CN105198968A - 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用 - Google Patents

一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105198968A
CN105198968A CN201510736182.3A CN201510736182A CN105198968A CN 105198968 A CN105198968 A CN 105198968A CN 201510736182 A CN201510736182 A CN 201510736182A CN 105198968 A CN105198968 A CN 105198968A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibacterial peptide
mycobacterium tuberculosis
application
peptide
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510736182.3A
Other languages
English (en)
Inventor
赖仞
莫国香
严秀文
方鸣谦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Agricultural University
Original Assignee
Nanjing Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Agricultural University filed Critical Nanjing Agricultural University
Priority to CN201510736182.3A priority Critical patent/CN105198968A/zh
Publication of CN105198968A publication Critical patent/CN105198968A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

本发明公开了一种抗结核杆菌抗菌肽LR，所述抗菌肽LR由21个氨基酸残基组成，分子量2318.65Da，净电荷数为+2.08，等电点10.79，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明中的抗菌肽LR具有分子量小、人工合成简单、抗菌作用广谱高效、对结核杆菌作用效果好，溶血活性低的优点，具有广泛的应用前景。

Description

一种抗结核杆菌抗菌肽LR及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种抗菌肽LR及其制备方法和应用。
背景技术
结核病(Tuberculosis)是由人类重大病原菌结核杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)感染引起的，全球有三分之一的人口感染有结核杆菌，全球结核病的死亡率在单因素的感染性疾病当中位居第二。近些年，许多可以有效控制结核病的药物如异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇等在临床上得到大量应用，但由于多重耐药性(Multidrug-resistant，MDR)与广泛耐药性(Extensivelydrug-resistant，XDR)结核杆菌菌株的大量出现，给结核病的治疗带来了严重困难。因此，亟待开发新型抗结核药物来克服结核杆菌的耐药性问题。抗菌肽是一种生物体内合成的天然小分子多肽，是多细胞生物天然免疫系统的重要功能分子，对细菌、真菌、病毒和原虫等均具有直接杀灭作用。抗菌肽具有分子量小、结构简单、杀菌活性强、杀菌机制独特，不易引起耐药性等优点，被认为是极具潜力的传统抗生素替代药物，具有很大的开发应用前景。
发明内容
发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种具有高效灭杀结核杆菌的抗菌活性和极低的溶血活性的抗结核杆菌抗菌肽LR，可以有效控制结核病。
本发明进一步要解决的技术问题在于提供上述抗结核杆菌抗菌肽LR的制备方法和应用。
技术方案：为实现上述技术目的，本发明提出一种抗结核杆菌抗菌肽LR，其由21个氨基酸残基组成，分子量2318.65Da，净电荷数为+2.08，等电点10.79，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示：Pro1Arg2Val3IIe4Gly5Thr6Lys7Val8His9Gly10Arg11Glu12Val13Thr14Glu15Leu16Ala17Arg18Asn19Val20Ser21。
本发明进一步提出了上述抗结核杆菌抗菌肽LR在制备抗结核药物或抗菌药物或保健品或化妆品中的应用。
更进一步地，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述抗结核杆菌抗菌肽LR和药学上或美学上可接受的载体或稀释剂。所本发明研究发现，上述抗结核杆菌抗菌肽LR和含有LR的组合物不仅能作为抗结核病药物，也能应用于抗菌药物、保健品及化妆品等领域。
有益效果：本发明中抗结核杆菌抗菌肽LR具有分子量小、人工合成简单、高效灭杀结核杆菌、广谱抗菌、溶血活性低的优点，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为化学合成LR多肽的反相高效液相色谱分析结果。
具体实施方式
根据下述实施例可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书所详细描述的本发明。
实施例1：抗结核杆菌抗菌肽LR的制备。
(1)抗结核杆菌抗菌肽LR的化学合成方法：根据氨基酸序列，用自动多肽合成仪(433A，AppliedBiosystems)合成其全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐纯化。
(2)化学合成的LR多肽纯度经过了反相高效液相色谱(RP-HPLC，如图1所示)检验，等电聚焦电泳测定等电点，用自动氨基酸测序仪测定氨基酸序列结构。
LR多肽氨基酸序列测定结果：
由21个氨基酸残基组成，分子量2318.65Da，净电荷数为+2.08，等电点10.79其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，具体为：Pro1Arg2Val3IIe4Gly5Thr6Lys7Val8His9Gly10Arg11Glu12Val13Thr14Glu15Leu16Ala17Arg18Asn19Val20Ser21。
RP-HPLC(HypersilBDSC18，25*0.46cm)分析结果显示，LR在46分钟处只出现一个洗脱峰，而且峰型对称性较好。
实施例2抗结核杆菌抗菌肽LR抗菌活性检测。
微生物菌株接种到MH液体培养基中，37℃振荡培养到对数生长期，用新鲜MH液体培养基将菌液稀释到2×105CFU/ml备用。在无菌96孔板(Thermo，美国)各孔中预先加入100μlMH液体培养基，然后在第一孔中加入100μl用MH液体培养基稀释的抗菌肽LR样品溶液，混匀后取100μl加入第2孔，依次倍比稀释(参见表1)，自第9孔吸出100μl弃去，第10孔做为对照管。
表.1稀释方法
将96孔板放置37℃培养箱中缓慢振荡培养18小时，于600nm波长处测定光吸收，计算抗菌肽LR对不同微生物的最小抑菌浓度(MinimumInhibitoryConcentration)值。结果如表2所示。
抗菌肽LR的抗菌谱分析：
同时检测了LR对结核杆菌和其它革兰氏阳性、阴性细菌的最小抑菌浓度(MIC)。LR对结核杆菌的抑菌活性如表2所示，对结核杆菌标准菌株H37Rv(ATCC27294)的最小抑菌浓度为75μg/ml，对临床分离的结核杆菌同样有抑菌活性，最小抑菌浓度为37.5-50μg/ml。
表2LR对结核杆菌的抗菌活性
其中，MIC：最低抑菌浓度.这些浓度为三个独立的实验每个平行做两次后得到的平均值。CI：临床分离菌株。
LR对其它革兰氏阳性、阴性细菌的抑菌活性如表3所示，对革兰氏阳性菌株的最小抑菌浓度(MIC)都大于100μg/ml，例如对金黄色葡萄球菌标准株(S.aureusATCC2592)、金黄色葡萄球菌临床分离株(S.aureus08A865)、枯草芽孢杆菌标准株(B.subtilisATCC6633)的最小抑菌浓度(MIC)分别为150、175、125μg/ml。LR对革兰氏阴性菌株的最小抑菌浓度也都大于或等于100μg/ml，例如对大肠杆菌标准株(E.coliATCC25922)、大肠杆菌临床分离株(E.coli08A852)、铜绿假单胞杆菌临床分离株(P.aeruginosa08031205)的最小抑菌浓度分别为150、175、＞200μg/ml。
对LR的抗菌谱分析得知，LR对结核杆菌的活性要明显强于其他的革兰氏阳性和阴性细菌。
表3LR对其它革兰氏阳性与阴性细菌的抗菌活性
其中，MIC：最低抑菌浓度.这些浓度为三个独立的实验每个平行做两次后得到的平均值。CI：临床分离菌株。
实施例3
抗菌肽LR溶血活性测定：
将采集的新鲜C57小鼠血与阿氏液混合抗凝，生理盐水洗涤2次并重悬成107～108cell/ml的悬浮液。上述稀释好的红细胞悬液与溶解于生理盐水的抗菌肽LR样品混合，37℃保温30min，再于1000rpm离心5min，上清液于540nm测吸收值。阴性对照使用生理盐水，阳性对照使用TritonX-100，溶血百分比按以下公式计算：溶血百分比H％＝A样品-A阴性对照/A阳性对照×100％。
结果表明抗菌肽LR浓度为200μg/ml时，溶血百分比为5.07％。说明抗菌肽LR对哺乳动物红细胞具有极低的溶血活性。
综上所述，本发明中抗结核杆菌抗菌肽LR具有分子量小、人工合成简单、高效灭杀结核杆菌、广谱抗菌、溶血活性低的优点，上述抗结核杆菌抗菌肽LR和含有LR的组合物不仅能作为抗结核病药物，也能应用于抗菌药物、保健品及化妆品等领域。

Claims (5)

1.一种抗结核杆菌抗菌肽LR，其特征在于，所述的抗结核杆菌抗菌肽LR由21个氨基酸残基组成，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.权利要求1所述的抗结核杆菌抗菌肽LR的制备方法，其特征在于，根据SEQIDNO.1所示的氨基酸序列，用自动多肽合成仪合成其全序列，通过HPLC反相柱层析脱盐纯化。
3.权利要求1所述的抗结核杆菌抗菌肽LR在制备抗结核药物或抗菌药物或保健品或化妆品中的应用。
4.一种组合物，所组合物包括权利要求1所述的抗结核杆菌抗菌肽LR和药学上或美学上可接受的载体或稀释剂。
5.权利要求4所述的组合物在制备抗结核药物或抗菌药物或保健品或化妆品中的应用。
CN201510736182.3A 2015-11-03 2015-11-03 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用 Pending CN105198968A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510736182.3A CN105198968A (zh) 2015-11-03 2015-11-03 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510736182.3A CN105198968A (zh) 2015-11-03 2015-11-03 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105198968A true CN105198968A (zh) 2015-12-30

