CN105031663A - 一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 - Google Patents
一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105031663A CN105031663A CN201510374914.9A CN201510374914A CN105031663A CN 105031663 A CN105031663 A CN 105031663A CN 201510374914 A CN201510374914 A CN 201510374914A CN 105031663 A CN105031663 A CN 105031663A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- luteolin
- sbe
- beta
- inclusion compound
- inclusion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法，属于中药制剂技术领域。该方法包括如下步骤：将木犀草素与SBE-β-CD按物质的量之比1:2物理混匀，缓慢加入100μL超纯水，研磨70min，得到初始包合物；将所述的初始包合物于60℃干燥1h，研细后置于垫有滤纸的布氏漏斗中，用无水乙醇洗涤，取残渣，60℃干燥20min，得到木犀草素/SBE-β-CD包合物。本发明以投料比、研磨时间和水量作为考虑因素，采用正交试验法优选制备处方。制备得到的木犀草素/SBE-β-CD包合物的溶解度得到了很大的提高。本发明的制备方法简单，得到较满意的包合率和收率，可应用于生产与临床需要。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂技术领域，特别涉及一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法。
背景技术
木犀草素(luteolin)是一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于白毛夏枯草、金银花、菊花等天然药材中，具有抗氧化、抗炎、抗菌等方面的作用。近年来的研究证实，木犀草素是一种拓扑异构酶抑制剂，可多靶点、多途径、多环节产生抗肿瘤效应，如直接干扰肿瘤细胞的生长和代谢，诱导其凋亡；抑制肿瘤的转移；通过增强机体的免疫力，抑制血管内皮细胞的生长，减少肿瘤组织血管的生成；与化疗药物联用产生增敏效应，从而提高药物疗效，是一种很有前途的天然抗肿瘤药物。磺丁基醚-β-环糊精(sulfobutylether-β-cyclodextrin简称SBE-β-CD)是对β-CD进行磺酸化修饰的衍生物。与β-CD的其他衍生物相比，SBE-β-CD中引入的极性强大的伸向外侧的磺丁基醚基团，扩大了β-CD的洞穴范围，在和药物包合时，它结合的更加牢固。SBE-β-CD主要应用于增加药物溶解度和稳定性、提高生物利用度、调节释放速度、防止挥发性成分逸散、改善不良气味、减少刺激性、降低不良反应等方面。
但是，由于木犀草素水溶性较差，将其制成木犀草素新剂型以改善药物溶解度，存在一定的困难。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法，包括如下步骤：
将木犀草素与SBE-β-CD按物质的量之比1:2混匀，缓慢加入100μL超纯水，研磨70min，得到初始包合物，将所述的初始包合物于60℃干燥1h，研细后置于垫有滤纸的布氏漏斗中，用无水乙醇洗涤，取残渣，60℃干燥20min，得到木犀草素/SBE-β-CD包合物。
所述的研磨优选为沿同一方向匀速研磨。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：SBE-β-CD水溶性好、肾毒性和溶血作用等不良反应可降至最低，是一种优良的药物辅料。本发明以投料比与研磨时间为常设置的因素，以可明显影响研磨力度的加水量作为第三个因素，采用正交试验法优选制备处方。制备得到的木犀草素/SBE-β-CD包合物经IR和DSC鉴别证明已形成，相对木犀草素而言其溶解度得到了很大的提高。本发明采用HPLC作为检测方式，该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，操作方便。其制备方法简单，可得到较满意的包合率和收率，可应用于生产与临床需要。
附图说明
图1是木犀草素的紫外扫描图；
图2是木犀草素对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液的HPLC图谱；其中，A为木犀草素对照品的HPLC图谱，B为SBE-β-CD的HPLC图谱，C为木犀草素/SBE-β-CD包合物的HPLC图谱,1为木犀草素；
图3是木犀草素的相溶解度图，以木犀草素溶解度(mol/L)为纵坐标，SBE-β-CD浓度(mol/L)为横坐标；
图4是各物质的红外分析图谱，其中，A为木犀草素的红外分析图谱；B为SBE-β-CD的红外分析图谱；C为木犀草素与SBE-β-CD物理混合物的红外分析图谱；D为木犀草素/SBE-β-CD包合物的红外分析图谱；
图5是各物质的差示扫描量热分析图谱，其中，A为木犀草素的差示扫描量热分析图谱，B为SBE-β-CD的差示扫描量热分析图谱，C为木犀草素与SBE-β-CD物理混合物的差示扫描量热分析图谱，D为木犀草素/SBE-β-CD包合物的差示扫描量热分析图谱。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例
1仪器与材料
1.1仪器
