CN105163739A - 组合物及饮食 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种组合物，所述组合物含有γ‐谷维素和将γ‐谷维素封入其内部的生物相容性颗粒。生物相容性颗粒可以含有数均粒径为2.5～1000nm的聚乳酸-乙醇酸共聚物或其聚乙二醇修饰物。该组合物可用于改善胰岛素抗性。另外，该组合物可以用于治疗或预防选自由肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病所形成的组的疾病。

Description

组合物及饮食
【技术领域】
本发明涉及组合物及饮食。
【背景技术】
已知糙米饮食能够改善胰岛素抗性、延缓糖尿病的病发。糙米中含有生理活性物质γ‐谷维素，其生物活性的机制不断得到揭示。非专利文献1中公开了，在经口投药γ‐谷维素(320mg/kg)的肥胖模型小鼠中，抑制了从小肠吸收脂质、抑制了胰岛素的分泌促进和血糖值降低、及对于高脂肪饮食的嗜好。
【先行技術文献】
【非专利文献】
【非专利文献1】KozukaCetal.，BrownRiceandItsComponent，γ－Oryzanol，AttenuatethePreferenceforHigh－FatDietbyDecreasingHypothalamicEndoplasmicReticulumStressinMice.，Diabetes，2012，61，3084－93
【非专利文献2】TakeuchiHetal.，Mucoadhesivenanoparticulatesystemsforpeptidedrugdelivery.，AdvDrugDelivRev，2001，47，39－54
【发明内容】
【发明所要解决的课题】
但是，在肥胖、血脂异常及糖尿病等患者中，为了获取γ‐谷维素的上述作用所要的1天的用量是较大量的(以患者的体重为60kg计，用量为19.2g)。在接连数日经口投药如此大量的γ‐谷维素的情况下，副作用是一个问题。另外，即使将1天的用量分为数次进行投药，则导致投药次数增加、投药管理变得复杂。因此，连续数日经口投药大量的γ‐谷维素是不现实的。
本发明是鉴于上述实情而完成的，其目的在于提供一种能够以较少的用量来发挥γ‐谷维素的作用的组合物及饮食。
【解决课题的手段】
如上所述的需要大量的γ‐谷维素的一个因素可以认为是从肠管吸收γ‐谷维素的吸收效率较低。因此，本发明人关注通过将药剂进行封装以使得该药剂的动态发生变化的药物递送系统(DDS)。通常，用于药物递送系统的微米尺寸的粒子，具有易于吸附于肠管黏膜层的性质。进而，纳米尺寸的粒子，能够附加如下功能，即进入黏膜层内、药剂的释放及送至肠管内等功能(参考非专利文献2)。至今为止，还未能确定利用药物递送系统的γ‐谷维素在生物体内的作用。在此，本发明人，反复研究了以实用的低用量γ‐谷维素是否也能够获得上述效果，从而完成了本发明。
即，本发明的第1方面的组合物，包含：γ‐谷维素；和生物相容性颗粒，将所述γ‐谷维素封入其内部。
在这种情况下，所述生物相容性颗粒可以含有数均粒径为2.5～1000nm的聚乳酸-乙醇酸共聚物或其聚乙二醇修饰物。
另外，上述组合物可以用于改善胰岛素抗性。
另外，上述组合物可以用于抑制内质网应激。
另外，上述组合物可以用于抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌。
另外，上述组合物可以用于治疗或预防选自肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病所形成的组的疾病。
在此情况下，以1日以上的投放间隔对于患者投药上述组合物。
另外，上述投放间隔为7日以上14日以下。
本发明的第2方面的饮食含有上述本发明第1方面的组合物。
【发明效果】
根据本发明，通过封入生物相容性颗粒提高了从肠管吸收γ‐谷维素的吸收效率，能够以较少的用量发挥γ‐谷维素的作用。
【附图说明】
图1(A)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的体重的经时变化图。图1(B)是表示投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠的体重的经时变化的图。
图2(A)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的血糖值的经时变化图。图2(B)是表示投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠的血糖值的经时变化图。
图3(A)是表示对投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的葡萄糖耐受性试验中血糖值的经时变化的图(其1)。图3(B)是表示从图3(A)的结果得到的曲线下面积(AUC)的图。图3(C)是表示对于投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠的葡萄糖耐受性试验中血糖值的经时变化的图(其1)。图3(D)是表示从图3(C)的结果得到的AUC的图。
图4(A)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠中血浆中的中性脂肪的浓度的图。图4(B)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的糞便中的脂质浓度的图。
图5是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠中血浆中的胰岛素的浓度的图。
图6是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠中内质网(ER)应激标记物基因的表达量的图。图6(A)表示Chop的表达量。图6(B)表示ERdj4的表达量。图6(C)表示Xbp1s的表达量。
图7是表示从通过TNF‐α刺激的肠上皮细胞所分泌的IL‐8的量的图。图7(A)是由γ‐谷维素进行预处理的情况，图7(B)是由γ‐谷维素封入粒子进行预处理的情况，图7(C)是由作为PLGA粒子的对照而使用FITC封入粒子进行预处理的情况。
图8是将由肠上皮细胞所获取的FITC的量通过由共聚焦激光显微镜进行分析得到的荧光强度来表示的图。图8(A)表示添加FITC封入粒子后当天的荧光强度。图8(B)表示在添加FITC封入粒子后的第1天的荧光强度。图8(C)表示在添加FITC封入粒子后的第3天的荧光强度。图8(D)表示在添加FITC封入粒子后的第7天的荧光强度。
图9(A)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠，其4周期间内的体重的经时变化的图。图9(B)是表示投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠，其4周期间内的体重的经时变化的图。
