CN105199095A - 一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 - Google Patents
一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105199095A CN105199095A CN201510629853.6A CN201510629853A CN105199095A CN 105199095 A CN105199095 A CN 105199095A CN 201510629853 A CN201510629853 A CN 201510629853A CN 105199095 A CN105199095 A CN 105199095A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probe
- compound
- amphipathic
- amphipathic molecule
- fluorescence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 title abstract description 7
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 title abstract 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 title abstract 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 title abstract 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 52
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 46
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- -1 thiol compound Chemical class 0.000 claims description 20
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 12
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 8
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims description 6
- GZFGOTFRPZRKDS-UHFFFAOYSA-N 4-bromophenol Chemical compound OC1=CC=C(Br)C=C1 GZFGOTFRPZRKDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 claims description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- PBLNBZIONSLZBU-UHFFFAOYSA-N 1-bromododecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCBr PBLNBZIONSLZBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 4,4-difluoro-N-[3-[3-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1C1CC2CCC(C1)N2CCC(NC(=O)C1CCC(F)(F)CC1)C1=CC=CS1 BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N N-[3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]acetamide Chemical compound C(C)(C)C1=NN=C(N1C1CCN(CC1)CCC(C=1SC=CC=1)NC(C)=O)C LFZAGIJXANFPFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N benzene Substances C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 claims description 4
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 claims description 4
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 4
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 claims description 4