高效液相色谱仪、SPD-20A检测器及色谱数据处理系统(日本岛津)；UV2600型紫外-可见分光光度计(日本岛津)；DiscoveryDV215CD电子天平(美国OHAUSCorporation,)；CS101-1E电热鼓风干燥箱(重庆万达仪器有限公司)；G16型医用离心机(北京白洋医疗器械有限公司)；KQ3200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HITECHEdi-S10UV实验室纯水系统(上海和泰仪器有限公司)；THZ-82水浴恒温振荡器(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；傅里叶红外光谱仪(美国ThermoFisherscientific)；TGA/DSC1STAReSystem(METTLER1100LF)。
1.2试药
木犀草素对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST-14050411，纯度大于98％)；木犀草素(西安唯奥生物科技有限公司，批号20140912，纯度98％)；SBE-β-CD(山东滨州智源生物科技有限公司，批号20140626，平均取代度6.5)；甲醇(色谱纯，美国TEDIA公司)；磷酸，无水乙醇均为分析纯；水为超纯水。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18(4.6×250mm,5μm)；流动相：甲醇-0.2％H3PO4溶液(70:30)；流速：1ml/min；检测波长：348nm；进样量：10μL。
2.2溶液配制
木犀草素对照品储备液：精密称取木犀草素对照品适量，置10mL容量瓶，以甲醇溶解并定容，摇匀，即得浓度为111.6μg/mL的对照品储备液，于4℃冰箱保存，临用前配制成浓度分别为6.696、8.928、11.160、13.392、15.624、20.088μg/mL的系列标准溶液。
供试品溶液：精密称取木犀草素/SBE-β-CD包合物适量，置10mL容量瓶，以40％甲醇溶解并定容，超声20min，即为供试品溶液。
阴性样品溶液：精密称取SBE-β-CD适量，置10ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容，即得阴性样品溶液。
2.3包合物制备(研磨法)
称取适量木犀草素与SBE-β-CD(物质的量之比1:2)，将二者物理混匀，缓慢加入100μL适量超纯水，沿同一方向匀速研磨70min，即得初步的包合物，将包合物于60℃干燥1h后研细，后置于垫有滤纸的布氏漏斗中，用适量无水乙醇洗涤未包合的木犀草素，60℃干燥20min，即得木犀草素/SBE-β-CD包合物。
2.4方法学研究
2.4.1检测波长的确定
将一定浓度的木犀草素对照品溶液，以甲醇为空白，在200-800nm范围内全波段扫描，测得木犀草素的最大吸收波长为348nm(图1)。
2.4.2专属性
按照“2.1”项下色谱条件，分别考察木犀草素对照品溶液、阴性样品溶液、供试品溶液的色谱图(见图2)。结果表明，木犀草素峰形良好，SBE-β-CD未对木犀草素的测定产生干扰。
2.4.3标准曲线
取系列木犀草素对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝23794X﹣17234(r＝0.999)，表明木犀草素在6.696～20.088μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.4.4精密度
取浓度为15.624μg/mL的木犀草素对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件于1d内重复测定5次，连续测定5d，记录峰面积，计算得日内精密度RSD为0.35％，日间精密度RSD为0.64％，表明仪器精密度良好，日内及日间精密度均满足检测要求。
2.4.5稳定性
取供试品溶液，于室温下放置0、1、2、4、8、10、24h后按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算得RSD为0.38％，表明供试品溶液在24小时内稳定。
2.4.6重复性
精密称取包合物5份，按“2.2”项下供试品溶液制备方法，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算得RSD为2.99％。结果表明该方法重复性良好。
2.4.7加样回收率
精密量取木犀草素对照品溶液(C＝15.624μg/mL)各0.6、1、1.4mL于2mLEP管中，每个浓度三份，分别加入包合物供试品溶液(其中木犀草素含量29.6088μg/mL)0.5mL，各加甲醇0.9、0.5、0.1mL以保证总体积为2mL，最终配制成低、中、高浓度的溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积。结果见表1，平均加样回收率为100.81％，RSD为2.15％。
2.5含量测定
取供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算包合率和收率(包合率＝包合物中木犀草素的质量/木犀草素投料量；收率＝包合物实际质量/(SBE-β-CD+木犀草素)投料量)。
表1加样回收率试验
2.6溶解度测定
称取过量包合物与木犀草素置10mL容量瓶中，制成过饱和溶液，于室温(25±2)℃振荡24h。上清液13000rpm/min离心10min，各精密量取上清液适量于10mL容量瓶，40％甲醇定容，超声20min，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，代入回归方程计算出包合物与木犀草素的溶解度，得出包合物在水中的溶解度为5174.25mg/L，木犀草素的溶解度为82.26mg/L。结果表明包合物较木犀草素的溶解度提高了62.90倍。
2.7正交实验优化包合工艺
根据文献及预实验结果，以SBE-β-CD与木犀草素的投料比、加水量、研磨时间为考察因素，按L9(34)正交表进行正交设计，以包合率和收得率拟合的综合结果为指标，进行9次试验，因素水平见表2，结果及直观分析见表3，方差分析见表4。由极差R可知，各因素对综合结果的影响顺序为B>A>C。由方差分析表可知，B因素三个水平对综合结果有统计学意义，A和C水平内差异均无统计学意义。A因素中K3＞K2＞K1，B因素中K1＞K3＞K2，C因素中K3＞K2＞K1，因此确定木犀草素/SBE-β-CD包合物制备工艺的最优处方为A3B1C3，即SBE-β-CD与木犀草素的投料比为2:1，加水量为100μL、研磨时间为70min。
表2正交因素水平表
表3直观分析表
综合结果＝0.6×(24％+包合率)+0.4×(4.56％+收率)
表4方差分析
2.8验证试验
按照以上所选最优处方，制备三批木犀草素/SBE-β-CD包合物，综合评分结果分别为95.08、96.06、92.40,平均值为94.51，表明该工艺稳定。
2.9木犀草素/SBE-β-CD包合物的鉴定
2.9.1相溶解度图
在浓度为0、0.9091、1.8182、2.7273、3.6364、4.5454mmol/L的SBE-β-CD溶液中分别加入过量的木犀草素，置25mL容量瓶中于水浴恒温振荡器中振摇3d(25±2℃)，取上清液13000rpm/min离心10min，各精密量取上清液适量于10mL容量瓶，40％甲醇定容，超声20min，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，代入回归方程计算不同浓度SBE-β-CD溶液中木犀草素的溶解度，以木犀草素溶解度(mol/L)为纵坐标，SBE-β-CD浓度(mol/L)为横坐标，绘制相溶解度图(图3)，回归方程为Y＝0.4989X+0.0004(r＝0.9981)。可见木犀草素的溶解度与SBE-β-CD浓度成线性关系，相溶解度图为AL型，证实形成的是1:1的包合物。若包合物的形成摩尔比为1：1，则有b＝[KS0/(1+KS0)]a+S0(b为SBE-β-CD存在时木犀草素分子的总浓度，S0为游离木犀草素分子的浓度，a为SBE-β-CD的总浓度)。通过b对a作图就可得相溶解度图。通过斜率和截距可以求得平衡常数K为2.49×103L/mol。这说明木犀草素分子很易进入SBE-β-CD中与之形成包合物，其结合很牢固。
2.9.2红外光谱分析
采用KBr压片法制备样品，波数范围4000～400cm-1，分别对木犀草素、SBE-β-CD、木犀草素与SBE-β-CD物理混合物(物质的量之比1:1)及包合物进行红外扫描，见图4。结果表明，物理混合物的红外光谱中木犀草素和SBE-β-CD两者有简单的叠加。木犀草素在3464，3234，1603，1262，1126cm-1左右的特征峰在包合物中消失，而在混合物中仍存在。SBE-β-CD与包合物的峰形相似，推测木犀草素可能被完全进入SBE-β-CD的空腔中，表明木犀草素/SBE-β-CD包合物已形成。
2.9.3差示扫描量热分析
分别对木犀草素、SBE-β-CD、木犀草素与SBE-β-CD的物理混合物(物质的量之比1:1)及包合物进行差示扫描量热分析。测试条件：以Al2O3为参比，Ar为气氛，升温速率为10℃/min，扫描范围为30～300℃。结果见图5。四种物质在55℃左右均有吸热峰，而物理混合物在55℃的峰相对SBE-β-CD较强，推测木犀草素在此处的贡献较大，SBE-β-CD与物理混合物在221℃左右均有放热峰，因此物理混合物基本包括了木犀草素和SBE-β-CD的主要特征，包合物在261、288℃处出现两个新的放热峰，与前三者有差异，结果表明木犀草素/SBE-β-CD包合物已形成。
3、讨论
本实验采用HPLC作为检测方式，该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，操作方便。之前文献所报道的木犀草素包合物的制备多采用β-CD或者HP-β-CD，相比之下SBE-β-CD水溶性更好、肾毒性和溶血作用等不良反应可降至最低，是一种优良的药物辅料。经文献查阅投料比与研磨时间为常设置的因素，实验过程中发现加水量可明显影响研磨力度，故设置为第三个因素。实验采用正交试验法优选制备处方，分析了对包合物制备工艺的主要影响因素与收率和包合率的关系，从而了解因素与收率和包合率的相关性。制备的包合物经IR和DSC鉴别证明已形成，相对木犀草素而言溶解度得到很大提高。本方法可得到较满意的包合率和收率，可应用于生产与临床需要。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将木犀草素与SBE-β-CD按物质的量之比1:2物理混匀，缓慢加入100μL超纯水，研磨70min，得到初始包合物；将所述的初始包合物于60℃干燥1h，研细后置于垫有滤纸的布氏漏斗中，用无水乙醇洗涤，取残渣，60℃干燥20min，得到木犀草素/SBE-β-CD包合物。
2.根据权利要求1所述的制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法，其特征在于，所述的研磨为沿同一方向匀速研磨。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510374914.9A CN105031663B (zh) | 2015-06-30 | 2015-06-30 | 一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510374914.9A CN105031663B (zh) | 2015-06-30 | 2015-06-30 | 一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105031663A true CN105031663A (zh) | 2015-11-11 |
| CN105031663B CN105031663B (zh) | 2018-10-16 |
Family
ID=54439016