图10(A)是表示投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠其4周期间的血糖值的经时变化的图。图10(B)是表示投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠其4周期间的血糖值的经时变化的图。
图11(A)是表示对投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的葡萄糖耐受性试验中，血糖值的经时变化的图(其2)。图11(B)是表示从图11(A)的结果得到的AUC的图。(C)是表示对于投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠的葡萄糖耐受性试验中血糖值的经时变化的图(其2)。(D)是表示从图11(C)的结果得到的AUC的图。
图12(A)是表示对投药γ‐谷维素封入粒子的遗传性肥胖小鼠的胰岛素抗性试验中血糖值的经时变化的图。图12(B)是表示从图12(A)的结果得到的AUC的图。图12(C)是表示对投药γ‐谷维素的遗传性肥胖小鼠的胰岛素抗性试验中血糖值的经时变化的图。图12(D)是表示从图12(C)的结果得到的AUC的图。
图13是表示投药γ‐谷维素封入粒子或γ-谷维素的遗传性肥胖小鼠的血浆中的中性脂肪的浓度的图。
图14是表示投药γ‐谷维素封入粒子或γ-谷维素的遗传性肥胖小鼠中的内质网应激标记基因的表达量的图。图14(A)表示丘脑下部的Chop的表达量。图14(B)表示丘脑下部的ERdj4的表达量。图14(C)表示胰岛中的ERdj4的表达量。图14(D)表示胰岛中的Xbp1s的表达量。
图15是表示投药γ‐谷维素封入粒子或γ-谷维素的遗传性肥胖小鼠中的内质网应激标记基因的表达量的图。图15(A)表示肠间膜的脂肪组织中Chop的表达量。图15(B)表示肠间膜的脂肪组织中的Xbp1s的表达量。图15(C)表示肝脏中的Chop的表达量。图15(D)表示肝脏中的Xbp1s的表达量。
图16是表示投药γ‐谷维素封入粒子或γ-谷维素的遗传性肥胖小鼠中的炎症性细胞因子及趋化因子基因的表达量的图。图16(A)表示附睾的脂肪组织中的TNFα的表达量。图16(B)表示附睾的脂肪组织中的MCP－1的表达量。图16(C)表示皮下脂肪组织中的TNFα的表达量。图16(D)表示皮下脂肪组织中的MCP－1的表达量。
【具体实施方式】
对于本发明的实施方式进行说明。
(实施方式1)
首先，对于本发明的实施方式1进行说明。本实施方式的组合物，含有γ‐谷维素、以及将γ‐谷维素封入其内部的生物相容性颗粒。
γ‐谷维素是米糠等脂质中所含有的生理活性物质。γ‐谷维素是甾醇或三萜醇与阿魏酸进行酯连接的化合物或其混合物。γ‐谷维素，主要可以从米糠油、米胚芽油提取。另外，可以利用市售的γ‐谷维素(和光纯药社制)。
将γ‐谷维素封入其内部的生物相容性颗粒，可以由生物相容性聚合物来制备。生物相容性聚合物，由于其各种各样的平均链长，导致内部粘性及聚合物特性的不同。本实施方式中所用的聚合物，优选具有对生物体的刺激或毒性较低的生物相容性，是在投药后进行分解代谢的生物体内分解性的聚合物。作为生物体内分解性的聚合物，例如可以举出聚羟基丁酸、聚羟基戊酸乙酯等高分子，以及胶原蛋白、醋酸纤维素、细菌纤维素、高直链玉米淀粉、淀粉、壳聚糖等天然高分子等。
从生物相容性聚合物所得到的生物相容性颗粒，优选将所封入的γ‐谷维素持续释放，即逐渐释放。为此，作为生物相容性聚合物，例如为分子量5000～200000的聚合物，优选分子量为5000～25000的聚合物。
生物相容性颗粒，可以由生物相容性聚合物，例如生物相容性聚酯来制备。生物相容性聚酯为选自例如D，L‐丙交酯、D‐丙交酯、L‐丙交酯、D，L‐乳酸、D‐乳酸、L‐乳酸、乙交酯、乙醇酸、ε‐己内酯、ε‐羟基己酸、γ‐丁内酯、γ‐羟丁酸、δ‐戊内酯、δ‐羟基戊酸、羟丁酸、苹果酸等中的1种或1种以上的单体通过聚合而合成的聚酯。优选地，生物相容性聚合物为聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸·乙醇酸共聚物、或乳酸·天冬氨酸共聚物，特别优选聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)或聚乙二醇/壳聚糖修飾‐PLGA(PEG/CS‐PLGA)。
作为生物相容性聚合物的PLGA，例如是以1：99～99：1、优选为3：1的比例，由乳酸或丙交酯与乙醇酸或乙交酯所形成的共聚物。PLGA可以是将任意的单体通过普通的方法进行合成，也可以使用市售的。作为市售的PLGA，例如有PLGA7520(乳酸：乙醇酸＝75：25，平均重量分子量20000，和光纯药社制)。乳酸及乙醇酸的含量为25重量％～65重量％的PLGA是非晶体，可溶于丙酮等有机溶剂，故而优选。
在由PIGA制备上述生物相容性颗粒的情况下，生物相容性颗粒中可以含有粒径不足1000nm，例如2.5～1000nm，优选为5～800nm，更优选为25～500nm，进一步优选为大致50～300nm，最优选为100～250nm的PLGA。粒径可以通过筛分法、沉降法、显微镜法、光散射法、激光衍射散射法、电阻实验等来测定。粒径根据测定方法不同，可以由斯托克当量直径、圆当量直径、球当量直径来表示。另外，粒径还可以是以多个粒子为测定对象，以其平均值所表示的数均粒径、体积平均粒径、面积平均粒径等。例如，数均粒径是基于激光衍射散射法等测定而从个数分布等所计算出的平均粒径。具体而言，可以在以粉体集合的总体积为100％来求取累积曲线时，该累积曲线为50％的点的粒径，即50％径(D50)作为平均粒径。
由PLGA所制备的生物相容性颗粒，易于在肠管(小肠)的黏膜层、肠管壁停留，从而将所封入的γ‐谷维素在肠管的黏膜层、肠管壁灯持续放出，故而优选。
另外，在制备上述生物相容性颗粒时，可以使用PLGA的聚乙二醇(PEG)修饰体。通过PEG来修饰PLGA的表面的话，可以提高血中稳定性，故而优选。
上述生物相容性颗粒，只要是能将生物相容性聚合物与γ‐谷维素加工成数均粒径为，例如通过激光衍射散射法所测定时，不足1000nm，例如2.5～1000nm，优选为5～800nm，更优选为25～500nm，进一步优选为大致50～300nm，最优选为100～250nm的粒子的方法，可以采用任意方法来制备。生物相容性颗粒，例如可以通过球形结晶技术来制备。球形结晶技术是在将结晶操作中所析出的结晶造粒为球状的方法。根据球形结晶技术，能够控制所制备的化合物的物性来加工化合物。例如，在球形结晶技术中，有乳化溶剂扩散法(以下，仅称作「ESD法」)。