- VNGOYPQMJFJDLV-UHFFFAOYSA-N dimethyl benzene-1,3-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC(C(=O)OC)=C1 VNGOYPQMJFJDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxybutanediamide Chemical compound NC(=O)CCC(=O)NO HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 claims description 4
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 4
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005201 scrubbing Methods 0.000 claims description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims description 4
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 4
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 claims description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 abstract 1
- 238000003477 Sonogashira cross-coupling reaction Methods 0.000 abstract 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 abstract 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 125000005677 ethinylene group Chemical group [*:2]C#C[*:1] 0.000 abstract 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 abstract 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 abstract 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 abstract 1
- 0 Bc1ccc(*C*C)cc1 Chemical compound Bc1ccc(*C*C)cc1 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000011540 sensing material Substances 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 2
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- MVLGANVFCMOJHR-UHFFFAOYSA-N C#Cc(cc1)ccc1C#C Chemical compound C#Cc(cc1)ccc1C#C MVLGANVFCMOJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明是一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法。首先利用Sonogashira偶联反应通过“一锅法”合成寡聚苯撑乙炔(OPE)结构的刚性单元,以实现其荧光性;随后通过酰胺化反应接上带有双硫键的吡啶基团;最后用连有巯基的氨基聚乙二醇(SH-PEG-NH2)链替换吡啶基团,实现两亲性分子探针的制备。这种新型的分子探针具有非常好的水溶性(在水溶液中形成的纳米颗粒尺寸为5-6纳米)和生物相容性,在巯基分子存在下,该探针分子中的双硫键迅速被打断,使得原探针的两亲性丧失,在水中形成强烈的分子间聚集导致荧光的急剧下降,从而可视化监测巯基分子的存在。
Description
技术领域
本发明属于生物功能化传感材料技术领域,具体涉及一种对巯基分子具有特异性响应的双光子荧光探针的合成以及在细胞内巯基分子检测中的应用。
背景技术
细胞内巯基化合物(包括半胱氨酸、高半胱氨酸和还原型谷胱甘肽等)在维持生命体系的氧化还原动态平衡方面起着重要的作用。而且某些巯基化合物水平的高低与很多疾病密切相关,如:癌症、老年痴呆症和心血管疾病等。相比于其他检测方法,荧光分析法因其具有灵敏度高、选择性好、动态响应范围宽及易于进行原位分析等优点而在生物分子检测中受到人们的广泛关注。同时,与紫外光相比,近红外光因具有较深的组织穿透能力和较小的组织伤害更加适合于临床应用。因此,开发一类对巯基分子具有高效响应性的近红外荧光分子探针在生物医学领域具有重要意义。
发明内容
