CN105145361B - 一种繁殖白芨组培苗的方法及白芨的种植方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高效繁殖白芨组培苗的方法及白芨的种植方法。高效繁殖白芨组培苗的方法：将白芨种子播种在种子萌发培养基中，培育萌发30‑40d；将萌发的种子移至成苗培养基中，培养3‑4个月；种子萌发培养基包括：1/2改良型MS培养基、30‑40g/L土豆汁、20‑30g/L蔗糖；成苗培养基包括：改良型MS培养基、30‑40g/L土豆汁、60‑70g/L香蕉汁、20‑30g/L蔗糖、3.8‑4.5g/L琼脂粉；白芨的种植方法：将上述白芨组培苗移栽至农田中，栽后进行水肥管理，除草及病虫害防治。本发明为液体培养基法，只需转接一次，相比传统的固体培养法，操作简单、污染小、成本低、成活率高、培养周期短。
Description
技术领域
本发明涉及植物育苗领域，具体而言，涉及一种繁殖白芨组培苗的方法及白芨的种植方法。
背景技术
白芨是多年生草本球根植物，植株高18-60厘米，主要分布在中国、日本以及缅甸北部，主要花期在春季，但因各地气候而不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。白芨主要用于收敛止血，消肿生肌，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
白芨的蒴果中含有数以万计的细微种子，消毒灭菌后，选择合适的培养基，进行白芨种子的无菌萌发，以便种植，生产上多采用固体培养法育苗，如图1所示，即“原球茎—诱导丛生芽增殖—诱导芽的分化—诱导生根成苗”的方式进行大规模生产。这样的组培程序，全过程需要转接4次，步骤繁琐、操作复杂、增加了污染几率。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种高效繁殖白芨组培苗的方法，所述的高效繁殖方法为液体培养基法，只需转接一次，相比传统的固体培养法，操作简单、污染小、成本低、成活率高、培养周期短。
本发明的第二目的在于提供一种白芨的种植方法，所述的种植方法改进了白芨组培苗的培育方法，具有成活率高、产率高等优点。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种高效繁殖白芨组培苗的方法，包括下列步骤：
将白芨种子播种在种子萌发培养基中，培育萌发30-40d，再移至成苗培养基中，成苗培养3-4个月，得到白芨组培苗；
所述种子萌发培养基由以下成分组成：1/2改良型MS培养基、30-40g/L土豆汁、20-30g/L蔗糖；所述成苗培养基由以下成分组成：改良型MS培养基、30-40g/L土豆汁、60-70g/L香蕉汁、20-30g/L蔗糖、3.8-4.5g/L琼脂粉；
所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.75-0.83mg/L，硼酸5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-24mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，盐酸硫胺素0.8-1mg/L，甘氨酸3-4mg/L，pH为5.8-6.0。
上述高效繁殖方法通过以下手段实现了液体培养基培育白芨组培苗的目的：改良MS培养基，分别针对性地配制种子萌发培养基和成苗培养基，加入土豆汁、香蕉汁、蔗糖、琼脂粉提高两个不同发育阶段培养基的营养条件。
其中，在种子萌发培养基中白芨种子完成了原球茎的诱导和生长，在成苗培养基中是进行成苗过程。
经过以上繁殖，得到的白芨组培苗的成活率在95％以上，整体污染率小于0.3％，且整个繁殖过程培养周期为120-160天，仅需一次转移，操作简单，成本比传统的固体培养法降低了55％。
优选地，所述培育萌发和所述成苗培养的培养条件均为：24-26℃、光照强度为1500-2000lx、光照时间10-11h/d。严格控制种子萌发及成苗时的温度、光照条件可以快速、高成活率地培育出白芨组培苗。
优选地，所述培育萌发在摇床中进行，且摇床的转速为120-130r/min。
120-130r/min的转速有利于种子均匀、高效地吸收营养，快速萌发。
优选地，所述种子萌发培养基和所述改良型MS培养基均采用如下相同的制备方法：按照配方，将所有原料混合溶解，再采用高压锅灭菌。
经过高压灭菌，为种子萌发、成苗提供更安全的培养环境。
优选地，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1895-1900mg/L，硝酸铵1650-1655mg/L，二水氯化钙440-442mg/L，七水硫酸镁370-373mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸5.5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.6mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-29mg/L，乙二胺四乙酸24.3-25mg/L，肌醇98-100mg/L，烟酸0.8-0.9mg/L，盐酸吡哆醇0.8-0.9mg/L，盐酸硫胺素0.8-0.9mg/L，甘氨酸3-3.5mg/L，pH为5.8-6.0。