ESD法中，使用生物相容性聚合物能溶解的良溶剂和生物相容性聚合物不溶解的不良溶剂这两种溶剂。良溶剂使用生物相容性聚合物能够溶解、且与不良溶剂混溶的有机溶剂。良溶剂与不良溶剂的种类，没有特殊的限定，根据所封入的物质的种类来决定。本实施方式的生物相容性颗粒主要作为在人体内发挥作用的组合物的原料而使用，因而优选使用对人体安全性较高、且环境负荷少的有机溶剂。
作为不良溶剂，有水，可以在水中添加表面活性剂。例如，作为表面活性剂，优选使用聚乙烯醇水溶液。作为聚乙烯醇之外的表面活性剂，有卵磷脂、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等。需要说明的是，在残留有聚乙烯醇的情况下，在除去溶剂之后，优选通过离心分离等除去聚乙烯醇。
作为良溶剂，可以举出低沸点且水溶性差的有机溶剂：卤代烷烃类、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、环己烷、苯、甲苯等。优选地，例如仅使用对环境或人体的不良影响较少的丙酮或使用丙酮与乙醇的混合液。
在ESD法中，首先在良溶剂中溶解生物相容性聚合物，此后，在该良溶剂中添加并混合γ‐谷维素溶解液溶解且使得生物相容性聚合物不析出。将含有生物相容性聚合物与γ‐谷维素的混合液一边搅拌一边滴加入不良溶剂中，则混合液中的良溶剂迅速地向不良溶剂中扩散移动。其结果，在不良溶剂中发生良溶剂的乳化，形成直径数μm程度的良溶剂的乳滴。进一步，通过良溶剂与不良溶剂的相互扩散，有机溶剂从乳滴内继续向不良溶剂内扩散，因此乳滴内的生物相容性聚合物及γ‐谷维素的溶解度有所下降。最终生成了将γ‐谷维素封入的球形结晶粒子的生物相容性颗粒。此后，将作为良溶剂的有机溶剂进行离心分离或减压蒸馏，得到生物相容性颗粒粉末。所获得的粉末，可以直接使用，也可以根据需要通过冷冻干燥等而复合成可再分散的凝集粒子。复合的粒子，作为γ‐谷维素封入粒子，填充至容器内。如此所得的γ‐谷维素封入粒子，优选封入的γ‐谷维素为0.1～99％(w/v)，更优选为0.1～30％(w/v)，进一步优选为1～10％(w/v)，特别优选为3～5％(w/v)。
上述球形结晶技术中，由于所得到的γ‐谷维素封入粒子为大致球形，无需考虑所谓催化剂、原料化合物的残留问题。另外，根据球形晶析技术，能够容易地形成粒径偏差小的γ‐谷维素封入粒子。
需要说明的是，为了提高进入生物相容性颗粒内部的γ‐谷维素封入率，也可以在不良溶剂中添加阳离子性高分子。在不良溶剂中添加阳离子性高分子的情况下，吸附于生物相容性颗粒表面的阳离子性高分子与存在于乳滴表面的γ‐谷维素相互作用，能够抑制γ‐谷维素向不良溶剂中漏出。
作为阳离子性高分子，可以列举壳聚糖及壳聚糖衍生物、纤维素上结合了多个阳离子基的阳离子化化纤维素、聚乙烯亚胺、聚乙烯胺、聚丙烯胺等聚氨基化合物、多鸟氨酸、多聚赖氨酸等聚氨基酸、聚乙烯咪唑、聚氯乙烯氯化吡啶、甲基丙烯酸烷基季铵盐聚合物(DAM)、甲基丙烯酸烷基季铵盐·丙烯酰胺共聚物(DAA)等。特别优选使用壳聚糖或其衍生物。
壳聚糖是结合了多个作为具有氨基的糖的一种的氨基葡萄糖的天然高分子，具有乳化稳定性、保形性、生物分解性、生物相容性、抗菌性等特征，因此可以广泛用作化妆品、食品、服装及医药等原料。通过将壳聚糖添加入不良溶剂中，不会对生物体产生不良影响，能够制备安全性较高的γ‐谷维素封入粒子。
如上所述得到的γ‐谷维素封入粒子，在通过冷冻干燥等进行粉末化时可以复合化成可再分散可能的凝集粒子(复合纳米材料)。此时，将有机或无机物质复合化成可再分散的，优选与γ‐谷维素封入粒子一起干燥。例如，通过使用糖醇或蔗糖，不仅能够有效地防止封入率的不均，且糖醇等成为赋性剂可以提高γ‐谷维素封入粒子的处理容易度。作为糖醇，可以列举甘露醇、海藻糖、山梨糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、木糖醇等，其中特别优选海藻糖。
通过这样的复合化，γ‐谷维素封入粒子成为易于处理的凝集粒子。并且，在使用时通过接触水则凝集粒子被解散，γ‐谷维素封入粒子显示出高反应性等特性。需要说明的是，代替冷冻干燥法，也可以通过使用例如AgromasterAGM(商标，细川密克朗公司制)的流动层干燥造粒法进行复合化，以可再分离的状态进行一体化。
本实施方式的含有γ‐谷维素封入粒子的组合物，通过已知方法制备，作为有效成分含有大致0.1％～99％、优选为约1％～约50％、更优选为1～20％(％表示重量％)的γ‐谷维素封入粒子。
本实施方式的含有γ‐谷维素封入粒子的组合物，在医药用途中，可以作为注射剂、直肠栓剂、阴道栓剂、经鼻吸收剂、经皮吸收剂、肺吸收剂和口服吸收剂等来使用。特别是，由于含有γ‐谷维素封入粒子的组合物，其在肠管的吸收效率较高，适用于作为口服制剂来使用。此时，该组合物，可以为例如与药学上可接受的载体所混合的合剂。药学上可接受的载体，是作为制剂素材使用的各种有机载体物质或无机载体物质。药学上可接受的载体，作为固形制剂中的赋性剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂，或液状制剂中的溶剂、溶解助剂、悬浮剂、张度剂、缓冲剂、舒缓剂等而被配合在氧化应激疾病治疗药物中。另外，根据需要，还可以使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等添加物。
赋性剂，例如为乳糖、蔗糖、D-甘露糖醇、淀粉、结晶纤维素、轻质无水硅酸等。润滑剂，例如为硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石、胶态二氧化硅等。粘合剂，例如为结晶纤维素、白糖、D-甘露糖醇、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂，例如为淀粉，羧甲基纤维素，羧甲基纤维素钙，交联羧甲基钠，羧甲基淀粉钠等。
溶剂，例如为注射用水、醇、丙二醇、聚乙二醇等。溶解助剂，例如为聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等。悬浊剂，为界面活性剂、亲水性高分子等，例如为硬脂三乙醇胺、月桂基硫酸钠、月桂基丙氨酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等。
张度剂，例如为氯化钠、甘油、D-甘露糖醇等。缓冲剂，例如为磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐的缓冲液等。舒缓剂，例如为苯甲醇等。防腐剂，例如对羟基苯甲酸、氯丁醇、苯甲醇、苯乙醇、脱氢乙酸、山梨酸等。抗氧化剂，例如为亚硫酸盐、抗坏血酸等。