技术问题:本发明的目的是提供一种对细胞内巯基分子具有高灵敏度和高特异性响应的近红外荧光探针的合成方法以及对细胞外/细胞内巯基分子的高效检测应用。
技术方案:本发明的一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针具有如下分子结构:
其中,n为重复单元个数,x为PEG链的平均分子量;n值为5,11,17;x值为1000,2000。
本发明的的基于巯基物质检测的两亲性分子探针的合成方法具体如下:
合成的具体步骤如下:
1)、化合物1的合成:
将4-溴苯酚,无水碳酸钾和四丁基溴化胺加入到一容器中,抽真空氮气保护下加入溶剂丙酮,随后加入溴代十二烷,然后将反应体系升温到58~60摄氏度,回流反应;反应结束后抽滤除去碳酸钾,滤液旋干后用乙醇重结晶,最终得到白色鳞状晶体;
2)、化合物2的合成:
将化合物1、1,4-二乙炔基苯、5-溴间苯二甲酸二甲酯、催化剂四(三苯基膦)钯和碘化亚铜加入到一反应瓶中;将整个反应体系密封抽真空,然后充入氮气,保持整个反应过程在氮气氛围中进行,注入溶剂二异丙胺,避光条件下80~83摄氏度搅拌反应20~24小时,反应结束后减压蒸干溶剂,粗产物经硅胶柱提纯,最终得到的产物为淡黄色固体粉末;
3)、化合物3的合成:
将化合物2溶于四氢呋喃中,再加入氢氧化钾水溶液和四丁基溴化铵,混合溶液在50~60摄氏度下搅拌回流4~5小时,反应结束后,向体系中加入过量的稀盐酸水溶液,直到产生大量的絮状沉淀,过滤,滤渣用水反复洗涤,真空干燥,得到黄色固体产物;
4)、化合物4,5的合成
将2,2'-二硫二吡啶和巯基乙胺溶于甲醇中,室温搅拌7~10小时,后旋干溶剂得到氨基取代的二硫吡啶中间产物;再向反应瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺,超声溶解后投入化合物3、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温搅拌20~24小时得到不纯的化合物4;反应结束后直接投入过量的SH-PEG-NH2,滴加醋酸,室温搅拌2~3天;反应结束后用截留分子量3000~3500Da的透析袋在去离子水中进行透析,透析过程持续2~3天;用滤膜推滤透析袋中的液体,得到澄清透明的水溶液后再冷冻干燥,最终得到的化合物5为淡黄色固体粉末,即基于巯基物质检测的两亲性分子探针。
本发明基于巯基物质检测的两亲性分子探针在巯基物质检测中的应用,将该探针分子中的双硫键能被含有巯基的生物分子迅速打断,使得原探针的两亲性丧失,在水中形成强烈的分子间聚集导致荧光的急剧下降,从而可视化监测巯基分子的存在,具体方法如下:
1)、细胞外检测:将所制备的两亲性分子探针和目标检测物半胱氨酸在PBS缓冲溶液37摄氏度中共孵育,实时检测不同时间点溶液荧光的变化,并通过动态光散射DLS和透射电镜TEM观察粒子尺寸及形貌的变化;为了验证探针检测的特异性,选取一系列含不同官能团的氨基酸和探针共孵育,用同样的方法观察检测效果,其中所用两亲性分子探针的n值为11,x值为1000,
2)、细胞内检测:将所制备的两亲性分子探针和肿瘤细胞Hela进行共孵育,在双光子激发下观察不同时间点细胞内荧光的变化;选取正常细胞NIH-3T3和加入巯基抑制剂的Hela细胞进行对照实验,结果为:Hela细胞在探针存在下培养1小时后荧光明显减弱,而NIH-3T3细胞和加入巯基抑制剂的Hela细胞在培养1小时后荧光没有明显变化。
实验证明该探针在巯基物质检测方面具有很好的特异性。
有益效果:本发明首先通过“一锅法”Sonogashira偶联反应合成一端连有疏水性烷基链的寡聚苯撑乙炔(OPE)刚性单元,再利用另一端的羧基进行酰胺化反应接上带有双硫键的吡啶基团,最后通过巯基PEG链的替换反应很方便的实现了两亲性荧光探针的制备。本发明中所涵盖的材料具有好的水溶性、生物相容性、优异的发光性能以及具有对巯基分子高特异性高灵敏度的响应。该探针在水溶液中分散后形成的纳米颗粒极小(5-6纳米),可以很方便的被细胞摄取,一旦和肿瘤细胞中过量表达的巯基分子(谷胱甘肽)接触后,能迅速发生特异性反应导致荧光的急剧淬灭,从而达到检测的目的。通过调节疏水性烷基链和亲水性PEG链的相对长度,可以优化出检测性能最佳的荧光探针。同时,PEG末端的氨基可以进一步修饰以实现其生物多功能化。再者,该类探针的双光子吸收性质为其实现深层组织检测和高空间分辨率成像提供了保障。总之,该类分子探针在生物医学检测领域可以发挥重要作用,是一类非常理想的生物传感材料。
具体实施方式
采用Sonogashira不对称偶联反应等步骤,合成主链含寡聚苯撑乙炔,两端分别连有疏水性的烷基链和双硫键连接的亲水性聚乙二醇链的两亲性分子探针。该类具有近红外吸收的两亲性巯基分子探针的结构如下:
其中,n为重复单元个数,x为PEG链的平均分子量。
n值为5,11,17;x值为1000,2000。
当n值为11,x值为1000时,上述化合物的分子结构式如下:
本发明的上述化合物的合成方法如下:
1)、化合物1的合成:
将4-溴苯酚,无水碳酸钾和四丁基溴化胺加入到一容器中,抽真空氮气保护下加入溶剂丙酮,随后加入溴代十二烷,然后将反应体系升温到58~60摄氏度,回流反应;反应结束后抽滤除去碳酸钾,滤液旋干后用乙醇重结晶,最终得到白色鳞状晶体;
