CN105044332B - 一种监测免疫胶体金试验中hook效应的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，使用免疫结果判读记录仪在t50和t时间时，测定T线灰度值A50和A，当A/A50＜1.05时，判为存在HOOK效应，提示需要稀释样本后再测，结果乘以稀释倍数；当A/A50＞1.05时，即未出现倒钩现象；采用本发明的监测方法可以快速判断所有免疫胶体金实验中是否出现HOOK效应，及时更正检测结果，对于出现HOOK效应的样本进行稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数为最终检测结果，如判断不存在HOOK效应，直接报告检测结果无需再讲样本稀释重测，可大大提高免疫胶体金检测效率和准确率。

Description

一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法
技术领域
本发明属于一种监测方法，具体地涉及一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法。
背景技术
免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，将胶体金标记的免疫反应性物质——抗原(或抗体)与样本中对应的抗体(或抗原)进行反应，并在硝酸纤维素膜上进行层析，并进而与硝酸纤维素膜上包被的另一抗原(或抗体)结合而被固定在硝酸纤维素膜上并显现胶体金颗粒的颜色(T线)，以便对在该样本中的指定抗体或抗原进行定量分析。
有时在测定含有高浓度分析物的样品中观察到没有T线颜色发生或仅发生轻微的T线颜色。在高浓度下T线颜色的消失或减少称作前带效应或“钩状效应”(HOOK效应)，并且与如下事实相关：例如在样品中过量的抗原导致形成小抗体-抗原-复合物，它们不会形成可见的凝集。一般而言，抗原的浓度与抗体的浓度相比越高，则观察到的信号越低。当抗原的递增浓度超过了抗体群识别和结合的相对能力时，T线灰度值会衰减。这种效应是动态的并且代表了从抗原一抗体凝集物形成到非凝集化形式占优势的较高可能性之间反应平衡的改变。
当出现HOOK效应时，就会出现假阴性结果，影响检测结果准确性，造成误诊等严重后果。
发明内容
本发明的目的是提供一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，能够快速有效判断HOOK效应的发生并及时更正检测结果。
本发明通过如下技术方案实现：
一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，使用免疫结果判读记录仪在t50和t时间时，测定T线灰度值值A50和A，t表示抗原与抗体完全反应的时间；t50表示抗原与抗体反应完成50％时的时间，当A/A50＜1.05时，判为存在HOOK效应，提示需要适当稀释样本后再测，结果乘以稀释倍数；当A/A50＞1.05时，即未出现倒钩现象。
其中免疫结果判读记录仪为(天津中新科炬生物制药有限公司生产)NS7001或NS3001。
所述t50和t是通过如下方法确定的：取一标准待测样本，使用免疫结果判读记录仪连续监测该待测样本的免疫胶体金层析反应T线灰度值随时间变化，待T线灰度值不再变化即确定出完全反应的时间t，T线灰度值为完全反应的50％的时间为t50。
如果是低浓度样本，T线颜色深度会缓慢增加，不会在短时间内达峰值,t时T线的灰度值与t50的灰度值之比大于＞1.05；如果是高浓度样本但未超过检测的浓度范围，即未出现倒钩现象，T线t时的灰度值与t50的灰度值之比也会大于1.05。
本发明具有的优点和积极效果是：采用本发明的检测方法可以快速判断所有免疫胶体金实验中是否出现HOOK效应，及时更正检测结果，对于出现HOOK效应的样本进行稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数为最终检测结果，如判断不存在HOOK效应，直接报告检测结果无需再将样本稀释重测，可大大提高免疫胶体金检测效率和准确率。
附图说明
图1为标准样本HCG免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系图；
图2为待测样本HCG免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系图；
图3为标准样本铁蛋白免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系图；
图4为待测样本铁蛋白免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系图；
具体实施方式
实施例1：
监测胶体金免疫层析法测定尿液绒毛膜促性腺激素(HCG)的HOOK效应的方法
(1)t和t50的确定
取浓度为5000mIU/mL的HCG标准样本，采用免疫结果判读记录仪连续监测HCG的免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系见图1所示，T线灰度值恒定开始值即确定出完全反应时间t，从图1可以判断为10分钟，而T线灰度值为完全反应的50％的时间为t50，从图1可判断为2分钟。
(2)HOOK效应的监测方法
由此设置，t为10分钟，t50为2分钟。在2分钟和10分钟时分别测定T线灰度值，实验数据如图2所示，HOOK效应的判断结果见表1。对于样本4用水稀释5倍后重新测定，结果乘以5作为最终检测结果。
表1胶体金免疫层析法测定尿液HCG的HOOK效应判断结果
样本名称 A/A50 HOOK效应
样本1 2.1 否
样本2 2 否
样本3 1.67 否
样本4 1.03 是
实施例2：
监测胶体金免疫层析法测定血液中铁蛋白的HOOK效应的方法
(1)t和t50的确定
取浓度为100ng/ml的铁蛋白标准样本，采用免疫结果判读记录仪连续监测铁蛋白的免疫胶体金层析反应的T线灰度值与时间的关系见图3所示，T线灰度值恒定开始值即确定出完全反应时间t，从图3可以判断为10分钟，而T线灰度值为完全反应的50％的时间为t50，从图3可判断为3分钟。
(2)HOOK效应的监测方法
由此设置，t为10分钟，t50为3分钟。在10分钟和3分钟时分别测定T线灰度值，实验数据如图4所示，HOOK效应的判断结果见表2。对于样本4用水稀释5倍后重新测定，结果乘以5作为最终检测结果。
表2胶体金免疫层析法测定血液中铁蛋白的HOOK效应判断结果
样本名称 A/A50 HOOK效应
样本1 1.60 否
样本2 2.00 否
样本3 1.33 否
样本4 1.01 是

Claims (3)

1.一种监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，使用免疫结果判读记录仪在t50和t时间时，测定T线灰度值A50和A，
当A/A50＜1.05时，判为存在HOOK效应，提示需要稀释样本后再测，结果乘以稀释倍数；
当A/A50＞1.05时，即未出现倒钩现象；
t-表示抗原与抗体完全反应的时间；
t50-表示抗原与抗体反应完成50％的时间。
2.如权利要求1所述的监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，所述免疫结果判读记录仪为NS7001或NS3001。
3.如权利要求1所述的监测免疫胶体金试验中HOOK效应的方法，所述t50和t是通过如下方法确定的：取一标准待测样本，使用免疫结果判读记录仪连续监测该待测样本的免疫胶体金层析反应T线灰度随时间变化，待T线灰度不再变化即确定出完全反应的时间t，T线灰度为完全反应的50％的时间为t50。
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