含有本实施方式的γ‐谷维素封入粒子的组合物，如下述实施例2、5所示，适于用于改善胰岛素抗性(胰岛素抗性改善剂)。另外，该组合物不仅具有对血糖值、体重増加及脂质吸收的抑制作用，由于可以降低血浆中的中性脂肪浓度，从而认为具有抗动脉硬化作用。基于这些作用，该组合物适于用于治疗或预防例如选自肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病及动脉硬化症的疾病。需要说明的是，该组合物抑制内质网应激，因此可以用于内质网应激的抑制、或与内质网应激相关的疾病的治疗或预防(内质网应激抑制剂)。特别是，如下述实施例5所示，该组合物，有效抑制丘脑下部中的内质网应激。进行接触调节的丘脑下部中，内质网应激与对于高脂肪饮食的嗜好性相关，因此该组合物即使以较低用量也能够减轻对高脂肪饮食的依赖性。即使基于这一点，该组合物也适用于肥胖症、糖尿病等的治疗或预防。此外，含有γ‐谷维素封入粒子的组合物，可以用于与内质网应激相关的疾病冠状动脉疾病、高血压、代谢综合征、神经变性疾病和双相性精神障碍等疾病的治疗或预防。
含有本实施方式的γ‐谷维素封入粒子的组合物，如下述实施例3所示，抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌。因此，该组合物适于用于抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌(IL－8分泌抑制剂)。当IL‐8的分泌亢奋时，嗜中性粒细胞等免疫细胞被吸引。通过免疫细胞释放出大量炎症性细胞因子使得炎症性疾病进一步进展。因此，含有γ‐谷维素封入粒子的组合物，可以用于溃疡性大肠炎、克罗恩病等肠管上皮中的炎症性疾病的治疗或预防。如实施例5所示，表明该组合物不仅对于肠管上皮、还抑制附睾的脂肪组织及皮下脂肪组织中的炎症性细胞因子及趋化因子的表达。因此，该组合物适于用于炎症性疾病的治疗或预防。
含有本实施方式的γ‐谷维素封入粒子的组合物的投放量，根据被实验体的性別、年龄、体重、症状等而适当确定。投药该组合物以使得γ‐谷维素达到治疗上的有效用量。所谓有效用量，是用于得到所需要的结果所需要的γ‐谷维素的量，是能够导致延迟、阻碍、预防、逆转、或治愈正在治疗或处理的状态的进展的所需量。该组合物的投放量，通常为约0.01mg/kg～约1000mg/kg，优选为约0.1mg/kg～约200mg/kg，更优选为约0.2mg/kg～约20mg/kg，可以1日1次，或分多次进行投药。在将该组合物进行分割投药的情况下，该组合物优选为1日1～4次投药。另外，该组合物，也可以以每天、隔天、每周1次、隔周、1月1次等各种投放频度进行投药。优选地，投放频度由医生简单地确定。需要说明的是，根据需要，也可以使用上述范围外的量。
本实施方式的将γ‐谷维素封入的粒子，例如PLGA粒子，如下述实施例4所示，长时间维持对于肠上皮细胞的进入。因此，如下述实施例2、5所示，通过将含有本实施方式的γ‐谷维素封入粒子的组合物以1周或每2周进行投药，能够获得如下作用，即：改善胰岛素抗性；抑制血糖值、体重増加以及脂质吸收；降低血浆中的中性脂肪浓度；抑制内质网应激；以及抑制炎症等作用。由此，含有该γ‐谷维素封入粒子的组合物，可以对患者以1日以上的投放间隔进行投药。该投放间隔可为7日以上14日以下。
如上述详细说明的，本实施方式的组合物，通过封入生物相容性颗粒增加了从肠管吸收γ‐谷维素的吸收效率，因此能够以较少的用量获得γ‐谷维素的作用。
另外，本实施方式的组合物，与未将γ‐谷维素封入生物相容性颗粒的情况相比，可以以较低用量获得足够的作用，因此可以减少投药次数。另外，由于投药简单、并且能够防止大量投药引起的副作用，从而能够提高安全性。
需要说明的是，本实施方式中，将γ‐谷维素封入的生物相容性颗粒，还可以含有数均粒径为2.5～1000nm的PLGA或其PEG修饰体。PLGA，以对生物体的刺激或毒性较低的生物相容性，具有在投药后分解代谢的生物体内分解性，因此适于对人体的投药。另外，PLGA的PEG修饰体，由于提高了血中稳定性，对于代谢吸收稳定性等药物动力学特征的最佳化是有用的。另外，将γ‐谷维素封入的PLGA及PLGA的PEG修饰体，停留在肠管的黏膜层以及肠管壁，从而使所封入的γ‐谷维素逐渐释放。由此，能够以较少的用量在相对较长时间内发挥γ‐谷维素的作用。
另外，可以是通过向患者投药本实施方式的组合物来治疗或预防肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病的方法。另外，本实施方式的组合物，还可以使用作肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病的治疗药或预防药。本实施方式还可以是本实施方式的组合物在制备用于治疗或预防肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病的医药中的使用。
(实施方式2)
接下来，对本发明的实施方式2进行说明。
本实施方式的饮食，包含上述实施方式1的组合物。如下述实施例2中所述，该组合物，由于通过口服能够发挥各种作用，因此可以作为饮食的原料来使用。
在讲上述组合物作为饮食(饮食物)的原料来使用的情况下的饮食的形态，例如包括：能量饮料、汽水、红茶、绿茶等饮料；糖果、饼干、片剂糖果、口香糖、果冻等点心；面条、面包、米饭、饼干等谷物加工；香肠、火腿、鱼糕等膏状产品；奶油、酸奶等乳制品；干调味粉、调味料等。需要说明的是，该饮食还可以含有甜味剂、香料、着色料等添加物。
本实施方式的饮食，由于含有具有对血糖值、体重増加及脂质吸收的抑制作用等的上述组合物，适于用作改善胰岛素抗性的饮食。另外，该饮食，例如可以用作选自肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病及动脉硬化症的疾病的治疗或预防的饮食。该饮食，由于抑制内质网应激，还可以作为用于内质网应激的抑制、或与内质网应激相关的疾病的治疗或预防的饮食。此外，该饮食，也可以作为用于冠状动脉疾病、高血压、代谢综合征、神经变性疾病和双相性精神障碍等疾病的治疗或预防的饮食。
另外，本实施方式的饮食，由于含有抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌的上述组合物，适于用作抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌的饮食。另外，本实施方式的饮食，可以作为用于炎症性疾病的治疗或预防的饮食。
作为饮食中的有效成分的上述组合物的含量，通常为0.0001～100重量％，优选为1～95重量％。作为有效成分的上述组合物的摄取量，成人每日为1mg～100g，优选为10mg～100g，更优选为100mg～50g的范围内。
如上述详细说明，本实施方式的饮食，含有上述实施方式1的封入生物相容性颗粒内的γ‐谷维素。因此，通过摄取该饮食，能够在体内有效吸收γ‐谷维素。另外，通过作为饮食进行加工，可以结合嗜好来添加味道、气味、香味等。进一步，通过作为饮食来加工，通过就餐能够轻松地摄取封入到生物相容性颗粒内的γ‐谷维素。
【实施例】
通过以下实施例，进一步具体说明本发明，但本发明不受实施例所限定。