2)、化合物2的合成:
将化合物1、1,4-二乙炔基苯、5-溴间苯二甲酸二甲酯、催化剂四(三苯基膦)钯和碘化亚铜加入到一反应瓶中;将整个反应体系密封抽真空,然后充入氮气,保持整个反应过程在氮气氛围中进行,注入溶剂二异丙胺,避光条件下80~83摄氏度搅拌反应20~24小时,反应结束后减压蒸干溶剂,粗产物经硅胶柱提纯,最终得到的产物为淡黄色固体粉末;
3)、化合物3的合成:
将化合物2溶于四氢呋喃中,再加入氢氧化钾水溶液和四丁基溴化铵,混合溶液在50~60摄氏度下搅拌回流4~5小时,反应结束后,向体系中加入过量的稀盐酸水溶液,直到产生大量的絮状沉淀,过滤,滤渣用水反复洗涤,真空干燥,得到黄色固体产物;
4)、化合物4,5的合成
将2,2'-二硫二吡啶和巯基乙胺溶于甲醇中,室温搅拌7~10小时,后旋干溶剂得到氨基取代的二硫吡啶中间产物;再向反应瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺,超声溶解后投入化合物3、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温搅拌20~24小时得到不纯的化合物4;反应结束后直接投入过量的SH-PEG-NH2,滴加醋酸,室温搅拌2~3天;反应结束后用截留分子量3000~3500Da的透析袋在去离子水中进行透析,透析过程持续2~3天;用滤膜推滤透析袋中的液体,得到澄清透明的水溶液后再冷冻干燥,最终得到的化合物5为淡黄色固体粉末,即基于巯基物质检测的两亲性分子探针。
为了更好地理解本发明,下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。实例1(两亲性分子探针的n值为11,x值为1000)的合成方法如下:
1)、化合物1的合成:
将4-溴苯酚,无水碳酸钾和四丁基溴化胺加入到一容器中,抽真空氮气保护下加入溶剂丙酮,随后加入溴代十二烷,然后将反应体系升温到58~60摄氏度,回流反应;反应结束后抽滤除去碳酸钾,滤液旋干后用乙醇重结晶,最终得到白色鳞状晶体1;1HNMR(CDCl3,ppm):δ7.35(d,2H),6.78(d,2H),3.91(t,2H),1.76(m,2H),1.26(m,18H),0.88(t,3H)。
2)、化合物2的合成:
将化合物1、1,4-二乙炔基苯、5-溴间苯二甲酸二甲酯、催化剂四(三苯基膦)钯和碘化亚铜加入到一反应瓶中;将整个反应体系密封抽真空,然后充入氮气,保持整个反应过程在氮气氛围中进行,注入溶剂二异丙胺,避光条件下80~83摄氏度搅拌反应20~24小时,反应结束后减压蒸干溶剂,粗产物经硅胶柱提纯,最终得到的产物为淡黄色固体粉末2。1HNMR(CDCl3,ppm):δ8.63(s,1H),8.37(s,2H),7.49(m,6H),6.89(d,2H),3.97(m,8H),1.79(m,2H),1.26(s,18H),0.88(t,3H)。
3)、化合物3的合成:
将化合物2溶于四氢呋喃中,再加入氢氧化钾水溶液和四丁基溴化铵,混合溶液在50~60摄氏度下搅拌回流4~5小时,反应结束后,向体系中加入过量的稀盐酸水溶液,直到产生大量的絮状沉淀,过滤,滤渣用水反复洗涤,真空干燥,得到黄色固体产物3;1HNMR(dimethylsulfoxide-d6,ppm):δ8.44(s,1H),8.25(s,2H),7.47-7.68(m,6H),6.95(d,2H),3.98(t,2H),1.69(m,2H),1.22(m,18H),0.83(t,3H)。13CNMR(dimethylsulfoxide-d6,ppm):δ166.3,159.7,136.1,133.6,132.5,131.9,130.5,123.9,115.4,70.2,68.1,56.5,31.8,29.5,29.2,25.9,22.6,14.4。MALDI-TOF,m/z:Calcd,550.3;Found,550.3(M+)。
4)、化合物4,5的合成
将2,2'-二硫二吡啶和巯基乙胺溶于甲醇中,室温搅拌7~10小时,后旋干溶剂得到氨基取代的二硫吡啶中间产物;再向反应瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺,超声溶解后投入化合物3、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温搅拌20~24小时得到不纯的化合物4;反应结束后直接投入过量的SH-PEG-NH2,滴加醋酸,室温搅拌2~3天;反应结束后用截留分子量3000~3500Da的透析袋在去离子水中进行透析,透析过程持续2~3天;用滤膜推滤透析袋中的液体,得到澄清透明的水溶液后再冷冻干燥,最终得到的化合物5为淡黄色固体粉末,即基于巯基物质检测的两亲性分子探针。1HNMR(CDCl3,ppm):δ8.24,7.49,6.81-7.00(m,benzenering),5.22-5.51(br,NH2),3.97(Ph-O-CH2),3.64(PEGchain),2.75-3.25(CH2-CH2-S-S),1.25(alkylchain)。MALDI-TOFMS(thehighestpeak,m/z):4665.3(M+).
