CN105056242A - 一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统 - Google Patents

Abstract

本发明属于抗牙周病药物,一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统。现有抗牙周病药物药效短,治疗操作麻烦,效果差。本发明由纳米载体、靶向功能分子及抗牙周病原菌药物组成:纳米载体为生物可降解高分子材料、表面聚乙二醇修饰的纳米粒、脂质体、聚合物胶束、固体脂质纳米粒；靶向功能分子为短肽RGD及其衍生物；载体表面的活性基团为马来酰亚胺基还巯基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的任一种；载药系统的粒径为10-1000nm；递药系统以牙周上皮细胞上的整合素为靶点。本发明的优点是：载药量和包封率高；延长药物在牙周袋中滞留时间；药物在细胞内缓慢释放，提高疗效。用药后药物载体自行降解，无需再次取出。

Description

一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统

技术领域

本发明属于抗牙周病药物,具体地为一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统。

背景技术

牙周炎是人类常见的慢性口腔疾病，主要病因是细菌侵入牙周软组织并产生有害的代谢物质，引发牙周支持组织的炎性破坏引起。其后果最终导致牙齿提前脱落、缺失。牙周炎不仅仅危害了患者的口腔健康，研究表明牙周病还与人类心血管疾病、呼吸道疾病、糖尿病、不良妊娠等全身性疾病之间存在相关性，能否有效地治疗牙周炎关系着人体的周身健康。目前，临床上对牙周炎的基础治疗手段主要是通过机械性的洁治及根面平整术祛除牙菌斑，但这种单纯的物理疗法无法完全清除寄居牙周组织内部的病原菌，术后仍需用抗生素药物治疗。人的全身应用抗菌药物时牙周炎灶部位药物浓度有限，长期反复应用较大剂量的抗生素易引起细菌耐药，降低治疗效果。因此物理刮治后将抗菌药物局部施用于病变牙周部位为最佳的给药途径。现有技术牙周病治疗的局部用药方式包括：(1)冲洗药物制剂；(2)含漱药物制剂；(3)涂布药物制剂；(4)缓释药物制剂等。冲洗和含漱药物制剂的缺点是在牙周炎变部位停留时间短，抗菌作用有限。涂布药物多为碘伏、碘甘油、碘酚等，缺点是药物刺激性较强，患者用药顺应性差。缓释药物制剂可使活性药物缓慢地释放出来，在局部较长时间地维持所需的药物浓度，从而达到长效作用，减少用药频率，受到医生和患者的欢迎。临床用于牙周炎局部治疗的缓控释剂型主要有：药棒、药线、凝胶注射剂、微球等。药棒和药线需要专业牙科医师将其埋植于用药部位，待药物释放完毕后再取出，治疗麻烦，同时不利于药物在牙周附着的形成。临床应用较多的是凝胶剂和软膏剂，如 等，这些药物制剂在施用后一般会由液态变为固态或半固态；当制剂为半固态时其在牙周袋内的快速清除，仍然很不方便。例如牙周袋内注射后往往需要用粘合剂封闭牙周袋口。和在施用后遇水变为固态，使人感觉不适；同时影响恢复过程中牙周附着的形成。综上所述，现有牙周治疗药物均存在着药效短,医生治疗操作麻烦,病人痛苦,治疗效果差的缺点。

因此发明一种药效长,医生治疗操作简单,治疗效果好的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统是十分重要的。

本发明采用生物可降解材料制备包载抗牙周病原菌药物的纳米粒，用于牙周炎的靶向治疗,将RGD修饰于包载抗牙周病原菌的纳米粒表面以增强纳米粒与牙周上皮细胞的结合能力，延长药物滞留时间，增强牙周炎治疗效果,具有药效长,医生治疗操作简单,治疗效果好的优点。经广泛查阅专利文献和国内外公开出版物,尚未见短肽RGD修饰的包载抗牙周病原菌的纳米载药系统用于牙周炎治疗的文献报道。本发明具有新颖性和创造性,本发明可在世界各地广泛应用,具有实用性。

发明内容

本发明的目的是提供一种药效长,医生治疗操作简单,治疗效果好的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统。

本发明的另一目的是提供该载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统的制备方法。

本发明目的是这样实现的：

一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统，由纳米载体、靶向功能分子及抗牙周病原菌药物组成:纳米载体为生物可降解高分子材料、表面聚乙二醇修饰的纳米粒、脂质体、聚合物胶束、固体脂质纳米粒；靶向功能分子为短肽RGD及其衍生物，其共有的氨基酸序列为Arg-Gly-Asp；抗牙周病原菌治疗药物包括米诺环素、多西环素、美他环素、四环素、甲硝唑、替硝唑、羟氨苄青霉素、头孢菌素类、克拉维酸、氨苄青霉素红霉素、螺旋霉素、罗红霉素、阿齐霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、利福平中的一种或两种以上的药物组合；递药系统的粒径为10-1000nm；载体表面的活性基团为马来酰亚胺基还巯基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的任一种；递药系统是以牙周上皮细胞上的整合素为靶点。

生物可降解高分子材料为聚乳酸PLA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚己内酯PCL、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺DSPE、聚乙醇酸PGA、聚酸酐PSPA、聚碳酸酯PC、聚对二氧环己酮PDS、聚氰基丙烯酸烷酯PACA、聚甲基丙烯酸甲酯PMMA、聚羟基丁酸PHB、聚原酸酯POE、聚氨基酸、白蛋白、明胶、壳聚糖等及其嵌段共聚物的一种。

所述聚乙二醇分子量为2000—5000Da,优选为聚乙二醇分子量为1000—20000Da。

所述聚乳酸分子量为5000—50000Da。

一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统的制备方法，步骤如下:

(1)以权利要求2所述的生物可降解高分子材料为原料，以PEG-PLA为载体，采用乳化溶媒蒸发法制备纳米粒；

(2)将步骤(1)产物RGDyC短肽c与Mal-PEG-PLA共价连接得到RGD-PEG-PLA纳米粒；

(3)将步骤(2)产物放入Zeta/激光粒度仪测定纳米粒的平均粒径和电位；

(4)将步骤(3)产物使用透射电镜观察形态；

(5)将步骤(4)产物采用高效液相HPLC法测定短肽RGD的接枝率及药物的载药量、包封率及释放。

本发明纳米载药系统的要点是：

由纳米载体、靶向功能分子及抗牙周病原菌药物组成，该载药系统增强对牙周组织的粘附作用，提高了药物载体在牙周袋中的滞留时间，延长药物释放时间，增强治疗效果。

本发明载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统是以整合素受体为靶点的纳米递药系统。

本发明所述药物为抗牙周病原菌药物；纳米载体为表面聚乙二醇修饰的纳米粒、脂质体、聚合物胶束、固体脂质纳米粒；靶向功能分子为短肽RGD及其衍生物。药物以包裹或共价连接的方式包载于纳米载体中，功能分子通过共价连接的方式与纳米粒表面的聚乙二醇相连。所述的纳米递药系统粒径为10—1000nm。

本发明所述靶向分子短肽RGD及其衍生物的共有氨基酸序列为Arg-Gly-Asp，该序列为整合素受体与细胞外基质配体结合的识别位点，可与细胞表面整合素特异性结合。

本发明所述生物可降解高分子材料包括但不局限于聚乳酸PLA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚己内酯PCL、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺DSPE、聚乙醇酸PGA、聚酸酐PSPA、聚碳酸酯PC、聚对二氧环己酮PDS、聚氰基丙烯酸烷酯PACA、聚甲基丙烯酸甲酯PMMA、聚羟基丁酸PHB、聚原酸酯POE、聚氨基酸、白蛋白、明胶、壳聚糖等各种可用于制备纳米粒的天然及人工合成可降解生物材料及其嵌段共聚物，其中优选材料为聚乳酸PLA。

本发明所述聚乙二醇分子量为1000—20000Da，优选2000—5000Da。聚乳酸分子量为5000—50000Da，优选20000—40000Da。载体还可以为聚乳酸PLA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚己内酯PCL、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺DSPE、聚乙醇酸PGA、聚酸酐PSPA、聚碳酸酯PC、聚对二氧环己酮PDS、聚氰基丙烯酸烷酯PACA、聚甲基丙烯酸甲酯PMMA、聚羟基丁酸PHB、聚原酸酯POE、聚氨基酸、白蛋白、明胶、壳聚糖等其中的一种或多种；载体表面的活性基团除了马来酰亚胺基还可以为巯基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的一种。

本发明所述抗牙周病原菌治疗药物除了米诺环素，还包括多西环素、美他环素、四环素、甲硝唑、替硝唑、羟氨苄青霉素、头孢菌素类、克拉维酸、氨苄青霉素红霉素、螺旋霉素、罗红霉素、阿齐霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、利福平中的一种或两种以上的药物组合。

本发明纳米递药系统包载抗牙周病原菌治疗药物，利用纳米载体对药物的保护作用，提高药物在贮存及使用过程中的稳定性。本发明制备纳米载体所用材料皆为生物可降解材料，生物相容性及安全性良好。

本发明克服了现有牙周治疗制剂的缺陷，将抗牙周炎治疗药物包载于纳米粒中，使药物的释放达到缓释效果，同时利用受损组织对纳米粒的粘附及上皮细胞对靶向纳米粒的结合和摄取作用增强药物在牙周袋上皮细胞的滞留能力，提高牙周炎治疗效果。

生物可降解材料在药物递释方面具有缓释作用，具有利用受损组织对纳米粒的粘附及上皮细胞对靶向纳米粒的结合和摄取作用增强药物在牙周袋上皮细胞的滞留能力，提高牙周炎治疗效果的优点。近年来生物可降解材料被广泛地应用于纳米递药系统。由于受损组织对纳米粒子具有较强的粘附能力，见S.Rose等,Nature，505，2014，382的报道，纳米粒子可粘附于牙周袋上皮细胞，被上皮细胞所摄取，成为可长期缓释药物的“药库”，有利于牙周炎的治疗。

本发明的外用纳米载药系统包载有可显著抑制牙周病原菌增殖的抗生素，该载药系统可直接施用牙周袋内，通过靶向结合于牙周袋内上皮细胞增强纳米载药系统的滞留时间，提高牙周病的治疗效果。

本发明在制备技术上解决了现有技术存在的技术难点，以生物可降解材料制备纳米载药系统包载抗牙周病原菌治疗药物，通过调节处方和工艺使得纳米载体对药物有较高的包封率和载药量。本发明的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统经大动物牙周炎模型局部给药后，牙周袋内药动学结果表明，治疗药物可以维持的有效药物浓度时间及治疗效果优于临床常用制剂

具体而言，本发明将抗牙周炎治疗药物米诺环素包载于生物可降解纳米载药系统中，以达到药物在较长时间内缓释的效果。然后，将短肽RGD修饰于纳米粒表面，利用其与牙周上皮细胞中整合素特异性结合的性质使更多载药纳米粒粘附于牙周上皮细胞，延长药物在牙周袋中的滞留时间，使病灶部位药物浓度较长时间维持于有效浓度范围内，提高治疗效果。

整合素是由α(120-185kD)和β(90-110kD)两个不同亚单位组成的二聚体，其广泛地存在于大多数细胞的表面，在多种生命活动中发挥重要作用，例如，介导细胞的粘附、胚胎的形成、细胞的分化、免疫反应、伤口的修复及止血等。RGD是由精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)和天冬氨酸(Asp)构成的一个寡肽氨基酸序列，该序列是整合素受体与细胞外基质配体的结合位点的最小单元。目前，利于整合素在肿瘤细胞表面高表达的特点，RGD相关短肽已广泛应用于抗肿瘤药物递释系统，提高药物对肿瘤的靶向治疗效果。另外，已有研究表明，在牙周炎发病期内，牙周袋上皮细胞β₁型整合素的表达水平显著提高。牙周袋内上皮细胞中α2β1，α3β1，α5β1及α6β1型整合素的表达量显著高于正常牙周上细胞，而且随着牙周炎的恶化其表达水平进一步提升。文献见L.F.DelCastillo等,Journalofperiodontalresearch,31,1996,36。本发明采用短肽RGD对载抗牙周病原菌药物纳米粒表面进行修饰，通过纳米载药系统靶向作用于牙周袋上皮细胞，进一步延长药物制剂在牙周袋中的滞留时间，有利于增强药物的治疗效果。

本发明所述的局部外用抗牙周炎纳米制剂可用于治疗牙龈病、慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、反映全身疾病的牙周炎、坏死性牙周炎、牙周脓肿、伴牙髓病变的牙周炎等牙周疾病。

本发明载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统通过以下步骤制备：

以PEG-PLA为载体，采用乳化溶媒蒸发法制备纳米粒。然后，将短肽c(RGDyC)与Mal-PEG-PLA共价连接得到RGD-PEG-PLA纳米粒，Zeta/激光粒度仪测定纳米粒的平均粒径和电位，透射电镜观察其形态。高效液相HPLC法测定短肽RGD的接枝率及药物的载药量、包封率及释放。

体外培养上皮细胞Calu-3细胞株，通过体外摄取试验评价靶向功能分子短肽RGD是否显著提高了上皮细胞对纳米粒的粘附和摄取。

体外培养上皮细胞Calu-3细胞株，选用不同类型的细胞摄取抑制剂，初步探究上皮细胞对RGD-PEG-PLA纳米粒的摄取机制

建立比格犬牙周炎模型，通过测定给药后龈沟液中的药物溶度对该载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统进行药动学评价

建立比格犬牙周炎模型，通过测定给药后牙周炎病理指标参数的变化情况对该载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统进行药效学评价。

本发明的优点是：

1.对牙周病治疗药物有较高的载药量和包封率，纳米粒对药物的包载积极到了缓释作用也提高了药物的稳定性；

2.本发明以纳米载体作为治疗药物载体，该类药物载体不仅可粘附于牙周上皮细胞，还可被牙周上皮细胞摄取，使部分药物在细胞内缓慢释放，进一步提高疗效。

3.本发明将寡肽RGD连接于纳米载体表面作为功能性靶向基团，使纳米载体可特异性地粘附于牙周上皮细胞，进一步延长了药物在牙周袋中的滞留时间，和上皮细胞对纳米粒的摄取量。

4.本发明制备纳米粒所用材料为生物可降解材料，生物相容性好，且施用方便，患者可自行用药，用药后药物载体自行降解，无需再次取出，利于病变部位的恢复。

附图说明

图1为载抗牙周病原菌药物纳米载药系统靶向作用于牙周上皮细胞缓释效果图。

图2为纳米载药系统的表征图:(A)为透射电镜图；(B)为粒径与电位图。

图3为短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒RGD-NP-MIN中米诺环素体外释放曲线图。

图4为定性测定Calu-3细胞对纳米粒的粘附和摄取图：(A)和(D)为Calu-3细胞对NP的摄取；(B)和(E)无游离RGD时Calu-3细胞对RGD-NP的摄取；(C)和(F)有游离RGD时Calu-3细胞对RGD-NP的摄取。

图5为定量测定Calu-3细胞对纳米粒的粘附和摄取图：(A)细胞摄取流式定量结果；(B)细胞粘附流式定量结果。

图6为不同抑制剂对Calu-3细胞对纳米粒摄取的抑制状况图。

图7为不同米诺环素制剂的体内药动学评价。

具体实施方式

下面通过具体实施方式，结合附图对本发明做进一步说明。

实施例1：短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒RGD-NP-MIN的制备。

(1)乳化溶媒蒸发法制备载米诺环素纳米粒NP-MIN：

(2)精密称量米诺环素(MIN)8mg；甲氧基封端PEG-PLA(MPEG-PLA)36mg；马来酰亚胺基封端PEG-PLA(Mal-PEG-PLA)4mg。将上述药物溶于1mL二氯甲烷；加入到5mL0.6％的胆酸钠溶液中。超声功率200W，探针超声15次，每次5s。40℃旋转蒸发去除去二氯甲烷；纳米粒高速冷冻离心45min，(21000g)，除去上清，纳米粒沉淀采用纯水分散，即得NP-MIN。

(2)短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒RGD-NP-MIN的制备：

将步骤(1)制备的纳米粒与25μg短肽RGD混合，在氮气保护下搅拌2h，将搅拌连接反后的纳米粒高速冷冻离心45min(21000g)，除去上清，纳米粒沉淀采用纯水分散，即得RGD-NP-MIN。

实施例2：短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒(RGD-NP-MIN)的表征。

短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒(RGD-NP-MIN)的粒径与电位：Zeta/激光粒度仪测定纳米粒的平均粒径和Zeta电位，以2％(w/V,pH7.0)磷钨酸负染后在透射电镜下观察RGD-NP-MIN形态。如图2所示，短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒(RGD-NP-MIN)形态规则圆整，平均粒径约为106.0±6.6nm，表面Zeta电位为-15.0±1.0mV。

短肽RGD的接枝效率：以高效液相HPLC法测定上清液中游离RGD的量，按照公式：

接枝效率＝(RGD总投料量-上清液中RGD的量)/RGD总投料量×100％

计算短肽RGD的接枝效率，测得RGD的接枝效率约为95.6％。

米诺环素的载药量和包封率：将RGD-NP-MIN溶于乙腈中破乳，然后加入9倍体积的水涡旋1min，10000rpm条件下离心10min，以高效液相HPLC法测定上清液中米诺环素的量，按照公式：

载药量＝上清中米诺环素的量/纳米材料总投料量×100％

包封率＝上清中米诺环素的量/米诺环素总投料量×100％

计算得米诺环素的载药量和包封率分别为8.8±0.3％和43.2±1.5％。

短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒RGD-NP-MIN中米诺环素的体外释放：以透析袋法测定RGD-NP-MIN在PBS(0.01M,pH＝7.4)中米诺环素的体外释放，结果显示RGD-NP-MIN的释药时间长达14天，显示出明显的缓释效果，见图3。

实施例3：上皮细胞对RGD-NP的粘附和摄取及摄取机制

上皮细胞对RGD-NP的粘附：将Calu-3细胞以1×10⁵的密度接种于24孔板中培养24h，待细胞汇合度达80％左右后，加入香豆素-6标记的NP和RGD-NP(0.5mg/ml)，4℃条件下与预先加入或没加入游离RGD(100μg/ml)的细胞共孵育30min。然后，用胰蛋白酶消化细胞，流式细胞法比较上皮细胞对NP和RGD-NP的粘附情况。结果表明上皮细胞对RGD-NP的粘附量是NP的5倍，游离RGD可抑制上皮细胞对RGD-NP的粘附，见图4。

上皮细胞对RGD-NP的摄取：将Calu-3细胞以1×10⁵的密度接种于24孔板中培养24h，待细胞汇合度达80％左右后，加入香豆素-6标记的NP和RGD-NP(0.5mg/ml)，37℃条件下与预先加入或没加入游离RGD(100μg/ml)的细胞共孵育1h，PBS(0.01M,pH＝7.4)漂洗三次。用4％的多聚甲醛固定细胞，然后分别用荧光显微镜和流式细胞仪定性和定量测定上皮细胞对RGD-NP的摄取情况。结果如图5所示，上皮细胞对RGD-NP的摄取是其对NP的摄取量的3.1倍，游离RGD可抑制上皮细胞对RGD-NP的摄取。

上皮细胞对RGD-NP的摄取机制：将Calu-3细胞以2×10⁵的密度接种于12孔板中培养48h。待细胞与DMEM预孵育30min后，每孔中加入NP或RGD-NP(0.5mg/ml)和不同种类的细胞摄取抑制剂，以DMEM为对照组，孵育1h，冰PBS(0.01M,pH＝7.4)漂洗三次。用胰蛋白酶消化细胞，将收集到的细胞分散于0.5mlPBS(0.01M,pH＝7.4)中，流式细胞仪分析实验结果显示，与对照组相比各类细胞摄取抑制剂均对上皮细胞对RGD-NP的摄取产生一定影响(**P<0.01)，见图6。

实施例4：短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒(RGD-NP-MIN)的体内药动学评价

毕格犬慢性牙周炎模型的建立：采用线栓法建立毕格犬慢性牙周炎模型。15kg左右的毕格犬采用戊巴比妥纳(30mg/kg)麻醉，固定在手术台上，在左上第2，第3，第4磨牙，左下第1，第3，第4磨牙切开牙龈，深度3mm，将牙科钢线固定在牙齿颈部。术后3天内每2天给予曲马多减轻动物的痛苦。线栓固定后每天给予软食物以促进牙菌斑的形成。每周检查1次临床牙周炎指数以评价牙周炎的形成状况。

RGD-NP-MIN的体内药动学评价：8周后毕格犬慢性牙周炎模型形成。将患病牙齿随机分为4组，每组6个牙齿。动物麻醉后各组分牙周袋内注射50μLNP-MIN、RGD-NP-MIN、浓度为2％的米诺环素(MIN)溶液。设定时间30s，采用无菌滤纸条采集龈沟液。测定滤纸条的增重，采用牛血清白蛋白绘制质量-体积曲线，换算龈沟液的体积。滤纸条上的米诺环素采用500μL甘氨酸溶液洗脱，洗脱液加四环素内标溶液(10μL)，HPLC法测定洗脱液样品中米诺环素浓度。以洗脱液中的米诺环素含量除以龈沟液的体积，即得龈沟液内米诺环素的浓度。以龈沟液中米诺环素浓度对时间作图，绘制龈沟液中米诺环素的药动学曲线。如图7所示，给药后米诺环素溶液组龈沟液中米诺环素浓度迅速下降，2天后浓度低于米诺环素的中位有效浓度1μg/mL。组龈沟液中MIN浓度随时间缓慢下降，药物>1μg/mL作用时间8天，表明Periocline有较好的药物缓释作用。而NP-MIN组和RGD-NP-MIN组药物缓释时间更长，药物作用时间分别长达12天和14天，显著高于组。表明RGD-NP-MIN在局部应用后可在牙周袋中较长时间地保持较高的药物浓度，具有很好的缓释作用。药时数据采用DAS2.0进行分析，计算米诺环素药动学参数如表1所示，各试验组龈沟液中米诺环素的消除符合二室模型。与米诺环素溶液组相比，NP-MIN组、RGD-NP-MIN组和组的药时曲线下面积AUC_(0-∞)，平积滞留时间MRT_(0-∞)，半衰期t_1/2，消除速度常数k，清除率Cl有显著性差异(P<0.01)。RGD-NP-MIN组的AUC_(0-∞)、MRT_(0-∞)、t_1/2分别是米诺环素溶液组的6.22、2.98、3.91倍。RGD-NP-MIN组的AUC_(0-t)、MRT_(0-t)、t_1/2分别是组的1.77、1.18、1.26倍，并且存在显著性差异(p<0.05)，表明RGD-NP-MIN比具有更高的药物生物利用度和药物作用效果。

表1不同米诺环素制剂局部给药后牙周袋内药物的药动学参数

Datapresentedasthemean±standarddeviation

^ap<0.05vs

^bp<0.01vsMINsolution.

^bp<0.05vsNP-MIN.

实施例5：短肽RGD修饰载米诺环素纳米粒RGD-NP-MIN的体内药效学评价。

毕格犬慢性牙周炎模型形成后，将15只慢性牙周炎模型毕格犬随机分为5组。动物麻醉后各组分牙周袋内注射50μL生理盐水，米诺环素MIN的N-甲基吡咯烷酮NMP，2％溶液，NP-MIN、RGD-NP-MIN、给药后定期检查临床牙周炎指数：牙周袋深度PPD，牙菌斑版指数PI，牙龈指数GI，根据指数的变化评价牙周炎的治疗效果。如表2所示，给药7天后，NP-MIN组、RGD-NP-MIN组和组的牙周袋深度PPD，牙菌斑版指数PI，牙龈指数GI的改善情况均显著高于米诺环素溶液组p<0.01。第14天，RGD-NP-MIN组牙周袋深度PPD，牙菌斑版指数PI，牙龈指数GI的改善情况显著高于NP-MIN组和组p<0.05，表明RGD-NP-MIN在治疗牙周炎方面具有良好的效果。

表2不同制剂治疗后牙周炎指数的变化

Datapresentedasthemean±standarddeviation

^ap<0.05vs

^bp<0.01vsMINsolution.

^bp<0.05vsNP-MIN.

以上具体实例和附图仅是为了说明本发明，并不完全代表本发明。本领域技术人员可以在本发明的范围内对本发明做出各种修改和变化，这些修改和变化，也包括在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统，由纳米载体、靶向功能分子及抗牙周病原菌药物组成,其特征在于:纳米载体为生物可降解高分子材料、表面聚乙二醇修饰的纳米粒、脂质体、聚合物胶束、固体脂质纳米粒；靶向功能分子为短肽RGD及其衍生物，其共有的氨基酸序列为Arg-Gly-Asp；抗牙周病原菌治疗药物包括米诺环素、多西环素、美他环素、四环素、甲硝唑、替硝唑、羟氨苄青霉素、头孢菌素类、克拉维酸、氨苄青霉素红霉素、螺旋霉素、罗红霉素、阿齐霉素、林可霉素、克林霉素、万古霉素、利福平中的一种或两种以上的药物组合；递药系统的粒径为10-1000nm；载体表面的活性基团为马来酰亚胺基还巯基、氨基、羧基、生物素或亲和素中的任一种；递药系统是以牙周上皮细胞上的整合素为靶点。

2.根据权利要求1所述的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统，其特征在于:生物可降解高分子材料为聚乳酸PLA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚己内酯PCL、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺DSPE、聚乙醇酸PGA、聚酸酐PSPA、聚碳酸酯PC、聚对二氧环己酮PDS、聚氰基丙烯酸烷酯PACA、聚甲基丙烯酸甲酯PMMA、聚羟基丁酸PHB、聚原酸酯POE、聚氨基酸、白蛋白、明胶、壳聚糖等及其嵌段共聚物的一种。

3.根据权利要求1所述的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统，其特征在于:所述聚乙二醇分子量为2000—5000Da,优选为聚乙二醇分子量为1000—20000Da。

4.根据权利要求1所述的载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统，其特征在于:所述聚乳酸分子量为5000—50000Da。

5.一种载抗牙周病原菌药物的外用纳米载药系统的制备方法，步骤如下:

(1)以权利要求2所述的生物可降解高分子材料为原料，以PEG-PLA为载体，采用乳化溶媒蒸发法制备纳米粒；

(2)将步骤(1)产物RGDyC短肽c与Mal-PEG-PLA共价连接得到RGD-PEG-PLA纳米粒；

(3)将步骤(2)产物放入Zeta/激光粒度仪测定纳米粒的平均粒径和电位；

(4)将步骤(3)产物使用透射电镜观察形态；

(5)将步骤(4)产物采用高效液相HPLC法测定短肽RGD的接枝率及药物的载药量、包封率及释放。