CN105177079B - 一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 - Google Patents
一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105177079B CN105177079B CN201510739864.XA CN201510739864A CN105177079B CN 105177079 B CN105177079 B CN 105177079B CN 201510739864 A CN201510739864 A CN 201510739864A CN 105177079 B CN105177079 B CN 105177079B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- curvulamine
- under conditions
- temperature
- yield
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，包括：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB‑Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40‑65%的条件下活化培养7‑10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180转速/分钟的条件下，培养72‑96小时；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180转速/分钟的条件下，培养144‑196小时；且在发酵过程中添加氯化钙的水溶液，从而来提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵水平。用本发明所建立的发酵工艺进行吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵水平已明显超过原工艺的水平，且该技术操作简单，有效地克服了现有发酵方法的不足，为下一阶段的工业产业化的实现奠定了良好的基础。
Description
技术领域
本发明涉及海洋来源吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵工艺优化方法，属于生物工程领域，具体说是通过添加金属钙离子来提高海洋来源吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的一种发酵工艺。
背景技术
南京大学谭仁祥教授等从海洋共生弯孢霉IFB-Z10的发酵液中，得到了稳定的吲哚里西啶生物碱Curvulamine，其具有极好的抗菌和乙酰胆碱酯酶的抑制活性。由于其在国内外均为首创，于2013年8月申请并获得了中国发明专利（专利号：ZL201310362976.9）。然而，目前关于吲哚里西啶生物碱Curvulamine的现有发酵工艺都只是一些常规的发酵生产方式，实际生产中所存在的突出问题是发酵产量低，并且费时费力，往往达不到生产化的要求。
而微量的金属离子，作为微生物生理活性物质的组成或生理活性作用的调节剂，对于微生物的生长和发酵过程具有巨大的影响。其中钙离子能够控制细胞透性，是多种激酶的辅酶或辅因子并可以调控丝状真菌的菌丝生长，进而影响微生物的生理代谢。
因此，如何通过添加金属离子来提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，成为了本发明人目前致力于研究的课题。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种通过添加金属钙离子来提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，以提高发酵产量，节约生产成本。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下方式来实现：
一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，包括如下步骤：
将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180转速/分钟（rpm）的条件下，培养72-96小时（h）；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180转速/分钟（rpm）的条件下，培养144-196小时（h）；且在发酵过程中添加氯化钙的水溶液，从而来提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵水平。
作为优选方案之一，在发酵过程中，将氯化钙的水溶液添加到发酵摇瓶或发酵罐中后，使得发酵摇瓶或发酵罐中的钙离子浓度为0.5-10毫摩尔/升（mM/L）。
更优选的，在钙离子浓度相同的情况下，在发酵初始时添加氯化钙水溶液得到的产率最高。
微量的金属离子，作为微生物生理活性物质的组成或生理活性作用的调节剂，对于微生物的生长和发酵过程具有巨大的影响。而其中钙离子能够控制细胞透性，是多种激酶的辅酶或辅因子并可以调控丝状真菌的菌丝生长，进而影响微生物的生理代谢。
与现有技术比较，本发明通过添加氯化钙水溶液，不仅解决了限制吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵水平的技术难题，而且该工艺方法生产成本低，操作简单，不需特殊设备，可大规模应用于生产。
具体实施方式
以下具体实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不限于下述实施例。
实施例1：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵初始时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为1mM。
实施例2：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵初始时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为3mM。
实施例3：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵初始时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为5mM。
表1为金属钙离子添加工艺（添加量）在摇瓶上的实验结果。
表1
| 项目 | 对照 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 |
| 金属离子 | -- | 氯化钙:1mM | 氯化钙:3mM | 氯化钙:5mM |
| Curvulamine（mg/L） | 18.93 | 34.85 | 53.31 | 63.31 |
实施例4：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵第24小时时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为5mM。
实施例5：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵第48小时时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为5mM。
实施例6：将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65%的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养72-96h；按12%接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180rpm的条件下，培养144-196h；且在发酵第72小时时添加氯化钙的水溶液，使钙离子的浓度为5mM。
表2为金属钙离子添加工艺（添加时间）在摇瓶上的实验结果。
表2
综上所述可以看出，按照适当的比例将氯化钙加入到发酵过程中，吲哚里西啶生物碱Curvulamine的产量均有所提高，说明了本发明工艺方法的有效性，同时也为工业放大应用做好了准备。
需要说明的是，以上较佳实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，所作出各种变换或变型，均属于本发明的范畴。