实施例1：γ‐谷维素封入粒子的制备
制备封入了γ‐谷维素的PLGA粒子。将2g的PLGA(PLGA7520、乳酸：乙醇酸＝75：25，平均重量分子量20000，和光纯药社制)与0.1g的γ‐谷维素(和光纯药工业社制)溶解于丙酮40ml和乙醇20ml的混合溶剂中，成为聚合物溶液。将其以一定速度(4ml/min)滴加入40℃、以400rpm搅拌的0.5重量％聚乙烯醇溶液(gohsenol(商标)EG50、日本合成化学工业社制)120ml中，得到γ‐谷维素封入粒子的悬浊液。接着在减压下，在40℃下以100rpm进行搅拌的同时蒸馏混合溶剂。在将混合溶剂蒸馏2小时后，将悬浊液进行过滤器过滤(孔径32μm)，将滤液冷冻干燥1晚，得到γ‐谷维素封入粒子的干燥粉末。所得到的干燥粉末的数均粒径为198nm，对于PLGA的γ‐谷维素的封入率为3.49±0.11％(w/v)。γ‐谷维素封入粒子的Zeta电位为21.0mV。
此处，数均粒径的定义如下进行定义。以该粉体集合的总体积作为100％来求取累积曲线时，其累积曲线为50％的点的粒径即50％径(D50)作为累积中位粒径(平均粒径)，作为通常评价粒度分布的参数而定义。平均粒径，通过将纳米粒子分散在蒸馏水中的样品用MicrotrackUPA150(日机装公司制)通过光散法来测定。
实施例2：遗传性肥胖小鼠中的γ‐谷维素封入粒子的评价(1)
将实施例1所制备的γ‐谷维素封入粒子对小鼠进行口服投药，并进行评价。
首先，将γ‐谷维素封入粒子在精制水中以5％，1.25％，0.31％(w/v)的浓度悬浊。作为对照的γ‐谷维素，在0.5％(w/v)甲基纤维素溶液(和光纯药社制)中以0.05％，3.2％(0.5，32mg/ml)浓度悬浊。
接着，对ob/ob小鼠(5周龄、雄、B6.Lepob/J小鼠(纯合体(Lepob/Lepob))、日本CharlesRiver公司制)将γ‐谷维素封入粒子悬浊液及γ‐谷维素悬浊液分别利用探头进行口服投药(n＝6)。详细地，将γ‐谷维素封入粒子悬浊液作为γ‐谷维素，在2周的间隔内以0.3，1.3和5ug/g体重/14日对小鼠按照投放2天停药5天的间隔进行投药，观察14天。每天的投放量分别为1.1，4.4和17.5ug/g体重/日。另一方面，将γ‐谷维素悬浊液，以1天5和320ug/g体重/日对小鼠连续投放28天，观察4周。
测定投药开始1周后与2周后的小鼠的体重及血糖值。在测定血糖值时使用简易血糖测定器(Medisafe(注册商标)Mini；Terumo公司制)。另外，为了评价耐糖能，在投药开始10天后进行口服葡萄糖耐受性试验。在该实验中，在18小时断食后，利用探头投放0.75g/kg的葡萄糖，测定从投放开始至2小时后的血糖值。
关于投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠，在5ug/g体重/日的投药组中，为了对血浆中的中性脂肪与胰岛素、及糞便中的脂质进行定量、并对β细胞中的内质网应激进行评价，在投药开始2周后，从小鼠采用血液、糞便、胰岛。血浆中的中性脂肪，利用TriglycerideE-testWako(甘油三酯E试验，和光纯药社制)来测定。糞便中的脂质，通过Folch法提取。需要说明的是，糞便中的脂质的定量，在n＝2条件下进行。血浆中的胰岛素浓度，利用超高灵敏度小鼠胰岛素測定试剂盒(森永生化学研究所制)来测定。
在对β细胞中内质网应激的评价中，分析内质网应激标记基因(Chop、ERdj4、Xbp1s)的表达量。首先，使用TRIzol(注册商标)RNA提取试剂(LifeTechnologies(生命科学)公司制)来提取胰岛中的RNA，利用iScript(商标)cDNA合成试剂盒(Bio-Rad(伯乐生命医学产品)公司制)来合成cDNA。接着，利用StepOnePlus(商标)实时荧光定量PCR系统及FastSYBR(注册商标)GreenMasterMix(LifeTechnologies(生命科学)公司制)，根据所合成的cDNA来分析内质网应激标记基因的表达量。
(结果)
γ‐谷维素封入粒子投药后的小鼠的体重示于图1(A)。在投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠中，在任一投放量下，与溶剂对照组相比，投药2周后的体重增加都得到了有效的抑制(p＜0.05或0.01)。另一方面，如图1(B)所示，在投药γ‐谷维素的小鼠中，未发现体重増加的有效抑制。
γ‐谷维素封入粒子投药后的小鼠的血糖值示于图2(A)。在投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠中，在1.3ug/g体重投药组中，与溶剂对照组相比，投药1周后(p＜0.05)及2周后(p＜0.01)的血糖值得到有效降低。另外，在5ug/g体重投药组及0.3ug/g体重投药组，与溶剂对照组相比，投药2周后的血糖值得到有效降低(p＜0.01)。另一方面，如图2(B)所示，投药γ‐谷维素的小鼠中，未发现血糖值的有效降低。
口服葡萄糖耐受性试验的结果示于图3。如图3(A)所示，在投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠中，在0.3ug/g体重投药组，与溶剂对照组相比，在葡萄糖负荷后15、120分钟的血糖值得到有效降低。在1.3ug/g体重投药组及5ug/g体重投药组，与溶剂对照组相比，在葡萄糖负荷后15、30、120分钟的血糖值得到有效降低。图3(B)示出了葡萄糖负荷后120分钟的AUC。在投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠的所有组中，与溶剂对照组相比，AUC均有效减小。另一方面，在投药γ‐谷维素的小鼠，显示出与溶剂对照组相同程度的血糖值(图3(C)、(D))、未能发现血糖值的降低。
图4(A)表示投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠(5ug/g体重投药组)的血浆中的中性脂肪浓度。确认了血浆中的中性脂肪浓度，与溶剂对照组相比，有降低的倾向。图4(B)示出了投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠(5ug/g体重投药组)的糞便中的脂质量。确认了糞便中的脂质的量，与溶剂对照组相比，存在増加的倾向。由这些结果表明，通过投药γ‐谷维素封入粒子，抑制了小鼠的脂质吸收。
图5表示投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠(5ug/g体重投药组)的血浆中的胰岛素的浓度。即使投药γ‐谷维素封入粒子，也几乎不能看到胰岛素的浓度变化。考虑ob/ob小鼠是显示胰岛素抗性的模型小鼠，且投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠中血糖值得到了有效降低(参考图2(A))，表明通过γ‐谷维素封入粒子改善了胰岛素抗性。
