CN105148284A

CN105148284A - 一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒

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Publication number: CN105148284A
Application number: CN201510511493.XA
Authority: CN
Inventors: 胡军; 胡琦; 杨军艳
Original assignee: Beijing Mdc New Spring Medical Devices Co Ltd
Current assignee: Beijing Mdc New Spring Medical Devices Co Ltd
Priority date: 2015-08-19
Filing date: 2015-08-19
Publication date: 2015-12-16
Anticipated expiration: 2035-08-19
Also published as: CN105148284B

Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒。本发明的组合物和稳定剂，在室温条件下2年内能够保存液体型凝血酶的酶活力不损失。同时，利用本发明的方法制备的液体型凝血酶可制凝血酶止血制剂和纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒，具有广泛而又深远的市场前景，并能创造可观的经济效益和良好的社会效益。

Description

一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒。

背景技术

凝血酶，一种由凝血酶前体(血浆中的必要成分)经激活形成的蛋白质水解酶，能催化纤维蛋白原变成纤维蛋白而促使血液凝固，用于毛细血管出血的局部止血以及外科手术后组织愈合。

凝血酶能直接作用于血液中的纤维蛋白原，促使其转变为纤维蛋白。局部应用后作用于病灶表面的血液很快形成稳定的凝血块，用于控制毛细血管、静脉出血，或作为皮肤、组织移植物的黏合、固定剂。凝血酶对血液凝固系统的其他作用尚包括诱发血小板聚集及继发释放反应等。凝血酶适用于结扎止血困难的小血管、毛细血管以及实质性脏器出血的止血，可以用于外伤、手术、口腔、耳鼻喉、泌尿、烧伤、骨科、妇产科等出血的止血。

凝血酶制剂作为近年来开发的一种新型止血剂，其应用范围越来越广，它不仅是局部应用于出血症状外用药，也应用于上消化道出血症，用生理盐水或牛奶、温开水溶解为溶液，口服或灌注。

凝血酶作为一种酶蛋白，和大多数具有生物活性的蛋白质一样，稳定性相对较差，容易失活、变性，所以作为止血药物的凝血酶制剂一般制做成冷冻干燥制剂，为白色或类白色的无菌冻干块状物或粉末，要求10℃以下保存。这便存在以下问题：一是室温下难以保存，会造成酶活力降低；其次，患者使用起来也不方便。

由于凝血酶能催化血液中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白而使血液凝固，根据这一原理，可以定量分析血液中的纤维蛋白含量，所以凝血酶除了可用作止血药物以外，也广泛应用于纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒的生产，目的是定量测定人血浆中纤维蛋白原的含量，以辅助诊断有关疾病，如：纤维蛋白原增加见于月经期和妊娠期、糖尿病、动脉硬化症、大叶肺炎、支气管肿瘤、肾病综合症、淀粉样变性、尿毒症、亚急性细菌性心内膜炎、心包炎、心肌梗死、血栓性静脉炎等；纤维蛋白原减少见于先天性纤维蛋白原缺乏症、异常纤维蛋白原血症、新生儿、早产儿、肝损伤(如氯仿、磷、急性黄色肝萎缩、微生物毒素中毒、肝硬化)、恶性肿瘤、严重结核病、烧伤、纤维蛋白原溶解活性增高等。凝血系统常规四项(俗称凝血四项)检测，其中就包含FIB，可见FIB在凝血系统有关疾病的检测中有着重要的地位，而FIB测定试剂盒的主要成分就是凝血酶，所以凝血酶质量的稳定与否、好坏与否直接决定着FIB试剂盒的品质。

为了解决上述问题，有必要开发一种稳定性较强、患者使用方便的凝血酶止血药物。但是凝血酶与大多数酶类一样，稳定性较差，其水溶液在室温保存24d便完全失活，如果不添加保护剂或稳定剂，或其配方不太合适，凝血酶无论是作为止血制剂，还是制成诊断试剂，其产品质量均很难保证，所以有必要研制一种稳定剂，以增强凝血酶的稳定性，从而借以提高以凝血酶为主要成分的产品质量的稳定性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒。该组合物和稳定剂能够在室温条件下较长时间保存液体型凝血酶的酶活力。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，包括海藻糖、甘氨酸、氯化钠、牛血清白蛋白、叠氮钠和硫代硫酸钠。

