CN105051016A - 苯达莫司汀衍生物及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及苯达莫司汀酯和苯达莫司汀酰胺以及它们用于治疗癌症的用途：(I)其中R1是C6-C24烷基或聚乙二醇；并且(II)其中R2是C1-C24亚烷基；并且R3是-COOC1-3烷基；或者R2-R3是C1-C24烷基；或其药用可接受的盐形式

Description

苯达莫司汀衍生物及其使用方法
相关申请的交叉参考
本申请要求2012年11月12号提交的美国临时申请号61/725,213和2013年3月12号提交的美国临时申请号61/776,951的权益，所述申请的整体通过参考并入本文中。
技术领域
本发明涉及用于治疗癌症的苯达莫司汀的酯和酰胺。
背景技术
苯达莫司汀即4-[5-[双(2-氯乙基)氨基]-1-甲基苯并咪唑-2-基]丁酸：
作为盐酸盐在RIBOMUSTIN和TREANDA的商品名下市售，并且是已经成功用于治疗如下疾病的化合物：血癌例如慢性淋巴细胞性白血病，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。这些产品作为静脉内输注液进行施用。
然而，苯达莫司汀治疗固体肿瘤的用途被该化合物在水性环境中的化学不稳定性所限制。的确，已报道苯达莫司汀在体内具有仅约6-10分钟的半衰期。结果，苯达莫司汀的循环水平没有维持足够长的时间，以使得苯达莫司汀到达循环系统外的肿瘤。需要增加苯达莫司汀循环时间的方法。
发明内容
本发明涉及式I的化合物或其药用可接受的盐形式：
其中R1是C6-C24烷基或聚乙二醇。还描述了使用式I的化合物治疗固体和非固体癌瘤的方法。
本发明还涉及式IA的化合物或其药用可接受的盐形式用于治疗固体和非固体癌瘤的用途：
其中R是C1-C24烷基或聚乙二醇。
本发明还涉及式II的化合物或其药用可接受的盐形式：
其中R2是C1-C24亚烷基；并且R3是-COOC1-3烷基；或者R2-R3是C1-C24烷基。使用式II的化合物治疗固体和非固体癌瘤的方法。
包含式I或IA的化合物的纳米粒子和包含这些纳米粒子的冻干组合物也在本发明的范围内。
附图说明
图1示出了CD-1小鼠中本发明特定实施方式的血浆水平，以3mg/kg静脉注射给药，在3％DMSO、30％Solutol、100μL中。
图2示出了苯达莫司汀盐酸盐和本发明的特定实施方式对具有MDA-MB-231移植瘤的小鼠的肿瘤体积的影响。
图3示出了在使用本发明的特定实施方式治疗MDA-MB-231乳腺肿瘤S9后随时间观察到的苯达莫司汀的量。
图4示出了在使用本发明的特定实施方式治疗H460非小细胞肺肿瘤S9后随时间观察到的苯达莫司汀的量。
图5示出了使用不同的制剂在大鼠中给药本发明的一个实施方式后，大鼠中苯达莫司汀的血浆水平。
图6示出了使用不同的制剂在大鼠中给药本发明的一个实施方式后，大鼠中所述实施方式的血浆水平。
图7示出了本发明的一个实施方式苯达莫司汀C14酯的纳米粒子的低温TEM图像。
图8示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的血浆水平。
图9示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的血液水平。
图10示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的脑水平。
图11示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的肝水平。
图12示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的肺水平。
图13示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的脾水平。
图14示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯后，苯达莫司汀和本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体和纳米粒子制剂)的肾水平。
图15示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药后，在施用本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为液体制剂)后，大鼠中苯达莫司汀的血浆、血液和器官水平。
图16示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯(作为液体制剂)后，大鼠中本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯的血浆、血液和器官水平。
图17示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药后，在施用本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯(作为纳米粒子制剂)后，大鼠中苯达莫司汀的血浆、血液和器官水平。
图18示出了在以30mg/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药苯达莫司汀C12酯(作为纳米粒子制剂)后，大鼠中本发明的一个实施方式苯达莫司汀C12酯的血浆、血液和器官水平。
图19示出了在以3mg当量/kg静脉注射(1mL/kg)向大鼠给药后，在施用本发明的实施方式苯达莫司汀PEG-2000酯和苯达莫司汀PEG-5000酯后，大鼠中苯达莫司汀的血浆水平。与TREANDA进行比较。
图20示出了在以3mg/kg静脉注射(3％DMSO，30％Solutol)给药本发明的实施方式后，CD-1小鼠中苯达莫司汀的血浆水平。
图21示出了在52,000x的放大率下的本发明的代表性纳米粒子实施方式。在样品中观察到：显得比周围的缓冲液更加均匀致密的球形粒子(最左的箭头)，背景中的小粒子(最右的箭头)。插图以更大比例显示由最左边的箭头表示的两个粒子。在左图中的十字之间的距离为28nm，在右边插图中的十字之间的距离为43nm。比例尺：200nm。
图22示出了在52,000x的放大率下的本发明的代表性纳米粒子实施方式。在样品中观察到：显得比周围的缓冲液更加均匀致密的球形粒子(最左的箭头)，背景中的小粒子(最右的箭头)。插图以更大比例显示由最左边的箭头表示的两个粒子。在左图中的十字之间的距离为28nm，在右边插图中的十字之间的距离为43nm。比例尺：200nm
图23示出了在施用苯达莫司汀和苯达莫司汀C12酯纳米粒子后的肿瘤体积。
图24示出了在施用苯达莫司汀和苯达莫司汀C12酯纳米粒子后的体重测量。
具体实施方式
已经发现，将苯达莫司汀的羧酸部分转化为C1-C24烷基酯基团、聚乙二醇酯基团或C1-C24烷基酰胺基团产生提供苯达莫司汀较长循环时间的化合物。尽管不希望束缚于任何特定理论，但认为酯或酰胺部分降低了苯达莫司汀分子的溶解度，产生针对水性环境的保护效果。随着时间推移，酯或酰胺部分被水解，从而暴露出活性苯达莫司汀分子的羧酸部分。整体结果是随着时间推移产生了苯达莫司汀。
通过改变酯/酰胺部分中的碳数目，可以修饰所得苯达莫司汀衍生物的亲脂性。增加的亲脂性与酯/酰胺的增加的稳定性和苯达莫司汀更长的循环时间相关。
在本发明范围内的是式IA的化合物或其药用可接受的盐形式：
其中R是C1-C24烷基或聚乙二醇。式IA的化合物对于治疗患者中的固体或非固体癌瘤是有用的。
可将本发明的化合物配制成包含如下的药物组合物：式IA的化合物或其药用可接受的盐形式，和药用可接受的载体或稀释剂。在本发明的优选药物组合物中，R是C10-C24烷基。优选地，R是C10烷基。其中R是C12烷基的情形也是优选的。其它优选实施方式包括其中R是C14烷基的实施方式。其中R是C16烷基的组合物也是优选的。
本发明的其它实施方式包括包含式IA的化合物的纳米粒子。
同样在本发明范围内的是治疗患者中的固体或非固体癌瘤的方法，所述方法包括向患者施用式IA的化合物。优选的固体或非固体肿瘤包括慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤(T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤)、侵袭性非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌或肺癌(例如，小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))。据预测，也可用本发明的化合物和组合物治疗其它固体和非固体癌瘤，例如肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、睾丸癌、黑素瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。据预测，也可用本发明的化合物治疗其它固体和非固体癌瘤，例如乳腺癌、胰腺癌、和胃癌。
本发明的优选化合物是式I的化合物或其药用可接受的盐形式：
其中R1是C6-C24烷基或聚乙二醇。式I的化合物对于治疗患者中的固体或非固体癌瘤是有用的。
在优选实施方式中，R1是C8-C24烷基。在其它实施方式中，R1是C10-C24烷基。在另外的其它实施方式中，R1是C12-C24烷基。在还有的其它实施方式中，R1是C14-C24烷基。其中R1是C16-C24烷基的式I的那些化合物也是优选的。在其它实施方式中，R1是C18-C24烷基。
在其它实施方式中，R1是C10烷基。在另外的其它实施方式中，R1是C12烷基。在还有的其它实施方式中，R1是C14烷基。在其它实施方式中，R1是C16烷基。
同样在本发明范围内的是包含式I的化合物和药用可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
本发明的其它实施方式包括包含式I的化合物的纳米粒子。
同样在本发明范围内的是治疗癌症的方法，所述方法包括向患者施用式I的化合物。一些癌症，包括涉及固体肿瘤的癌症和不涉及固体肿瘤的癌症，可以对这种治疗作出相应。这些癌症包括慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤(T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤)、侵袭性非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌或肺癌(例如，小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC))。据预测也可用本发明的化合物和组合物治疗的其它癌症是特征为存在固体肿瘤的癌症，包括肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、睾丸癌、黑素瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。据预测，也可用本发明的化合物治疗其它固体和非固体癌瘤，例如乳腺癌、胰腺癌、和胃癌。
本发明特别优选的化合物包括：
同样在本发明范围内的是式II的化合物或其药用可接受的盐形式：
其中R2是C1-C24亚烷基；并且R3是-COOC1-3烷基；或者R2-R3是C1-C24烷基。式II的化合物对于治疗患者中的固体或非固体癌瘤是有用的。
在式II的化合物的优选实施方式中，R2-R3是C8-C24烷基。在其它实施方式中，R2-R3是C10-C24烷基。在还有的其它实施方式中，R2-R3是C12-C24烷基。在另外的其它实施方式中，R2-R3是C14-C24烷基。当R2-R3是C16-C24烷基时也是优选的。在其它实施方式中，R2-R3是C18-C24烷基。
优选地，对于式II的化合物来说，R2-R3是C10烷基。当R2-R3是C12烷基时也是优选的。在其它实施方式中，R2-R3是C14烷基。在另外的其它实施方式中，R2-R3是C16烷基。
在其它实施方式中，R2是C2亚烷基并且R3是-COOCH3。
式II的优选化合物包括：
以及
同样在本发明范围内的是包含式II的化合物和药用可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
本发明的其它实施方式包括包含式II的化合物的纳米粒子。