应用研究
1、方法:采用Sonogashira不对称偶联反应等步骤,合成主链含寡聚苯撑乙炔,两端分别连有疏水性烷基链和双硫键连接的亲水性聚乙二醇链的两亲性分子探针。基于该探针中的双硫键能被含有巯基的生物分子特异性切断从而产生荧光信号的变化,我们通过调节探针的亲水/疏水平衡,最终优化出检测效果最好的结构。由于PEG是一种低毒性、生物相容性非常好的物质,所以该类探针可以很容易地进入生物细胞体内,达到检测的作用,是一种非常理想的生物传感材料。2、实验步骤:实验分细胞外和细胞内两部分进行。
细胞外检测:将所制备的两亲性分子探针和目标检测物半胱氨酸在PBS缓冲溶液中共孵育(37摄氏度),实时检测不同时间点溶液荧光的变化,并通过动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)观察粒子尺寸及形貌的变化。为了验证探针检测的特异性,我们选取一系列含不同官能团的氨基酸和探针共孵育,用同样的方法观察检测效果。其中所用探针的n值为11,x值为1000;
细胞内检测:将所制备的两亲性分子探针和肿瘤细胞Hela进行共孵育,在双光子激发下观察不同时间点细胞内荧光的变化;选取正常细胞NIH-3T3和加入巯基抑制剂的Hela细胞进行对照实验。
Claims (4)
1.一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针,其特征在于该两亲性分子探针具有如下分子结构:
其中,n为重复单元个数,x为PEG链的平均分子量;n值为5,11,17;x值为1000,2000。
2.一种如权利要求1所述的基于巯基物质检测的两亲性分子探针的合成方法,其特征在于该合成方法具体如下:
3.如权利要求2所述的基于巯基物质检测的两亲性分子探针的合成方法,其特征在于合成的具体步骤如下:
1)、化合物1的合成:
将4-溴苯酚,无水碳酸钾和四丁基溴化胺加入到一容器中,抽真空氮气保护下加入溶剂丙酮,随后加入溴代十二烷,然后将反应体系升温到58~60摄氏度,回流反应;反应结束后抽滤除去碳酸钾,滤液旋干后用乙醇重结晶,最终得到白色鳞状晶体;
2)、化合物2的合成:
将化合物1、1,4-二乙炔基苯、5-溴间苯二甲酸二甲酯、催化剂四(三苯基膦)钯和碘化亚铜加入到一反应瓶中;将整个反应体系密封抽真空,然后充入氮气,保持整个反应过程在氮气氛围中进行,注入溶剂二异丙胺,避光条件下80~83摄氏度搅拌反应20~24小时,反应结束后减压蒸干溶剂,粗产物经硅胶柱提纯,最终得到的产物为淡黄色固体粉末;
3)、化合物3的合成:
将化合物2溶于四氢呋喃中,再加入氢氧化钾水溶液和四丁基溴化铵,混合溶液在50~60摄氏度下搅拌回流4~5小时,反应结束后,向体系中加入过量的稀盐酸水溶液,直到产生大量的絮状沉淀,过滤,滤渣用水反复洗涤,真空干燥,得到黄色固体产物;
4)、化合物4,5的合成
将2,2'-二硫二吡啶和巯基乙胺溶于甲醇中,室温搅拌7~10小时,后旋干溶剂得到氨基取代的二硫吡啶中间产物;再向反应瓶中加入N,N-二甲基甲酰胺,超声溶解后投入化合物3、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺,室温搅拌20~24小时得到不纯的化合物4;反应结束后直接投入过量的SH-PEG-NH2,滴加醋酸,室温搅拌2~3天;反应结束后用截留分子量3000~3500Da的透析袋在去离子水中进行透析,透析过程持续2~3天;用滤膜推滤透析袋中的液体,得到澄清透明的水溶液后再冷冻干燥,最终得到的化合物5为淡黄色固体粉末,即基于巯基物质检测的两亲性分子探针。
4.一种如权利要求1所述的基于巯基物质检测的两亲性分子探针在巯基物质检测中的应用,其特征在于,将该探针分子中的双硫键能被含有巯基的生物分子迅速打断,使得原探针的两亲性丧失,在水中形成强烈的分子间聚集导致荧光的急剧下降,从而可视化监测巯基分子的存在,具体方法如下:
1)、细胞外检测:将所制备的两亲性分子探针和目标检测物半胱氨酸在PBS缓冲溶液37摄氏度中共孵育,实时检测不同时间点溶液荧光的变化,并通过动态光散射DLS和透射电镜TEM观察粒子尺寸及形貌的变化;为了验证探针检测的特异性,选取一系列含不同官能团的氨基酸和探针共孵育,用同样的方法观察检测效果,其中所用的两亲性分子探针的n值为11,x值为1000,
2)、细胞内检测:将所制备的两亲性分子探针和肿瘤细胞Hela进行共孵育,在双光子激发下观察不同时间点细胞内荧光的变化;选取正常细胞NIH-3T3和加入巯基抑制剂的Hela细胞进行对照实验,结果为:Hela细胞在探针存在下培养1小时后荧光明显减弱,而NIH-3T3细胞和加入巯基抑制剂的Hela细胞在培养1小时后荧光没有明显变化。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510629853.6A CN105199095B (zh) | 2015-09-29 | 2015-09-29 | 一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510629853.6A CN105199095B (zh) | 2015-09-29 | 2015-09-29 | 一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105199095A true CN105199095A (zh) | 2015-12-30 |
