CN105194644B - 一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药与医学工程技术领域,特别涉及一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法。以质量百分比计,将囊素活性多肽原液5‑10%、太子参为主料的中药提取物30‑45%和水50‑60%三部分按比例配比混合后,采用双膜过滤进行除菌,采用0.25um滤膜过滤制得饮水剂产品。本发明药物药效显著提高,高效的标本兼治疗效,具有扶正祛邪、清瘟败毒的效果,禽流感治愈后不易复发,不易产生耐药性,对禽流感治愈率高,可常温保存,是一种绿色、高效、优质、无残留和无毒副的治疗禽流感的新型特效药。
Description
技术领域
本发明属于医药与医学工程技术领域,特别涉及一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法。
背景技术
禽流感(Avain in—fluenza,AI)是一种由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,是一种从呼吸系统到严重全身败血病症等多种症状的传染性疾病综合病,被世界动物卫生组织( O I E ) 规定为A类动物疫病,其在家禽中传播快、死亡率高,严重影响我国集约化养禽业的发展,且大规模流行会严重影响受感染国家的生计、公共卫生、经济和国际贸易。
目前,针对禽流感的防治大多集中在疫苗的使用和研究,如传统的灭活疫苗、减毒活化疫苗和新型的亚单位疫苗、重组疫苗、核酸疫苗等,但由于禽流感病毒的抗原变异能力强,加之家禽个体免疫力的不同,导致疫苗的保护率并不高,况且禽流感病毒表面的红细胞凝集 素和神经氨酸酶的抗原性极易发生漂移( drift) 或转换 (shift ),引起病毒变异,故病毒株较多,不同亚型毒株之间又无交叉保护作用,研制疫苗较为困难。有效疫苗的研制落后于病毒变异的速度,这是疫苗防治禽流感的最大瓶颈。另外,当前众多疫苗的保存和稳定性条件较高,无意间又增加了疫苗的使用成本。
中医认为禽流感病在血分和气分。热盛入血,迫血妄行,则脏器出血。热毒炽盛,灼烧阴津,口渴喜饮。热入心包,痰阻包络,神志被蒙。肠内燥热迫津下趋,故见便稀。中草药有多种有效成分,不仅具有毒性低、不易产生副作用、多靶点、病原微生物对其不易产生耐药性的优点,而且在抗菌抗病毒的同时,还能促进动物生长,增强动物的免疫机能,提高机体抗病力,改善血液循环,解热镇痛及抗菌消炎等功效。中草药是中国最有可能获得自主知识产权的一大类药物,具有较强的竞争力和市场潜力,所以开展对抗禽流感病毒中草药的研究已势在必行,同样其在防治禽流感病毒方面具有独特的优势和广阔的发展前景。
太子参为石竹科孩儿属植物孩儿参的干燥根,别名孩儿参、童参、双批七、四叶参或米参,为珍贵中药,具有益气生津、补肺健脾的功效,特点为益气但不提升,生津但不助湿,扶正但不恋邪,补虚又不峻猛。主治心悸自汗,疲倦乏力,脾虚食少,气阴不足,自汗口渴,肺燥干咳等症。同时,现代医学研究证明太子参还能显著提高机体免疫力,促进免疫反应。另外,囊素活性多肽(BS)也已成为一种应用于禽类疾病治疗中活性生物提取物质,它是从鸡法氏囊抽提分离而得,明确的具有增强和调节机体免疫反应的生物活性物质。BS不仅对禽类具有免疫调节功能,且对哺乳动物及人类淋巴细胞、杂交瘤细胞也具有明显的免疫学活性,有望发展成为新一代的免疫增强剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:
一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法,包括如下步骤:
第一步,从鸡法氏囊抽提获得囊素活性多肽原液;
第二步,按下述步骤制备获得太子参为主料的中药提取物:
(i)、干燥和粉碎:将太子参、板蓝根、黄芩、苦参、柴胡和白头翁6种中药分别进行干燥后,以占6种中药总组分的质量百分比计,按照太子参30-35%、板蓝根15-20%、黄芩10-15%、苦参10-15%、柴胡10-15%和白头翁5-10%的固定比例混合并粉碎;
(ii)、超声预处理:将步骤(i)获得的中药粉按固液比g/ml=1:10-1:30加入乙醇进行超声;
(iii)、低温超临界CO2萃取:将步骤(ii)超声后获得的中药乙醇分散液进行烘干后,再在夹带剂存在的条件下进行低温超临界CO2萃取,萃取操作参数为:夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1-3%,萃取温度35-50℃,萃取压力10-25MPa,CO2流量2-4L/h,萃取时间0.5-2h;所述夹带剂为乙醇、乙二醇、丙酮和乙酸乙酯中的一种或多种;待萃取结束后,减压回收夹带剂,即得太子参为主料的中药提取物;
第三步,以质量百分比计,将囊素活性多肽原液5-10%、太子参为主料的中药提取物30-45%和水50-60%三部分按比例配比混合后,采用0.25um滤膜过滤制得饮水剂产品。
较好地,步骤(i)中:干燥至水分的质量百分含量不高于10%;粉碎目数为65-80目。步骤(ii)中:乙醇为体积纯度为85%以上的乙醇;超声时的参数为:超声功率50-200 W,超声频率20-40 kHz,超声时间30-50min。步骤(iii)中:烘干时的温度为60-80℃,夹带剂的体积纯度为80-100%;若夹带剂为多种时,等体积比混合使用。
较好地,所述水为纯化水,pH值6-7。
较好地,所述囊素活性多肽原液按下述步骤从鸡法氏囊抽提而得:
(a)、从健康鸡获得新鲜的法氏囊,去除筋膜和脂肪;
(b)、向步骤(a)获得的法氏囊按质量/体积比g/mL 1:1-3加入无菌生理盐水进行匀浆;
(c)、向步骤(b)获得的匀浆液按体积比1:4-6加入无菌生理盐水混匀,反复冻融数次;
(d)、向步骤(c)冻融后的匀浆液按体积比1:3-5加入无菌生理盐水再次进行匀浆;
(e)、将步骤(d)获得的匀浆液进行过滤,过滤液即为囊素活性多肽原液,冷藏保存,以备后用。
较好地,步骤(a)中,所述健康鸡为健康成年鸡;步骤(c)中,反复冻融3次。步骤(b)匀浆时的参数为:转速12000-15000 rpm/min,3-5 min;步骤(d)匀浆时的参数为:2000-2500 rpm/min,15-20 min。步骤(e)中,利用已灭菌的多层纱布进行过滤。
本发明创新性地将囊素活性多肽原液和中药提取物进行了科学配伍组合,为预防治疗禽流感病和开展对抗禽流感病毒中草药的研究提供了一条新方法。本发明药物药效显著提高,高效的标本兼治疗效,具有扶正祛邪、清瘟败毒的效果,禽流感治愈后不易复发,不易产生耐药性,对禽流感治愈率高,可常温保存,是一种绿色、高效、优质、无残留和无毒副的治疗禽流感的新型特效药。
具体实施方式
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案,但本发明的保护范围并不局限于此:
实施例1
一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法,包括如下步骤:
第一步,从鸡法氏囊抽提获得囊素活性多肽原液:
(a)、从健康成年鸡获得新鲜的法氏囊,去除筋膜和脂肪;
(b)、向步骤(a)获得的法氏囊按质量/体积比g/mL 1:1加入无菌生理盐水利用组织捣碎机在12000 rpm/min的转速下匀浆3 min;
(c)、向步骤(b)获得的匀浆液按体积比1: 6加入无菌生理盐水混匀,反复冻融3次;
(d)、在无菌条件下向步骤(c)冻融后的匀浆液按体积比1:3加入无菌生理盐水利用组织捣碎机在2500 rpm/min的转速下再次匀浆15 min;
(e)、将步骤(d)获得的匀浆液利用已灭菌的8层纱布进行过滤,过滤液即为囊素活性多肽原液,3 ℃保存,以备后用;
第二步,按下述步骤制备获得太子参为主料的中药提取物:
(i)、干燥和粉碎:将太子参、板蓝根、黄芩、苦参、柴胡和白头翁6种中药分别进行干燥至水分的质量百分含量不高于10%;干燥后,以占6种中药总组分的质量百分比计,按按照太子参30%、板蓝根20%、黄芩10%、苦参15%、柴胡15%和白头翁10%的固定比例混合并粉碎,粉碎目数为65目;
(ii)、超声预处理:将步骤(i)获得的中药粉按固液比g/ml=1:10加入体积纯度85%的乙醇进行超声,超声时的参数为:超声功率100W,超声频率20kHz,超声时间30min;
(iii)、低温超临界CO2萃取:将步骤(ii)超声后获得的中药乙醇分散液进行60℃烘干后,再在夹带剂存在的条件下进行低温超临界CO2萃取,萃取操作参数为:夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1.5%,萃取温度35℃,萃取压力15MPa,CO2流量3L/h,萃取时间1h;所述夹带剂为无水乙醇;待萃取结束后,减压回收无水乙醇,即得太子参为主料的中药提取物;
第三步,囊素活性多肽原液、太子参为主料的中药提取物和纯化水(pH值7)三种成分按照质量百分比5%、35%和60%进行配比混合后,采用0.25um滤膜过滤制得饮水剂产品。
实施例2
一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法,包括如下步骤:
第一步,从鸡法氏囊抽提获得囊素活性多肽原液:
(a)、从健康成年鸡获得新鲜的法氏囊,去除筋膜和脂肪;
(b)、向步骤(a)获得的法氏囊按质量/体积比g/mL 1:1加入无菌生理盐水利用组织捣碎机在12000 rpm/min的转速下匀浆4 min;
(c)、向步骤(b)获得的匀浆液按体积比1: 6加入无菌生理盐水混匀,反复冻融3次;
(d)、在无菌条件下向步骤(c)冻融后的匀浆液按体积比1:3加入无菌生理盐水利用组织捣碎机在2500 rpm/min的转速下再次匀浆15 min;
(e)、将步骤(d)获得的匀浆液利用已灭菌的8层纱布进行过滤,过滤液即为囊素活性多肽原液,3 ℃保存,以备后用;
第二步,按下述步骤制备获得太子参为主料的中药提取物:
(i)、干燥和粉碎:将太子参、板蓝根、黄芩、苦参、柴胡和白头翁6种中药分别进行干燥至水分的质量百分含量不高于10%;干燥后,以占6种中药总组分的质量百分比计,按照太子参35%、板蓝根15%、黄芩15%、苦参15%、柴胡15%和白头翁5%的固定比例混合并粉碎,粉碎目数为70目;
(ii)、超声预处理:将步骤(i)获得的中药粉按固液比g/ml=1:20加入体积纯度85%的乙醇进行超声,超声时的参数为:超声功率150W,超声频率30kHz,超声时间40min;
(iii)、低温超临界CO2萃取:将步骤(ii)超声后获得的中药乙醇分散液进行60℃烘干后,再在夹带剂存在的条件下进行低温超临界CO2萃取,萃取操作参数为:夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为2%,萃取温度40℃,萃取压力20MPa,CO2流量2L/h,萃取时间1h;所述夹带剂为无水乙醇;待萃取结束后,减压回收无水乙醇,即得太子参为主料的中药提取物;
第三步,囊素活性多肽原液、太子参为主料的中药提取物和纯化水(pH值6.5)三种成分按照质量百分比10%、40%和50%进行配比混合后,采用0.25um滤膜过滤制得饮水剂产品。
临床疗效试验报告
选用2010年以来,在福建贝迪药业有限公司服务的养鸡户鸡群中根据临床症状和流行病学确诊为禽流感的未经治疗的自然病鸡,选择体重为1-1.5kg的试验用鸡600只,随机分为A、B、C三组,每组200只。A组进行本发明实施例1饮水剂治疗,按2.5mL/只加入饮水中,每日2次,然后自由采食,不限饮水;B组进行板蓝根注射液(规格:10mL相当于板蓝根5g)饮水,按2.5mL/只加入饮水中,每日2次,然后自由采食,不限饮水;C组为对照组,发病后不加任何药物,自由采食,不限饮水。A、B、C三组饲养管理条件相同,均连续用药5天。药效判定标准为:用药/不用药后精神好转、饮食增加者为有效;用药后精神食欲恢复为痊愈,不用药精神食欲恢复为自愈;用药/不用药后精神食欲无改善为无效;总有效=有效+痊/自愈。结果表明:本发明饮水剂对禽流感患病鸡的有效率和痊愈率分别高达95.5%和92.5%,极显著高于板蓝根注射液组和对照组(见表1)。
Claims (6)
1.一种治疗禽流感的饮水剂的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
第一步,从鸡法氏囊抽提获得囊素活性多肽原液:
(a)、从健康鸡获得新鲜的法氏囊,去除筋膜和脂肪;
(b)、向步骤(a)获得的法氏囊按质量/体积比g/mL 1:1-3加入无菌生理盐水进行匀浆;
(c)、向步骤(b)获得的匀浆液按体积比1:4-6加入无菌生理盐水混匀,反复冻融3次;
(d)、向步骤(c)冻融后的匀浆液按体积比1:3-5加入无菌生理盐水再次进行匀浆;
(e)、利用已灭菌的多层纱布将步骤(d)获得的匀浆液进行过滤,过滤液即为囊素活性多肽原液,冷藏保存,以备后用;
第二步,按下述步骤制备获得太子参为主料的中药提取物:
(i)、干燥和粉碎:将太子参、板蓝根、黄芩、苦参、柴胡和白头翁6种中药分别进行干燥后,以占6种中药总组分的质量百分比计,按照太子参30-35%、板蓝根15-20%、黄芩10-15%、苦参10-15%、柴胡10-15%和白头翁5-10%的固定比例混合并粉碎;
(ii)、超声预处理:将步骤(i)获得的中药粉按固液比g/ml=1:10-1:30加入乙醇进行超声;
(iii)、低温超临界CO2萃取:将步骤(ii)超声后获得的中药乙醇分散液进行烘干后,再在夹带剂存在的条件下进行低温超临界CO2萃取,萃取操作参数为:夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为1-3%,萃取温度35-50℃,萃取压力10-25MPa,CO2流量2-4L/h,萃取时间0.5-2h;所述夹带剂为乙醇、乙二醇、丙酮和乙酸乙酯中的一种或多种;待萃取结束后,减压回收夹带剂,即得太子参为主料的中药提取物;
第三步,以质量百分比计,将囊素活性多肽原液5-10%、太子参为主料的中药提取物30-45%和水50-60%三部分按比例配比混合后,采用0.25um滤膜过滤制得饮水剂产品。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(i)中:干燥至水分的质量百分含量不高于10%;粉碎目数为65-80目。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(ii)中:乙醇为体积纯度为85%以上的乙醇;超声时的参数为:超声功率50-200 W,超声频率20-40 kHz,超声时间30-50min。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(iii)中:烘干时的温度为60-80℃,夹带剂的体积纯度为80-100%;若夹带剂为多种时,等体积比混合使用。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述水为纯化水,pH值6-7。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(b)匀浆时的参数为:转速12000-15000 rpm,3-5 min;步骤(d)匀浆时的参数为:2000-2500 rpm,15-20 min。
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