CN105087469A - 体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 - Google Patents
体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105087469A CN105087469A CN201510648560.2A CN201510648560A CN105087469A CN 105087469 A CN105087469 A CN 105087469A CN 201510648560 A CN201510648560 A CN 201510648560A CN 105087469 A CN105087469 A CN 105087469A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- adscs
- substratum
- add
- induction
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。该方法包括的步骤为:分离出ADSCs;体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:内胚层诱导阶段;成肝诱导阶段;肝细胞的成熟阶段。使用本发明的诱导分化方法,只需要九天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。这将有利于临床治疗方案的应用。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及到一种体外诱导脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)向成熟肝细胞(iHeps)分化的方法。
背景技术
肝脏是一个调节多种生理过程的关键器官。肝脏疾病,如爆发性肝损伤,是导致死亡的重要原因。原位肝移植(OLT)是目前治疗终末期肝脏疾病的唯一方法,但由于免疫排斥等副作用及其肝脏供体的短缺限制了肝移植的临床应用。肝细胞移植是治疗肝功能不全的整体肝移植的替代疗法;虽然原代肝细胞可以从供体肝脏中分离得到,但每次移植需要1~5×109个肝细胞,这就需要获得大量的供体肝或大量体外扩增原代肝细胞。供体肝脏的缺乏和原代肝细胞体外扩增困难等原因使得获得充足的可用于细胞治疗的肝细胞非常困难。为了解决目前这种窘境,迫切需要可快速产生大量肝细胞的新方法。
过去几年,发现了多种可用于治疗肝脏疾病的肝外细胞群,其中具有多向分化潜能和半无限增殖能力的间充质干细胞(MSCs)就是一种重要的具有潜在应用价值的细胞。间充质干细胞可从骨髓、脂肪、脐带血、羊膜液、头皮、胎盘等多种组织中获得。其中,脂肪来源的MSCs(ADSCs)被认为是最有应用前景的一类间充质干细胞,其在脂肪组织的占比介于1:100到1:500之间,远高于骨髓间充质干细胞在骨髓中所占比例,在再生医学中有良好的应用前景。ADSCs来源充足,易得到,创伤小,可取材于患者自身的脂肪组织,这样就避免了免疫排斥反应,也解决了伦理问题等的障碍。已有研究表明ADSCs在体外具有诱导分化成肝细胞的潜力。
目前的技术由ADSCs向肝细胞诱导分化都需要大约1个月的时间,使得这些诱导分化方法并不适用于实际临床应用。而临床应用需要尽可能缩短体外诱导分化的时间。因此,开发新的能在短时间内将ADSCs高效地诱导成为成熟肝细胞(iHeps)的方法是本领域的一个难题。
发明内容
本发明要求解决的技术问题是现有ADSCs诱导成为iHeps的方法耗时长,效率低的缺陷。
本发明解决技术问题的技术方案是提供一种新的体外诱导ADSCs向iHeps分化的方法。该方法包括以下步骤:
a、从离体脂肪组织中分离出ADSCs;
b、体外诱导ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为3个阶段:
内胚层诱导阶段:在步骤a分离得到的ADSCs中加入含有50~200nMIDE1和1~5μΜCHIR99021的RPMI-1640培养基或者含有50~200nMIDE1和1~5μΜCHIR99021的DMEM/F12培养基中进行诱导培养,诱导时间为20~28小时。
成肝诱导阶段:在完成内胚层诱导后的细胞中加入含有50-200nMIDE和10-30ng/mLFGF4的RPMI-1640培养基或者含有50-200nMIDE和10-30ng/mLFGF4的DMEM/F12中培养基诱导培养64~80小时。
肝细胞的成熟阶段:在完成成肝诱导后的细胞中加入肝细胞生长因子(HGF)至100-200ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4(FGF4)至10-30ng/mL、加入抑瘤素M(OsM)至20-40ng/mL、加入地塞米松(Dex)至1.5~3×10-5mol/L以及加入ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养,培养时间为112~136小时。