CN105199095B CN105199095B (zh) | 2017-05-03 |
Family
ID=54947076
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510629853.6A Expired - Fee Related CN105199095B (zh) | 2015-09-29 | 2015-09-29 | 一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105199095B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105944115A (zh) * | 2016-06-07 | 2016-09-21 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种靶向脑胶质瘤的磁性荧光双模态探针及其制备方法 |
CN112280551A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-01-29 | 西北师范大学 | 基于pda 和双(6-甲酰基苯氧基)-二吡啶铜的热致可逆变色复合材料的制备 |
CN112444505A (zh) * | 2019-09-03 | 2021-03-05 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 一种基于双激发比率型上转换荧光探针的胞内检测方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101679022A (zh) * | 2007-04-02 | 2010-03-24 | 爱默蕾大学 | 使用表面增强拉曼纳米粒子标记物的体内肿瘤靶向和光谱检测 |
CN102525935A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-04 | 上海交通大学医学院 | 一种纳米药物载体脑内递送方法 |
EP2527322A1 (en) * | 2011-05-24 | 2012-11-28 | Noscira, S.A. | Carbamyl alkylphenyl disulfide derivatives and their therapeutic uses |
CN102879364A (zh) * | 2012-09-19 | 2013-01-16 | 南京大学 | 量子点纳米荧光探针及其在肿瘤靶向检测中的应用 |
CN103319388A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-09-25 | 西安交通大学 | 一种双功能聚乙二醇衍生物及其制备方法 |
CN103341177A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-10-09 | 西安交通大学 | 一种还原敏感型聚乙二醇-药物偶联物及其制备方法 |
CN103553944A (zh) * | 2013-10-11 | 2014-02-05 | 南京邮电大学 | 一种高性能光限幅蓝光材料及其制备方法 |
-
2015
- 2015-09-29 CN CN201510629853.6A patent/CN105199095B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101679022A (zh) * | 2007-04-02 | 2010-03-24 | 爱默蕾大学 | 使用表面增强拉曼纳米粒子标记物的体内肿瘤靶向和光谱检测 |
EP2527322A1 (en) * | 2011-05-24 | 2012-11-28 | Noscira, S.A. | Carbamyl alkylphenyl disulfide derivatives and their therapeutic uses |
CN102525935A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-04 | 上海交通大学医学院 | 一种纳米药物载体脑内递送方法 |
CN102879364A (zh) * | 2012-09-19 | 2013-01-16 | 南京大学 | 量子点纳米荧光探针及其在肿瘤靶向检测中的应用 |
CN103319388A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-09-25 | 西安交通大学 | 一种双功能聚乙二醇衍生物及其制备方法 |
CN103341177A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-10-09 | 西安交通大学 | 一种还原敏感型聚乙二醇-药物偶联物及其制备方法 |
CN103553944A (zh) * | 2013-10-11 | 2014-02-05 | 南京邮电大学 | 一种高性能光限幅蓝光材料及其制备方法 |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105944115A (zh) * | 2016-06-07 | 2016-09-21 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种靶向脑胶质瘤的磁性荧光双模态探针及其制备方法 |