在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，本发明提供的组合物包括如下组分：

在本发明的另一些具体实施方案中，以质量份计，本发明提供的组合物包括如下组分：

本发明还提供了一种稳定剂，包括所述的组合物。

本发明还提供了所述的组合物或所述的稳定剂在提高液体型凝血酶的稳定性中的应用。

本发明还提供了一种液体型凝血酶的保存方法，取液体型凝血酶与所述的组合物或所述的稳定剂混合后分装。

在本发明的一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4～10％、甘氨酸0.5～2.5％、氯化钠0.5～1.0％、牛血清白蛋白0.5～1.0％、叠氮钠0.1～0.5％和硫代硫酸钠0.01～0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6～8％、甘氨酸1.0～2.0％、氯化钠0.5～0.8％、牛血清白蛋白0.6～0.9％、叠氮钠0.2～0.4％和硫代硫酸钠0.01～0.15％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4％、甘氨酸0.5％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.5％、叠氮钠0.1％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖7％、甘氨酸1.5％、氯化钠0.75％、牛血清白蛋白0.75％、叠氮钠0.3％和硫代硫酸钠0.015％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖8％、甘氨酸1.0％、氯化钠0.8％、牛血清白蛋白0.6％、叠氮钠0.4％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6％、甘氨酸2.0％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.9％、叠氮钠0.2％和硫代硫酸钠0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，液体型凝血酶的保存方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖10％、甘氨酸2.5％、氯化钠1.0％、牛血清白蛋白1.0％、叠氮钠0.5％和硫代硫酸钠0.02％。

本发明还提供了一种凝血酶制剂，包括所述的组合物或所述的稳定剂和液体型凝血酶。

在本发明的一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4～10％、甘氨酸0.5～2.5％、氯化钠0.5～1.0％、牛血清白蛋白0.5～1.0％、叠氮钠0.1～0.5％和硫代硫酸钠0.01～0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6～8％、甘氨酸1.0～2.0％、氯化钠0.5～0.8％、牛血清白蛋白0.6～0.9％、叠氮钠0.2～0.4％和硫代硫酸钠0.01～0.15％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4％、甘氨酸0.5％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.5％、叠氮钠0.1％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖7％、甘氨酸1.5％、氯化钠0.75％、牛血清白蛋白0.75％、叠氮钠0.3％和硫代硫酸钠0.015％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖8％、甘氨酸1.0％、氯化钠0.8％、牛血清白蛋白0.6％、叠氮钠0.4％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6％、甘氨酸2.0％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.9％、叠氮钠0.2％和硫代硫酸钠0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖10％、甘氨酸2.5％、氯化钠1.0％、牛血清白蛋白1.0％、叠氮钠0.5％和硫代硫酸钠0.02％。

本发明还提供了一种所述的凝血酶制剂的制备方法，取液体型凝血酶与所述的组合物或所述的稳定剂混合。

在本发明的一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4～10％、甘氨酸0.5～2.5％、氯化钠0.5～1.0％、牛血清白蛋白0.5～1.0％、叠氮钠0.1～0.5％和硫代硫酸钠0.01～0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6～8％、甘氨酸1.0～2.0％、氯化钠0.5～0.8％、牛血清白蛋白0.6～0.9％、叠氮钠0.2～0.4％和硫代硫酸钠0.01～0.15％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4％、甘氨酸0.5％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.5％、叠氮钠0.1％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖7％、甘氨酸1.5％、氯化钠0.75％、牛血清白蛋白0.75％、叠氮钠0.3％和硫代硫酸钠0.015％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖8％、甘氨酸1.0％、氯化钠0.8％、牛血清白蛋白0.6％、叠氮钠0.4％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6％、甘氨酸2.0％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.9％、叠氮钠0.2％和硫代硫酸钠0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，凝血酶制剂的制备方法中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖10％、甘氨酸2.5％、氯化钠1.0％、牛血清白蛋白1.0％、叠氮钠0.5％和硫代硫酸钠0.02％。

