CN105039145A - 活动隔间式核酸反应管及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种活动隔间式核酸反应管，所述活动隔间式核酸反应管由核酸反应管和活动插片两部分构成，其中：所述核酸反应管的管壁内侧设置有U型凹槽，活动插片插于U型凹槽内，所述活动插片在管体高度的基础上留有接头，接头根部设有折痕，折后接头与管口平面平行。本发明在传统PCR反应管的基础上，在管体内部增加活动插片设计，该活动插片与管壁内部U型凹槽结构吻合，使活动插片与管壁接缝处具有良好的密封性，保证活动插片两侧液体独立贮存，不发生混合。

Description

活动隔间式核酸反应管及其应用

技术领域

本发明涉及一种核酸反应管及其应用。

背景技术

在各类核酸反应中，同一反应中的不同组分往往需要分别贮存，原因是有些组分之间会相互影响，甚至提前反应，导致组分活性下降，影响试验效果，例如限制性内切酶酶切体系中会将酶与Buffer分开，目前市面上销售的限制性内切酶均为酶和相应Buffer分管配套销售。研究人员在使用时需在反应体系中分别添加，并自行配备反应管，在进行大量样本的相同酶切鉴定时要进行大量的加样操作。另外在PCR反应体系中，酶的活性也容易受到其它组分的影响，当上下游引物之间存在互补作用，而体系中其它原料组分都存在，此时即使不加入模板DNA，也可能造成Taq酶的损失，此类情况可以发生在引物与PCR预混液混合保存的条件下。在大规模的分子标记鉴定中，为了保证试验的准确性，研究人员通常会按照常规的操作流程将不能预混的组分单独进行添加，导致工作量巨大，并且反复的加样操作会使人为误差的发生几率大幅增加，影响鉴定结果的准确性。因此，实现“安全预混”意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供一种活动隔间式核酸反应管及其应用，在传统PCR反应管的基础上，在管体内部增加活动插片设计，该活动插片与管壁内部U型凹槽结构吻合，使活动插片与管壁接缝处具有良好的密封性，保证活动插片两侧液体独立贮存，不发生混合。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种活动隔间式核酸反应管，包括核酸反应管和活动插片两部分，所述核酸反应管的管壁内侧设置有U型凹槽，活动插片插于U型凹槽内，所述活动插片的顶端留有接头，接头根部设有折痕，折后接头与管口平面平行。

上述活动隔间式核酸反应管可以作为便捷操作试剂盒应用于不同种类的核酸反应，适用于多种试剂的便捷操作包装。

本发明中，所述活动插片的制作选用与管体相同的材质，表面经硅化处理，在抽出时不粘带液体，确保体系的完整性。

本发明中，所述活动插片完全插入核酸反应管后，在管体高度的基础上留有3mm接头，接头根部设计折痕，折后接头可与管口平面平行，上表面可利用粘着剂(传统封口膜所使用的粘着剂即可)与封口膜(盖)粘合，使用时在打开封口膜(盖)的同时，活动插片由于顶端的粘合力和牵引力被顺势抽出，管内原有“隔间”消失，原不同隔间内单独贮存的液体组份发生混合，此时只要按说明书向管内加入待反应的核酸样品即可。

本发明中，所述活动隔间式核酸反应管分为96孔板和单独反应管两种，96孔板采用封口膜封口，加入待检DNA后应用新的封口膜或石蜡油进行封口，单独的反应管采用自带管盖封口，打开管盖后直接将活动插片揭下丢弃，重新盖好即可。

本发明具有如下优点：

1、本发明中设计出带有活动插片的活动隔间式核酸反应管，首次实现了PCR反应体系中除DNA模板外所有组份的预配制和混合贮存，将研究人员的工作量减少到最小，提高大规模鉴定的工作效率。

2、在活动隔间式核酸反应管中直接添加最适配比的各反应组份，提高了反应的稳定性和反应结果准确性。

3、以本发明中活动隔间式核酸反应管的应用为基础的系列试剂盒为大量分子标记从理论知识到实物商品的转化提供了一条有效途径。

4、以本发明中活动隔间式核酸反应管的应用为基础的酶切反应试剂盒为类似酶类的销售提供了一种全新的、更加符合用户使用需求的销售方式。

5、利用本发明中的活动隔间式核酸反应管可以根据不同用户需求进行灵活的设计定制，可以将引物订购与反应试剂的销售合二为一，改变传统的引物与反应试剂的销售方式，使之更加符合顾客实际需求，更加便捷和高效。

附图说明

图1为核酸反应管主体的结构示意图；

图2为活动插片的结构示意图；

图3为活动隔间式核酸反应管的整体结构示意图；

图4为活动隔间式核酸反应管的使用步骤示意图；

图中，1-核酸反应管，2-U型凹槽，3-接头，4-折痕，5-活动插片。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

具体实施方式一：如图1-3所示，本实施方式提供的活动隔间式核酸反应管由核酸反应管1和活动插片5两部分构成，所述核酸反应管1的管壁内侧设置有U型凹槽2，活动插片5插于U型凹槽2内，所述活动插片的顶端留有接头3，接头3根部设有折痕4，折后接头与管口平面平行。

如图4所示，活动隔间式核酸反应管的使用步骤如下：

步骤1：将活动插片延管壁内侧U型凹槽完全插入管体。

步骤2：在隔间A和隔间B内加入不同反应组份，将活动插片顶端接头延折痕折至与插片平面呈一定角度(介于0°至90°之间均可,确保接头受到管盖压力时可以沿折痕弯曲,避免接头和插片垂直受力发生变形)，盖好管盖(此时接头与管口平面平行，且上表面与管盖黏合)。

(以上为试剂盒商品制备阶段)

步骤3：使用时正常打开管盖，活动插片被顺势抽出，管内组份发生混合。

步骤4：将粘在管盖上的活动插片揭下丢弃，继续试验。

(以上为试剂盒商品使用阶段)

注：96孔板以整张贴膜形式代替管盖，但插片的插入与抽出与此单独反应管作用方式相同。

具体实施方式二：本实施方式提供了一种大规模PCR分子标记鉴定便捷操作试剂盒。

大规模分子标记鉴定便捷操作系列试剂盒是一种可以有效简化分子标记鉴定试验操作、提高反应体系稳定性，从而高效、快捷地进行大规模分子标记鉴定的试剂盒。根据不同的目的基因选择相应的标记引物，将引物稀释液和PCR预混液按一定配比分装于活动隔间式核酸反应管内的两个隔间中，然后进行封口，一般此类鉴定多采用96孔板。研究人员可根据需要购买或定制用于鉴定某一基因的该系列试剂盒，然后根据试剂盒说明书将待检DNA加入管内即可进行后续试验，免去了引物查找、订购，反应体系摸索，反复加样等繁琐的步骤，降低了大量人为操作可能带来的误差。

以番茄分子标记辅助育种系列-I₂基因鉴定试剂盒为例：

本系列试剂盒专为番茄分子标记辅助育种设计，可以减少大规模种质鉴定的工作量，提高鉴定的准确性，而且由于引物和反应体系完备，无需进行标记查找筛选、体系设计摸索、稳定性检验等步骤，非常适合缺少分子理论基础的育种机构使用。