以上改良型MS培养基更适宜白芨的萌发及成苗。
另外，为了提高种子萌发的成功率及速度，还可以进一步优化营养物质的浓度，例如，所述种子萌发培养基中土豆汁的浓度为35-40g/L，所述种子萌发培养基中蔗糖的浓度优选为20-24g/L，所述培育萌发时的光照强度优选为1500-1800lx。
同样，为了提高成苗的成功率及速度，还可以进一步优化营养物质的浓度，例如，优选地，所述成苗培养基中香蕉汁的浓度为60-65g/L，所述成苗培养基中琼脂粉的浓度优选为4.0-4.5g/L。
白芨的种植方法，包括下列步骤：
将上文所述的高效繁殖白芨组培苗的方法培养出的所述白芨组培苗移栽至农田中，栽后进行水肥管理，除草及病虫害防治。
该种植方法主要是改进了白芨组培苗的培育方法，所采用的组培苗的优点如上文所述，正是基于此，整个种植方法具有成活率高、产率高、周期短、操作简单等优点。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)通过改良培养基及温度、光照等培养条件开发出一种新的白芨组培苗繁殖方法—液体培养法，为白芨育苗提供了新的契机。
(2)缩短了培养周期，简化了操作步骤，减小了污染率，降低了成本，提高了成活率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为固体培养法培育白芨组培苗的流程图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种高效繁殖白芨组培苗的方法：
配制改良型MS培养基：配方如表1所示，混合后高压灭菌。
表1实施例1的改良型MS培养基
配制种子萌发培养基：配方为1/2MS+40g/L土豆汁+30g/L蔗糖，混合后高压灭菌。
配制成苗培养基：配方为MS+40g/L土豆汁+60g/L香蕉汁+30g/L蔗糖+4.2g/L琼脂粉，混合后高压灭菌。
种子萌发：将经过消毒的白芨种子播种在种子萌发培养基中，再置于摇床中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10-h/d、120r/min的条件下培育萌发30d，得到萌发的种子；
成苗：将萌发的种子移至成苗培养基中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10h/d的条件下培养3个月，得到白芨组培苗。
实施例2
一种高效繁殖白芨组培苗的方法：
配制改良型MS培养基：配方如表2所示，混合后高压灭菌。
表2实施例2的改良型MS培养基
配制种子萌发培养基：配方为1/2MS+40g/L土豆汁+30g/L蔗糖，混合后高压灭菌。
配制成苗培养基：配方为MS+40g/L土豆汁+60g/L香蕉汁+30g/L蔗糖+4.2g/L琼脂粉，混合后高压灭菌。
种子萌发：将经过消毒的白芨种子播种在种子萌发培养基中，再置于摇床中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10-h/d、120r/min的条件下培育萌发30d，得到萌发的种子；
成苗：将萌发的种子移至成苗培养基中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10h/d的条件下培养3个月，得到白芨组培苗。
实施例3
一种高效繁殖白芨组培苗的方法：
配制改良型MS培养基：配方如表3所示，混合后高压灭菌。表3实施例3的改良型MS培养基
| 名称 | 用量mg/L |
| 硝酸钾 | 1895 |
| 硝酸铵 | 1655 |
| 二水氯化钙 | 442 |
| 七水硫酸镁 | 373 |
| 磷酸二氢钾 | 165 |
| 碘化钾 | 0.8 |
| 硼酸 | 5.5 |
| 四水硫酸锰 | 23.6 |
| 七水硫酸锌 | 10 |
| 钼酸钠 | 0.2 |
| 五水硫酸铜 | 0.03 |
| 氯化钴 | 0.028 |
| 硫酸亚铁 | 29 |
| 乙二胺四乙酸 | 25 |
| 肌醇 | 98 |
| 烟酸 | 0.9 |
| 盐酸吡哆醇 | 0.9 |
| 盐酸硫胺素 | 0.9 |
| 甘氨酸 | 3.5 |
| pH | 5.9 |
配制种子萌发培养基：配方为1/2MS+40g/L土豆汁+30g/L蔗糖，混合后高压灭菌。
配制成苗培养基：配方为MS+40g/L土豆汁+60g/L香蕉汁+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂粉，混合后高压灭菌。
种子萌发：将经过消毒的白芨种子播种在种子萌发培养基中，再置于摇床中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10-h/d、120r/min的条件下培育萌发30d，得到萌发的种子；
成苗：将萌发的种子移至成苗培养基中，在24℃、光照强度为1500lx、光照时间10h/d的条件下培养3个月，得到白芨组培苗。
实施例4
一种高效繁殖白芨组培苗的方法：
配制改良型MS培养基：配方如表4所示，混合后高压灭菌。
表4实施例4的改良型MS培养基
配制种子萌发培养基：配方为1/2MS+30g/L土豆汁+20g/L蔗糖，混合后高压灭菌。