Family

ID=54946954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510736182.3A Pending CN105198968A (zh) 2015-11-03 2015-11-03 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105198968A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019016043A1 (en) * 2017-07-17 2019-01-24 Adenium Biotech Aps PEPTIDES HAVING ANTIBIOTIC POWERS AGAINST MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101293925A (zh) * 2007-04-29 2008-10-29 王鹤尧 一种治疗结核杆菌感染的合成多肽药物制备和应用
CN102241748A (zh) * 2011-06-10 2011-11-16 中国科学院昆明动物研究所 D29分枝杆菌噬菌体来源的pk34多肽及其应用
CN103243098A (zh) * 2013-04-28 2013-08-14 付玉荣 靶向治疗结核的RelA切割并TLR7激活基序修饰的锁核酸脱氧核酶及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101293925A (zh) * 2007-04-29 2008-10-29 王鹤尧 一种治疗结核杆菌感染的合成多肽药物制备和应用
CN102241748A (zh) * 2011-06-10 2011-11-16 中国科学院昆明动物研究所 D29分枝杆菌噬菌体来源的pk34多肽及其应用
CN103243098A (zh) * 2013-04-28 2013-08-14 付玉荣 靶向治疗结核的RelA切割并TLR7激活基序修饰的锁核酸脱氧核酶及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邓兆群: "抗菌肽体外对结核杆菌的作用初探", 《氨基酸和生物资源》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019016043A1 (en) * 2017-07-17 2019-01-24 Adenium Biotech Aps PEPTIDES HAVING ANTIBIOTIC POWERS AGAINST MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
US11034742B2 (en) 2017-07-17 2021-06-15 Linnane Pharma Ab Peptides with antibiotic potential against Mycobacterium tuberculosis

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Jiang et al. Anti-tuberculosis activity of α-helical antimicrobial peptides: de novo designed L-and D-enantiomers versus L-and D-LL37
CN102731629B (zh) 一种抗菌肽及其应用
US9273095B2 (en) Antibiotic peptide and preparation method therefor and application therefor
CN102924574B (zh) 抗菌肽lz1和该抗菌肽在制备抗菌药物中的用途
CN111533786B (zh) 色氨酸和精氨酸跨链交互作用的β发卡抗菌肽及制备方法
Conlon et al. A family of brevinin-2 peptides with potent activity against Pseudomonas aeruginosa from the skin of the Hokkaido frog, Rana pirica
CN107266533B (zh) 一种α螺旋抗菌肽RL及其制备方法和应用
CN106008677A (zh) 一种抗菌肽se37及其应用
CN107746429A (zh) 一种末端对称抗菌肽pp及其制备方法和应用
CN114181293B (zh) 一种人源抗菌肽ll-37改造体及其应用
CN105294838A (zh) 一种抗菌肽及其应用
CN103435686B (zh) 抗耐药性细菌感染多肽Cbf-14及其用途
CN104292301A (zh) 一种小分子合成抗菌肽及其制备方法与应用
KR20180117792A (ko) 왕귀뚜라미에서 유래한 항균 펩타이드 테레오그릴루신 1 및 그의 조성물
CN106554400A (zh) 非完美两亲性抗菌肽prw4‑r及其制备方法和应用
CN105198968A (zh) 一种抗结核杆菌抗菌肽lr及其制备方法和应用
KR101444256B1 (ko) 왕지네로부터 분리한 신규 스콜로펜드라신ⅲ 펩타이드 및 그의 조성물
Conlon et al. Antimicrobial and cytolytic properties of the frog skin peptide, kassinatuerin-1 and its L-and D-lysine-substituted derivatives
Iwahori et al. Synthesis of reversed magainin 2 analogs enhanced antibacterial activity
CN102382186B (zh) 衍生自线性鸡β-防御素4(RL38)的抗菌肽GLI23及其制备方法
CN100365018C (zh) 一组抗菌肽及其制备方法和应用
Chockalingam et al. A peptide derived from human bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) exerts bactericidal activity against Gram-negative bacterial isolates obtained from clinical cases of bovine mastitis
CN111378023B (zh) 一种抗变异链球菌多肽及其应用
CN105198979B (zh) 一种海蛇改造体抗菌肽qha1及其制备方法和应用
CN109678944A (zh) 一种抗菌多肽hf-18及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20151230

RJ01 Rejection of invention patent application after publication