图6示出了与溶剂对照组相比在投药γ‐谷维素封入粒子的小鼠(5ug/g体重投药组)中的内质网应激标记基因(Chop、ERdj4、Xbp1s)的表达量。确认了Chop、ERdj4、Xbp1s的表达量，任一个都存在降低的倾向。由此表明，γ‐谷维素封入粒子对β细胞中内质网应激的抑制作用。
实施例3：使用人肠上皮细胞株来评价γ‐谷维素封入粒子对由TNF‐α刺激的IL‐8分泌抑制作用
(细胞的制备)
细胞使用Caco‐2(RCB0988、理化学研究所)。将Caco‐2用100ml的培养皿培养至半汇合状态。培养基使用达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM、D5796、西格玛-奥尔德里奇公司制)。培养基中，添加了非必须的氨基酸(M7145、西格玛-奥尔德里奇公司制)、青霉素/链霉素(Penicillin/Streptomycin，以下称作“PS”。Gibco，LifeTechnologies(生命科学)日本公司制)。
将继代50的细胞，通过0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA进行剥离，以2×105细胞/孔的浓度接种于24孔板。通过含有10％FBS(胎牛血清)、1％非必须的氨基酸及1％PS的DMEM培养14天。每隔1天交换一次培养基，将充分分化的细胞用于如下实验。
(预处理)
在由TNF‐α进行刺激的24小时前，除去培养基，对于1个孔用1ml的PBS将细胞清洗2次。接着，将各孔中的培养基用含有1％PS的1ml的DMEM进行交换，该DMEM中加入了在使用时调制的γ‐谷维素、γ‐谷维素封入粒子或FITC封入粒子，培养24小时。此处，所使用的含有γ‐谷维素、γ‐谷维素封入粒子或FITC封入粒子的培养基，如下进行调制。
关于γ‐谷维素，将γ‐谷维素(152‐01272、和光纯药工业社制)溶解于丙酮以使得浓度为10mg/ml，用丙酮调制稀释系列后，加入培养基中(丙酮的最终浓度为0.1％)。
关于γ‐谷维素封入粒子，使用与实施例1同样调制的封入率3.18±0.06％(w/v)、数均粒径220nm的γ‐谷维素封入粒子。将γ‐谷维素封入粒子作为PLGA利用无菌水调制为15.72mg/ml(相当于原料粉末500μg/ml)。进一步，通过培养基稀释为3.14mg/ml(相当于原料粉末100μg/ml)，将其通过培养基调制成10倍稀释系列。
关于FITC(fluoresceinisothiocyanate，异硫氰酸荧光素)封入粒子，将与实施例1同样制备的封入率4.06％(w/v)、数均粒径225nm的FITC封入粒子，与上述γ‐谷维素封入粒子同样地用培养基进行调制。
需要说明的是，同时调制预处理所使用的培养基。
(TNF‐α刺激)
在去除预处理用的培养基之后，用PBS将细胞清洗2次。接着，将含有1％FBS及1％PS的DMEM加入各孔中，该DMEM含有的1％FBS及1％PS含有TNF‐α(T6674‐10UG、Aldrich(奥德里奇)公司制)50ng/ml或100ng/ml，培养24小时。在培养24小时候，将培养上清回收到1.5ml管中。需要说明的是，TNF‐α使用以100μg/ml溶解于蒸留水，在－20℃下保存的溶液。另外，培养基在用的时候进行调制。
(IL‐8的定量)
对于回收的上清进行ELISA(酶联免疫吸附测定)，来测定上清中的IL‐8量。根据ELISA用试剂盒(D8000C、R&D社制)的协议来进行。同时，对上清中的总蛋白量利用二辛可宁酸法(PierceBCA蛋白定量分析试剂盒，ThermoScientific(赛默飞世尔)社制)来测定。关于数据的统计分析，采用单因素方差和Dunnett’s(杜納)多重比较测试。
(结果)
图7表示将由ELISA测定所得的IL‐8量通过总蛋白量进行校正后的值。图7(A)表示以γ‐谷维素进行预处理的情况下的上清中的IL‐8量。在1μg/ml的γ‐谷维素条件下发现IL‐8量的降低，但与未使用γ‐谷维素(0μl/ml)、0.1μg/ml相比较，未发现有意义的差异。
图7(B)表示由γ‐谷维素封入粒子进行预处理的情况下上清中的IL‐8量。与未使用γ‐谷维素(0μl/ml)相比，在1μg/ml的γ‐谷维素原料粉末相当量时，发现IL‐8的量得到有效降低。
图7(C)表示作为PLGA粒子的对照而使用FITC封入粒子进行预处理情况下上清中的IL‐8的量。与未使用FITC封入粒子相比，任一浓度均未表现出有意义的差别。
IL‐8的产生量在由于各种因素而受到刺激的肠上皮细胞中增长。IL‐8的分泌亢奋吸引嗜中性粒细胞等免疫细胞，被吸引的免疫细胞释放出大量的炎症性细胞因子从而使得炎症进一步进展。根据本实施例的结果，γ‐谷维素封入粒子在肠上皮细胞中具有良好的抗炎症作用。
实施例4：评价人肠上皮细胞对FITC封入粒子的吸收
(细胞的调制)
同样地培养上述实施例3所使用的Caco‐2。将继代49的细胞，通过0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA进行剥离，以3×105细胞/孔的浓度接种于35mm玻璃(D110400，松波玻璃社制)。通过含有10％FBS(胎牛血清)、1％非必须的氨基酸及1％PS的DMEM培养21天。每隔1天交换一次培养基，将充分分化的细胞用于如下实验。
(预处理)
在添加FITC封入粒子的30分钟之前除去培养基，对于1个孔用2ml的PBS将细胞清洗2次。接着，将各孔中的培养基用含有1％PS的1ml的DMEM(无血清)进行交换。接下来，将培养基变换为加入FITC封入粒子或FITC的含有1％PS的2ml的DMEM，在37℃下培养2小时。此处所使用的含有FITC封入粒子及FITC的培养基，如下进行调制。
关于FITC封入粒子，将与实施例1同样制备的封入率4.06％(w/v)、数均粒径225nm的FITC封入粒子溶解于水制备成1mM(9.59mg/ml)的水溶液，用含有1％PS的DMEM进行稀释。粒子浓度为0.0959mg/ml(作为FITC，为10μM)。
关于FITC，将FITC原料粉末(FITC－I343－03664，同仁化学研究所制)用0.1％DMSO(Dimethylsulfoxide，二甲基亚砜)调制成10mM，用含有1％PS的DMEM进行稀释。
(样品的获取和通过共聚焦激光显微镜的评价)
在上述培养2小时后，以2ml/孔添加7.5μMcellMask(商标)及含有1％PS的DMEM，在37℃下培养，用HBSS缓冲剂(Gibco14175－095，LifeTechnologies(生命科学)日本公司制)进行5分钟×3次清洗。并且，由冷却的甲醇进行固定，以PBS清洗后，通过DAPI封入，当日(2小时)后得到样品。