配制成苗培养基：配方为MS+30g/L土豆汁+70g/L香蕉汁+20g/L蔗糖+3.8g/L琼脂粉，混合后高压灭菌。
种子萌发：将经过消毒的白芨种子播种在种子萌发培养基中，再置于摇床中，在26℃、光照强度为2000lx、光照时间11h/d、130r/min的条件下培育萌发40d，得到萌发的种子；
成苗：将萌发的种子移至成苗培养基中，在26℃、光照强度为2000lx、光照时间11h/d的条件下培养4个月，得到白芨组培苗。
实施例5
一种高效繁殖白芨组培苗的方法：
配制改良型MS培养基：配方如表5所示，混合后高压灭菌。
表5实施例5的改良型MS培养基
配制种子萌发培养基：配方为1/2MS+35g/L土豆汁+24g/L蔗糖，混合后高压灭菌。
配制成苗培养基：配方为MS+40g/L土豆汁+65g/L香蕉汁+24g/L蔗糖+4g/L琼脂粉，混合后高压灭菌。
种子萌发：将经过消毒的白芨种子播种在种子萌发培养基中，再置于摇床中，在25℃、光照强度为1700lx、光照时间10h/d、120r/min的条件下培育萌发40d，得到萌发的种子；
成苗：将萌发的种子移至成苗培养基中，在25℃、光照强度为1800lx、光照时间10h/d的条件下培养3个月，得到白芨组培苗。
实验例
将上述实施例与现有的培育方法作对照，前后两者的培养周期、污染率、成本、成活率入下表6所示。
现有的培育方法参照CN104126398A中的实施例二。
表6白芨组培苗的培养周期、污染率、成本、成活率
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。
Claims (9)
1.一种繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，包括下列步骤：
将白芨种子播种在种子萌发培养基中，培育萌发30-40d，再移至成苗培养基中，成苗培养3-4个月，得到白芨组培苗；
所述种子萌发培养基由以下成分组成：1/2改良型MS培养基、30-40g/L土豆汁、20-30g/L蔗糖；所述成苗培养基由以下成分组成：改良型MS培养基、30-40g/L土豆汁、60-70g/L香蕉汁、20-30g/L蔗糖、3.8-4.5g/L琼脂粉；
所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.75-0.83mg/L，硼酸5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-24mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，盐酸硫胺素0.8-1mg/L，甘氨酸3-4mg/L，pH为5.8-6.0。
2.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述培育萌发和所述成苗培养的培养条件均为：24-26℃、光照强度为1500-2000lx、光照时间10-11h/d。
3.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述培育萌发在摇床中进行，且摇床的转速为120-130r/min。
4.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述种子萌发培养基和所述改良型MS培养基均采用如下相同的制备方法：按照配方，将所有原料混合溶解，再采用高压锅灭菌。
5.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1895-1900mg/L，硝酸铵1650-1655mg/L，二水氯化钙440-442mg/L，七水硫酸镁370-373mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸5.5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.6mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-29mg/L，乙二胺四乙酸24.3-25mg/L，肌醇98-100mg/L，烟酸0.8-0.9mg/L，盐酸吡哆醇0.8-0.9mg/L，盐酸硫胺素0.8-0.9mg/L，甘氨酸3-3.5mg/L，pH为5.8-6.0。
6.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述种子萌发培养基中土豆汁的浓度为35-40g/L。
7.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述种子萌发培养基中蔗糖的浓度为20-24g/L。
8.根据权利要求1所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述成苗培养基中，香蕉汁的浓度为60-65g/L，琼脂粉的浓度优选为4.0-4.5g/L。
9.根据权利要求2所述的繁殖白芨组培苗的方法，其特征在于，所述培育萌发时的光照强度为1500-1800lx。
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