本发明还提供了一种试剂盒，包括所述的组合物或所述的稳定剂。

在本发明的一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4～10％、甘氨酸0.5～2.5％、氯化钠0.5～1.0％、牛血清白蛋白0.5～1.0％、叠氮钠0.1～0.5％和硫代硫酸钠0.01～0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6～8％、甘氨酸1.0～2.0％、氯化钠0.5～0.8％、牛血清白蛋白0.6～0.9％、叠氮钠0.2～0.4％和硫代硫酸钠0.01～0.15％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖4％、甘氨酸0.5％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.5％、叠氮钠0.1％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖7％、甘氨酸1.5％、氯化钠0.75％、牛血清白蛋白0.75％、叠氮钠0.3％和硫代硫酸钠0.015％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖8％、甘氨酸1.0％、氯化钠0.8％、牛血清白蛋白0.6％、叠氮钠0.4％和硫代硫酸钠0.01％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖6％、甘氨酸2.0％、氯化钠0.5％、牛血清白蛋白0.9％、叠氮钠0.2％和硫代硫酸钠0.02％。

在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中涉及的所述的组合物或所述的稳定剂中各组分与液体型凝血酶的重量百分比为：海藻糖10％、甘氨酸2.5％、氯化钠1.0％、牛血清白蛋白1.0％、叠氮钠0.5％和硫代硫酸钠0.02％。

本发明还提供了一种试剂盒，其特征在于，包括所述的凝血酶制剂。

本发明提供了一种组合物和稳定剂，它由海藻糖、甘氨酸、氯化钠、牛血清白蛋白、叠氮钠和硫代硫酸钠混合搅拌制成；所述各组分与液体型凝血酶重量百分比为：海藻糖4～10％、甘氨酸0.5～2.5％、氯化钠0.5～1.0％、牛血清白蛋白0.5～1.0％、叠氮钠0.1～0.5％和硫代硫酸钠0.01～0.02％。本发明选用海藻糖，能阻止蛋白质二级结构改变，防止凝血酶蛋白失去活性；选用甘氨酸，能抑制pH的改变，阻止凝血酶蛋白的变性；选用氯化钠能与蛋白质形成复杂的静电相互作用而稳定酶蛋白；选用牛血清白蛋白，可有效阻止凝血酶蛋白表面的吸附，使凝血酶蛋白分子在水溶液中容易保持其稳定结构，不易变性失去活性；选用叠氮钠，它作为一种防腐剂，能有效抑制微生物的繁殖，避免因微生物的污染而造成凝血酶蛋白的分解、失活；选用硫代硫酸钠，它作为还原剂，可阻止凝血酶蛋白的氧化变性。

本发明提供了一种以海藻糖、甘氨酸、氯化钠、牛血清白蛋白、叠氮钠和硫代硫酸钠为组分的复合稳定剂。本发明的组合物和稳定剂，在室温条件下2年内能够保存液体型凝血酶的酶活力不损失。同时，利用本发明的方法制备的液体型凝血酶可制凝血酶止血制剂和纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒，具有广泛而又深远的市场前景，并能创造可观的经济效益和良好的社会效益。

具体实施方式

本发明公开了一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的一种组合物、稳定剂及其用途、凝血酶的保存方法、制备方法及凝血酶制剂、试剂盒中所需原料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1组合物的制备

