CN105106266B - 一种香芸火绒草提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种香芸火绒草提取物及其制备方法和应用，所述的制备方法为：将香芸火绒草干燥粉末以体积浓度为50‑80％的乙醇溶液超声提取1‑2次，每次0.2‑1.5小时，固液分离得滤液，将滤液合并蒸干，得香芸火绒草粗提物；其中，所述香芸火绒草干燥粉末与所述乙醇溶液的质量体积比为(1：8)‑(1：15)g/mL；所述香芸火绒草提取物具有很好的美白和抗衰老功效，可用于化妆品、保健食品和医药领域，尤其是可应用于化妆品中。

Description

一种香芸火绒草提取物及其应用

技术领域

本发明属于天然产物化学领域，尤其涉及一种香芸火绒草提取物及其制备方法和应用。

背景技术

美白、抗衰老化妆品一直以来都是女性的追求和向往，也是美容界研究的永恒话题。近年来随着社会经济的发展和科学技术的进步，人们对化妆品的需求亦随之提高。

皮肤的颜色主要取决于皮肤色素的总和，皮肤色素中主要成分是黑色素。人体可以生成两种类型的黑色素：真黑素和假黑色素。真黑素是造成皮肤、头发和眼睛的可见颜色的主要原因。一般来说，真黑素是受基因调控的，此外还受到UV暴露的刺激作用影响，随着年龄的增长，色素沉着的程度也随之增加。基于中国东方美学的传统观念，“白即是美”、“一白遮三丑”，希望减少皮肤的色素沉着来实现皮肤的美白是中国消费者对外貌的最大需求。色素沉着的过程是一种复杂的过程，其中关键在于黑色素的合成，黑色素的合成受到酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)的控制。通过抑制酪氨酸酶的活性，减缓黑色素的生成，是减少色素沉着最直接和最有效的办法。天然来源的酪氨酸酶抑制剂作为潜在的美白活性物，同时又具有安全性和对皮肤低刺激性的预期，目前已有各种开发的报道。

皮肤由于暴露在紫外线等外界环境中，紫外线产生的活性氧以及其它外界环境中的活性氧，都会在皮肤中产生各种自由基，造成对皮肤氧化应激的损伤，短期会诱发皮肤炎症等皮肤病症，长期将导致皮肤的老化。抗氧剂是具有捕捉自由基能力的物质，可以清除皮肤中的活性自由基，减轻自由基引起的皮肤氧化应激损伤，从而改善由氧化应激等造成的皮肤老化。天然来源的抗氧化活性成分，由于安全性、来源广泛等优点，受到国内外研究者的重视。

皮肤老化主要原因为光老化和机体的自然衰老，其中UV暴露引起的光老化会诱导皮肤弹性蛋白酶活性的增加。弹性蛋白酶是一种分布于多种组织和细胞中的生物酶，弹性蛋白酶活性的增加可导致皮肤弹性纤维的水解，从而加速真皮内弹性蛋白的分解，使皮肤失去弹性，出现皱纹等皮肤老化现象。抑制弹性蛋白酶活性，预期可以改善皮肤弹性和皱纹等皮肤老化现象。

香芸火绒草Leontopodium haplophylloides Hand.Mazz.，为菊科火绒草属植物。产自四川西部(道孚)和北部(松潘)、青海东部(西宁、大通等)、甘肃西南部(临潭)。生于高山草地、石砾地、灌丛或针叶林外缘。《晶珠本草》载“火绒草治瘟病时疫，解信石毒”。蒙医用火绒草治疗肺热咳嗽、支气管炎等；藏医用火绒草治疗流行性感冒、瘟病时疫、矿物药中毒、砒霜中毒、肉瘤、疮疖疔毒、出血，亦可作艾灸用。