在本发明的一个实施方式中，使用本发明的化合物和组合物治疗对一种或多种化疗剂如烷化剂耐受的患者。患者可能耐受的示例性烷化剂包括：氮芥类；乙撑亚胺类(ethylenimes)；烷基磺酸酯类；三氮烯类；哌嗪类；和亚硝基脲类。下面列出了患者对其可以变得耐受的各种化疗剂的更多具体实例。对这些化疗剂中的一种或多种耐受的患者将通过利用本发明的化合物和组合物进行治疗而受益。
氮芥类
在商品名下市售的二氯甲基二乙胺通过注射给药来治疗霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤，并作为乳腺癌和肺癌的姑息性治疗，并且作为局部治疗给药而用于蕈样真菌病的皮肤损伤(皮肤T细胞淋巴瘤)。
在商品名下销售的异环磷酰胺被用来治疗霍奇金和非霍奇金淋巴瘤两者，以及复发性睾丸癌和生殖细胞肿瘤、肉瘤、肺癌、膀胱癌、头颈癌和宫颈癌。
美法仑是在品牌名下销售的化疗药，并且也称作L-PAM或苯丙氨酸氮芥。它用于治疗多发性骨髓瘤、卵巢癌、成神经细胞瘤、横纹肌肉瘤和乳腺癌。
苯丁酸氮芥以商品名销售，并且被最广泛用于治疗慢性淋巴细胞性白血病，包括淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤的恶性淋巴瘤，和霍奇金病。其也已经被成功地用于治疗非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌和睾丸癌、沃尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’smacroglobulinemia)、血小板增多症和绒毛膜上皮癌。
环磷酰胺作为或市售，并且被用于治疗霍奇金和非霍奇金淋巴瘤，伯基特淋巴瘤(Burkitt’slymphoma)，慢性淋巴细胞性白血病，慢性髓细胞性白血病，急性髓细胞性白血病，急性淋巴细胞性白血病，T细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤，成神经细胞瘤，视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，尤文氏肉瘤(Ewing’ssarcoma)；乳腺癌，睾丸癌，子宫内膜癌，卵巢癌，和肺癌。
亚硝基脲类
链脲菌素在商品名下销售，并且被用于治疗胰岛细胞胰腺癌。
卡莫司汀也称为或BCNU，并且被用于一些种类的脑瘤、成胶质细胞瘤、脑干胶质瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、室管膜瘤，和转移性脑瘤。其还被用于治疗多发性骨髓瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤、肺癌和结肠癌。
洛莫司汀，也被称为CCNU或被用于治疗原发性脑瘤和转移性脑瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤，并且还已经被用于黑素瘤、肺癌和结肠癌。
烷基磺酸酯类
在商品名和下销售的白消安被用于治疗慢性骨髓性白血病。
三氮烯类
达卡巴嗪在商品名下销售，并且被用于治疗转移性恶性黑素瘤、霍奇金病、软组织肉瘤、成神经细胞瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、胰岛细胞癌和甲状腺髓样癌。
替莫唑胺在商品名下销售，并且被用于治疗特定类型的脑瘤间变性星形细胞瘤和多形性成胶质细胞瘤。
乙撑亚胺类
在商品名下已知的噻替派是用于治疗乳腺癌、卵巢癌、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤的烷化剂。
六甲蜜胺在商品名下销售，并且还被称作六甲基三聚氰胺或HMM。其被用于治疗卵巢癌。
当在本文中使用时，“C1-C24烷基”指直链的或支链的、含有1～24个碳原子的饱和烃基。代表性烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正十二烷基等。在本发明的范围内，“C1-C24烷基”也包括“环烷基”，所述环烷基指单环、双环和三环饱和烃，例如环丙基、环丁基、环戊基、环丁基、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚基、金刚烷基等。
当在本文中使用时，也指作“PEG”的“聚乙二醇”指通式H(OCH2CH2)nO-或H(OCH2CH2)nOCH3的聚合物，其中n为至少4。优选的PEG具有约200～约5000道尔顿的平均分子量，更优选的PEG为约2000～约5000道尔顿。
当在本文中使用时，“药用可接受的载体或稀释剂”指生理相容的溶剂、分散介质、包衣剂、填充剂、稳定剂、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。药用可接受的载体的实例包括以下一种或多种：水，盐水，磷酸盐缓冲的盐水，右旋糖，甘油，乙醇，糖如海藻糖和蔗糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，糖和多元醇的混合物，以及氯化钠。药用可接受的载体还可包括辅助物质如润湿剂或乳化剂、防腐剂和缓冲剂。
当在本文中使用时，“药物组合物”指适合在医药或兽用应用中施用的组合物。这种化合物优选包括本发明的化合物与一种或多种载体和/或稀释剂的组合。这种组合物也被称作“制剂”。
当在本文中使用时，“施用”指可以将本发明的化合物递送至患者的本领域内的任何方法。优选的施用方法包括局部施用和全身施用，所述局部施用是将本发明的化合物直接施用到其中需要所述化合物的效果的位置处。施用方法的实例包括但不限于口服施用、经肠施用、舌下施用、锁骨下施用、皮下施用、经鼻施用、静脉内施用、动脉内施用、肌内施用和腹膜内施用。
当在本文中使用时，“固体肿瘤”指作为组织的局部肿块的恶性肿瘤。固体癌瘤的实例包括淋巴瘤、肉瘤、和癌，并且包括乳腺癌、脑癌、骨癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌等。
当在本文中使用时，“非固体癌瘤”最常见地是指血癌，即血液的恶性癌症。非固体癌瘤的实例包括慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤(T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤)、多发性骨髓瘤等。
当在本文中使用时，“纳米粒子”指如由MalvernZetasizer测定的，平均粒径为约0.2μm以下、优选为约0.1μm以下的粒子。
实验部分
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酸甲酯(苯达莫司汀C1酯)的制备：
方法A：向装配有顶置式搅拌器、具有氮气吹扫的冷凝器和具有温度控制器的热电偶的1L三颈圆底烧瓶装载4-(5-氨基-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-丁酸甲酯(10.2g，41.2mmol，1.0当量)和氯乙酸(81.9g，866mmol)以及20mL的无水四氢呋喃(THF)。在自来水浴中搅拌该浆料以允许所有固体溶解。在25分钟内通过另外的漏斗缓慢添加硼烷-THF(288mL，288mmol)。当完成BH3-THF的添加后，在室温下搅拌所得反应溶液1.5小时，然后利用加热幔(heatmantle)在58℃下加热45分钟。将反应冷却并在室温下保持过夜，然后用甲醇(10mL)淬灭。通过在旋转蒸发仪上蒸发将所得溶液浓缩至约三分之一重，并且在冰水浴中用氢氧化钠水溶液中和至pH8-9。通过真空过滤收集固体，用水(200mL)洗涤，然后用稀碳酸氢钠水溶液(50mL)重新浆化20分钟。在过滤后利用室内真空(housevacuum)在室温下干燥过夜，得到棕褐色固体(9.6g，63％产率，93A％纯度)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，3.70(brs，8H)，3.66(s，3H)，3.59(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz，2H)，2.48(t，J＝7.4Hz，2H，与DMSO部分重叠)，2.01(五重峰，J＝7.4Hz，2H)；LC/MS(ESI，m/z)372(M+1)，mp60-63℃已分解。
方法B：向装配有加热幔、热电偶、冷凝器、氮气入口/出口和顶置式搅拌器的2L三颈玻璃容器装载苯达莫司汀HCl(50.0g，126.7mmol，1.0当量)、甲醇(500mL)和甲磺酸(2.47mL，38.1mmol)。将反应混合物加热至回流并在65℃下搅拌1小时。将反应溶液冷却至40℃并在真空下浓缩。将水(500mL)添加至浓缩的残余物，用饱和的NaHCO3水溶液(150mL)在1.5小时内将混合物中和至pH6。产物经过滤收集，用水(150mL)洗涤并在40℃下真空干燥，得到白色粉末固体44.2g(94％产率)，经HPLC测定纯度为98.4A％。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酸乙酯(苯达莫司汀C2酯)的制备：
方法A：向装配有加热幔、热电偶、冷凝器、氮气入口/出口和顶置式搅拌器的1L三颈玻璃容器装载苯达莫司汀HCl(30.0g，76mmol，1.0当量)、乙醇(300mL)和甲磺酸(1.48mL，22.8mmol)。将反应混合物在70℃下加热1小时。将反应溶液冷却至40℃并在真空下浓缩。将水(300mL)添加至浓缩的残余物，用饱和的NaHCO3水溶液(115mL)在1.5小时内将混合物中和至pH6。产物经过滤收集，用水(100mL)洗涤并在40℃下真空干燥，得到白色固体28.6g(97％产率)，经HPLC测定纯度为99.2A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，4.04(五重峰，J＝7.12Hz，2H)，3.70(brs，8H)，3.66(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz，2H)，2.45(t，J＝7.4Hz，2H，与DMSO部分重叠)，2.00(五重峰，J＝7.4Hz，2H)，1.18(t，J＝7.12Hz，3H)。
方法B：向装配有加热幔、热电偶、冷凝器、氮气入口/出口和顶置式搅拌器的500mL三颈玻璃烧瓶装载4-(5-氨基-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-丁酸乙酯(6.4g，1.0当量)、氯乙酸(42.5g)和四氢呋喃(THF，13mL)。在室温下，将所得混合物在水浴中搅拌1.5小时。在20分钟内添加硼烷-THF(150mL)。一旦完成装载，则将反应混合物加热至55-58℃并搅拌1.5小时。经HPLC的进程分析显示出94A％的期望产物。将反应冷却至室温并套入下一步的水解从而产生苯达莫司汀。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸丁酯(苯达莫司汀C4酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、1.9g(2.35mL，25.6mmol，1.01当量)的1-丁醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到棕色油。用25mL的MDC研制所述油，并且将固体杂质经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液真空浓缩至干，从而得到9.5g(22.8mmol，90％)作为清澈浅棕色油的产物，HPLC纯度为94.5A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.32Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.36，8.8Hz，1H)，4.05(t，J＝6.76Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.1Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，2H)，0.89(t，J＝4.56Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸己基酯(苯达莫司汀C6酯)的制备：
方法A：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、2.62g(3.22mL，25.6mmol，1.01当量)的1-己醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到棕色油。用25mL的MDC研制所述油，并且将固体杂质经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液真空浓缩至干，从而得到8.91g(20.1mmol，79％)作为清澈浅棕色油的产物，HPLC纯度为91.9A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.32Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.36，8.8Hz，1H)，4.05(t，J＝6.76Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.1Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，6H)，0.89(t，J＝4.56Hz，3H)。
方法B：向装配有顶置式搅拌器、热电偶和氮气入口/出口的一升4颈圆底烧瓶装载30g(76.0mmol)的苯达莫司汀盐酸盐和300mL的二氯甲烷。开始搅拌并通过注射器添加10.6mL(7.69g，76.0mmol)的三乙胺，然后在室温下搅拌15分钟，然后添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，21.86g，114mmol)和正己醇(9.57mL，7.84g，76.8mmol)。在搅拌20分钟后，该浑浊的白色反应混合物变为清澈溶液。在室温下继续搅拌22.5小时，在30℃继续搅拌1小时，直到经HPLC分析反应完全。装入DI水(300mL)以淬灭反应，并使用1NHCl将pH调节至6。进行分层，用二氯甲烷(100mL)萃取水层，然后与有机相合并并在硫酸钠上干燥。在过滤和真空下浓缩至干后，得到了清澈黄色油，所述黄色油通过柱色谱(含25％～50％乙酸乙酯的庚烷溶液)纯化。回收了共计16.5g(37.3mmol，49.1％)的黄色稠油，HPLC纯度为99.1A％。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸辛酯(苯达莫司汀C8酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、3.33g(4.03mL，25.6mmol，1.01当量)的1-辛醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到棕色油。用25mL的MDC研制所述油，并且将固体杂质经真空过滤移除并用5mL的MDC洗涤。将滤液真空浓缩至干，从而得到9.7g(20.5mmol，81％)作为清澈浅棕色油的产物，HPLC纯度为91.9A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.28Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.4，8.76Hz，1H)，4.05(t，J＝6.8Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.44Hz，2H)，2.49(t，J＝7.12Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，10H)，0.89(t，J＝6.72Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸癸酯(苯达莫司汀C10酯)的制备：
方法A：向装配有搅拌子、热电偶和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载10.0g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、4.9mL(4.08g，25.6mmol，1.01当量)的癸醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的二氯甲烷和0.31g(2.53mmol，0.1当量)的N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)。将反应混合物在室温下搅拌18小时，HPLC分析显示反应在此时间完成。固体通过真空过滤移除，将滤液用DI水(2X100mL)和饱和碳酸氢钠(1X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥。将有机相过滤以移除干燥剂，然后真空浓缩至干，从而得到9.6g(19.2mmol，75.9％)作为低熔点白色固体的期望产物，HPLC纯度为94.1A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.32Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.4，8.76Hz，1H)，4.05(t，J＝6.76Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.08Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，14H)，0.87(t，J＝6.68Hz，3H)。
方法B：向装配有磁力搅拌子、热电偶和氮气入口/出口的250mL4-颈圆底烧瓶装载10g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐和100mL的二氯甲烷。开始搅拌并通过注射器添加3.53mL(2.56g，25.3mmol)的三乙胺，然后在室温下搅拌15分钟，然后添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，7.28g，38mmol)和正癸醇(4.88mL，4.04g，25.5mmol)。在搅拌20分钟后，该浑浊的白色反应混合物变为清澈溶液。在室温下继续搅拌20小时，直到经HPLC分析反应完全。装入DI水(100mL)以淬灭反应，并使用1NHCl将pH调节至6-7。进行分层，水层用二氯甲烷(25mL)萃取，然后与有机相合并并在硫酸钠上干燥。在过滤和真空下浓缩至干后，得到了清澈黄色油，所述黄色油通过柱色谱(含2％～60％乙酸乙酯的庚烷溶液)纯化。回收了共计11.2g(22.42mmol，88.6％)的黄色稠油，HPLC纯度为98.9A％。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸十二烷基酯(苯达莫司汀C12酯)的制备：
方法A：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、4.77g(25.6mmol，1.01当量)的1-十二烷醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到灰白色半固体。用25mL的MDC研制这一固体，并且将固体杂质经真空过滤移除并用5mL的MDC洗涤。将滤液真空浓缩至干，从而得到11.53g(21.9mmol，86.4％)作为灰白色半固体的产物，HPLC纯度为93.7A％。
方法B：向装配有热电偶、加热器/冷却器、氮气入口/出口、添加漏斗和真空管路的20升带夹套的圆柱形ChemGlass反应容器装载苯达莫司汀(374g，1.04mol，1.0当量)的游离碱、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，300g，1.57mol，1.5当量)、和二氯甲烷(DCM，3.74L，10倍体积)。在搅拌的同时添加1-十二烷醇(292.1g，1.57mol，1.5当量)。将反应混合物加热，然后在27℃下搅拌4小时。将该批次冷却并在20℃下保持过夜。然后，将该批次用3.75L的水洗涤并分层。用1.2L的二氯甲烷对水性部分进行再萃取，将合并的二氯甲烷部分在Na2SO4上干燥。在过滤移除干燥剂后，将滤液在真空下浓缩，从而制得作为粗油的产物。使用374g的苯达莫司汀的游离碱在相同条件下进行这一反应的另一批次。将来自两批次的粗产物合并，与4494mL的庚烷混合并加热至45-50℃。允许所得溶液缓慢冷却至室温，析出灰白色固体。在室温下对该浆料搅拌过夜，通过真空过滤在10℃下分离固体。用1L的庚烷洗涤湿饼，并用2.5L的庚烷将其在20-22℃下重新浆化过夜。产物经过滤收集并每次用500mL的庚烷洗涤两次。在20-22℃下将湿饼干燥过夜，得到653g(59％产率)通过HPLC测定为99.0A％的白色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，6.92(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，3.99(t，J＝6.64Hz，2H)，3.70(brs，8H)，3.65(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz,2H)，2.45(t，J＝7.4Hz，2H，与DMSO部分重叠)，2.01(五重峰，J＝7.4Hz，2H)，1.54(五重峰，J＝6.9Hz，2H)，1.24(m，18H)，0.85(t，J＝6.8Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸十四烷基酯(苯达莫司汀C14酯)的制备：
方法A：向装配有搅拌子、热电偶和氮气入口/出口的500mL三颈圆底烧瓶装载10.0g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、6.5g(30.4mmol，1.2当量)的十四烷醇、6.3g(30.4mmol，1.2当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的二氯甲烷和0.62g(5.1mmol，0.2当量)的N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)。将反应混合物在室温下搅拌20小时，HPLC分析显示反应在此时间完成。通过真空过滤移除固体，用50mL的二氯甲烷洗涤湿饼，然后将滤液真空浓缩至干。用50mL的二氯甲烷研制所得淡橙色油，通过真空过滤移除不想要的固体。再次，将滤液真空浓缩至干，从而得到16.5g的半固体，通过1HNMR显示其包含十四烷醇和DMAP。将残余物在150g的230-400目硅胶60上进行色谱分离，用1500mL的MDC、1000mL的0.5％甲醇/MDC和2000mL的1％甲醇/MDC洗脱，收集100-150mL级分。将含有期望产物的级分合并，并真空浓缩至干。再次，用30mL的MDC研制残余物，通过过滤移除不想要的固体。将滤液真空浓缩，从而得到5.0g(9.2mmol，36.4％)作为浅紫色固体的期望产物，纯度为95.0A％。
方法B：向装配有热电偶、冷凝器、氮气入口/出口和顶置式机械搅拌器的150mL三颈玻璃容器装载苯达莫司汀的游离碱(16.0g，44.6mmol，1.0当量)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，9.42g，49.2mol)、1-十四烷醇(10.6g，49.2mmol)和二氯甲烷(120mL)。将反应混合物在27℃下搅拌过夜。将反应溶液冷却至室温并用100mL的水洗涤。在搅拌的同时加入1MHCl水溶液以将水层的pH调节至pH3-4。进行分层。用100mL的二氯甲烷对水性部分进行再萃取，将合并的二氯甲烷部分在MgSO4上干燥。在过滤移除干燥剂后，将滤液真空浓缩，从而产生作为蜡状黄色固体的产物。用80mL的庚烷将该固体在室温下过夜浆化。通过过滤收集产物并干燥，得到20.6g(83.4％产率)的白色固体，HPLC纯度为97.2A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，6.91(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，3.98(t，J＝6.64Hz，2H)，3.70(brs，8H)，3.66(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz,2H)，2.45(t，J＝7.4Hz，2H，与DMSO部分重叠)，2.01(五重峰，J＝7.3Hz，2H)，1.54(m，2H)，1.23(m，18H)，0.85(t，J＝7.12Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸十五烷基酯(苯达莫司汀C15酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、5.85g(25.6mmol，1.01当量)的十五烷醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)进行洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到灰白色固体。用25mL的MDC研制这一固体，通过真空过滤移除不想要的固体杂质并用5mL的MDC洗涤。将滤液在真空中浓缩至干，从而得到10.8g(19.0mmol，75％)作为灰白色固体的产物，HPLC纯度为94.6A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.32Hz，1H)，6.78(dd，J＝2.4，8.76Hz，1H)，4.05(t，J＝6.8Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.08Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，24H)，0.88(t，J＝6.68Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸十六烷基酯(苯达莫司汀C16酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、6.2g(25.6mmol，1.01当量)的十六烷醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(2X100mL)、DI水(1X100mL)和盐水(1X100mL)进行洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到灰白色固体。用25mL的MDC研制这一固体，通过真空过滤移除不想要的固体杂质并用5mL的MDC洗涤。将滤液在真空中浓缩至干，从而得到13.1g(22.5mmol，88.8％)作为灰白色固体的产物，HPLC纯度为94.0A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.76Hz，1H)，7.08(d，J＝2.32Hz，1H)，6.78(dd，J＝2.36，8.72Hz，1H)，4.05(t，J＝6.8Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.69(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.08Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，26H)，0.88(t，J＝6.68Hz，3H)。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酸油酰基酯(苯达莫司汀C18酯)的制备：
方法A：向装配有顶置式搅拌器、具有氮气吹扫的冷凝器、具有温度控制器的加热幔和热电偶的250mL三颈圆底烧瓶装载1-十八烷醇(50g，185mmol，7.3当量)。在缓慢添加4-(5-氨基-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-丁酸(10g，25.3mmol.1.0当量)和硫酸(0.5mL)之前，将固体加热以使其熔化。将所得浆料在70℃下搅拌6小时，然后冷却至56℃，向其中添加二氯甲烷(150mL)。将反应混合物冷却至室温并用水(100mL)洗涤。在相分离之后，用二氯甲烷(100mL)进行另一次萃取。将有机相合并，并在MgSO4上干燥。通过过滤移除干燥剂。将滤液浓缩并进行SFC分离。通过在减压下蒸发SFC级分中的溶剂，获得了白色固体，利用室内真空在室温下将其干燥5天，以7.1％的产率和95.4A％的纯度得到1.2g的期望产物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.18(d，J＝8.8Hz，1H)，7.09(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，4.05(t，J＝6.8Hz，2H)，3.74(m，7H)，3.62(m，4H)，2.93(t，J＝7.4Hz，2H)，2.49(t，J＝7.1Hz，2H)，2.22(五重峰，J＝7.1Hz，2H)，1.60(五重峰，J＝7.1Hz，2H)，1.28(m，30H)，0.88(t，J＝7.1Hz，3H)；LC/MS(ESI，m/z)610(M+1)。
方法B：向装配有搅拌子、氮气吹扫和热电偶的500mL三颈圆底烧瓶装载苯达莫司汀HCl(5.04g，12.8mmol)、1-十八烷醇(4.15g，15.3mmol)、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC，3.17g，15.4mmol)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP，0.31g，2.56mmol)和二氯甲烷(250mL)。将所得浆料在室温下搅拌16小时。产生了固体并通过过滤将其从反应混合物中移除。用水(150mL)洗涤滤液。在相分离之后，将有机相在MgSO4上干燥。通过过滤移除干燥剂，浓缩滤液，并使用EtOAc和庚烷的混合物对滤液进行ISCO色谱纯化，得到具有99A％纯度的白色固体5.68g(73％产率)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸二十二烷基酯(苯达莫司汀C22酯)的制备：向装配有搅拌子、热电偶和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载5.0g(12.7mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、4.2g(12.9mmol，1.01当量)的二十二烷醇(teradecylalcohol)、2.7g(12.9mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、50mL的二氯甲烷(MDC)和0.16g(1.27mmol，0.1当量)的N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，HPLC分析显示反应在此时间完成。通过真空过滤移除固体，用50mL洗涤湿饼。进行两个交替的纯化步骤。将滤液用DI水(2X150mL)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干。所得蜡状残余物在80g的230-400目硅胶60上进行色谱分离，以从100％MDC开始、然后0.5％甲醇/MDC和最后1％甲醇/MDC的梯度进行洗脱，收集100-150mL的级分。将含有期望产物的级分合并，并真空浓缩至干。再次，用20mL的MDC研制残余物，通过过滤将不想要的固体移除。滤液在真空被浓缩，从而得到3.65g(5.5mmol，43.1％)作为蜡状白色固体的期望产物，纯度为95.7A％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.17(d，J＝8.72Hz，1H)，7.08(d，J＝2.28Hz，1H)，6.78(dd，J＝2.36，8.72Hz，1H)，4.05(t，J＝6.76Hz，2H)，3.72(m，4H)，3.70(s，3H)，3.63(m，4H)，2.91(t，J＝7.44Hz，2H)，2.49(t，J＝7.08Hz，2H)，2.18(m，2H)，1.60(m，2H)，1.32(m，38H)，0.88(t，J＝6.64Hz，3H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸2-十二烷基酯(支链的苯达莫司汀C12酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10.0g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、4.77g(5.75mL，25.6mmol，1.01当量)的2-十二烷醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在室温下搅拌过夜，进程分析显示反应在此时间完成。固体经真空过滤移除并用25mL的MDC洗涤。将滤液用200mL的MDC稀释，然后用4％的碳酸氢钠水溶液(1X500mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干以得到灰白色固体。用25mL的MDC研制这一固体，通过真空过滤将固体杂质移除并用5mL的MDC洗涤。将滤液在真空中浓缩至干，从而得到粗产物，所述粗产物经1HNMR显示含有残余的2-十二烷醇。使用100g的230-400目硅胶60对粗产物进行色谱分离，先用1L庚烷、然后用500mL的3：1庚烷/EtOAc、500mL的2：1庚烷/EtOAc并在最后用500mL的1：1庚烷/EtOAc进行洗脱，收集100mL的级分。将含有产物的级分合并，并真空浓缩至干，从而产生5.35g(10.16mmol，40％)作为浅紫色粘性油的产物，HPLC纯度为99.5A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.31(d，J＝8.76Hz，1H)，6.93(d，J＝2.28Hz，1H)，6.78(dd，J＝2.36，8.76Hz，1H)，4.8(m，1H)，3.7(s，8H)，3.65(s，3H)，2.82(t，J＝7.4Hz，2H)，2.42(t，J＝7.36Hz，2H)，2.00(m，2H)，1.50(m，2H)，1.25(s，b，16H)，1.14(d，J＝6.24，2H)，0.84(t，J＝6.68Hz，3H)。
苯达莫司汀C12酯的制备
向装配有热电偶、加热器/冷却器、氮气入口、添加漏斗、冷凝器和真空管路的20升带夹套的圆柱形ChemGlass反应容器装载428g(1.10mmol)的预处理的苯达莫司汀盐酸盐在10倍体积的痕量GC分析级二氯甲烷中的浆料。将搅拌设置在100RPM，将夹套设置在20℃。经添加漏斗在10分钟内将二异丙基乙胺(213ml，1.1当量)添加至这一混合物。在保持34分钟后，在一个级分中添加熔化的十二烷醇(227g，1.1当量)。在保持11分钟后，将EDCI(320.3g，1.5当量)添加至该批次。在～20℃下将所得清澈黄色溶液搅拌23.5小时。这时，IPC表明剩余0.54％的原料。添加10倍体积的水，将反应搅拌另外的15分钟。将下面的有机层排出，经5微米筒式滤芯过滤，用1倍体积的GC分析级二氯甲烷清洗筒式滤芯。在真空中浓缩二氯甲烷溶液，从而提供作为黄色粘性油的粗产物。将5倍体积的过滤的正庚烷添加至所述油，将混合物在真空中浓缩以移除残余的二氯甲烷，从而以92.9重量％得到615g的粗固体，对应于98.0％的产率。基于干重，最终纯度为98.4％。
苯达莫司汀C12酯的纯化
将CEP-40125粗品(1100gAPI，1250g粗品)溶解在正庚烷(6倍体积)中，并且转移至装配有热电偶、加热器/冷却器、氮气入口、冷凝器和真空管路的20升带夹套的圆柱形ChemGlass反应容器。将浆料加热至40℃以溶解所有固体。在达到32.6℃后，发生溶解。然后，将反应混合物在2.5小时内冷却至17.7℃，在这一点产物析出。然后，将反应混合物重新加热至23℃以在26分钟内溶解细粒子，并在2小时内冷却至4℃。将固体经密封的过滤器进行过滤，并用2倍体积的冷正庚烷在4.5小时内进行洗涤。IPC表明0.20％的残余十二烷醇。将固体在真空下、在30℃干燥24小时至恒重，从而以98.3％的纯度提供1018g的CEP-40125，表示92.5％的产率。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸5-癸酯(支链的苯达莫司汀C10酯)的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载3.0g(7.6mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、1.21g(7.7mmol，1.01当量)的5-癸醇、1.59g(7.7mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、30mL的1,2-二氯乙烷(EDC)和0.1g(0.76mmol，0.1当量)的DMAP。将反应在75℃下搅拌5天，直到进程分析表明反应完成。通过真空过滤移除固体，并用5mL的EDC洗涤。将滤液用4％的碳酸氢钠水溶液(1X50mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干。将残余物与来自在相同条件下进行的10g批次实验的残余物合并，对合并的批次进行色谱分离。使用100g的230-400目硅胶60进行色谱分离，用2L的庚烷、然后1L的3：1庚烷/EtOAc和1L的2：1庚烷/EtOAc进行洗脱，收集100mL的级分。将含有产物的级分合并，并在真空中浓缩至干，从而得到3.97g(7.96mmol，24.2％)作为清澈黄色油的产物，HPLC纯度为99.4A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.31(d，J＝8.76Hz，1H)，6.93(d，J＝2.28Hz，1H)，6.78(dd，J＝2.40，8.80Hz，1H)，4.8(m，1H)，3.7(s，8H)，3.65(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz，2H)，2.44(t，J＝7.36Hz，2H)，2.02(m，2H)，1.48(m，4H)，1.25(s，b，10H)，0.84(m，6H)。
4-{5-[双-(氯乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}丁酸环己酯的制备：250mL三颈圆底烧瓶用顶置式搅拌器、热电偶、温度控制器和氮气吹扫进行装配，然后装载10g(25.34mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、2.56g(2.7mL，25.6mmol，1.01当量)的环己醇、5.3g(25.6mmol，1.01当量)的二环己基碳二亚胺(DCC)、100mL的MDC和0.31g(2.54mmol，0.1当量)的DMAP。将反应浆料在RT下搅拌18h，直到进程分析表明反应完成。观察到了两个新的主要产物峰。通过真空过滤移除固体，并用5mL的MDC洗涤。将滤液用4％的碳酸氢钠水溶液(2X100mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干，从而得到具有存在的一些固体的黄色油。1HNMR分析表明，除期望的产物外，还存在残余的DMAP和环己醇以及DCC副产物。用50mL的MDC浆化残余物以移除残余的环己醇，然后真空干燥并色谱分离。使用50g的230-400目硅胶60进行色谱分离，用1：1庚烷/EtOAc洗脱，收集100mL的级分。将含有产物的级分合并，并真空浓缩至干，从而得到3.11g(7.06mmol，27.9％)作为灰白色固体的产物，HPLC纯度为97.8A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.31(d，J＝8.76Hz，1H)，6.93(d，J＝2.28Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.40，8.80Hz，1H)，4.65(m，1H)，3.7(s，8H)，3.65(s，3H)，2.83(t，J＝7.4Hz，2H)，2.44(t，J＝7.36Hz，2H)，2.00(m，2H)，1.76(m，4H)，1.65(m，2H)，1.33(m，b，6H)。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酸PEG-2000酯(苯达莫司汀PEG-2000酯)的制备：向装配有搅拌子、热电偶、冷凝器和氮气入口/出口的100mL三颈玻璃容器装载苯达莫司汀盐酸盐(2.0g，5.1mmol，1.0当量)和二氯甲烷(30mL)。在22℃下将三乙胺(0.71mL，5.1mmol)添加至浆料并搅拌20分钟。添加甲氧基聚乙二醇2000(PEG-OMe-2000，12.2g，6.1mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，1.5g，7.6mol)。将反应混合物在22℃下搅拌5.5小时，这时添加PEG-OMe-2000(1.0g)，然后搅拌3天经过周末。添加水(20mL)，通过添加1M盐酸将pH调节至pH5-6。相缓慢分离。用20mL的二氯甲烷对水性部分进行再萃取，将合并的二氯甲烷部分在MgSO4上干燥。在过滤移除干燥剂后，将滤液在真空中浓缩，从而产生作为蜡状固体的产物。在室温下，在10mL的庚烷中将固体浆化。产物经过滤收集并在30℃下、在真空下干燥，得到11.7g(99％产率)的白色粉末状固体，HPLC纯度为97.9A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.32(d，J＝8.6Hz，1H)，6.92(d，J＝2.2Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8,2.2Hz，1H)，4.12(t，J＝4.8Hz，2H)，3.70(m，12H)，3.60(m，3H)，3.51(m，224H)，3.43(m，4H)，3.32(m，58H)，2.84(t，J＝7.4Hz,2H)，2.45(2H，与DMSO部分重叠)，2.01(五重峰，J＝7.3Hz，2H)。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酸PEG-5000酯(苯达莫司汀PEG-5000酯)的制备：向装配有搅拌子、热电偶、冷凝器和氮气入口/出口的50mL三颈玻璃容器装载苯达莫司汀盐酸盐(0.5g，1.27mmol，1.0当量)和二氯甲烷(15mL)。在22℃下将三乙胺(0.18mL，1.28mmol)添加至浆料，并且与甲氧基聚乙二醇5000(PEG-OMe-5000，6.33g，1.27mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC，0.36g，1.88mol)一起搅拌20分钟。将反应混合物在22℃下搅拌过夜。添加水(20mL)并且通过添加1M盐酸将pH调至pH3-4。相缓慢分离。用10mL的二氯甲烷对水性部分再次萃取。将合并的二氯甲烷部分用盐水(20mL)洗涤并在MgSO4上干燥。在过滤移除干燥剂之后，将滤液在真空中浓缩，从而产生作为蜡状固体的产物。在室温下，将固体在20mL的庚烷中浆化。产物经过滤收集并在30℃下、在真空下干燥，得到5.24g(77％产率)的白色粉末状固体，HPLC纯度为99A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.38(d，J＝12Hz，1H)，6.91(d，J＝2.4Hz，1H)，6.82(d，J＝10Hz，1H)，4.12(t，J＝4.7Hz，2H)，3.72(brs，8H)，3.68(m，5H)，3.59(m，3H)，3.51(m，436H)，3.42(m，3H)，3.31(m，28H)，2.88(t，J＝7.4Hz,2H)，2.45(t，2H，与DMSO部分重叠)，2.01(五重峰，J＝7.3Hz，2H)。
苯达莫司汀甲酯的酯交换反应的一般步骤
向装配有搅拌子、热电偶、具有迪安-斯达克分水器(Dean-Starktrap)的冷凝器、和氮气入口/出口的50mL三颈玻璃容器装载苯达莫司汀甲酯(0.5g，1.27mmol，1.0当量)、催化剂(0.05-1.4当量)、合适的容积(5-15倍体积)、和过量的十二烷醇(5-10当量)。将所得反应混合物加热至回流并通过HPLC监测。在各种条件下的结果总结如下。
苯达莫司汀盐酸盐酰胺的制备
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-N-癸基-丁酰胺(苯达莫司汀C10酰胺)：向装配有搅拌子、热电偶、冷却浴、60mL压力均衡滴液漏斗和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载10.0g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、10.6g(27.8mmol)的HATU和100mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。向这一搅拌的黄色溶液添加4.41mL(3.27g，25.3mmol)的N,N-二异丙基乙二胺(DIPEA)。注意到了放热至27.1℃，并且溶液变为较暗的黄色。将反应冷却至6.6℃，其中在2.7-7.6℃下，在13分钟内滴加6.2mL(4.59g，35.5mmol)的DIPEA、5.11mL(4.1g，25.6mmol)的癸胺在20mL的DMF中的溶液。一旦完成添加，则让反应在<10℃下搅拌1.5小时，进程分析表明反应在此时完成。用200mL的DI水将该批次淬灭，并用乙酸乙酯(2X175mL)进行萃取。合并有机相，用10％的磷酸氢钠(1X200mL)、8％的碳酸氢钠(1X200mL)和盐水(1X200mL)洗涤，然后真空浓缩至干，从而得到粘性白色固体。用庚烷(75mL)研制这一固体并使其变为可流动的固体，通过真空过滤将其分离。在25℃下的真空烘箱中将湿饼干燥过夜，从而产生13.33g(25.3mmol，100％)作为白色固体的期望产物，HPLC纯度为98.01A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72(s，b，1H)，7.33(d，J＝8.76Hz，1H)，6.91(d，J＝2.28Hz，1H)，6.80(dd，J＝2.36，8.8Hz)，3.7(s，8H)，3.66(s，3H)，3.01(q，J＝6.8，12.68，2H)，2.79(t，J＝7.44Hz，2H)，2.18(t，J＝7.36Hz，2H)，1.95(m，2H)，1.36(m，2H)，1.22(s，b，14)，0.84(t，J＝6.68Hz，3H)。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-N-十四烷基-丁酰胺(苯达莫司汀C14酰胺)：向装配有搅拌子、热电偶、冷却浴、60mL压力均衡滴液漏斗和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载10.0g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、10.6g(27.8mmol)的HATU和100mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。向这一搅拌的黄色溶液添加4.41mL(3.27g，25.3mmol)的N,N-二异丙基乙二胺(DIPEA)。注意到了放热至27.1℃，并且溶液变为较暗的黄色。将反应冷却至3.3℃，其中在<10℃下，在6分钟内滴加6.2mL(4.59g，35.5mmol)的DIPEA、5.75g(25.6mmol)的十四烷基胺在40mL的DMF中的溶液。一旦完成添加，反应就变得非常粘稠和难以搅拌。将其转移至装配有顶置式搅拌器和热电偶的500mL三颈圆底烧瓶，然后在RT下搅拌3小时，进程分析表明反应在此时完成。该批次在400mL的DI水上淬灭，并用乙酸乙酯(2X300mL)进行萃取。合并有机相，用10％的磷酸氢钠(1X300mL)、8％的碳酸氢钠(1X300mL)和盐水(1X300mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干。通过色谱法，使用100g的230-400目硅胶60对残余物进行纯化，使用1％的MeOH/MDC(2L)、2.5％的MeOH/MDC(1L)和5％的MeOH/MDC(1L)进行洗脱，收集～100mL的级分。合并含有产物的级分，并在真空中浓缩至干，从而得到7.86g(14.6mmol，57.6％)作为白色固体的期望产物，HPLC纯度为97.3A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72(s，b，1H)，7.33(d，J＝8.84Hz，1H)，6.91(d，J＝2.22Hz，1H)，6.80(dd，J＝2.36，8.84Hz)，3.71(s，8H)，3.70(s，3H)，3.01(q，J＝6.8，12.68，2H)，2.79(t，J＝7.44Hz，2H)，2.18(t，J＝7.36Hz，2H)，1.97(m，2H)，1.36(m，2H)，1.28(s，b，22)，0.84(t，J＝7.04Hz，3H)。
4-{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-N-十八烷基-丁酰胺(苯达莫司汀C18酰胺)：向装配有搅拌子、热电偶、冷却浴、60mL压力均衡滴液漏斗和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载10.0g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、10.6g(27.8mmol)的HATU和100mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。向这一搅拌的黄色溶液添加4.41mL(3.27g，25.3mmol)的N,N-二异丙基乙二胺(DIPEA)。注意到了放热至27.1℃，并且溶液变为较暗的黄色。将反应冷却至2.0℃，其中通过移液管添加6.2mL(4.59g，35.5mmol)的DIPEA、7.65g(25.6mmol)的十八烷基胺在0mL的DMF中的混悬液。一旦完成添加，反应变得非常粘稠和难以搅拌。将其加热至室温，并用顶置式搅拌器代替磁力搅拌子。将该批次在RT下搅拌过夜，进程分析表明反应在此时间之后完成。将该批次在300mL的DI水上淬灭，并用二氯甲烷(2X150mL)进行萃取。合并有机相，用10％的磷酸氢钠(1X300mL)、8％的碳酸氢钠(1X300mL)和盐水(1X300mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并真空浓缩至干。通过色谱法，使用100g的230-400目硅胶60对残余物进行纯化，使用1％的MeOH/MDC(2L)、2.5％的MeOH/MDC(1L)和5％的MeOH/MDC(1L)进行洗脱，收集～100mL的级分。合并含有产物的级分，并在真空中浓缩至干，从而得到5.11g(8.38mmol，33％)作为白色固体的期望产物，HPLC纯度为90.9A％。主要的杂质显示为C-16酰胺，其来自起始胺中的杂质。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72(s，b，1H)，7.33(d，J＝8.84Hz，1H)，6.91(d，J＝2.22Hz，1H)，6.80(dd，J＝2.36，8.84Hz)，3.71(s，8H)，3.70(s，3H)，3.01(q，J＝6.8，12.68，2H)，2.79(t，J＝7.44Hz，2H)，2.18(t，J＝7.36Hz，2H)，1.97(m，2H)，1.36(m，2H)，1.28(s，b，30H)，0.85(t，J＝6.32Hz，3H)。
(S)-2-(4--{5-[双-(2-氯-乙基)-氨基]-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基}-丁酰基氨基)-丙酸甲酯：向装配有搅拌子、热电偶、冷却浴、添加漏斗和氮气入口/出口的250mL三颈圆底烧瓶装载10g(25.3mmol)的苯达莫司汀盐酸盐、10.6g(27.8mmol)的HATU和100mL的DMF。将该批次冷却至1.9℃，其中在2分钟内添加8.8mL(6.54g，50.6mmol)的DIPEA。反应放热至9℃且变为橘色。在4.9-5.7℃下，在10分钟内滴加3.57g(25.6mmol)的L-丙氨酸甲酯盐酸盐和6.2mL(4.57g，35.4mmol)的DIPEA在20mL的DMF中的溶液。将反应在1小时内缓慢加热至RT，并搅拌3小时，进程分析表明反应在此时完成。将该批次在400mL的1：1乙酸乙酯/DI水上淬灭。进行分层，将有机层用10％的磷酸氢钠(1X200mL)、8％的碳酸氢钠(1X200mL)和盐水(1X200mL)洗涤，然后在硫酸钠上干燥，过滤并在真空中蒸发至干。通过色谱法，使用100g的230-400目硅胶60对残余物进行纯化，使用1％的MeOH/MDC(3L)、2.5％的MeOH/MDC(1L)和5％的MeOH/MDC(500mL)进行洗脱，收集～100mL的级分。合并含有产物的级分，并在真空中浓缩至干，从而得到7.1g(16.0mmol，63.3％)作为白色固体的期望产物，HPLC纯度为97.4A％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.25(d，J＝6.92Hz)，1H)，7.40(d，J＝8.84Hz，1H)，6.92(d，J＝2.2Hz，1H)，6.86(dd，J＝2.32，8.88Hz)，4.25(q，1H)，3.72(s，8H)，3.71(s，3H)，3.62(s，3H)，2.87(t，J＝7.48Hz，2H)，2.25(t，J＝7.52Hz，2H)，1.99(m，2H)，1.26(d，J＝7.32Hz，3H)。
用于制备本发明的苯达莫司汀酯的溶液制剂的一般步骤：
将本发明的苯达莫司汀酯的储液以约100mg/mL的浓度溶于二甲基乙酰胺(“DMA”)和HS-15的60/40(v/v)混合物中。在室温下搅拌该混合物直至溶解。所得的储液在数月内是稳定的，将其用0.9％的盐水稀释至期望的浓度并在约2小时内给药。
苯达莫司汀C14酯溶液制剂：通过将320.1mg的苯达莫司汀C14酯溶于DMA和HS-15的60/40(v/v)的4mL混合物中来制备储液。将混合物搅拌约2小时直至溶解。在给药前，通过取出1.00mL的储液并添加16.20mL的盐水且在室温下搅拌5分钟来稀释储液。所得制剂为3mg当量/mL苯达莫司汀。
移除残余乙醇的预处理：
将苯达莫司汀盐酸盐(277g)装入5L的蒸发烧瓶中，然后装入2倍体积的DI水和5倍体积的丙酮。在40℃的最大温度下，在真空下将溶剂在5.5小时内蒸馏掉。添加另外的5倍体积的丙酮，将所得浆料在旋转蒸发仪上、在大气压下、在35℃旋转15分钟。然后，将该批次经密封的烧结玻璃漏斗过滤，并将所得白色固体用2倍体积的丙酮清洗。将固体转移至干燥盘并在40℃干燥17小时至恒重，然后分离266g(96.0％)的产物，纯度为99.8A％，KF为0.26％。
用于制备本发明的苯达莫司汀酯的人血清白蛋白(“HSA”)纳米粒子制剂的一般步骤：
纳米粒子由使用二氯甲烷和HSA作为表面活性剂的O/W乳液形成。通过将期望量的苯达莫司汀酯按约120mg/mL的浓度溶于二氯甲烷中来制备油相。通过将2-4x量的HSA(w/w，基于苯达莫司汀酯)溶于5-15x体积的水(w/w，基于二氯甲烷)中来制备水相。通常，将甘露醇以5-10％添加至水相以使得溶液对于注射来说是等渗的，并且在冻干后提供药用合适的产物。通过使用IKA手持均化器将油相和水相以中等强度乳化约30秒来形成该O/W乳液。通过以下步骤来形成纳米粒子：通过高压均化器(在约30,000psi下通过5次)处理该粗O/W乳液以提供如使用动态光散射(MalvernZetasizer)测定的大小为50-100nm的粒子。在真空下移除溶剂，并将所得浓缩物冻干或冷冻储存，直至给药。这些制剂显示出良好的物理和化学稳定性。
将冻干的纳米粒子复溶并使用低温透射电镜(c-TEM)进行分析。大多数纳米粒子是易于分散在水中的20-40nm固体球。少数粒子在125nm范围内。所有粒子具有光滑表面。
苯达莫司汀C12酯HSA纳米粒子：通过将600mg的苯达莫司汀C12酯溶于5mL的二氯甲烷来制备油相。使用由60mL去离子(“DI”)水、2.4gHSA(来自Sigma-Aldrich的冻干固体，圣路易斯，MO)和6.6g甘露醇组成的水相，使用IKAUltra-Turrex手持均化器乳化油相，从而获得粗乳液。在约30,000psi下，使这一乳液通过MicrofluidicsM-110P高压均化器5次。使用旋转蒸发仪将二氯甲烷从所得纳米粒子混悬液移除，用DI水稀释所得水性混悬液，从而使总体积为100mL。然后，以10mL的等份将这一混悬液分配到30mL的血清瓶中并且冻干。
具有聚乳酸乙醇酸(PLGA)的苯达莫司汀C12酯HSA纳米粒子：通过将300mg的苯达莫司汀C12酯和500mg的PLGA(50/50乳酸对乙醇酸，MW为7,000-17,000；AldrichPart#719897)溶于2.5mL的二氯甲烷中来制备油相。使用由30mLDI水、1.2gHSA(来自Sigma-Aldrich的冻干固体)和3.3g甘露醇组成的水相，使用IKAUltra-Turrex手持均化器乳化油相，从而获得粗乳液。在约30,000psi下，使这一乳液通过MicrofluidicsM-110P高压均化器5次。使用旋转蒸发仪将二氯甲烷从所得纳米粒子移除，用DI水稀释所得水性混悬液，从而使总体积为50mL。如通过MalvernZetasizer测定的，所得纳米粒子具有90.5nm的粒径(Z平均)。然后，以10mL的等份将这一混悬液分配到30mL的血清瓶中并且冻干。
本发明的苯达莫司汀酯的PEG化的纳米粒子制剂的制备：使用文献(Alexis，F.，MolecularPharmaceutics，5，(2008)，505-515)中报道的PEG涂层制备了一系列的纳米粒子制剂，以提供“秘密(stealth)”涂层并辅助粒子避开身体免疫系统的能力。通过使用基于PEG的表面活性剂(PEG和聚乳酸的共聚物)代替HSA或利用生物偶联化学将PEG基团共价地连接至HSA纳米粒子表面上的游离NH2基团，完成PEG的掺入。两个系统均在PK研究中显示出增加的血浆循环时间。
具有聚乙二醇(PEG)涂层的苯达莫司汀C12酯HSA纳米粒子：通过将600mg的苯达莫司汀C12酯溶于5mL的二氯甲烷中来制备油相。使用由60mLDI水、2.4gHSA(来自Sigma-Aldrich的冻干固体)和6.6g甘露醇组成的水相，使用IKAUltra-Turrex手持均化器乳化油相，从而获得粗乳液。在～30,000psi下，使这一乳液通过MicrofluidicsM-110P高压均化器5次。使用旋转蒸发仪将二氯甲烷从所得纳米粒子混悬液移除，用DI水稀释所得水性混悬液，从而使总体积为50mL。然后，将纳米粒子的混悬液稀释至200mL的100mMpH8.5硼酸盐缓冲液，使用MalvernZetasizer测定所得纳米粒子的粒径和ζ电势。纳米粒子具有78.9nm的粒径(Z平均)和-13.0mV的表面电荷。搅拌该混悬液，并添加150mg的甲氧基-PEG5,000-正羟基丁二酰亚胺酯(Laysan聚合物)。将反应在室温下混合～90分钟，重新测定粒径和ζ电势。发现纳米粒子粒径为83.6nm(Z平均)并且ζ电势为-7.35mV。使用6.6％(重量/重量)的甘露醇溶液和50,000MWCO渗滤筒，对纳米粒子进行缓冲液交换和浓缩。然后，以10mL的等份将这一混悬液分配到30mL的血清瓶中并且冻干。
具有聚乳酸乙醇酸(PLGA)和聚氧乙烯乳酸共聚物(PELA)表面活性剂的苯达莫司汀C12酯纳米粒子：通过将300mg的苯达莫司汀C12酯和500mg的PLGA(50/50乳酸对乙醇酸，MW为7,000-17,000；AldrichPart#719897)溶于2.5mL的二氯甲烷中来制备油相。使用由30mLDI水、0.6gPEG-5,000-聚乳酸1,000的共聚物(使用来自A.Lucke，Biomaterials，21，(2000)，2361-2370的步骤制备的共聚物)和3.3g甘露醇组成的水相，使用IKAUltra-Turrex手持均化器乳化油相，从而获得粗乳液。在～30,000PSI下，使这一乳液通过MicrofluidicsM-110P高压均化器处理5分钟。使用旋转蒸发仪将二氯甲烷从所得纳米粒子混悬液移除，用DI水稀释所得水性混悬液，从而使总体积为50mL。如通过MalvernZetasizer测定的，所得纳米粒子具有248.0nm的粒径(Z平均)。然后，以10mL的等份将这一混悬液分配到30mL的血清瓶中并且冻干。
来自浓缩物的苯达莫司汀C12酯HSA纳米粒子：通过将4.8g的苯达莫司汀C12酯溶于13.4g的二氯甲烷中来制备油相。使用由111g去离子(“DI”)水和9gHSA组成的水相，使用IKAUltra-Turrex手持均化器乳化油相，从而获得粗乳液。在约30,000psi下，使这一乳液通过MicrofluidicsM-110P高压均化器5次。通过添加12gNaCl并混合直至溶解来使所得纳米乳剂浓缩物稳定化。也可以使用本领域中已知的其它方法例如其它盐、受控的加热和/或pH调节实现稳定化。例如使用戊二醛进行交联也可以帮助防止聚集。
使用旋转蒸发仪将二氯甲烷从所得纳米粒子混悬液移除。将所得水性混悬液与12g蔗糖混合，添加DI水使总重量为480g。然后，以7.5mL的等份将这一混悬液分配到20mL的血清瓶中并且冻干。
HSA纳米粒子的溶液显示出粒径随时间缓慢增加。如通过动态光散射测定的，一些溶液的尺寸在12-24小时内达到～200nm。为了确定纳米粒子是否聚集或制剂中的过量蛋白是否加在粒子的表面上以增加粒径，使用c-TEM研究这一增加的性质。将一瓶冻干的纳米粒子复溶，并使用c-TEM成像(图21)。让同一瓶纳米粒子在室温放置24小时，然后重新成像(图22)。最初样品含有粒径分布在25-60nm之间的球形粒子。老化的样品显示出粒径分布增加至35-130nm，没有粒子聚集的迹象。两个样品均含有1-3nm粒子的群体，与“游离”蛋白相一致。这些结果暗示在溶液中时，“游离”HSA添加在纳米粒子的表面上，从而引起粒径缓慢增加。可以采用数种策略来缓和这一过程，所述策略包括改变pH、改变渗透性、添加溶剂和渗滤以移除过量的蛋白。
制备肿瘤细胞分离物的方案：将具有MDA-MB-231乳腺癌细胞系皮下移植瘤(在基质胶中的5x106个细胞)的查尔斯河实验室(CharlesRiverLab)无胸腺的裸鼠处死以制备肿瘤分离物。使用无菌仪器和无菌操作，从安乐死的动物中取出肿瘤。将肿瘤放在50mL的无菌锥管中并添加5mL的胰酶。将肿瘤切成小块并在37℃下孵育30分钟。在孵育后，将细胞过滤网放置在第二个50mL无菌锥管上并将第一个管的内含物放入细胞过滤网中。使用注射器柱塞的平端强迫组织穿过该过滤器。用5mL含有FBS的介质洗涤该细胞过滤网。将细胞离心，丢弃上清液。将细胞重新悬浮在20mL含有P/S的完整介质中，并置于75cm烧瓶中。这一数据在表1中示出。
MTS细胞分析的一般步骤：将癌细胞(2,000个细胞/孔)与期望浓度(0-200μM)的试验分子孵育72小时。然后，将细胞与MTS溶液(普洛麦格(Promega))孵育1-2小时，并通过测定在490nm下的吸光度来确定化合物对细胞增殖的影响。将细胞生长表示为合适对照(安慰剂)的百分比。使用这一数据计算各个化合物的IC50。所有报道的数据是三个独立实验的平均值±标准误。这一数据在表1中示出。
表1
R2＝确定系数
前述生物数据也被示出在图1中。在图20中描述了在施用前述酯后，苯达莫司汀的血浆水平。
肿瘤疗效
裸鼠MDA-MB-231肿瘤疗效研究的步骤：用在基质胶中的5x106个人肿瘤细胞对查尔斯河实验室无胸腺的裸鼠进行皮下注射。监测肿瘤体积，直到在小鼠群体中获得了～150mm3的平均肿瘤尺寸。然后将小鼠随机分组到九个治疗组中的一组中(总结于下表)，每组总数为10只小鼠(n＝10)。在研究的第1天和第2天，经尾静脉注射以100μL固定体积给药各个制剂。在3周的研究时间内，每3-4天对小鼠称重和测量肿瘤体积。这一数据在表2和图2中示出。
表2.苯达莫司汀(BM1)、苯达莫司汀C12酯和苯达莫司汀C14酯针对MB-231的肿瘤疗效数据的总结：％肿瘤抑制、％发病率/死亡率、以及肿瘤和血浆水平。
裸鼠H460肿瘤疗效研究的步骤：用95％空气和5％CO2，在37℃下，在含有10％FBS的RPMI-1640培养基中培养H460肿瘤细胞(大细胞肺癌)。当达到80-90％汇合时，通过0.25％的胰酶-EDTA溶液在5-10分钟内将细胞分开，用新鲜的培养基中和，并通过细胞计数器(Cellometer，AutoT4，由Nexcelom制造)计数。将在培养基和基质胶(1：1比率)溶液的混合物中的2x106个细胞/100ul注射到各nu/nu小鼠的后背侧面。监测植入后的小鼠，并用电动卡尺(electriccaliper)测量。当肿瘤尺寸达到～150mm3时开始研究。测量小鼠，并根据下表将其随机分为9组，每组10只小鼠：
肿瘤疗效给药组
在配制化合物之后的30分钟内，经尾静脉注射以100μL剂量施用制剂。每周两次对所有小鼠称重并测量肿瘤。在研究的最后一天，收集血浆、肿瘤、肺、肝、脾、左肾、脑和腿，并将它们快速冷冻，用于在给药两小时后进一步分析。结果示于表3中。
表3.苯达莫司汀(BM1)、苯达莫司汀C12酯和苯达莫司汀C14酯针对H-460的肿瘤疗效数据的总结：％肿瘤抑制、％发病率/死亡率、以及肿瘤和血浆水平。
药动学研究实验
裸鼠肿瘤疗效PK组的步骤：一部分具有肿瘤的小鼠作为卫星PK组给药。如肿瘤疗效组所描述的对各个组给药，但是在第2天给药后1、3和6小时将PK组安乐死并收集组织样品。收集的组织包括血液、肺、肝和肿瘤。如在LC-MS方案部分所描述的，对苯达莫司汀HCl和相应的酯类似物进行样品分析。
PK研究的LC-MS实验方案：根据标准方案，在用含有内标的乙腈沉淀蛋白后，制备血浆和其它组织用于高效液相色谱(HPLC)/质谱分析。然后，通过与串联质谱结合的HPLC，对本发明的苯达莫司汀HCl和苯达莫司汀酯两者以及阿普洛尔(内标)进行样品分析。在磷酸钠缓冲液中均化组织样品，并将从分析获得的值乘以3以对处理期间的稀释进行校正。
PK研究的动物给药方案：在所有实验中使用成年动物(查尔斯河，金斯敦，纽约；n＝3或4/时间点)。将小鼠或大鼠禁食过夜，然后通过侧尾静脉施用IV剂量。IV剂量以100μL的固定剂量体积施用于小鼠，或以1mL/kg的剂量体积施用于大鼠。通过断头将小鼠处死，在规定的采样时间将躯干血收集在肝素抗凝管中。对于血液收集，将每只大鼠(未麻醉的)放在清澈的控制管中，在规定的采样时间将血液样品(约0.25mL)从侧尾静脉抽入肝素抗凝收集管中。(注意：没有获得给药前样品)。这一步骤的例外之处是，在最后的采样时间，通过断头将大鼠处死并获得躯干血，而不是经尾静脉获得血液。将血液样品放置在湿冰上直到离心分离血浆。将血浆级分转移到干净、干燥的管中，在干冰上冷冻，并储存在约-20℃直到分析为止。在预定的时间点将整个大脑和其它高度灌注的器官(肝、肺、脾、肾、和心)快速取出并在干冰上冷冻。将所有的组织样品也储存在约20℃直到分析为止。
药动学分析：将所有小鼠和大鼠的血浆浓度数据输入Excel表格中，以准备进行药动学分析。使用WinNonlin软件(专业版4.1，Pharsight公司，帕洛阿尔托，CA)，通过血浆浓度对时间数据的非隔室分析(Gibaldi和Perrier1982)来估算平均药动学参数。通过对半对数血浆浓度-时间曲线的末端部分进行线性回归来估算从血浆清除的末端速率常数(β)。表观末端半衰期(t1/2)被计算为0.693除以β。通过线性梯形法则确定单次给药后从时间0到最后可测量浓度的时间的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)。从0到无穷的面积(AUC0-∞)被计算为AUC0-t和从最后可测量浓度到无穷的推算面积(C最后/β)的总和。出于计算AUC的目的，将给药前浓度全部假设为0。出于计算AUC的目的，将在最后可量化采样时间之后低于定量限(BLQ)的任何浓度视为空值；为了计算给定采样时间的平均浓度，将其作为0处理。
来自药动学研究的数据在表4-17中示出。
表4
来自表4的数据也在图8中示出。
表5
来自表5的数据也在图9中示出。
表6
来自表6的数据也在图10中示出。
表7
来自表7的数据也在图11中示出。
表8
来自表8的数据也在图12中示出。
表9
来自表9的数据也在图13中示出。
表10
来自表10的数据也在图14中示出。
表11.在施用苯达莫司汀C12酯液体制剂(30mg/mL，1mL/kg图15)后，大鼠中苯达莫司汀的血浆、血液和器官水平。
血浆 血液 脑 肝 肺 脾 肾
t1/2，h 5.7 6.3 无数据 4.2 2.0 2.3 6.4
AUC0-t，ng*h/mL 66885 91549 9284 13901 22229 10201 19489
AUC0-∞，ng*h/mL 67131 91856 无数据 14111 22286 10362 19966
来自表11的数据也在图15中示出。
表12.在施用苯达莫司汀C12酯液体制剂(30mg/mL，1mL/kg图16)后，苯达莫司汀C12酯的血浆、血液和器官水平。
血浆 血液 脑 肝 肺 脾 肾
t1/2，h 无数据 无数据 无数据 0.8 7.6 3.1 5.3
AUC0-t，ng*h/mL 无数据 4424 299 2564 12619 25874 2383
AUC0-∞，ng*h/mL 无数据 无数据 无数据 2586 13246 25927 2605
来自表12的数据也在图16中示出。
表13.在施用苯达莫司汀C12酯纳米粒子制剂(30mg/mL，1mL/kg图17)后，大鼠中苯达莫司汀的血浆、血液和器官水平。
血浆 血液 脑 肝 肺 脾 肾
t1/2，h 6.0 5.7 无数据 2.6 5.1 1.6 7.0
AUC0-t，ng*h/mL 55296 58021 1010 43785 15075 2598 9665
AUC0-∞，ng*h/mL 55417 58112 无数据 44713 15590 2735 10725
来自表13的数据也在图17中示出。
表14.在施用苯达莫司汀C12酯纳米粒子制剂(30mg/mL，1mL/kg图18)后，苯达莫司汀C12酯的血浆、血液和器官水平。
血浆 血液 脑 肝 肺 脾 肾
t1/2，h 无数据 无数据 无数据 4.5 8.5 5.4 4.9
AUC0-t，ng*h/mL 无数据 951 149 13355 28327 13111 1766
AUC0-∞，ng*h/mL 无数据 无数据 无数据 13586 32297 13578 1802
来自表14的数据也在图18中示出。
表15.在以3mg当量/kg静脉注射给药苯达莫司汀C12酯纳米粒子后，大鼠中苯达莫司汀的血浆水平：不同制剂的比较(图19)。
来自表15的数据也在图5中示出。
表16.在以3mg当量/kg静脉注射给药苯达莫司汀C12酯纳米粒子后，大鼠中苯达莫司汀C12酯的血浆水平：不同制剂的比较(图20)。
来自表16的数据也在图6中示出。
表17：在以3mg当量/kg静脉注射给药溶液制剂后，大鼠中苯达莫司汀C16酯、环己酯、和5-癸酯的血浆水平。
根据上述方法将本发明的另一个实施方式苯达莫司汀C14酯配制成纳米粒子静脉内制剂并施用至CD-1小鼠。确定小鼠血浆中苯达莫司汀(BM1)和苯达莫司汀C14酯的量。将这些实验的结果总结在表18中。
表18
还对苯达莫司汀的PEG化的酯进行试验。苯达莫司汀的PEG-2000酯和PEG-5000酯的数据在下表19和20中示出。这一数据还在图19中示出。
表19：作为苯达莫司汀PEG-2000酯以3mg当量/kg静脉注射、1mL/kg给药的苯达莫司汀在大鼠中的血浆水平。
表20：作为苯达莫司汀PEG-5000酯以3mg当量/kg静脉注射、1mL/kg给药的苯达莫司汀在大鼠中的血浆水平。
苯达莫司汀酯的体外稳定性分析
肿瘤S9的制备：将具有乳腺癌(MB-231)或非小细胞肺癌(H460)的查尔斯河实验室无胸腺裸鼠处死。立即将肿瘤取出并用冰冷的1.15％KCl清洗。将肿瘤称重、切割和切碎。将切碎的组织与4X(v/w)冰冷的SET缓冲液(250mM蔗糖，5.4mMNa2EDTA和20mMTris，pH7.4)混合并用组织均化器均化。将匀浆物转移到干净的聚碳酸酯离心管中，并在10,000g、4℃下旋转20分钟。用棉签将超离心管顶部处的脂质移除，并将上清液(S9)等分试样储存在-80℃冰箱中。
体外孵育：在37℃的水浴中，对含有50mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)、NADPH-(还原型烟酰胺腺苷二磷酸)再生系统和1mg/mL肿瘤S9的孵育混合物进行预热。通过将1μL的苯达莫司汀C6、C8、C12或C14酯添加到单独的孵育混合物中以获得各个苯达莫司汀酯的10μM的最终浓度来开始反应。在设计的时间点，取出孵育混合物的100-μL等分试样并与400μL的终止溶液(4或8μM噻加宾[IS]在0.1％甲酸/乙腈的溶液中)混合。将所有样品涡旋混合，并放置在冰上至少10分钟，然后通过在Eppendorf5417R离心仪中以14,000rpm离心8分钟来沉淀蛋白。将上清液转移到HPLC瓶中，并注射10μL，用于使用具有串联质谱检测的高效液相色谱进行分析。
LC-MS/MS方法：由ShimadzuHPLC和SciexAPI4000MS构成的LC-MS/MS系统。在Phenomenex00B-4448-B0，LunaPFP(2)柱(50x2mm，5μm粒径)上进行色谱法。总的流动相流速为0.5mL/min。梯度以70％流动相A(0.1％的三氟乙酸水溶液)和30％流动相B(100％的乙腈)开始。然后，将流动相的比例在0.5分钟内线性增加至95％，并维持在该比例1.3分钟，在1分钟内重新平衡至初始条件。将质谱仪调节至各个苯达莫司汀酯的相应最佳条件，监测442.2/340.1(C6)、470.2/340.1(C8)、526.3/340.1(C12)和554.3/340.1(C14)的转变。
来自体外稳定性研究的数据在图3和4中示出。
电子显微镜实验
c-TEM研究的样品制备：通过向样品添加7.8mL的注射用水(WFI)使样品溶解，并通过用手翻转进行混合。样品在～2-5分钟快速溶解，在溶液中没有可见的不溶粒子。将样品保持在400目铜网格上由碳涂布的多孔碳膜所负载的玻璃化冰中。样品通过如下制备：将3μL未稀释的样品溶液滴施加至干净的网格，用滤纸吸干并立即在液体乙烷中进行玻璃化。将网格储存在液氮下直到转移至电子显微镜用于成像。
c-TEM成像参数：使用在120KeV下运作、装配有FEIEagle4Kx4KCCD照相机的FEITecnaiT12电子显微镜进行电子显微镜分析。将网格转移到使用低温恒温器的电子显微镜中，所述低温恒温器将网格维持在低于-170℃的温度。以多个比例获取网格的图像，从而评价样本的整体分布。在较低的放大率下鉴定了潜在合适的目标成像区域后，在52,000x(0.21nm/像素)和21,000x(0.50nm/像素)的标称放大率下获取高放大率图像。在-4μm(52,000x)和-5μm(21,000x)的标称弱焦点(underfocus)和～10-15的电子剂量下获取图像。
电子显微镜实验的结果在图7中示出。
苯达莫司汀酯的HSA纳米粒子制剂的交联实验
使用基于HSA的纳米粒子制剂可以延长本发明的苯达莫司汀和苯达莫司汀酯的循环时间，其中在形成纳米粒子结构后，蛋白部分被共价交联，参见例如K.Langer等，InternationalJournalofPharmaceutics347(2008)109–117。这向表面涂层提供更多结构并防止纳米粒子内含物的快速释放。这还可通过向交联剂引入PEG基团来提供纳米粒子的“秘密”保护。使用可商购的二醛戊二醛，证实了HSA纳米粒子的有效包封和硬化。使用例如如下所示制备的三官能PEG交联剂，可以添加引入合适大小的PEG部分：
步骤：用DI水将HSA纳米粒子稀释至1.5mg/mL的苯达莫司汀的C14酯浓度，其对应于6mg/mL的HSA浓度。然后，将所得纳米粒子的混悬液以1mL部分等分到装配有磁力搅拌子的5个玻璃瓶中。添加合适量的50％戊二醛溶液，将各个瓶盖上盖并在室温下搅拌过夜。然后在N-甲基吡咯烷酮(NMP)中将各个样品稀释1至10倍，使用微离心机将样品旋转～2分钟以移除HSA和交联的HSA纳米粒子。然后通过HPLC分析上清液，确定苯达莫司汀的C14酯的浓度(峰面积)以确认粒子包封。下表显示未包封的苯达莫司汀的C14酯的浓度随戊二醛μL的变化：
戊二醛μL HPLC峰面积
0 4882.02
2 4788.99
5 4778.11
10 4714.02
20 29.55
数据显示以3.33μL/mgHSA的比率添加戊二醛对于产生交联的含有苯达莫司汀酯的纳米粒子是合适的。
体外多发性骨髓瘤模型
材料和方法
RPMI8226(人浆细胞瘤，骨髓瘤B细胞)ATCC#CCL-155；
ECM胶(基质胶)，Sigma-Aldrich，Cat#E1270，5ml
RPMI(BeitHaemek，批号：1110235)
(Bortezomib)3.5mg在瓶中冻干，批号BIZSC00
苯达莫司汀(批号TD-D0815，API批号00039P0012)
苯达莫司汀C12酯纳米粒子(C12NP)，批号2861-242-22，17.6mg/瓶
氯化钠
注射用水(DEMOS.A.)
试验动物
80CB.17SCID雌性小鼠，4-6周龄，16-20克，从Harlan动物饲养中心获得。
细胞的准备
在RPMI培养基中培养细胞(来自ATCC)。将细胞混悬液离心，并在50％基质胶/HBSS中重新悬浮成7x107个细胞/ml的最终浓度。将混悬液以100μl的体积皮下植入到麻醉小鼠的右侧中。
化合物的准备
每周准备一次。将7ml的盐水添加至含有3.5mg粉末的初始瓶中，产生0.5mg/ml。将3ml的这一溶液添加至27ml盐水中以得到0.05mg/ml浓度。
苯达莫司汀的准备：在治疗前片刻，将13.5mg溶于0.9％盐水/5％甘露醇的3.6ml1：1混合物中。将1.05ml的这一溶液添加至0.95ml的稀释剂中，得到2mg/ml溶液。
C12NP的准备：在治疗前片刻，将3.1mlSWFI添加至含有17.62mg的样品瓶中。将1.05ml的这一溶液添加至0.95ml的稀释剂中，得到2mg/ml溶液。
实验设计
在第0天，使用7x106个RPMI8226细胞/小鼠(在50％基质胶/HBSS中)对小鼠进行皮下植入。在第21天，按最佳平均肿瘤体积(～150mm3)分选小鼠并分配到8个组中，每组9只小鼠。
应注意，SCID小鼠的性质(即严重免疫缺陷的)使得它们是更加脆弱/敏感的动物，因此，它们不太能够耐受在裸鼠(其是相比较而言较不免疫缺陷的)中使用的C12NP剂量。具体地，以100mg/kg和70mg/kg对SCID小鼠给药显示了不可接受的耐受问题(即，超过20％的体重损失)(数据未显示)。认为这(裸鼠和SCID鼠之间的耐受差异)是与品种相关的现象。因此，使用37.5mg/kg和20mg/kg的C12NP剂量进行研究。
统计学分析
如下计算肿瘤体积：使用单因素方差分析和之后的Tukey事后比较(Tukeypost-hoccomparison)对体重增加和肿瘤体积进展进行分析。
结果
将治疗反应总结在图23和24中。与对照组相比，除C12NP20mg/kg外的所有治疗都显著抑制肿瘤生长(参见表21中的数据)。在37.5mg/kg下，苯达莫司汀和C12NP的疗效相似，具有81％和70％的肿瘤生长抑制。然而，如在图24中可以看出，如通过在用C12NP治疗的动物中较少的体重损失所测定的，C12NP的耐受性比苯达莫司汀好。
表21：结果总结(第46天)

Claims (65)

1.式I的化合物：
其中R1是C6-C24烷基或聚乙二醇。
2.权利要求1的化合物，其中R1是C8-C24烷基。
3.权利要求1的化合物，其中R1是C10-C24烷基。
4.权利要求1的化合物，其中R1是C12-C24烷基。
5.权利要求1的化合物，其中R1是C14-C24烷基。
6.权利要求1的化合物，其中R1是C16-C24烷基。
7.权利要求1的化合物，其中R1是C18-C24烷基。
8.权利要求1的化合物，其中R1是C10烷基。
9.权利要求1的化合物，其中R1是C12烷基。
10.权利要求1的化合物，其中R1是C14烷基。
11.权利要求1的化合物，其中R1是C16烷基。
12.权利要求1的化合物，其中R1是C6烷基。
13.权利要求1的化合物，其中式I的化合物是
14.权利要求1的化合物，其中式I的化合物是
15.权利要求1的化合物，其中式I的化合物是
16.权利要求1的化合物，其中式I的化合物是
17.一种药物组合物，其包含式IA的化合物和药用可接受的载体或稀释剂：
其中R是C1-C24烷基或聚乙二醇。
18.权利要求17的药物组合物，其中R是C10-C24烷基。
19.权利要求17的药物组合物，其中R是C10烷基。
20.权利要求17的药物组合物，其中R是C12烷基。
21.权利要求17的药物组合物，其中R是C14烷基。
22.权利要求17的药物组合物，其中R是C16烷基。
23.纳米粒子，其包含式IA的化合物：
其中R是C1-C24烷基或聚乙二醇。
24.一种治疗患者中的癌症的方法，其包含向患者施用式IA的化合物：
其中R是C1-C24烷基或者聚乙二醇。
25.权利要求24的方法，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤、侵袭性非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌或肺癌。
26.权利要求24的方法，其中所述癌症选自肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、睾丸癌、黑素瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。
27.权利要求24～26中任一项的方法，其中所述患者对一种或多种化疗剂是耐受的。
28.权利要求27的方法，其中所述一种或多种化疗剂是烷化剂。
29.式II的化合物：
其中R2是C1-C24亚烷基；并且R3是-COOC1-3烷基；或者R2-R3是C1-C24烷基；或其药用可接受的盐形式。
30.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C8-C24烷基。
31.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C10-C24烷基。
32.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C12-C24烷基。
33.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C14-C24烷基。
34.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C16-C24烷基。
35.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C18-C24烷基。
36.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C10烷基。
37.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C12烷基。
38.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C14烷基。
39.权利要求29的化合物，其中R2-R3是C16烷基。
40.权利要求29的化合物，其中R2是C2亚烷基并且R3是-COOCH3。
41.权利要求29的化合物，其中式II的化合物是
42.权利要求29的化合物，其中式II的化合物是
43.权利要求29的化合物，其中式II的化合物是
44.权利要求29的化合物，其中式II的化合物是
45.一种药物组合物，其包含权利要求29的化合物和药用可接受的载体或稀释剂。
46.纳米粒子，其包含权利要求29的化合物。
47.一种治疗患者中的癌症的方法，其包含向患者施用权利要求29的化合物。
48.权利要求47的方法，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤、侵袭性非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌或肺癌。
49.权利要求47的方法，其中所述癌症选自肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、睾丸癌、黑素瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。
50.权利要求47～49中任一项的方法，其中所述患者对一种或多种化疗剂是耐受的。
51.权利要求50的方法，其中所述一种或多种化疗剂是烷化剂。
52.纳米粒子，其包含权利要求1～16中任一项的化合物。
53.权利要求52的纳米粒子，其还包含人血清白蛋白。
54.权利要求52或53的纳米粒子，其还包含聚乳酸乙醇酸。
55.权利要求52或53的纳米粒子，其还包含聚乙二醇。
56.权利要求52或53的纳米粒子，其还包含聚乳酸乙醇酸(PLGA)和聚氧乙烯乳酸共聚物。
57.权利要求53的纳米粒子，其中使用二醛将人血清白蛋白交联。
58.权利要求57的纳米粒子，其中所述二醛是戊二醛。
59.一种冻干组合物，其包含权利要求52～58中任一项的纳米粒子。
60.权利要求59的冻干组合物，其还包含甘露醇、海藻糖、蔗糖或NaCl中的一种或多种。
61.一种治疗患者中的癌症的方法，其包含向患者施用权利要求52～58中任一项的纳米粒子。
62.权利要求61的方法，其中所述癌症是慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、顽性非霍奇金淋巴瘤、侵袭性非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌或肺癌。
63.权利要求61的方法，其中所述癌症选自肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、睾丸癌、黑素瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。
64.权利要求61～63中任一项的方法，其中所述患者对一种或多种化疗剂是耐受的。
65.权利要求64的方法，其中所述一种或多种化疗剂是烷化剂。
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