试剂盒组分说明：

采用活动隔间式核酸反应管96孔板或单独反应管。

隔间A中组分：上游引物1μL(10μM)，下游引物1μL(10μM)，H₂O10μL；

隔间B中组分：2×TaqMasterMix(康为世纪)10μL；

灌装后采用封口膜封口，-20℃保存、运输。

试剂盒使用说明：

使用时室温下使液体组分充分溶化，溶化后揭去封口膜(盖)。

每反应管内加入1-2μgDNA(待检样品)。

用新的封口膜或石蜡油封口，单独反应管揭去活动插片后重新盖好。

按下列反应条件进行反应：

1.94℃3min；

2.94℃30s；

3.51℃40s；

4.72℃1min30s(2-4step，35×cycle)；

5.72℃10min；

6.4℃——。

具体实施方式二：本实施方式提供了一种便捷操作酶反应试剂盒。

便捷操作酶反应试剂盒采用活动隔间式核酸反应管，将酶和Buffer按一定比例分别加入两个隔间中，研究人员只要将待反应的核酸按说明书加入管中进行反应即可。

以限制性内切酶TaqI为例：

试剂盒组分说明：

采用活动隔间式核酸反应管96孔板或单独反应管。

隔间A中组分：TaqI1μL，nuclease-freewater10μL；

隔间B中组分：10×BufferTaqI2μL，nuclease-freewater8μL；

灌装后采用封口膜封口，-20℃保存、运输。

试剂盒使用说明：

使用时室温下使液体组分溶化，溶化后揭去封口膜(盖)。

每反应管内加入0.1-0.5μgDNA(待检样品)。

用新的封口膜或石蜡油封口，单独反应管揭去“活动插片”后重新盖好。

65℃下孵育1-16小时。

具体实施方式三：本实施方式提供了一种分子标记作图引物筛选便捷操作试剂盒。

分子标记作图引物筛选便捷操作试剂盒采用活动隔间式核酸反应管，将待筛选的引物和PCR预混液按一定比例分别添加到两个隔间中，研究人员只需将父母本或群体DNA加入反应管，即可进行PCR筛选，对于特殊的引物需求，可以进行定制。

以番茄SSR标记作图引物筛选便捷操作试剂盒为例：

选取覆盖番茄12条染色体的已知SSR标记，制成针对父母本和F₁进行筛选以及针对F₂大量群体进行作图的试剂盒，可根据需求设计反应管类型和引物添加布局。

试剂盒组分说明：

采用活动隔间式核酸反应管96孔板或单独反应管。

隔间A中组分：上游引物1μL(10μM)，下游引物1μL(10μM)，H₂O10μL；

隔间B中组分：2×TaqMasterMix(康为世纪)10μL；

灌装后采用封口膜封口，-20℃保存、运输。

试剂盒使用说明：

使用时室温下使液体组分溶化，溶化后揭去封口膜(盖)。

每反应管内加入1-2μgDNA(待检样品)。

用新的封口膜或石蜡油封口，单独反应管揭去活动插片后重新盖好。

按下列反应条件进行反应：

1.94℃3min；

2.94℃30s；

3.55℃或Tm40s；

4.72℃1min(2-4step，35×cycle)；

5.72℃10min；

6.4℃——。

以上三种便捷操作试剂盒均在活动隔间式核酸反应管的应用基础上设计，操作简便，并且可以将人为加样带来的误差降到最低。本反应管可应用于多种反应及包装，并不局限于本文示例。

Claims (7)

1.一种活动隔间式核酸反应管，其特征在于所述活动隔间式核酸反应管由核酸反应管和活动插片两部分构成，其中：所述核酸反应管的管壁内侧设置有U型凹槽，活动插片插于U型凹槽内，所述活动插片的顶端留有接头，接头根部设有折痕，折后接头与管口平面平行。

2.根据权利要求1所述的活动隔间式核酸反应管，其特征在于所述活动插片与核酸反应管的管体材质相同。

3.根据权利要求1所述的活动隔间式核酸反应管，其特征在于所述活动插片的表面经硅化处理。

4.根据权利要求1所述的活动隔间式核酸反应管，其特征在于所述接头长度为3mm。

5.根据权利要求1所述的活动隔间式核酸反应管，其特征在于所述活动隔间式核酸反应管分为96孔板和单独反应管两种。

6.权利要求1所述的活动隔间式核酸反应管在便捷操作试剂盒中的应用。

7.根据权利要求6所述的活动隔间式核酸反应管在便捷操作试剂盒中的应用，其特征在于所述便捷操作试剂盒为大规模PCR分子标记鉴定便捷操作试剂盒、便捷操作酶反应试剂盒或分子标记作图引物筛选便捷操作试剂盒。