准确称取海藻糖40g、甘氨酸5g、氯化钠5g、牛血清白蛋白5g、叠氮钠1g和硫代硫酸钠0.1g，混合。

实施例2组合物的制备

准确称取海藻糖70g、甘氨酸15g、氯化钠7.5g、牛血清白蛋白7.5g、叠氮钠3g和硫代硫酸钠0.15g，混合。

实施例3组合物的制备

准确称取海藻糖80g、甘氨酸10g、氯化钠8g、牛血清白蛋白6g、叠氮钠4g和硫代硫酸钠0.1g，混合。

实施例4组合物的制备

准确称取海藻糖60g、甘氨酸20g、氯化钠5g、牛血清白蛋白9g、叠氮钠2g和硫代硫酸钠0.2g，混合。

实施例5组合物的制备

准确称取海藻糖100g、甘氨酸25g、氯化钠10g、牛血清白蛋白10g、叠氮钠5g和硫代硫酸钠0.2g，混合。

实施例6凝血酶制剂的制备及酶活力的检测

称取1000g液体型凝血酶，加入实施例1制备的组合物，混合均匀，4～35℃保存，定期测定酶活力。试验结果见表1。

表1不同存放时间下液体型凝血酶和加有本发明稳定剂的液体型凝血酶的相对酶活力*

注：*以起始酶活力100，存放不同时间的酶活力与起始凝血酶活力的相对比值为相对酶活力。

从表1可知，普通液体凝血酶在4～35℃下存放1个月酶活力仅剩30％、存放2个月则完全丧失活力；而加有本发明稳定剂(实施例1制备的组合物)的液体型凝血酶，在4～35℃下存放24个月，仍保持100％的酶活力。

实施例7凝血酶制剂的制备及酶活力的检测

称取1000g液体型凝血酶，加入实施例2制备的组合物，4～35℃保存，定期测定酶活力。试验结果见表2。

表2不同存放时间下液体型凝血酶和加有本发明稳定剂的液体型凝血酶的相对酶活力*

注：以起始酶活力100，存放不同时间的酶活力与起始凝血酶活力的相对比值为相对酶活力。

从表2可知，普通液体凝血酶在4～35℃下存放1个月酶活力仅剩30％、存放2个月则完全丧失活力；而加有本发明稳定剂(实施例2制备的组合物)的液体型凝血酶，在4～35℃下存放24个月，仍保持100％的酶活力。

实施例8凝血酶制剂的制备及酶活力的检测

称取1000g液体型凝血酶，加入实施例3制备的组合物，4～35℃保存，定期测定酶活力。试验结果见表3。

表3不同存放时间下液体型凝血酶和加有本发明稳定剂的液体型凝血酶的相对酶活力*

*注：以起始酶活力100，存放不同时间的酶活力与起始凝血酶活力的相对比值为相对酶活力。

从表3可知，普通液体凝血酶在4～35℃下存放1个月酶活力仅剩30％、存放2个月则完全丧失活力；而加有本发明稳定剂(实施例3制备的组合物)的液体型凝血酶，在4～35℃下存放24个月，仍保持100％的酶活力。

实施例9凝血酶制剂的制备及酶活力的检测

称取1000g液体型凝血酶，加入实施例4制备的组合物，4～35℃保存，定期测定酶活力。试验结果见表4。

表4不同存放时间下液体型凝血酶和加有本发明稳定剂的液体型凝血酶的相对酶活力*

从表4可知，普通液体凝血酶在4～35℃下存放1个月酶活力仅剩30％、存放2个月则完全丧失活力；而加有本发明稳定剂(实施例4制备的组合物)的液体型凝血酶，在4～35℃下存放24个月，仍保持100％的酶活力。

实施例10凝血酶制剂的制备及酶活力的检测

称取1000g液体型凝血酶，加入实施例5制备的组合物，4～35℃保存，定期测定酶活力。试验结果见表5。

表5不同存放时间下液体型凝血酶和加有本发明稳定剂的液体型凝血酶的相对酶活力*

从表5可知，普通液体凝血酶在4～35℃下存放1个月酶活力仅剩30％、存放2个月则完全丧失活力；而加有本发明稳定剂(实施例5制备的组合物)的液体型凝血酶，在4～35℃下存放24个月，仍保持100％的酶活力。

实施例11液体型凝血酶的复合稳定剂的组分及配比筛选试验

1.不同种类的糖类物质对液体型凝血酶稳定性的影响

在液体型凝血酶中分别添加5％的海藻糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖和甘露醇，同时各添加0.1％的叠氮钠，37℃保存，定期测定酶活力，试验结果见表6。

表6在37℃下添加不同种类糖类的液体型凝血酶的相对酶活力变化情况*

从表6可知，添加5％的海藻糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖或甘露醇均有利于液体凝血酶在37℃下的稳定，尤其是甘露醇、乳糖和海藻糖，稳定效果比较理想，37℃下液体酶存放7天酶活力分别残存44％、51％和60％，而普通液体凝血酶3天后酶活力完全丧失。