进一步的,上述方法骤b所述内胚层诱导阶段为将步骤a分离得到的ADSCs在加入IDE1至100nM和CHIR99021至3μΜ的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12培养基中诱导培养,诱导时间为24小时。
进一步的,上述方法步骤b所述成肝诱导阶段为将完成内胚层诱导的ADSCs在加入IDE1至100nM和加入FGF4至20ng/mL的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12中培养基诱导培养72小时。
进一步的,步骤b所述成肝诱导阶段为将完成肝诱导阶段的ADSCs在加入肝细胞生长因子(HGF)至150ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4至20ng/mL纤维母细胞生长因子4(FGF4)、加入抑瘤素M(OsM)至30ng/mL、加入地塞米松(Dex)至1.5~3×10-5mol/L以及ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养,培养时间120小时。
其中,上述方法中分离得到的ADSCs在培养3-7代后再按步骤b所述方法进行诱导培养。
其中,上述方法中所述ADSCs在进行步骤b之前接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中进行后继诱导培养。
其中,上述方法中所述ADSCs接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中,当细胞长满培养皿底部后按步骤b的进行诱导培养。
本发明方法适用于动物的ADSCs诱导为iHeps。尤其是适用于啮齿类动物的ADSCs诱导为iHeps。优选的,适用于大鼠的ADSCs。
本发明的优点在于:使用本发明的分化方法,只需要八到十天左右的时间就足够产生具有肝细胞形态,基因表达及功能的肝细胞,是目前用时最短的肝细胞分化方法。本发明方法能获得ADSCs来源的肝细胞,使来自患者的自体脂肪组织的细胞治疗肝病成为可能,从而可以避免异体细胞的免疫排斥反应。其次,诱导过程快速而高效,这将有利于临床治疗方案的应用。此外,根据诱导分化后的肝细胞的功能分析,使用这种分化方法获得的细胞作为肝细胞的资源,将有利于肝细胞移植的发展。因此,该方法为ADSCs在肝脏疾病细胞治疗中的应用迈出了重要的一步。
附图说明
图1为诱导培养后的细胞形态图片。
图2为对诱导结束的细胞进行流式检测的结果。
图3为肝细胞特异性基因表达检测结果。
图4为使用诱导得到的iHeps进行改善CCl4诱导的急性肝损伤的功能试验结果。
具体实施方式
本发明方法具体可按以下步骤进行。
一、ADSC的分离、培养与扩增。
ADSC的分离、培养与扩增可按常规方法进行。
作为参考,本发明以大鼠为例,介绍以下具体方法:
大鼠脂肪间充质干细胞的分离:按0.35-0.4ml/100g体重,腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠,75%酒精浸泡10min。于超净台上无菌分离其腹股沟脂肪垫,在冷D-Hank’s液中漂洗3次,去除肉眼可见的纤维成分和血管,将其剪碎成1mm3左右的小颗粒,然后转入离心管并加入0.1%Ⅰ型胶原酶(每克脂肪组织加2-5mL),置于37℃振荡消化1小时。加入等量的4℃预冷的含10%血清(FBS)的DMEM-LG培养基终止消化后,将离心管管上下颠倒振荡几次进一步加速组织块离散,并用纱布过滤去除组织碎片。过滤液于4℃1500rpm离心10分钟,重复离心过程并弃去上清。将沉淀细胞用细胞裂解缓冲液重悬,室温静置10min以裂解红细胞。4℃下1500rpm离心10min,弃上清后用含10%血清(FBS)的DMEM-LG培养基重悬细胞于75cm2培养皿中,并放置于5%CO2,37℃培养箱中培养。1天后,用Hank's平衡盐溶液漂洗培养皿2-3次,清除未贴壁细胞,加入含10%血清(FBS)的DMEM-LG培养基继续培养。每2天换培养液1次,直至细胞达到覆盖80-90%培养皿底后用0.25%胰酶溶液消化进行细胞传代。传代3-7代后用于诱导培养。
二、将ADSCs诱导成成熟的肝细胞
将3-7代的ADSCs接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中。当细胞长满培养皿底部后进行为期约9天的成肝诱导(表1)。
表1.ADSC向肝细胞诱导分化的培养条件
在加入CHIR99021至1~5μΜ的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12培养基中诱导培养,诱导时间为20~28小时;
成肝诱导阶段:将完成内胚层诱导后的细胞中加入IDE1至50~200nM和FGF4至10~30ng/mL的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12中培养基诱导培养64~80小时;
肝细胞的成熟阶段:将完成肝诱导阶段后的细胞中加入肝细胞生长因子至100~200ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4至10~30ng/mL、加入抑瘤素M至20~40ng/mL、加入地塞米松至2×10-5mol/L以及加入ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养,培养时间112~136小时。
表1.ADSC向肝细胞诱导分化的培养条件
本文中使用的部分添加物为:
IDE1(购自tocris公司,CasNo.:1160927-48-9),分子量:306.31;分子式:C15H18N2O5。化学名:1-[2-[(2-Carboxyphenyl)methylene]hydrazide]heptanoicacid。
结构式:
CHIR99021(购自selleck公司,ct99021)分子量:465.34。
化学名:6((2((4-(2,4-二氯苯基)-5-(4-methyl-1h-imidazol-2-yl)嘧啶-2-基)氨基)乙基)氨基)烟腈。
化学式:C22H18CL2N8;CAS号:252917-06-09;
结构式:
本实施例使用的所述ITS预混通用培养添加物为康宁公司产品(ITSPremixUniversalCultureSupplement,20mL,1/Pack(Product#354350)),使用时按说明书要求添加即可。
实例一、使用本发明方法由ADSC具体诱导具有功能的iHeps
将从大鼠分离得到的ADSCs传代培养3代后,接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中。待ADSC长满培养皿底部后,用上述方法分别诱导鼠的ADSC,图1展示了诱导过程中从开始诱导(D0)到第9天诱导结束(D9)细胞的形态变化,在该方法中,ADSCs更换第Ⅰ阶段培养基,1天后细胞形态由长梭形变为短梭形(图1,D0-D1),接着用成肝诱导培养基培养3天。最后将培养基换成成熟培养基,细胞形态变为类似于原代肝细胞的具有细胞紧密接触的立方形(图1,D4-D9)。培养基具体配方和培养时间如下,一共用了九天时间完成:
表2.ADSC向肝细胞诱导分化的培养条件
对诱导结束的细胞进行流式细胞检测,实验组与同型对照组对比显示99.1%的RatiHeps表达白蛋白ALB,95.4%表达AAT(图2)。我们更进一步分析了肝细胞特异基因的表达,用未诱导的ADSC和肝原代细胞(rHeps)分别为阴、阳性对照发现在成肝诱导过程中,肝细胞的特异性基因表达逐渐上调(图3),其中,ALB、AAT和ASGPR1是肝细胞的特异性表达蛋白,并且也是成熟肝细胞功能的体现。而AFP是不成熟肝细胞的特异性蛋白,在肝脏发育中高表达,但成熟肝脏细胞中基本不表达。实验结果显示由ADSCs诱导分化后的riHep细胞表现出了成熟肝细胞的典型特征AFP表达量始终低于5%。这些现象说明ADSC细胞在向成熟肝细胞稳定分化。这些结果表明我们这种新方法成功获得了ADSCs来源的肝细胞。
试验例一、诱导得到的iHeps有改善CCl4诱导的急性肝损伤的体内功能试验
为了评估iHeps是否具有肝细胞功能,我们使用了上述实施例1诱导得到的iHeps对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠模型进行细胞移植实验。
实验分组及方法
20只NPG(6周龄,雄性,北京维通达公司)小鼠(重症联合免疫缺陷小鼠)分为四组,每组5只,分别标为假手术组(sham),ADSC组,iHep组和rHep组,全部注射CCl4后引起急性爆发性肝衰竭,24小时后,在所有小鼠左侧最后一根肋骨下方约3mm处至后背剪一5mm切口,拖出脾脏,在脾脏内注射不同的内容物。其中假手术组注射生理盐水,ADSC组注射大鼠未诱导的第三代ADSCs,iHep组注射准备好的按照实例一中诱导后的细胞,rHeps组注射提前分离好的大鼠肝原代细胞。其中并导致其在24小时内死亡(图4)。CCl4处理8小时后,分别给NPG鼠脾腔移植ADSCs,iHeps或原代肝细胞(rHeps)细胞(图4)。
实验结果及结论
ADSCs组和假手术(sham组)组在CCl4处理24小时内几乎全部死亡(假手术组的一只小鼠在第2天死亡(图4),rHeps移植组明显提高了急性肝衰竭小鼠的存活率并延长了存活时间(图4)。值得注意地,在RatiHeps移植组,2只小鼠(总共5只)完全从急性肝损伤中恢复(图4);在CCl4处理前(d0)和处理7天后(d7)相比,血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST恢复正常水平(图4);组织分析显示RatiHeps明显改善了CCl4诱导的急性肝损伤(图4),CCl4处理前(d0)的损伤肝细胞的细胞核裂解、溶解、细胞肿胀、细胞膜不完整的特征(箭头所指处)相比于处理后(d7)得到有效缓解。
1、按照实例一中相同方法对ADSC成肝诱导后的riHep细胞,加入适当量的0.25%胰酶铺满皿底,在37℃消化1分钟,轻轻拍打培养皿使细胞脱离皿底并分散成单个细胞。
加入5mL含有10%FBS的Willianm’E培养基终止消化。将胰酶和细胞的混合液移到15ml离心管1000rpm离心3分钟,去上清液,加入无血清williams’E培养基5mL,重新悬浮细胞。反复用无血清williams’E培养基离心重悬的方法洗3次,最后一次定浓度至2×106/100μL
2、准备同样浓度为2×106/100μL的ADSC和rHep
3、20只NPG(6周龄,雄性,北京维通达公司)小鼠分为四组,每组5只,分别标为作为空白对照的假手术组(sham),作为阴性对照的ADSC组,作为实验组的iHep组和作为阳性对照的rHep组
4、用将CCl4用橄榄油配制成5%溶液,将NPG小鼠按照0.3mL/kgCCl4体重注射CCl4溶液后引起急性爆发性肝衰竭(图4)。CCl4处理8小时后,将小鼠左侧背部脾脏下端剪一个5mm长的小口,用棉签小心将脾脏拖出半截,分别给ADSC组小鼠脾腔移植ADSCs,iHeps组小鼠脾脏移植ratiHeps,rHeps组移植原代肝细胞(rHeps)细胞,假手术组只注射生理盐水(图4),每组细胞用量为2×106/只。注射完生理盐水或者细胞后,将脾脏放回体内,用4号手术线缝合开口,每只小鼠3万单位青霉素和链霉素腹腔注射。
5、生存曲线分析:ADSCs组和假手术(sham组)组在CCl4处理24小时内几乎全部死亡(假手术组的一只小鼠在第2天死亡(图4中A),rHeps移植组明显提高了急性肝衰竭小鼠的存活率并延长了存活时间(图4中A)。在RatiHeps移植组,2只小鼠(总共5只)完全从急性肝损伤中恢复(图4中A);
6、重复上述试验,实验组和rHep组在CCl4处理前(d0)和处理7天后(d7),的小鼠各取三只,共4组,用眼球取血的方式收集这些小鼠的血液,静置于4℃过夜,1500rpm离心10分钟,取上层血清,送至血生化分析,分析显示,处理7天后,血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST恢复正常水平,并且iHep组治疗效果与rHep组没有明显差别(图4中B);
7、将在CCl4处理前(d0)和处理7天后(d7)的实验组小鼠处死解剖取出肝脏,制作HE组织切片。组织分析显示RatiHeps明显改善了CCl4诱导的急性肝损伤(图4中C),CCl4处理前(d0)的损伤肝细胞的细胞核裂解、溶解、细胞肿胀、细胞膜不完整的特征(箭头所指处)相比于处理后(d7)得到有效缓解。
Claims (7)
1.体外诱导ADSCs向iHeps分化的方法,其特征包括以下步骤:
a、从离体脂肪组织中分离出ADSCs;
b、体外诱导培养ADSCs向iHeps分化,诱导分化过程分为以下3个阶段:
内胚层诱导阶段:在步骤a分离得到的ADSCs中加入含有50~200nMIDE1和1~5μΜCHIR99021的RPMI-1640培养基或者含有50~200nMIDE1和1~5μΜCHIR99021的DMEM/F12培养基中进行诱导培养,诱导时间为20~28小时;
成肝诱导阶段:在完成内胚层诱导后的细胞中加入含有50-200nMIDE和10-30ng/mLFGF4的RPMI-1640培养基或者含有50-200nMIDE和10-30ng/mLFGF4的DMEM/F12中培养基诱导培养64~80小时;
肝细胞的成熟阶段:在完成成肝诱导后的细胞中加入肝细胞生长因子(HGF)至100-200ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4(FGF4)至10-30ng/mL、加入抑瘤素M(OsM)至20-40ng/mL、加入地塞米松(Dex)至1.5~3×10-5mol/L以及加入ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养,培养时间为120~144小时。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤b所述内胚层诱导阶段为将步骤a分离得到的ADSCs在加入IDE1至100nM和CHIR99021至3μΜ的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12培养基中进行诱导培养,诱导时间为24小时。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤b所述成肝诱导阶段为将完成内胚层诱导后的细胞在加入IDE1至100nM和加入纤维母细胞生长因子4至20ng/mL的RPMI-1640培养基或者DMEM/F12中培养基诱导培养72小时。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤b所述成肝诱导阶段为将完成肝诱导阶段后的细胞在加入肝细胞生长因子至150ng/mL、加入纤维母细胞生长因子4至20ng/mL纤维母细胞生长因子4、加入抑瘤素M至30ng/mL、加入地塞米松至2×10-5mol/L以及ITS预混通用培养添加物的Williams’E培养基中诱导培养,培养时间120小时。
5.根据权利要求1~4任一项所述的方法,其特征在于:所述分离得到的ADSCs培养3-7代后再按步骤b所述方法进行诱导培养。
6.根据权利要求1~5任一项所述的方法,其特征在于:所述ADSCs在步骤b之前接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中进行后续诱导培养。
7.根据权利要求1~6任一项所述的方法,其特征在于:所述ADSCs接种于Ⅰ型胶原包被的培养皿中,当细胞长满培养皿底部后按步骤b的进行诱导培养。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510648560.2A CN105087469B (zh) | 2015-10-09 | 2015-10-09 | 体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510648560.2A CN105087469B (zh) | 2015-10-09 | 2015-10-09 | 体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105087469A true CN105087469A (zh) | 2015-11-25 |
CN105087469B CN105087469B (zh) | 2019-03-05 |
Family
ID=54568805
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510648560.2A Active CN105087469B (zh) | 2015-10-09 | 2015-10-09 | 体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105087469B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105441381A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-03-30 | 四川大学 | 体外诱导人脂肪间充质干细胞向有功能肝细胞分化的方法 |
CN105907703A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-08-31 | 新乡医学院 | 一种诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的方法 |
CN108823148A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-11-16 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞诱导分化为肝脏样细胞的方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103740641A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-23 | 广州爱菲科生物科技有限公司 | 一种诱导人脂肪间充质干细胞分化为胰岛样细胞的培养基及其诱导方法 |
-
2015
- 2015-10-09 CN CN201510648560.2A patent/CN105087469B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103740641A (zh) * | 2013-12-26 | 2014-04-23 | 广州爱菲科生物科技有限公司 | 一种诱导人脂肪间充质干细胞分化为胰岛样细胞的培养基及其诱导方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
FEN XU 等: ""Rapid and high-efficiency generation of mature functional hepatocyte-like cells from adipose-derived stem cells by a three-step protocol"", 《STEM CELL RESEARCH & THERAPY》 * |
XUEYANG LI 等: ""Direct Differentiation of Homogeneous Human Adipose Stem Cells Into Functional Hepatocytes by Mimicking Liver Embryogenesis"", 《JOURNA OF CELLULAR PHYSIOLOGY》 * |
屈长青 等: ""脂肪间充质干细胞的分离培养、多向分化及其应用前景"", 《中国生物化学与分子生物学报》 * |
李文晰 等: ""人骨髓单个核细胞向肝细胞诱导分化的体外研究"", 《胃肠病学和肝病学杂志》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105441381A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-03-30 | 四川大学 | 体外诱导人脂肪间充质干细胞向有功能肝细胞分化的方法 |
CN105441381B (zh) * | 2015-12-31 | 2019-03-05 | 四川大学 | 体外诱导人脂肪间充质干细胞向有功能肝细胞分化的方法 |
CN105907703A (zh) * | 2016-05-17 | 2016-08-31 | 新乡医学院 | 一种诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的方法 |
CN105907703B (zh) * | 2016-05-17 | 2018-06-22 | 新乡医学院 | 一种诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的方法 |
CN108823148A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-11-16 | 广东唯泰生物科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞诱导分化为肝脏样细胞的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105087469B (zh) | 2019-03-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bunnell et al. | Adipose-derived stem cells: isolation, expansion and differentiation | |
CN101748096B (zh) | 亚全能干细胞、其制备方法及其用途 | |
Minonzio et al. | Frozen adipose-derived mesenchymal stem cells maintain high capability to grow and differentiate | |
CN101314766B (zh) | 一种分离培养人脂肪间充质干细胞的方法及其专用培养基 | |
CN109749986A (zh) | 一种由人多能干细胞分化获得胰腺前体细胞及胰岛β细胞的方法 | |
CN103396990A (zh) | 一种制备间充质干细胞的方法 | |
CN109234229B (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
CN105779395A (zh) | 一种永生化的犬脂肪间充质干细胞系及其构建方法 | |
CN107709545A (zh) | 从干细胞生成肌肉谱系细胞 | |
WO2018086319A1 (zh) | 诱导脐带间充质干细胞向胰岛素分泌样细胞分化的无血清培养基及其制备方法和用途 | |
CN104762257B (zh) | 一种从脐带制备间充质干细胞的方法 | |
CN106939300A (zh) | 树鼩肝细胞永生化细胞系及其构建方法与应用 | |
CN105331579A (zh) | 人睾丸间质干细胞的分离、培养方法及其用途 | |
CN104232574A (zh) | 一种间充质干细胞体外向黑素细胞定向分化诱导的方法 | |
CN105087469A (zh) | 体外诱导脂肪间充质干细胞向成熟肝细胞分化的方法 | |
CN104531611A (zh) | 肝干细胞的特异性表面分子标志物cd63及其应用 | |
CN106434542A (zh) | 一种增强脂肪干细胞增殖与移植后存活能力的方法 | |
CN105907710A (zh) | 一种人脂肪间充质干细胞的分离培养方法 | |
CN111793596A (zh) | 一种人羊膜上皮干细胞的分离方法和制备方法 | |
CN109628388B (zh) | 用消化酶组合物从胎盘血管分离间充质干细胞 | |
CN105441381A (zh) | 体外诱导人脂肪间充质干细胞向有功能肝细胞分化的方法 | |
US11186828B2 (en) | Method of making human cells expressing OCT4, SOX2, and Nanog using an Ecklonia cava extract | |
CN105907701A (zh) | 一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法 | |
CN106834217A (zh) | 一种促进人羊膜上皮细胞体外扩增的方法及应用 | |
CN102703380B (zh) | 亚全能干细胞、其制备方法及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |