CN105175543A - 抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗E-Cadherin单克隆抗体和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCC？No.11084)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体UMAB184。本发明还涉及单克隆抗体UMAB184在制备用于检测E-Cadherin蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体UMAB184的免疫组化检测试剂盒，以及单克隆抗体UMAB184在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与E-Cadherin蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了E-Cadherin蛋白免疫检测的特异性和可靠性。

Description

抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗E-Cadherin单克隆抗体和应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体和应用。

背景技术

钙黏蛋白E(E-cadherin)是由一种肿瘤抑制基因和肿瘤转移抑制基因CDH1编码的跨膜糖蛋白家族的一员，正常表达于上皮细胞，介导Ca²⁺-依赖的细胞-细胞黏附，对维持组织结构和形态形成十分重要。相对分子质量为120kDa，由细胞外肽段、跨膜区和细胞内肽段构成，主要表达于上皮细胞膜。E-cadherin的嗜同性特异黏附作用主要是细胞间的E-连接素的胞外段共同形成“拉链”结构的黏附连接。

E-cadherin与多种上皮来源的恶性肿瘤的发生、发展、侵袭转移密切相关；其表达缺失被认为是涉及细胞-细胞黏附系统功能丧失、引起癌症浸润转移的重大分子事件之一。Zali等研究发现E-cadherin的异常表达与胃癌的恶性程度有关，在弥漫型胃癌和晚期胃癌中更为常见。Xing等通过Meta分析得出E-cadherin表达减少与胃癌患者低生存率密切相关，亚组分析表明亚洲人群中，E-cadherin的低表达对胃癌患者的总生存率有不利的影响，且与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、分化程度、血管浸润及组织学类型密切相关，该分析认为E-cadherin的表达有可能作为亚洲人群中胃癌患者的预后因素。Wang等研究发现CDH1基因的C160A突变会增加胃癌、肺癌、前列腺癌和尿路上皮癌等的发病风险，但与乳腺癌、食管癌和结直肠癌的发病风险无关。Wei等报道，肝细胞癌肿瘤组织中CDHl表达上调者较表达下调或不变者更易于侵犯血管。E-cadherin表达与肺癌类型、细胞分化、分期和分级均有关系。正常支气管上皮E-cadherin表达正常，而大部分肺癌则E-cadherin表达下降，并且与细胞分化和肿瘤转移有关；另外也有研究报道有部分非小癌患者E-cadherin表达增加，提示肺癌中可能存在不同的钙粘附蛋白作用机制。

目前在临床上通常用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)病理实验检测肿瘤组织中E-Cadherin的表达状况，其实验方法的核心为特异性结合E-Cadherin的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对E-Cadherin蛋白的单克隆抗体具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体和应用。本发明所述单克隆抗体可与E-Cadherin蛋白特异性结合，而与芯片上其他近10000种其他蛋白无交叉反应，显著提高了E-Cadherin蛋白免疫检测的特异性和可靠性，广泛适用于用于各种肿瘤细胞中E-Cadherin的检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种单克隆抗体，其与钙黏蛋白E(E-cadherin)特异性结合。

在本发明的一些具体实施方案中，所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNo.11084的杂交瘤细胞株产生。

本发明提供了所述单克隆抗体在制备用于检测钙黏蛋白E(E-cadherin)的免疫检测工具中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，所述免疫检测工具为试剂、试剂盒、芯片或试纸。

本发明还提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括所述单克隆抗体。

本发明还提供了所述单克隆抗体在制备用于标记肿瘤细胞的试剂或试剂盒中的应用。

在本发明的一些具体实施方案中，所述单克隆抗体在制备用于标记肿瘤细胞的试剂或试剂盒中的应用中所述肿瘤包括乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌或肾癌中的一种或两者以上的混合物。

本发明还提供了一种标记肿瘤细胞的试剂盒，包括所述单克隆抗体。

在本发明的一些具体实施方案中，标记肿瘤细胞的试剂盒中所述肿瘤包括乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌或肾癌中的一种或两者以上的混合物。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCCNo.11084。

与现有技术相比，本发明提供了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCCNo.11084)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体UMAB184。本发明还提供了单克隆抗体UMAB184在制备用于检测E-Cadherin蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体UMAB184的免疫组化检测试剂盒，以及单克隆抗体UMAB184在制备用于标记肿瘤细胞中E-Cadherin蛋白水平的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与E-Cadherin蛋白特异性结合，而与芯片上其他近10000种其他蛋白无交叉反应，显著提高了E-Cadherin蛋白免疫检测的特异性和可靠性，广泛适用于用于各种肿瘤细胞中E-Cadherin的检测。

生物保藏说明

用于保藏的杂交瘤细胞株UMAB184的分类命名为：钙粘附蛋白E(E-Cadherin)单克隆抗体杂交瘤细胞株；

保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏单位简称：CGMCC；

保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；

保藏日期：2015年07月03日；

保藏编号：CGMCCNo.11084。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示实施例2E-Cadherin单克隆抗体UMAB184的Westernblot检测结果图，以UMAB184检测瞬时转染E-Cadherin质粒的HEK293T细胞中E-Cadherin蛋白的表达，其中泳道L为转染空载体的HEK293T细胞裂解液为抗原的检测结果、泳道R为转染pCMV6-E-Cadherin质粒的HEK293T细胞裂解液抗原的检测结果；

图2示实施例3乳腺癌组织免疫组化检测结果图(一抗为E-Cadherin单克隆抗体UMAB184，1:500)；

图3示实施例3前列腺癌组织免疫组化检测结果图(一抗为E-Cadherin单克隆抗体UMAB184，1:500)；

图4示实施例3结肠癌组织免疫组化检测结果图(一抗为E-Cadherin单克隆抗体UMAB184，1:500)；

图5示实施例3甲状腺癌组织免疫组化检测结果图(一抗为E-Cadherin单克隆抗体UMAB184,1:500)；

图6示实施例3前列腺组织免疫组化检测结果图(一抗为E-Cadherin单克隆抗体UMAB184,1:500)；

图7示实施例4origene蛋白芯片鉴定结果图(一抗为E-Cadherin单抗UMAB184,1:100；二抗为Alexa647-标记的驴抗鼠IgG，1:500)。

具体实施方式

本发明公开了一种抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗E-Cadherin蛋白单克隆抗体和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2015年07月03日，保藏编号为CGMCCNo.11084。

本发明还提供了一种特异性结合E-Cadherin蛋白的单克隆抗体UMAB184，由上述杂交瘤细胞株产生。

本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：

(1)单克隆抗体的筛选与制备：采用E-Cadherin真核重组蛋白(购买自北京义翘神州生物技术有限公司，CatlogNo.10204-H08H)免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗E-Cadherin特异性抗体的杂交瘤细胞株，命名为UMAB184，亚型鉴定为IgG1；通过无血清培养基制备抗体，通过亲和层析柱纯化获得E-Cadherin单克隆抗体。分别通过WesternBlot、免疫组化实验验证该单克隆抗体的灵敏度和特异性。

进一步采用OriGene高密度蛋白芯片对上述单克隆抗体的特异性进行验证：

OriGene高密度蛋白芯片上包含10,000个HEK293T细胞蛋白过表达裂解物，每种蛋白裂解液在芯片上具有两个拷贝的重复。蛋白裂解液被印迹在硝酸纤维素膜上。每一钟蛋白裂解液的定位可以通过Excel文件进行准确定位。蛋白芯片上蛋白分为40个亚矩阵，每个亚矩阵上有一些参照，通过参照，可以定量每个芯片点上蛋白的含量，监控每次免疫反应数据的重复性，以及定位阳性信号的方向。

本发明将所述单克隆抗体UMAB184与上述芯片杂交并确定阳性信号位点，结果显示：本发所述明单克隆抗体UMAB184特异性结合E-Cadherin蛋白，而与其他蛋白无交叉反应。

本发明还提供了单克隆抗体UMAB184在制备用于检测E-Cadherin蛋白的免疫检测工具中的应用。

具体地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。

在具体的实施例中，本发明提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括上述单克隆抗体UMAB184，可检测肿瘤细胞中E-Cadherin的表达状况。

本发明还提供了上述单克隆抗体在制备用于检测肿瘤细胞中E-Cadherin蛋白水平的试剂盒中的应用。

其中所述肿瘤具体包括但不限于淋巴瘤、肺癌、肝癌，结直肠癌，肾癌和乳腺癌等。

与现有技术相比，本发明提供了一种杂交瘤细胞株(保藏编号为CGMCCNo.11084)，以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体UMAB184。本发明还提供了单克隆抗体UMAB184在制备用于检测E-Cadherin蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体UMAB184的免疫组化检测试剂盒，以及单克隆抗体UMAB184在制备用于标记肿瘤细胞中E-Cadherin蛋白水平的试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与E-Cadherin蛋白特异性结合，而与芯片上其他近10000种其他蛋白无交叉反应，显著提高了E-Cadherin蛋白免疫检测的特异性和可靠性，广泛适用于用于各种肿瘤细胞中E-Cadherin的检测。

本发明提供的一种单克隆抗体及其用途、产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞株、含有该单克隆抗体的诊断工具中所用原料与试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1、E-Cadherin单克隆抗体的制备与筛选

根据标准方法用购买的E-Cadherin重组真核蛋白(以下简称E-Cadherin抗原)对B6/C57小鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)进行免疫。具体方法如下：

1、动物免疫：E-Cadherin抗原以完全弗氏佐剂乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周龄BALB/c小鼠，免疫剂量为50μg/只，间隔两周后进行第二次免疫，以不完全弗氏佐剂乳化，免疫剂量为50μg/只。免疫两次后取尾血以ELISA法梯度稀释测定血清效价；根据结果确定是否加强免疫，选取抗体效价最高的小鼠进行细胞融合。

2、细胞融合：骨髓瘤细胞采用BALB/c来源的sp2/0，融合时处于对数生长期；取已免疫小鼠脾脏，制成淋巴细胞单细胞悬液；小鼠脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞以1:5-1:10混合，滴加37℃的50％PEG(PH8.0)1mL，加入不完全培养基及其余终止液，离心弃上清后加入HAT培养基悬浮混匀，MC定容到50mL，分装到3.5cm培养皿中，放于湿盒中，置于37℃、5％CO₂恒温培养箱中进行培养。

3、筛选和克隆：融合7-10天内挑选细胞克隆，使用E-Cadherin重组蛋白进行ELISA测试。标记细胞株号。对阳性孔细胞进行有限稀释，每次有限稀释后5-6天测定ELISA值，挑取OD280阳性值较高的单克隆孔进行有限稀释，直至ELISA测定96孔板全板结果为阳性。挑取阳性值高的单克隆定株。其对应融合板细胞株为UMAB184。

4、细胞上清单抗的制备与纯化：将细胞株UMAB184用含15％血清的DMEM培养基培养于10cm培养皿中培养，扩培至约4×10⁷个时，800rpm离心5min，弃上清并将细胞转移到2L转瓶中，加入无血清培养基，使细胞密度约为3×10⁵个/ml。继续培养1～2周后，当细胞死亡率达到60％-70％时(此时细胞密度大概为1-2×10⁶个/ml)，收取细胞悬液6000rpm高速离心20min，取上清，亲和层析法进行上清纯化，根据抗体压型选择相应柱料，单抗UMAB184亚型为IgG1，采用proteinG进行纯化。纯化后的单抗浓度测定、分装(100uL/管，浓度为1mg/ml)、保存在4-8℃。

实施例2、E-Cadherin单克隆抗体UMAB184为一抗的蛋白印记(Western-Blot)检测

(1)、实验方法：

1、准备细胞：准备HEK293T细胞(293T，ATCCCatlogNo.CRL-3216)，培养于含5％CO₂的37℃细胞培养箱中。

2、转染：将人源全长E-cadherin质粒pCMV6-E-Cadherin(RC220731，OriGene公司)和空载体pCMV6(PS100001，OriGene公司)转染293T细胞，36小时收获活细胞。

3、制备细胞裂解液：将上述细胞消化，水平离心机800-1000rpm/5min离心,PBS洗2次，细胞沉淀用PBS定容到400ul-EP管，加入细胞裂解液，冰浴裂解20分钟后，12000rpm离心10分钟，收集上清加入5XLoadingBuffer稀释成1X作为细胞裂解液，-80℃存储备用。

4、SDS-PAGE电泳：恒压180V50min溴酚兰至凝胶底部。

5、转膜：提前用转移缓冲液浸泡Nc膜与滤纸，三明治形式置于湿转转膜仪，顺序为：电极(-)-海绵-滤纸-凝胶-NC膜-滤纸-电极(+)，一定要保证胶在下膜在上，即凝胶靠近负极。恒流600mA,45分钟。

6、染色：用立春红S染色2min，用蒸馏水清洗，至marker条带显出，用圆珠笔做好标记。蒸馏水冲洗膜。

7、封闭：用封闭液(含5％脱脂奶的TBST)浸没NC膜并置于37℃孵育1小时。

8、一抗孵育：将NC膜置于E-Cadherin鼠单抗UMAB184(以封闭液将抗体稀释2000倍)中，37℃温箱孵育1小时后，再用15mLTBST洗膜15min*3次。(根据容器大小可调整TBST用量)

9、二抗孵育：将NC膜置于HRP标记的羊抗鼠IgG二抗(Jackson，CatlogNo.115-035-146；1：5000)中，室温摇床孵育1小时后，TBST洗膜5次，15min/次。

10、底物曝光：鲁米诺和双氧水1：1混匀后加在NC膜上(1ml/膜),压上X射线胶片曝光，然后将胶片进行显影和定影(暗室中可根据胶片上的荧光估算艳片时间)。

11、根据阴性，阳性，空白对照来进行结果分析和判定，见图1。

(2)、实验结果：

由图1结果可见，E-Cadherin鼠单抗UMAB184(1:2000)能检测到转染pCMV6-CDH1重组质粒的HEK293T细胞裂解液中E-cadherin蛋白(R)。分子量大小与预期相符(pCMV6-E-Cadherin表达的蛋白预期大小为120～130kDa(背景中有介绍E-cadherin蛋白质预测分子量为120k，考虑到载体标签和蛋白修饰，重组蛋白分子量为120k～130k)。而239T细胞中则没有相应大小的条带，表明UMAB184能检测到E-cadherin蛋白的特异性表达。

实施例3、E-Cadherin单克隆抗体UMAB184为一抗的免疫组化检测

(1)、实验方法：

1、分别取乳腺癌、前列腺、前列腺癌、结肠癌、甲状腺癌组织块进行石蜡包埋，使用SAKURA组织切片机进行切片，组织厚度为4μm。

2、脱蜡与水化：分析纯二甲苯3×10min，无水乙醇3×10min，95％乙醇5min，85％乙醇5min，75％乙醇5min，去离子水浸泡3min×3次

3、加入抗原修复液(1mMEDTA,pH8.5的10mMTris-HCL缓冲液)高压锅高压热修复2.5min，待高压锅温度降至约90℃时，打开高压锅，取出标本，然后自然冷却至室温。去离子水浸泡3min×3次。

4、使用3％过氧化氢灭活组织内源性过氧化物酶，室温静置10min。去离子水浸泡5min×3次。

5、加上封闭液(PBS+5％脱脂奶粉+5％正常山羊血清)，37℃孵育60min。

6、去除封闭液，勿冲洗，加入E-Cadherin单抗(UMAB184)，稀释比：1:500，使用封闭液进行稀释。置于湿盒中，37℃孵育60min。PBST(0.1％Tween-20)洗涤2次，每次洗涤5min。PBST(0.02％Tween-20)洗涤1次，每次洗涤5min。

7、滴加聚合物HRP染色试剂盒中试剂PV6000(CatlogNo.PV-6000)，37℃孵育15分钟。使用PBS洗涤3次，每次5min。

8、应用DAB溶液(中杉金桥ZLI-9019)显色，显色3～10min。蒸馏水洗涤。

9、苏木精复染细胞核2min，蒸馏水漂洗，1％盐酸分化。蒸馏水漂洗3次，室温静置1min。

10、脱水和透明：75％乙醇5min，100％乙醇5minx3次，85％乙醇5min，95％乙醇5min，100％乙醇3×5min；二甲苯3×5min，中性树胶封片。

11、镜检，见图2、图3、图4、图5和图6。

(2)、实验结果：

由图2结果可见，E-Cadherin蛋白在乳腺癌组织中的肿瘤细胞呈特异性细胞膜和细胞质表达。

由图3结果可见，E-Cadherin蛋白在前列腺癌组织中肿瘤细胞呈特异性细胞膜和细胞质表达。

由图4结果可见，E-Cadherin蛋白在结肠癌组织中的肿瘤细胞呈特异性细胞膜和细胞质表达。

由图5结果可见，E-Cadherin蛋白在甲状腺癌组织中的肿瘤细胞呈特异性细胞膜和细胞质表达。

由图5结果可见，E-Cadherin蛋白在前列腺组织中的腺上皮细胞呈特异性细胞膜和细胞质表达。

结果表明本发明所述的单克隆抗体UMAB184能够特异性识别乳腺癌、前列腺、前列腺癌、结肠癌和甲状腺癌组织中的E-Cadherin蛋白。

实施例4、单克隆抗体UMAB184的特异性蛋白芯片检测

OriGene高密度蛋白芯片上包含10,000个HEK293T细胞蛋白过表达裂解物，每种蛋白裂解液在芯片上具有两个拷贝的重复。蛋白裂解液被印迹在硝酸纤维素膜上。每一钟蛋白裂解液的定位可以通过Excel文件进行准确定位。蛋白芯片上蛋白分为40个亚矩阵，每个亚矩阵上有一些参照，通过参照，可以定量每个芯片点上蛋白的含量，监控每次免疫反应数据的重复性，以及定位阳性信号的方向。以下为使用OriGene蛋白(OriGeneCatPA100001)芯片进行UMAB184抗体鉴定实验的实验方法：

1、将一张蛋白芯片放在50mL离心管中，使用40mL去离子水浸润芯片，置于摇床上，室温混合30分钟。弃掉去离子水，使用10mLPBST平衡芯片。室温处理10分钟。

2、向50mL离心管中加入40mL5％脱脂牛奶(用PBST进行稀释)置于摇床上，室温封闭30分钟。

3、使用封闭液(5％脱脂牛奶)稀释一抗UMAB184，稀释比列为1：100。

4、将洁净的封口膜粘贴到实验台上，滴加250-300μL一抗在封口膜上。

5、将蛋白芯片从封闭液中抽出，将蛋白芯片NC膜的一面朝下，从芯片的一边接触抗体，慢慢滑下，依靠液体表面张力，抗体将慢慢浸润芯片NC膜，直至整张NC膜浸润在一抗溶液中。整个操作过程避免产生气泡。将芯片移到4℃环境下，静置，一抗孵育过夜。在芯片上加盖培养皿盖，其上黏附一张湿纸巾，以防止长时间孵育导致抗体蒸发。

6、第二天将芯片移至50mL离心管中，使用PBST漂洗芯片两次，去除多余的抗体。使用40mLPBST(0.1％Tween-20)洗涤芯片，置于摇床上混合均匀，洗涤三次，每次洗涤5min。

7、使用封闭液(5％脱脂牛奶)稀释二抗Alexa647-标记的驴抗鼠IgG，稀释比例为1：500。

8、按照上述步骤4，步骤5进行二抗孵育操作。室温孵育1小时。在芯片上方用铝箔纸遮盖，以防止发生信号漂白。

9、按照上述步骤6，使用PBST洗涤芯片。

10、使用去离子水冲洗芯片，以去除残余的盐分和变性剂。

11、室温干燥芯片，确保芯片完全干燥。

12、使用芯片扫描仪读取荧光信号。

13、根据BSA-Cy3以及BSA-Cy5确定芯片方向以及阳性信号的位点。

14、根据阳性信号位点找出对应蛋白裂解液ID，根据裂解液数据库信息，查找到对应蛋白名称，NCBI录入号(accessionnumber)，蛋白ID，蛋白大小等信息。结果见图7。

图7结果显示，在蛋白芯片上仅有E-Cadherin蛋白与抗体UMAB184结合，表明本发明所述抗体UMAB184可与E-Cadherin蛋白特异性结合。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种单克隆抗体，其特征在于，其与钙黏蛋白E特异性结合。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCCNo.11084的杂交瘤细胞株产生。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备用于检测钙黏蛋白E的免疫检测工具中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述免疫检测工具为试剂、试剂盒、芯片或试纸。

5.一种免疫组化检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的单克隆抗体。

6.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备用于标记肿瘤细胞的试剂或试剂盒中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌或肾癌中的一种或两者以上的混合物。

8.一种标记肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌、肝癌或肾癌中的一种或两者以上的混合物。

10.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.11084。