Claims (3)
1.一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，其特征在于，该发酵工艺包括如下步骤：
将冷冻保存的海洋共生弯孢霉Curvularia sp IFB-Z10菌解冻后，在固体平板培养基中央进行点样，在温度28±1℃，湿度40-65％的条件下活化培养7-10天；再从固体平板培养基中接种至种子培养基，在温度28±1℃，180转速/分钟的条件下，培养72-96小时；按12％接种量接种于发酵培养基中，在温度28±1℃，180转速/分钟的条件下，培养144-196小时，且在发酵过程中添加氯化钙的水溶液来提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine的发酵水平。
2.根据权利要求1所述的提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，其特征在于，在发酵过程中，将氯化钙的水溶液添加到发酵摇瓶或发酵罐中后，发酵摇瓶或发酵罐中的钙离子浓度为0.5-10毫摩尔/升。
3.根据权利要求1或2所述的提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺，其特征在于，在钙离子浓度相同的情况下，在发酵初始时添加氯化钙水溶液得到的产率最高。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510739864.XA CN105177079B (zh) | 2015-11-04 | 2015-11-04 | 一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510739864.XA CN105177079B (zh) | 2015-11-04 | 2015-11-04 | 一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105177079A CN105177079A (zh) | 2015-12-23 |
| CN105177079B true CN105177079B (zh) | 2018-08-28 |
Family
ID=54899505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510739864.XA Expired - Fee Related CN105177079B (zh) | 2015-11-04 | 2015-11-04 | 一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105177079B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102329735A (zh) * | 2011-04-27 | 2012-01-25 | 南京大学 | 一种弯孢霉菌及吲哚里西啶生物碱的制备方法和应用 |
-
2015
- 2015-11-04 CN CN201510739864.XA patent/CN105177079B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102329735A (zh) * | 2011-04-27 | 2012-01-25 | 南京大学 | 一种弯孢霉菌及吲哚里西啶生物碱的制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Digar Singh •Gurvinder Kaur."Swainsonine, a novel fungal metabolite: optimization of fermentative production and bioreactor operations using evolutionary programming".《Bioprocess Biosyst Eng》.2014,(第37期),全文. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105177079A (zh) | 2015-12-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110157623B (zh) | 一种镰刀菌菌株及其发酵生产d-泛解酸内酯水解酶的方法 | |
| CN107955791B (zh) | 一种可一步催化得烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的菌种及其筛选方法和应用 | |
| CN111500644A (zh) | 一种防治植物疫霉病的复合菌发酵产物的制备方法、复合菌发酵产物及其应用 | |
| CN103756911A (zh) | 一株成绿肉座菌及其应用 | |
| CN100532536C (zh) | 一株高产核酸酶p1的桔青霉菌及其选育方法 | |
| CN102061320B (zh) | 11α，17α-二羟基-雄甾-4-烯-3，20-二酮的制备方法 | |
| CN102732427A (zh) | 小花棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离方法 | |
| CN104357506B (zh) | 增加前体物供应以提高盐霉素发酵水平的方法 | |
| Lu et al. | High efficiency cell-recycle continuous sodium gluconate production by Aspergillus niger using on-line physiological parameters association analysis to regulate feed rate rationally | |
| CN105154318A (zh) | 组合式液态发酵浅槽组件及其发酵装置 | |
| Zhao et al. | Enhancement of nuclease P1 production by Penicillium citrinum YL104 immobilized on activated carbon filter sponge | |
| CN104472226A (zh) | 一种牛樟芝培养方法 | |
| CN105177079B (zh) | 一种提高吲哚里西啶生物碱Curvulamine产量的发酵工艺 | |
| CN106755182B (zh) | 一种促进灵芝液体发酵产胞外多糖的方法 | |
| CN107828669A (zh) | 一种虫壳属真菌发酵生产葡甘聚糖酶的培养基及方法 | |
| CN105441334B (zh) | 产灰树花多糖的菌株及其应用 | |
| RU2701308C1 (ru) | Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris - продуцент ксиланазы | |
| CN101503658A (zh) | 一种产苦马豆素的内生真菌的分离方法 | |
| CN104126508B (zh) | 一种兰花无菌苗快速菌根化的方法 | |
| CN103820362B (zh) | 一种生物合成庆大霉素x2工程菌的构建及其应用 | |
| CN107641602B (zh) | 一株产朊假丝酵母及其在发酵产蛋白中的应用 | |
| GARG et al. | Continuous production of citric acid by immobilized whole cells of Aspergillus niger | |
| CN109112171A (zh) | 一种基于海洋微生物的抗菌活性物质的制备方法 | |
| CN111944019B (zh) | 一种抗菌多肽类化合物及其制备方法和用途 | |
| WO2017003387A8 (en) | Process for producing lactic acid or its salts from fermentation using thermotolerance bacillus bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180828 Termination date: 20191104 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |