液制品中的一种或多种被基本上保留在所述支持体上,并且随后从所述支持体上洗脱富含所述被基本上保留的血液制品中的至少一种的级分。
6.如权利要求5所述的方法,其中所述支持体是层析柱、膜、盘或芯片。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
8.如权利要求7所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
9.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
10.如权利要求9所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
11.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将二库宁肽耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
12.如权利要求11所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将二库宁肽耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
13.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将两种或更多种IαIp家族成员耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
14.如权利要求13所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将两种或更多种IαIp家族成员耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
15.如权利要求1-6中任一项所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI和PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
16.如权利要求15所述的方法,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI和PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
17.一种用于从IαIp耗乏的血液制品材料中分离一种或多种血液制品的方法,该方法包括:
(a)使一种血液制品材料与一种第一支持体接触,其中所述血液制品材料至少包括IαIp,IαIp家族∶IgG重量比等于约1∶30、等于约1∶5或介于约1∶30与约1∶5之间的IgG,以及因子VIII∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶106的因子VIII和冯维勒布兰德因子∶IαIp家族重量比等于或小于约1∶40的冯维勒布兰德因子中的一者,并且,其中IαIp被基本上保留在所述第一支持体上,并且另外,其中未被该支持体保留的材料包括第一流过物;
(b)从所述第一流过物中分离一种或多种血液制品,其中所述一种或多种血液制品中的至少一种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
18.如权利要求17所述的方法,其中所述血液制品材料是全血浆、冷凝蛋白贫乏的血浆、液态血浆、新鲜冰冻血浆(FFP)、FFP24、冰冻血浆(FP)、FP24、解冻的FFP、解冻的FFP24、解冻的FP、解冻的FP24、源血浆、回收的血浆、经溶剂/洗涤剂处理的血浆(SDP)、富血小板血浆(PRP)、贫血小板血浆(PPP)、血清、血液或其稀释或浓缩制剂。
19.如权利要求17或18所述的方法,其中在接触所述第一支持体之前,将所述血液制品材料与上样缓冲液混合。
20.如权利要求19所述的方法,其中所述上样缓冲液包括约10至约300mM盐。
21.如权利要求20所述的方法,其中所述上样缓冲液包括约50至约250mM盐。
22.如权利要求21所述的方法,其中所述上样缓冲液包括约200mM盐。
23.如权利要求17-22中任一项所述的方法,其中所述第一流过物包括处于以下量的三种或更多种非IαIp血液制品,该量等于或大于存在于所述血液制品材料中的所述非IαIp血液制品的每种的量的约20%,并且,其中所述非IαIp血液制品中的每种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
24.如权利要求23所述的方法,其中所述第一流过物包括处于以下量的十种或更多种非IαIp血液制品,该量等于或大于存在于所述血液制品材料中的所述非IαIp血液制品的每种的量的约20%,并且,其中所述非IαIp血液制品中的每种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
25.如权利要求24所述的方法,其中所述第一流过物包括处于以下量的二十种或更多种非IαIp血液制品,该量等于或大于存在于所述血液制品材料中的所述非IαIp血液制品的每种的量的约20%,并且,其中所述非IαIp血液制品中的每种是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
26.如权利要求17-25中任一项所述的方法,其中所述分离步骤(b)包括以下步骤:使所述第一流过物与一种第二支持体接触,这样使得所述血液制品中的一种或多种被基本上保留在所述第二支持体上,并且随后从所述第二支持体上洗脱富含所述被基本上保留的血液制品中的至少一种的级分。
27.如权利要求17-26中任一项所述的方法,其中所述第一支持体或第二支持体之一或两者是层析柱。
28.如权利要求27所述的方法,其中所述第一支持体是阴离子交换柱。
29.如权利要求27所述的方法,其中所述第一支持体是DEAE或QA柱。
30.如权利要求17-29中任一项所述的方法,该方法进一步包括从所述第一支持体上洗脱所述被基本上保留的IαIp,从而产生第一洗脱物,其中所述第一洗脱物富含该被基本上保留的IαIp。
31.如权利要求30所述的方法,其中所述第一洗脱物由分离的IαIp组成。
32.如权利要求30所述的方法,该方法进一步包括从所述第一洗脱物中分离所述被基本上保留的IαIp,以产生分离的IαIp。
33.如权利要求32所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少5μg/ml血液制品材料。
34.如权利要求33所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少50μg/ml血液制品材料。
35.如权利要求34所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少100μg/ml血液制品材料。
36.如权利要求35所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少300μg/ml血液制品材料。
37.如权利要求36所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少600μg/ml血液制品材料。
38.如权利要求37所述的方法,其中该分离的IαIp的产量是至少900μg/ml血液制品材料。
39.如权利要求32-38中任一项所述的方法,其中该分离的IαIp的纯度是至少5%。
40.如权利要求39所述的方法,其中该分离的IαIp的纯度是至少25%。
41.如权利要求40所述的方法,其中该分离的IαIp的纯度是至少50%。
42.如权利要求41所述的方法,其中该分离的IαIp的纯度是至少75%。
43.如权利要求42所述的方法,其中该分离的IαIp的纯度是100%。
44.如权利要求32-43中任一项所述的方法,其中所述分离的IαIp是IαI。
45.如权利要求32-43中任一项所述的方法,其中所述分离的IαIp是PαI。
46.如权利要求32-43中任一项所述的方法,其中所述分离的IαIp是二库宁肽。
47.如权利要求32-43中任一项所述的方法,其中所述分离的IαIp包括两种或更多种IαIp家族成员。
48.如权利要求32-43中任一项所述的方法,其中所述分离的IαIp包括IαI和PαI。
49.如权利要求17-48中任一项所述的方法,其中所述被基本上保留的IαIp是IαI。
50.如权利要求17-48中任一项所述的方法,其中所述被基本上保留的IαIp是PαI。
51.如权利要求17-48中任一项所述的方法,其中所述被基本上保留的IαIp是二库宁肽。
52.如权利要求17-48中任一项所述的方法,其中所述被基本上保留的IαIp包括两种或更多种IαIp家族成员。
53.如权利要求17-48中任一项所述的方法,其中所述被基本上保留的IαIp包括IαI和PαI。
54.如权利要求1-53中任一项所述的方法,其中在步骤(b)中分离的所述一种或多种非IαIp血液制品的产量分别是存在于所述第一流过物中的所述一种或多种非IαIp血液制品中的每种的总量的至少20%。
55.如权利要求54所述的方法,其中该一种或多种非IαIp血液制品的产量分别是存在于所述第一流过物中的所述一种或多种非IαIp血液制品中的每种的总量的至少50%。
56.如权利要求55所述的方法,其中该一种或多种非IαIp血液制品的产量分别是存在于所述第一流过物中的所述一种或多种非IαIp血液制品中的每种的总量的至少80%。
57.一种IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαIp耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
58.如权利要求57所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
59.如权利要求58所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
60.如权利要求57所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
61.如权利要求60所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
62.如权利要求57所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将二库宁肽耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
63.如权利要求62所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将二库宁肽耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
64.如权利要求57所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将两种或更多种IαIp家族成员耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
65.如权利要求64所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将两种或更多种IαIp家族成员耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
66.如权利要求57所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI和PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约20%的血液制品材料。
67.如权利要求66所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料是一种将IαI和PαI耗乏存在于该源血液制品材料中的总量的至少约90%的血液制品材料。
68.如权利要求57-67中任一项所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括三种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
69.如权利要求68所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括十种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
70.如权利要求69所述的IαIp耗乏的血液制品材料,其中所述IαIp耗乏的血液制品材料基本上包括二十种或更多种非IαIp血液制品,这些非IαIp血液制品是选自白蛋白、IgA、IgG、IgM、IgD、IgG、IVIg、抗DIgG、乙型肝炎IgG、麻疹IgG、狂犬病IgG、破伤风IgG、水痘带状疱疹IgG、纤维蛋白原(因子I)、凝血酶原(因子II)、凝血酶、抗凝血酶III、因子III、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII、纤连蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2抗纤溶酶、尿激酶、C1-抑制剂、蛋白C、蛋白S、蛋白Z、蛋白Z相关的蛋白酶抑制剂、纤溶酶原、组织纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂-1、纤溶酶原激活剂抑制剂-2、冯维勒布兰德因子、因子H、前激肽释放酶、高分子量激肽原以及肝素辅因子II。
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CN112028988A (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-04 | 哈尔滨派斯菲科生物制药股份有限公司 | 一种冻干型人凝血因子viii的制备方法 |
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6069236A (en) * | 1993-06-14 | 2000-05-30 | Association Pour L'essor De La Transfusion Sanguine Dans La Region Du Nord | Immunoglobulin G concentrate for therapeutic use and process for producing said concentrate |
CN1972961A (zh) * | 2004-06-07 | 2007-05-30 | 厄普弗朗特色谱公司 | 血浆或者血清蛋白的分离 |
CN102112876A (zh) * | 2008-05-28 | 2011-06-29 | 普罗瑟拉生物制剂有限责任公司 | 来自血液的间-α抑制物蛋白的制备和组合物 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AT368883B (de) | 1980-07-22 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen |
AT379310B (de) | 1983-05-20 | 1985-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines antithrombin iii-heparin- bzw. antithrombin iii-heparinoidkonzentrates |
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GB8729822D0 (en) | 1987-12-22 | 1988-02-03 | Central Blood Lab Authority | Chemical process |
DE4435485C1 (de) | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
US20030190732A1 (en) * | 2000-10-13 | 2003-10-09 | Djuro Josic | Plasma fraction containing bikunin, method for the production thereof and use of the same |
US7932365B2 (en) | 2003-11-08 | 2011-04-26 | Pro Thera Biologics, Llc | Preparation and composition of inter-alpha inhibitor proteins from human plasma for therapeutic use |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6069236A (en) * | 1993-06-14 | 2000-05-30 | Association Pour L'essor De La Transfusion Sanguine Dans La Region Du Nord | Immunoglobulin G concentrate for therapeutic use and process for producing said concentrate |
CN1972961A (zh) * | 2004-06-07 | 2007-05-30 | 厄普弗朗特色谱公司 | 血浆或者血清蛋白的分离 |
CN102112876A (zh) * | 2008-05-28 | 2011-06-29 | 普罗瑟拉生物制剂有限责任公司 | 来自血液的间-α抑制物蛋白的制备和组合物 |
WO2012012773A1 (en) * | 2010-07-23 | 2012-01-26 | Baxter International Inc. | Manufacture of inter -alpha - inhibitor proteins (iaip) from plasma |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
T. BURNOUF等: "Chromatography in plasma fractionation:benefits and future trends", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
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