2.三种不同的稳定剂配方对液体型凝血酶稳定性的影响

挑选表6中对液体型凝血酶的稳定性比较有益的3种糖类，将配方进行适当的修改，继续进行稳定性试验，三种配方为：①海藻糖5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％；②乳糖5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％；③甘露醇5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％。在液体型凝血酶中分别添加①、②、③三种稳定剂，37℃保存，定期测定酶活力，试验结果见表7。

表737℃下不同糖类的稳定剂配方对液体型凝血酶相对酶活力*的影响

从表7中可以看出，稳定剂配方①对液体型凝血酶的热稳定性远好于②和③，所以随后又以含有海藻糖的稳定剂配方①为基础进行了一定的改进，以增强对液体型凝血酶的保护作用。

3.以海藻糖为基础的稳定剂配方对凝血酶稳定性的影响

以表7中稳定剂配方①为基础，通过添加牛血清白蛋白，或抗氧化剂，看能否进一步增强稳定剂对凝血酶的稳定效果。配方改进如下：①海藻糖5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％；④海藻糖5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％+牛血清白蛋白0.5％；⑤海藻糖5％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％+牛血清白蛋白0.5％+硫代硫酸钠0.015％。即：在液体型凝血酶中分别添加①、④、⑤三种稳定剂，37℃保存，定期测定酶活力，试验结果见表8。

表837℃下三种稳定剂配方对液体型凝血酶相对酶活力*的影响

从表8中可以看出，稳定剂配方⑤优于①和④，在37℃下能有效的保护液体型凝血酶的稳定。

4.海藻糖浓度对液体型凝血酶稳定性的影响

以表8中稳定剂配方⑤为基础，在其它组分浓度不变的条件下，通过改变海藻糖的浓度，观察其在37℃下对液体型凝血酶的稳定效果。保护剂配方为：海藻糖2～15％+叠氮钠0.1％+甘氨酸1.5％+氯化钠0.5％+牛血清白蛋白0.5％+硫代硫酸钠0.015％。

表9海藻糖浓度对液体型凝血酶稳定性的影响

*注：表中数据为相对酶活力，即：以起始酶活力100，存放不同时间的酶活力与起始凝血酶活力的相对比值为相对酶活力。

由表9可以知，以稳定剂配方⑤为基础，选择4～10％的海藻糖浓度范围，能有效地保护液体型凝血酶的稳定性，也能保持较低的成本。

5.甘氨酸浓度对液体型凝血酶稳定性的影响

以上述稳定剂配方⑤为基础，海藻糖浓度为4～10％，在其它组分浓度不变的条件下，通过改变甘氨酸的浓度，观察其在37℃下对液体型凝血酶的稳定效果。保护剂配方为：海藻糖4～10％+叠氮钠0.1％+甘氨酸0.2～3.0％+氯化钠0.5％+牛血清白蛋白0.5％+硫代硫酸钠0.015％。

表10甘氨酸浓度对液体型凝血酶稳定性的影响

从表10可以看出，以稳定剂配方⑤为基础，海藻糖浓度为4～10％，在其它组分浓度不变的条件下，选择0.5～2.5％的甘氨酸度范围，能较为有效地保护液体型凝血酶的稳定性。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种组合物，其特征在于，包括海藻糖、甘氨酸、氯化钠、牛血清白蛋白、叠氮钠和硫代硫酸钠。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以质量份计，包括如下组分：

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以质量份计，包括如下组分：

4.一种稳定剂，包括如权利要求1至3任一项所述的组合物。

5.根据权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求4所述的稳定剂在提高液体型凝血酶的稳定性中的应用。

6.一种液体型凝血酶的保存方法，其特征在于，取液体型凝血酶与如权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求4所述的稳定剂混合后分装。

7.一种凝血酶制剂，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求4所述的稳定剂和液体型凝血酶。

8.一种如权利要求7所述的凝血酶制剂的制备方法，其特征在于，取液体型凝血酶与如权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求4所述的稳定剂混合。

9.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求4所述的稳定剂。

10.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求7所述的凝血酶制剂。