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510374914.9A Expired - Fee Related CN105031663B (zh) | 2015-06-30 | 2015-06-30 | 一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105031663B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113243362A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-13 | 维尼健康（深圳）股份有限公司 | 一种医用防锈消毒剂及其制备方法 |
| CN115400080A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-29 | 大连工业大学 | 一种由木犀草素稳定的Pickering乳液及其制备方法、应用 |
-
2015
- 2015-06-30 CN CN201510374914.9A patent/CN105031663B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 伍永富等: "Box-Behnken设计-效应面法优化木犀草素-β-环糊精包合物的制备工艺研究", 《中草药》 * |
| 李向荣: "《药剂学》", 28 February 2010, 浙江大学出版社 * |
| 李锦莲等: "正交试验法优选木犀草素的β-环糊精包合工艺", 《数理医药学杂志》 * |
| 王灵杰等: "木犀草素羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其鉴定", 《中国现代应用药学杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113243362A (zh) * | 2021-04-30 | 2021-08-13 | 维尼健康（深圳）股份有限公司 | 一种医用防锈消毒剂及其制备方法 |
| CN115400080A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-29 | 大连工业大学 | 一种由木犀草素稳定的Pickering乳液及其制备方法、应用 |
| CN115400080B (zh) * | 2022-08-22 | 2023-12-22 | 大连工业大学 | 一种由木犀草素稳定的Pickering乳液及其制备方法、应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105031663B (zh) | 2018-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102988723B (zh) | 一种中成药的制备方法及应用 | |
| CN103566023B (zh) | 一种齿痛消炎片的制备方法及应用 | |
| CN103655843B (zh) | 一种益康补元片及其制备方法和应用 | |
| CN104800481B (zh) | 一种挥发油包合物的制备方法及其应用 | |
| CN102327571A (zh) | 川贝母总生物碱及所含化合物的抗癌新用途 | |
| CN102266297B (zh) | 米铂冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN105031663A (zh) | 一种制备木犀草素/SBE-β-CD包合物的方法 | |
| CN109400598A (zh) | 盐酸小檗碱与乳酸共晶、其制备方法和应用 | |
| CN104013703A (zh) | 一种栀子提取物及其制备方法 | |
| CN103977391B (zh) | 一种小柴胡胶囊的制备方法及应用 | |
| CN105267978A (zh) | 一种含有艾纳香提取物的环糊精包合物的制备方法及其应用 | |
| CN102895283A (zh) | 西黄丸滴丸成型工艺 | |
| CN103792303B (zh) | 翼首草药材的检测方法 | |
| CN103463138B (zh) | 一种中药分散片及其制备方法 | |
| CN103323551A (zh) | 一种检测枸杞酸含量的方法 | |
| CN101401855A (zh) | 从酸枣仁中提取抗焦虑物质的方法 | |
| CN103494915B (zh) | 一种乳块消片的制备方法及应用 | |
| CN104983836A (zh) | 一种从复方血脂宁的原料药中提取活性成分的方法 | |
| CN105136939B (zh) | 一种采用hplc法测定桑葚药材中柠檬酸含量的方法 | |
| Aihaiti et al. | Extraction and Separation of Oxysophocarpine from Sophora alopecuroides by Reverse Three-phase Membrane Cycle Method | |
| CN103919885B (zh) | 一种鼻渊软胶囊的制备方法及应用 | |
| CN103735960A (zh) | 石椒草咳喘片在制备抑制肺癌细胞llc细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103536691B (zh) | 一种五味子丸的制备方法及应用 | |
| CN104922447A (zh) | 一种强身胶囊的制备方法及应用 | |
| CN102038647A (zh) | 一种注射用辅酶a冻干粉针剂的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20181016 Termination date: 20210630 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |