CN105030880A - 一种新型的花生壳总黄酮提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，准确称取花生壳，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂，抽滤，滤液用乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度，计算花生壳总黄酮的提取率。本发明采用乙醇提取花生壳中的总黄酮，其中提取温度、乙醇浓度对总黄酮的提取率均有较大的影响，提取温度较低时，要得到较高的总黄酮提取率必须增加乙醇浓度，而提取温度较高时，较低的乙醇浓度就能达到较高的提取率，因此采用此本发明所述提取工艺，总黄酮的提取率有很大的提高。

Description

一种新型的花生壳总黄酮提取工艺

技术领域

本发明涉及一种中药提取工艺领域，具体是指一种新型的花生壳总黄酮提取工艺。

背景技术

花生属豆科一年生草本植物，目前，对其开发利用的主要是花生仁、花生红衣和花生根，而花生壳大部分用作燃料或用作废渣弃去，仅有少量被加工成饲料或用于化工原料，造成自然资源的极大浪费，直接影响了花生的综合利用价值。据临床实践和药理研究证明，花生壳具有良好的抗氧化、降胆固醇、降β-脂蛋白，降血压、增加冠状动脉流量等作用，以花生壳为原料生产的舒脉胶囊是治疗高血脂症的纯中药直接，已收载入相关部颁标准，发挥这些药理活性的物质主要是花生壳中含有黄酮类化学物，研究表明，花生壳中含有的黄酮类化合物和粗纤维外，还含有多酚类和黄酮类物质，以及β-谷甾醇等甾体化合物。花生壳中以木犀草素为代表的黄酮类化合物不仅具有降血压、降血脂、扩张冠状动脉等作用，还具有抗氧化、镇咳、平喘、抗菌抗炎、增强免疫和抗肿瘤等药理活性。因此，从花生壳中提取黄酮类化合物作为保健食品或药品的原料具有较好的前景。但是从花生壳中对黄酮类化合物的提取工艺较为复杂，且提取效率不高。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，有利于进一步提高提取效率，且提取工艺简单。

本发明通过下述技术方案实现：一种新型的花生壳总黄酮乙醇提取工艺，准确称取花生壳，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂，抽滤，滤液用乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述提取溶剂为蒸馏水、碱性水溶液、80%丙酮、乙酸乙酯、70%甲醇、乙醇中的任意一种。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述乙醇浓度为75%—85%。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述提取温度为40℃—70℃。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述提取温度为70℃。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述料液比为1：25。

进一步地，为了更好的实现本发明，还具有以下技术特征，所述提取时间为2—2.5h。

具体实验方法为：

1.1材料与仪器

花生壳花生果产于安徽省，手工剥壳，粉碎后备用；芦丁、甲醇、乙醇、丙酮、AI(NO3)3、NaOH、NaOH、NaNO2均为分析纯。

PW100高速粉碎机，生产厂家：天津市泰斯特仪器有限公司；WFZUV-2000型紫外可见分光光度计，生产厂家：上海尤尼柯仪器有限公司；RE-52AA型旋转蒸发器，生产厂家：上海亚荣生化仪器厂；DZF-6030A型真空干燥箱，生产厂家：上海一恒科技有限公司，SARTORIUS-BS21S电子天平，生产厂家：德国赛多利斯集团。

1.2实验方法

1.2.1将芦丁于120℃烘箱中烘至恒重，于干燥器中冷却后称取0.0615g,用70%乙醇溶解，定容至250mL，得到浓度为0.246mg/ml芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0mL于50mL容量瓶中，加入5%NaNO₂溶液1.5mL，摇匀放置6min后加入10%Al(NO₃)₃溶液1.5mL，摇匀放置6min后加入4%NaOH溶液20mL，用70%乙醇定容，摇匀10min后用1cm比色皿于510nm测定吸光度A，得芦丁浓度Y(mg/mL)与吸光度A的回归方程；Y=0.0918A-0.0014(R=0.9952)。

1.2.2准确称取3.0g花生壳，用滤纸包住并捆好，置于索氏提取器中，用100mL甲醇提取，50℃水浴加热回流，当索氏提取器中的溶液由黄色接近无色时，取出滤纸包，提取液用70%乙醇定容至100mL，作为待测液，取1mL待测液至50mL容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度A，计算花生壳总黄酮的含量，重复3次，取平均值。计算花生壳总黄酮的平均含量。

1.2.3花生壳总黄酮的提取和测定方法为：准确称取3.0g花生壳置于磨口三颈烧瓶中,按照要求加入一定量的提取剂，在一定温度下回流提取一定时间，抽滤，滤液用70%乙醇定容至100mL，作为待测液，取1.5mL待测液于50mL容量瓶中,按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度A。花生壳总黄酮提取率按下列公式计算：

花生壳总黄酮提取率(%)=（C′×V′₁×V′₂）/（V′₃×W′×T）×100%×1000

式中C′—根据回归方程计算得到的芦丁浓度，mg/mL；V′1—提取液体积,mL；V′₂—稀释后提取液体积，mL；V′₃—待测液体积，mL；W′—花生壳质量，g；T—花生壳总黄酮平均含量，%。

1.2.4单因素实验分别研究不同料液比、提取时间、提取温度、乙醇浓度对花生壳总黄酮提取率的影响。

1.2.5提取花生壳总黄酮的Box-Behnken设计实验从单因素实验结果可知，提取温度、料液比和乙醇浓度是影响从花生壳中提取总黄酮的关键条件，因此选择上述3个因子为研究对象，自变量按xi=(Xi-X0)/Xi进行编码变换,式中xi为自变量Xi的编码值，X0为自变量Xi在中心点的值，Xi为自变量变化步长。并以花生壳总黄酮提取率为响应值，设计Box-Behnken实验。用标准多项式回归方法，对实验数据进行拟合，得到一个二次多项式。

2结果与分析

2.1花生壳总黄酮平均含量的测定结果

按照1.2.2的测定方法测得花生壳总黄酮平均含量为3.15%。本结果以花生壳总黄酮的实际真实含量作为以下计算提取率的依据。

2.2提取单因素对花生壳总黄酮提取率的影响

2.2.1提取剂的确定：分别用蒸馏水、碱性水溶液、80%丙酮、乙酸乙酯、70%甲醇、70%乙醇作为提取剂，按照1.2.2的方法在50℃回流提取2h，料液比1：25，花生壳总黄酮提取率分别为13.42%、67.38%、43.67%、23.51%、84.37%、87.28%。蒸馏水、丙酮和乙酸乙酯提取率较低，乙醇和甲醇提取率较高，相比之下乙醇的安全性较高，优选乙醇溶剂。

2.2.2乙醇浓度对提取率的影响在提取温度50℃、料液比1：25、提取时间2h条件下，分析乙醇浓度对花生壳总黄酮提取率的影响，随乙醇浓度的增加，花生壳总黄酮提取率呈上升趋势，说明乙醇浓度对提取率影响较显著，乙醇浓度太小，则原料提取不完全，不能将所有的黄酮类化合物转移到提取液中；乙醇浓度太大，则产生很大的渗透压，影响黄酮类化合物的提取浓度。实验过程中发现，当乙醇浓度较低时，提取液在存放时易腐败变质，其原因是由于乙醇浓度较低时，水作为了提取剂，易把蛋白质、糖类等易溶于水的物质提取出来，从而导致了霉变。当乙醇浓度超过80%时，提取液颜色加深，说明各种杂质的溶出液增多，也给后续的精制处理带来较大的困难，因此确定乙醇浓度优选80%。

2.2.3提取温度对提取率的影响：在乙醇浓度80%、料液比1：25、提取时间2h条件下，分析提取温度对花生壳总黄酮提取率的影响，可知,随着温度的升高,有利于花生壳总黄酮提取效率的提高。黄酮类化合物在乙醇溶液中的溶解度随温度的升高而增加,当温度达到一定值时，黄酮类化合物的提取除了溶剂效应外，还伴随着热效应的影响；当温度超过乙醇的沸点时，乙醇会挥发，此时黄酮类化合物的提取主要是热浸提，而乙醇提取处于次要地位。当提取温度在40～70℃时，花生壳总黄酮提取率变化不大,当温度超过70℃时，热提取和乙醇提取的共同作用提取黄酮类化合物，温度超过了乙醇的沸点，导致已不再属于有机溶剂提取的范围。

2.2.4料液比对提取率的影响：在乙醇浓度80%、提取时间2h、提取温度50℃条件下，分析料液比对花生壳总黄酮提取率的影响，可知，随着乙醇溶剂量的增加，花生壳总黄酮提取率逐渐增加，这是因为溶剂量的增加提高了花生壳与溶剂间黄酮类化合物的浓度差，从而减少了花生壳中黄酮类物质的残留量，因此可提高提取率，但是随着溶剂量的增加，回收试剂的时间较长，能耗较高,造成资源浪费。当料液比为1：25时，提取率达到92.78%，已达到较好的提取效果，考虑到本实验中只提取一次，应适当增加溶剂量，故料液比优选1：25。

2.2.5提取时间对提取率的影响：在乙醇浓度80%、料液比1：25、提取温度50℃条件下，提取时间对花生壳总黄酮提取率的影响，经过分析可知，花生壳总黄酮提取率随提取时间的增加而提高，但是超过2h以后，提取率维持在一个相对稳定的状态下，增加的幅度基本不变，再继续增加提取时间对提取效果影响不大，因此可将提取时间确定在2～2.5h之间。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

本发明采用乙醇提取花生壳中的总黄酮，提取温度和乙醇浓度对总黄酮的提取率均有较大的影响，提取温度较低时，要得到较高的总黄酮提取率必须增加乙醇浓度，而提取温度较高时，较低的乙醇浓度就能达到较高的提取率，因此采用此提取工艺对总黄酮的提取率有很大的提高。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：

本实施例中，一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，准确称取花生壳3.0g，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂70%乙醇，在40℃回流提取2h，抽滤，滤液用70%乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度，计算花生壳总黄酮的提取率。

实施例2：

本实施例中，一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，准确称取花生壳3.0g，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂75%乙醇，在70℃回流提取2.5h，抽滤，滤液用70%乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度，计算花生壳总黄酮的提取率。

实施例3：

本实施例中，一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，准确称取花生壳3.0g，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂85%乙醇，在70℃回流提取2.5h，抽滤，滤液用70%乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度，计算花生壳总黄酮的提取率。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于，准确称取花生壳，置于磨口三颈烧瓶中，加入提取剂，抽滤，滤液用乙醇定容至100ml，作为待测液，取1.5ml待测液于50ml容量瓶中，按照测定芦丁标准液吸光度的步骤测定吸光度。

2.根据权利要求1所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：所述提取溶剂为蒸馏水、碱性水溶液、80%丙酮、乙酸乙酯、70%甲醇、乙醇中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：所述乙醇浓度为75%—85%。

4.根据权利要求3所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：提取温度为40℃—70℃。

5.根据权利要求4所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：所述提取温度为70℃。

6.根据权利要求5所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：所述料液比为1：25。

7.根据权利要求6所述的一种新型的花生壳总黄酮提取工艺，其特征在于：所述提取时间为2—2.5h。