以PBS清洗后，在含有10％FBS、1％非必须氨基酸及1％PS的DMEM中用培养基来培养细胞(隔1日交换培养基)，在上述预处理中培养开始后1日、3日、7日后的各时间分别固定细胞。在固定前，以2ml/孔添加7.5μMcellMask(商标)及含有1％PS的DMEM，在37℃下培养，用HBSS缓冲剂(Gibco14175－095，LifeTechnologies(生命科学)日本公司制)进行5分钟×3次清洗。接下来，在用甲醇固定时，由于对细胞膜进行染色的cellMask(商标)洗脱，将细胞用福尔马林固定，以含有0.1％triton‐X的PBS培养10分钟，以PBS清洗后，由DAPI封入，得到1日后、3日后及7日后的样品。
如上所得到的各样品，通过共聚焦激光显微镜(尼康共聚焦显微镜系统A1+、尼康公司制)进行拍摄，来评价各浓度下的荧光强度。
(结果)
图8(A)、(B)、(C)及(D)分别表示当日(2小时)后、1天后、3日后及7日后的样品中共聚焦激光显微镜所拍摄的FITC封入粒子及FITC的荧光强度的平均值。显示了FITC封入粒子，在暴露给细胞后至少7日以上，相比于未封入PLGA的FITC，在细胞中吸收更多。
总结上述结果，每2周在经口投药γ‐谷维素封入粒子2日的肥胖小鼠(0.3，1.3和5ug/g体重)，胰岛素抗性及糖代谢得到改善。在将未封入PLGA的γ‐谷维素进行14日经口投药(γ‐谷维素的总投放量与5ug/g体重投药组相同)的肥胖小鼠中，完全没有发现这些作用。本实施例中的γ‐谷维素封入粒子，与上述非专利文献1中的γ‐谷维素14日经口投药(320ug/g×14＝4480ug/g)相比，以1/533～1/64的用量得到了相同的作用。另外，发现γ‐谷维素封入粒子存在改善脂质代谢、抑制内质网应激的倾向。
另外，γ‐谷维素封入粒子，抑制了由TNF‐α对肠上皮细胞的刺激所诱发的IL‐8的分泌。由此表明，γ‐谷维素封入粒子对于在肠管上皮中与IL‐8相关的溃疡性大肠炎、克罗恩病炎症性疾病等是有效的。
将γ‐谷维素封入的PLGA粒子，至少历时7日以上，在肠上皮细胞中的吸收有所增加，由该结果可以认为γ‐谷维素封入粒子在上述实施例所显示的优异的各种作用，是由于经口投药的γ‐谷维素封入粒子主要分布在肠管，投药后经过7天以上停留在黏膜层及肠管壁，释放γ‐谷维素。即，可以推测，通过将γ‐谷维素封入PLGA粒子，极大促进了γ‐谷维素在肠管中的停留及吸收，从而产生了本实施例中γ‐谷维素在低用量下的特别作用。确认了PLGA粒子在细胞的吸收维持14天。
实施例5：遗传性肥胖小鼠中的γ-谷维素封入粒子的评价(2)
(实验动物)
将ob/ob小鼠在24℃下以光照12小时/黑暗12小时的周期进行饲养。小鼠在可以自由摄取饲料和水的状态下饲养。每周测定小鼠的体重。
(γ-谷维素的投放)
将封入到PLGA粒子内的γ-谷维素溶解于蒸留水(以下，称作“NanoOrz”)中，以每2周两天，通过喂食针向小鼠以每日0.3、1.3或5μg/g体重的投放量进行投放。作为未封入到PLGA粒子中的γ-谷维素溶液，将γ-谷维素(和光纯药工业社制)溶解于0.5％甲基纤维素溶液(以下，称作“Orz”)。将Orz在4周内，每天通过喂食针投放至胃内(5或320μg/g体重/日)。
(代谢的评价)
从小鼠的尾静脉采取全血，利用简易血糖测定器来测定血糖。进而，从眼窝后静脉的网状组织采取血液样本。为了进行葡萄糖耐受性试验，将小鼠在18小鼠断食后以0.75g/kg体重投放葡萄糖。在预定时间测定血糖值。另外，为了进行胰岛素抗性实验，将胰岛素(0.5单位/kg体重；EliLilly(礼来制药)公司制)注射进4小时断食后的小鼠的腹腔内。血浆中的中性脂肪(甘油三酯)的浓度，通过TriglycerideE-testWako(甘油三酯E试验)来确定。
(组织中内质网应激、炎症的评价)
从小鼠采取丘脑下部、胰岛、肠间膜的脂肪组织、肝脏、附睾的脂肪组织及皮下脂肪组织，利用定量实时聚合酶链反应来定量内质网应激标记基因(Chop、ERdj4及Xbp1s)、炎症标记基因(TNFα及MCP－1)的表达量。通过胶原酶消化(LiberaseTL；RocheDiagnostics(罗氏诊断产品)制)从小鼠中分离胰岛，以Histopaque(商标)梯度(Histopaque1077；西格玛-奥尔德里奇公司制)进行精制。
使用TRIzol(注册商标)RNA提取试剂(LifeTechnologies(生命科学)公司制)从各组织提取全RNA，利用iScript(商标)cDNA合成试剂盒(Bio-Rad公司制)来合成cDNA。接着，利用StepOnePlus(商标)实时PCR体系、FastTaqManUniversalMasterMix、及FastSYBRGreenMasterMix(AppliedBiosystems应用生物系统公司制)定量实时PCR。mRNA水平通过18SrRNA进行标准化。
(统计分析)
数据通过平均±标准误差(s.e.m)来表示。适当采用单因素方差分析、重复测定方差分析、以及继重复测定方差分析的多重比较测定(Bonferroni/Dunn法)。对于2组之间的差的分析，采用学生t检验(Student'st-test)。P＜0.05时则视作差异是有意义的。
(结果)
以下，示出本实施例的结果。图9表示遗传性肥胖小鼠的体重的经时变化(n＝14)。根据图9(A)，在投药封入PLGA粒子中的NanoOrz的遗传性肥胖小鼠中，即使非常低的投放量也有效地抑制了体重増加。另一方面，根据图9(B)，在投药未封入PLGA粒子的Orz的遗传性肥胖小鼠中，即使投药320μg/g体重/日，也未能有效地抑制体重増加。
图10示出了遗传性肥胖小鼠的血糖值得经时变化(n＝14)。根据图10(A)，投药NanoOrz的遗传性肥胖小鼠，即使是Orz的最大投放量的大致1/100也确实地改善了高血糖。另一方面，根据图10(B)，投药Orz的遗传性肥胖小鼠，即使以320μg/g体重/日进行投药也未发现血糖值的有效变化。由此表明，遗传性肥胖小鼠中的高血糖，相比于Orz通过NanoOrz而被显著改善。
葡萄糖耐受性试验的结果示于图11(n＝14)。根据图11(A)及图11(B)，投药NanoOrz的遗传性肥胖小鼠，即使较低投放量耐糖能的急剧降低也得到了显著改善。另一方面，根据图11(C)和图11(D)，投药Orz的遗传性肥胖小鼠，即使以320μg/g体重/日进行投药，也未发现耐糖能的急剧降低得到改善。
胰岛素抗性试验的结果示于图12(n＝14)。根据图12(A)及图12(B)，投药NanoOrz的遗传性肥胖小鼠，即使较低投放量也有效改善了胰岛素抗性。另一方面，根据图12(C)及图12(D)，投药Orz的遗传性肥胖小鼠，即使以320μg/g体重/日进行投药也未发现胰岛素抗性的改善。
图13表示遗传性肥胖小鼠的血浆中的中性脂肪浓度(n＝6)。中性脂肪浓度在投药NanoOrz的情况下，即使较低投放量也得到有效抑制，但在相同投放量的Orz的情况下，中性脂肪浓度未得到抑制。