现代植物化学成分研究显示香芸火绒草含有多种成分：挥发油类：周劲松等利用气相色谱/质谱联用技术对青海大通宝库和互助北山两地林场生长期间的香芸火绒草(Leontopodium haplophylloides)进行分离分析，共分离出26个化合物，鉴定出22种化合物，占总量的89％，含量比较大的有愈创醇、甲酸香草酯、苯二酸双酯、十六烷酸、芳樟醇、香叶醛、姜黄烯等化合物，并对其浸膏香型做了评定为清灵香型，是一种稀少珍贵的天然香料。姚建等采用GC/MS联用方法对甘肃夏河产香芸火绒草进行分离分析，测得其精油有65个组分，主要成分有：α-香柠檬烯，β-檀香烯,芳樟醇,α-金合欢烯等。安承熙等利用毛细管气相色谱/质谱、毛细管气相色谱/傅立叶红外联用技周劲松从青海产香芸火绒草挥发油中鉴定出愈创醇、甲酸香草酯、苯二酸双酯等22种成分。安承熙从香芸火绒草中提取鉴定了法呢烯、法呢醇、薄荷醇、橙花叔醇等119种挥发油类组分。黄酮类：张所明等从藏药香芸火绒草的甲醇提取物中分得四个B环未取代的黄酮，分别为乔松素，高良姜素，3,7-二羟基-5-甲氧基黄酮，3,5-二羟基-7-甲氧基黄酮。其它：研究者从香芸火绒草植物中分离得到11个化合物，分别为：5,7,4’-三羟基-3’-甲氧基黄酮，7-羟基-5-甲氧基黄酮，乔松素，高良姜素，5,7,4’-三羟基-3’,5’-二甲氧基黄酮，木犀草素，木犀草素-4’-O-β-D-葡萄糖苷，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，大波斯菊苷，β-谷甾醇，胡萝卜苷。其中除乔松素和高良姜素外，均为首次从该种植物中得到。

此外，香芸火绒草中所含有的α-甜没药萜醇，具有抗菌、抗炎、抗微生物、抗消化等作用；含量第二的高良姜素黄烷酮具有抗肿瘤及细胞毒活性,醛糖还原酶抑制活性,还有局部麻醉、抗炎及抗菌作用，木犀草素具有抗炎，抗过敏，抗菌等作用；橙花叔醇，具有类似橙花的清甜香气，在香精方面起定香剂作用；顺式-顺式亚油酸在医药上用于治疗高血脂和动脉硬化等症。

综合上述文献资料，未见香芸火绒草抗衰老作用及其在抗衰老化妆品用途的报道。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种香芸火绒草提取物及其应用，旨在将香芸火绒草提取物应用于皮肤外用剂中，以起到美容护肤的作用。

新鲜的香芸火绒草与干燥后的香芸火绒草相比，完全保留了有效成分，使其能够充分发挥出功效，所以本发明采用鲜香芸火绒草为原料进行研究，实际应用中也可以选择干燥后的香芸火绒草为原料。

本发明的目的是这样实现的：

一种香芸火绒草提取物，其特征在于，在香芸火绒草中加入有机溶剂超声提取，过滤，将滤液浓缩，过AB-8树脂，用有机溶剂洗脱，得香芸火绒草提取物。

所述有机溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的有机溶剂，例如：甲酰胺、二甲基甲酰胺、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺、三乙胺、三丁胺、乙酸、三氟乙酸、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇和乙醚等，中的一种或几种，其中优选乙醇水溶液。

在以乙醇水溶液为有机溶剂时，乙醇的浓度选用30-70(体积)％。

根据试验可知，香芸火绒草提取物在抗氧化、美白、抑制酪氨酸酶和抗老化方面具有很好的功效，可以作为活性成分添加到化妆品配方中，这里所指的活性成分在某些情况下可以提供一种或一种以上的功效。

本发明中所述的活性成分还可以为泛醇、甘草酸二钾、尿囊素、烟酰胺、抗坏血酸磷酸酯钠、三色堇提取物、透明质酸钠、生育酚乙酸酯、十一碳烯酰基苯并氨酸等。此外，此类描述是为了便于理解，并不是使成分限于具体指出的应用或者所列出的应用。

香芸火绒草提取物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。

所述皮肤外用剂组合物是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆料组合物或药学组合物。所述化妆料组合物中可以是基础化妆料、面部妆容化妆料、身体用化妆料、头发护理用化妆料等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。

所述化妆料组合物中根据剂型和目的的不同还含有不同的化妆品学层面允许的介质或基质赋形剂。

可以用于本发明皮肤外用剂组合物的化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。水相为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温(25℃)下可以为液体、半固体或固体。赋形剂包括或可以为在水或水-醇赋形剂中的混悬液、分散液或溶液的形式，其可以含有增稠剂或凝胶剂。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的产品形式，其中包含的组分。

所述的组合物可以包括水相，该水相可以含有水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物，所述的亲水性有机溶剂诸如醇，尤其是含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇，如乙醇或丙醇；多元醇，如丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。

当发明的组合物为乳液形式时，该组合物还可以任选包含表面活性剂。

所述的组合物还可以包含成膜聚合物，如聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烃的树脂和/或硅氧烷树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的赋形剂中并且任选与增塑剂合并。

本发明的组合物还可以包含油相，所述的油相含有在室温(25℃)下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为油状或蜡状的物质，如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以含有有机溶剂。