CN112444505A (zh) * | 2019-09-03 | 2021-03-05 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 一种基于双激发比率型上转换荧光探针的胞内检测方法 |
CN112444505B (zh) * | 2019-09-03 | 2022-02-18 | 中国科学院福建物质结构研究所 | 一种基于双激发比率型上转换荧光探针的胞内检测方法 |
CN112280551A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-01-29 | 西北师范大学 | 基于pda 和双(6-甲酰基苯氧基)-二吡啶铜的热致可逆变色复合材料的制备 |
CN112280551B (zh) * | 2020-10-28 | 2023-06-20 | 西北师范大学 | 基于pda和双(6-甲酰基苯氧基)-二吡啶铜的热致可逆变色复合材料的制备 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105199095B (zh) | 2017-05-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Maji et al. | Dual-stimuli-responsive l-serine-based zwitterionic UCST-type polymer with tunable thermosensitivity | |
Xie et al. | Electrostatic and aromatic interaction-directed supramolecular self-assembly of a designed Fmoc-tripeptide into helical nanoribbons | |
CN102344415B (zh) | 阿奇沙坦中间体的制备方法 | |
CN104974745A (zh) | 两亲性的具有聚集诱导发光特性的发光物及其应用 | |
CN103756020B (zh) | 一种具有光敏性的纳米复合超分子水凝胶的制备方法 | |
CN108034054B (zh) | 一种两亲性聚合物荧光材料及其合成方法 | |
CN105199095A (zh) | 一种基于巯基物质检测的两亲性分子探针及其合成方法 | |
Díaz-Oltra et al. | Study of the effect of polymorphism on the self-assembly and catalytic performance of an L-proline based molecular hydrogelator | |
CN105056213A (zh) | 一种葡萄糖响应的超分子纳米球及其制备方法和应用 | |
KR102403515B1 (ko) | 세포 내 송달 비히클 | |
CN104292475A (zh) | 一种温敏光敏双响应聚肽基主客体复合智能水凝胶及其制备方法和应用 | |
He et al. | Preparation of novel organometallic derivatives of cholesterol and their gel-formation properties | |
CN105646752B (zh) | 一种荧光星形聚合物及其制备方法与应用 | |
CN101310850B (zh) | 聚乳酸树形分子修饰磁性纳米粒子的制备及应用方法 | |
CN103624268A (zh) | 新型抗癌荧光含糖银纳米团簇的制备方法 | |
Suzuki et al. | New l-valine-based hydrogelators: formation of supramolecular hydrogels | |
CN107674074B (zh) | 一种两亲性萘酰双亚胺凝胶因子的制备方法及应用 | |
Hwang et al. | A family of photolabile nitroveratryl-based surfactants that self-assemble into photodegradable supramolecular structures | |
CN103923281B (zh) | 可还原降解的两亲嵌段共聚物及其制备和作为药物载体的应用 | |
CN104387539B (zh) | 一种pH响应的荧光碳纳米颗粒杂化微凝胶及其制备方法 | |
CN103980398B (zh) | 一种以苝系衍生物或其类似物为荧光发色端基的自组装体及其制备方法 | |
CN102532347A (zh) | 三(三联吡啶钌)β-环糊精化合物的合成方法 | |
CN108610656A (zh) | Hpts系列衍生物及合成方法 | |
JP2007230871A (ja) | 刺激応答材料 | |
Maity | Supramolecular hydrogels |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170503 |