图14(A)及图14(B)，分别表示在丘脑下部中的Chop及ERdj4的表达量(N＝8)。NanoOrz的情况下以1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了Chop的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制Chop的表达量。另外，NanoOrz的情况下以0.3、1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了ERdj4的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制Chop的表达量。
图14(C)及图14(D)分别表示了胰岛中ERdj4及Xbp1s的表达量(N＝8)。NanoOrz以0.3、1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了ERdj4的表达量，但是Orz即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制ERdj4的表达量。另外，NanoOrz以0.3及1.3μg/g体重的投放量有效地抑制了Xbp1s的表达量，但是Orz即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制Xbp1s的表达量。
图15(A)及图15(B)分别表示肠间膜的脂肪组织中的Chop及Xbp1s的表达量(N＝8)。Orz的情况下在320μg/g体重/日的情况下有效地抑制了Chop的表达。另一方面，NanoOrz的情况下以5μg/g体重的投放量有效地抑制了Chop的表达量。另外，NanoOrz的情况下以5μg/g体重的投放量有效地抑制了Xbp1s的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能有效地抑制Xbp1s的表达量。
图15(C)及图15(D)分别示出肝脏中的Chop及Xbp1s的表达量(N＝8)。NanoOrz的情况下以1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了Chop的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制ERdj4的表达量。另外，NanoOrz的情况下以0.3及1.3μg/g体重的投放量有效地抑制了Xbp1s的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能有效地抑制Xbp1s的表达量。
图16(A)及图16(B)分别示出了附睾的脂肪组织中的TNFα及MCP－1的表达量(N＝8)。NanoOrz的情况下以0.3、1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了TNFα的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制TNFα的表达量。另外，NanoOrz的情况下以0.3及1.3μg/g体重的投放量有效地抑制了MCP－1的，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能有效地抑制MCP－1的表达量。
图16(C)及图16(D)分别示出了皮下脂肪组织中的TNFα及MCP－1的表达量。NanoOrz的情况下以0.3、1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了TNFα的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能抑制TNFα的表达量。另外，NanoOrz的情况下以0.3、1.3及5μg/g体重的投放量有效地抑制了MCP－1的表达量，但是Orz的情况下即使以320μg/g体重/日进行投药也未能有效地抑制MCP－1的表达量。
图14及图15的结果表明，γ-谷维素即使以过剩量的320μg/g体重/日进行投药，也未能抑制丘脑下部、胰岛及肝脏中的内质网应激，但封入PLGA粒子中的γ-谷维素，以非常低的投放量即抑制了丘脑下部、胰岛、肠间膜的脂肪组织及肝脏中的内质网应激。另外，图16的结果表明，γ-谷维素即使以过剩量的320μg/g体重/日进行投药，也未能抑制附睾的脂肪组织及皮下脂肪组织中的炎症，但是封入PLGA粒子的γ-谷维素，以非常低的投放量即抑制了附睾的脂肪组织及皮下脂肪组织中的炎症。
本发明，在不脱离本发明得广义精神和范围的情况下，可以进行各种实施方式及变形。另外，上述实施方式只是用于说明本发明，而不是用于限定本发明的范围。即，本发明的范围，不是通过实施方式，而是通过权利要求来表示的。并且，在权利要求以及其通过的发明范围内所实施的各种变形，视作本发明范围内。
本申请基于2012年12月21日申请的日本国专利申请2012－280303号公报。本说明书中，通过参考引入日本国专利申请2012－280303号公报的说明书、权利要求书、附图的整体。
【工业上的可利用性】
本发明适于胰岛素抗性的改善、或肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症、以及包括溃疡性大肠炎、克罗恩病等肠道炎症性疾病在内的炎症性疾病等疾病的治疗或预防。通过适用本发明，能够提高该疾病的治疗或预防的成绩，确保患者的生活品质。

Claims (9)

1.一种组合物，含有：
γ‐谷维素；
生物相容性颗粒，将所述γ‐谷维素封入其内部。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，
所述生物相容性颗粒含有数均粒径为2.5～1000nm的聚乳酸-乙醇酸共聚物或其聚乙二醇修饰物。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，用于改善胰岛素抗性。
4.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，用于抑制内质网应激。
5.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于，用于抑制源于肠上皮细胞的IL‐8的分泌。
6.如权利要求1至5任一项所述的组合物，其特征在于，
用于治疗或预防选自由肥胖、血脂异常、糖耐量受损、糖尿病、动脉硬化症及炎症性疾病所形成的组的疾病。
7.如权利要求1至6任一项所述的组合物，其特征在于，对于患者以1日以上的投放间隔进行投放。
8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述投放间隔为7日以上14日以下。
9.一种饮食，含有权利要求1至8任一项所述的组合物。
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