通常在室温下为液体，合适的油性物质包括：来源于动物的基于烃的油，如全氢化角鲨烯；基于烃的植物油，如液体的C4-10脂肪酸的甘油三酯类，例如庚酸或辛酸甘油三酯类，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鳄梨油、辛酸/癸酸甘油三酯类、霍霍巴油；矿物或合成来源的直链或支链烃类，例如液体石蜡及其衍生物、凡士林；合成酯类和醚类，特别是脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、异硬脂酸异硬脂醇酯；羟基化酯类，例如乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸脂类；多元醇酯类，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类；含有C12-26的脂肪醇类，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇、油醇；基于部分烃的氟油和/或氟硅油，硅油，在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷，例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任选包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。

本发明的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(提取物生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。

本发明的组合物还可以包含另外的颗粒相，所述的颗粒相可以为化妆品组合物中使用的颜料和/或珠光剂和/或填充剂。

颜料可以存在于组合物中，合适的无机颜料包括氧化钛、氧化锆和氧化铈以及氧化锌、氧化铁和铁蓝；合适的有机颜料包括钡、锶、钙和铝色淀和碳黑。

珠光剂可以存在于组合物中，合适的珠光剂包括涂覆了氧化钛、氧化铁或天然颜料的云母。

填充剂可以存在于组合物中，合适的填充剂包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸锌、云母、高岭土、尼龙粉末、聚乙烯粉末、特氟龙、淀粉、一氮化硼、共聚物微球，例如硅氧烷树脂微珠。

本发明组合物的油相可以包含一种或多种蜡、树胶或其混合物。蜡包括基于烃的蜡、氟蜡和/或硅氧烷蜡，并且可以来源于植物、矿物、动物和/或合成来源。合适的蜡包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、石蜡、微晶蜡、地蜡；合成蜡包括聚乙烯蜡、含有C16-45的硅氧烷蜡。树胶一般为聚二甲基硅氧烷或羧甲基纤维素钠或提取物类，并且半固体物质一般为基于烃的化合物，如羊毛脂及其衍生物。

可以将本发明的组合物配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以将本发明的组合物通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。

本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明中，特别优选香芸火绒草(Leontopodium haplophylloides Hand.Mazz.)进行抗氧化、抗衰老等功效的研究和应用。新鲜的香芸火绒草与干燥后的香芸火绒草相比，完全保留了有效成分，使其能够充分发挥出功效，所以本发明采用鲜香芸火绒草为原料进行研究，实际应用中也可以选择干燥后的香芸火绒草为原料。

实施例1香芸火绒草提取物的制备

方法I：

取香芸火绒草干燥粉末100g，室温下以70％乙醇900ml_500W超声提取2次，每次30min，滤液合并得约1700ml，取滤液蒸干，得到香芸火绒草粗提物5.13g；

方法II：

取香芸火绒草干燥粉末100g，室温下以70％乙醇900ml_500W超声提取2次，每次30min，滤液合并得约1700ml，将滤液减压回收溶剂至无醇味，过AB-8树脂，依次以30％乙醇，50％乙醇和70％乙醇洗脱，分别收集各流份，各约400ml，蒸干，分别得到香芸火绒草粗提物2.64g，30％乙醇洗脱部位0.83g和70％乙醇洗脱部位0.59g。

实施例2香芸火绒草提取物对人成纤维细胞增殖的影响

按照实施例1制备的香芸火绒草30％和70％乙醇洗脱部位，用去离子水配制成0.02％浓度溶液，加入到人成纤维细胞培养液中，以不含样品的去离子水为空白对照。培养48小时后，用MTT法对细胞染色后，用酶标仪测定550nm处吸光度，评估对人成纤维细胞的增殖作用，空白对照的增殖率为100％，增殖率高于120％为对细胞有增殖作用。

表1 香芸火绒草各洗脱部位对人成纤维细胞增殖的影响

由表1可知，在本发明中使用的香芸火绒草提取物均对人成纤维细胞增殖具有促进作用，其中70％乙醇洗脱部位对人成纤维细胞增殖的促进作用最强。

实施例3香芸火绒草提取物的抗氧化活性检测

将实施例1中制备的香芸火绒草提取物，用DPPH法测定其清除自由基活性。测定步骤为：将香芸火绒草提取物分别用去离子水配制成水溶液，移取2mL于10mL具塞试管中，加入2mL DPPH乙醇溶液(2×10^-4mol/L)，充分混匀，室温静置，30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度A₅₁₇(以乙醇为参比)；同时测定2mL DPPH溶液与2mL乙醇混合后的吸光度A_c，以及2mL提取液与2mL乙醇溶液混合后的吸光度A₀，平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率。

自由基清除率＝(1-(A₅₁₇-A₀)/A_c)×100％。

计算结果如表2所示。

表2

由表1可知，香芸火绒草提取物具有优异的自由基清除作用，作为抗氧化剂是有用的。因此，可以将香芸火绒草提取物配合在皮肤外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗氧化活性物使用。

实施例4香芸火绒草提取物的抗老化活性检测

将实施例1制备的香芸火绒草提取物，分别溶于去离子水，配制成水溶液，用于测定弹性蛋白酶抑制活性。测定方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.,2009,4,127-129)方法进行，测定步骤为：在96孔板中加入10μL样品溶液和130μL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(pH8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15μL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A₄₁₀。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度，测试结果见表2。

弹性蛋白酶活性抑制率计算公式为：抑制率(％)＝(A₀-(A₄₁₀-B))/A₀×100％，其中A₀是参比溶液的吸光度，A₄₁₀是样品溶液的吸光度，B是样品空白溶液的吸光度。

表3

由表3可知，香芸火绒草提取物具有抑制弹性蛋白酶活性的作用，其中，香芸火绒草70％乙醇部位的抑制作用最强，可以将香芸火绒草提取物配合在皮肤外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗老化剂使用。

实施例5含有香芸火绒草提取物的皮肤外用剂

取实施1中制备的香芸火绒草提取物，用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品组合物，例如化妆水、精华液、乳霜等。所述香芸火绒草香芸火绒草提取物在皮肤外用剂中的重量百分比是0.0001-3，优选0.5-3。以下是香芸火绒草花提取物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例。以下各表中“-”表示无添加。

实施例6含有香芸火绒草提取物的化妆水

取香芸火绒草提取物，用于制备具有抗衰老、美白作用的化妆水，所述化妆水含有的组分如表4所示：

表4

实施例7含有香芸火绒草提取物的精华液

取香芸火绒草提取物，用于制备具有抗衰老、美白作用的精华液，所述精华液含有的组分如表5所示：

表5

实施例8含有香芸火绒草提取物的乳液/霜

取香芸火绒草提取物，用于制备具有抗衰老、美白作用的乳液/霜，所述乳液/霜含有的组分如表6所示：

表6

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种香芸火绒草提取物的制备方法，其特征在于将香芸火绒草干燥粉末以体积浓度为50-80％的乙醇溶液超声提取1-2次，每次0.2-1.5小时，固液分离得滤液；其中，所述香芸火绒草干燥粉末与所述乙醇溶液的质量体积比为(1：8)-(1：15)g/mL；再将所述滤液减压回收溶剂至无醇味，上样到AB-8树脂填充柱，依次用溶剂I、溶剂II和溶剂III洗脱，分别收集洗脱液，再脱除溶剂后，相应地得到洗脱部位A、洗脱部位B和洗脱部位C，即可；其中，所述溶剂I为体积浓度25-35％的乙醇溶液，所述溶剂II为体积浓度45-55％的乙醇溶液，所述溶剂III为体积浓度65-75％的乙醇溶液；所述的提取为超声提取，所述的超声提取的温度为室温，超声提取的时间为0.5小时，超声提取的次数为2次。

2.如权利要求1所述的制备方法制得的香芸火绒草提取物在制备皮肤外用剂时作为抗老化活性成分或者抗氧化活性成分的应用，其特征在于，所述香芸火绒草提取物在皮肤外用剂组合物中的重量百分比是0.5-3；所述的香芸火绒草提取物按以下方法制备：将香芸火绒草干燥粉末以体积浓度为50-80％的乙醇溶液超声提取1-2次，每次0.2-1.5小时，固液分离得滤液；其中，所述香芸火绒草干燥粉末与所述乙醇溶液的质量体积比为(1：8)-(1：15)g/mL；再将所述滤液减压回收溶剂至无醇味，上样到AB-8树脂填充柱，依次用溶剂I、溶剂II和溶剂III洗脱，分别收集洗脱液，再脱除溶剂后，相应地得到洗脱部位A、洗脱部位B和洗脱部位C，即可；其中，所述溶剂I为体积浓度25-35％的乙醇溶液，所述溶剂II为体积浓度45-55％的乙醇溶液，所述溶剂III为体积浓度65-75％的乙醇溶液；所述的提取为超声提取，所述的超声提取的温度为室温，超声提取的时间为0.5小时，超声提取的次数为2次。