CN105030692B - 一种硫酸头孢喹诺的肺靶向plga微球制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂及其制备方法。所述靶向微球制剂是以硫酸头孢喹诺为原料药，以PLGA为载体，按原料药与载体的重量比为1：5~20制得，本发明还提供了靶向微球制剂的制备方法。本发明的有益效果是：所制备的微球包封率在60%以上，85%以上的微球粒径分布在7~35um范围内，因此微球制剂可靶向富集到肺部，有效提高药物的疗效，降低药物的毒副作用；同时可延长药物在肺部的滞留时间，维持血药浓度平稳，起到长效的作用。

Description

一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽用制剂技术领域，特别涉及一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂及其制备方法。

背景技术

头孢喹诺是第1个动物专用第4代头孢菌素类抗生素，因其强抗菌活性、广抗菌谱和低耐药性而被国内外广泛应用于治疗家畜的呼吸系统疾病。

我国对头孢喹诺及其制剂的研究开发相对较晚，目前仅有硫酸头孢喹诺原料药及其注射剂(混悬注射液、注射粉针剂)获得农业部批准生产和销售许可，与之相匹配的剂型种类比较少。头孢喹诺口服吸收不好，注射吸收较为迅速，在体内半衰期较短，仅为1～3小时。为达到有效治疗浓度，需要多次注射给药，给临床应用带来了很大的不便。因此，开发具有靶向缓释性能的制剂迫在眉睫。

PLGA肺靶向微球可在肺部被截留，使负载的药物富集于肺部，有效提高药物治疗水平，大大降低药物对非靶器官的毒副作用；同时，PLGA微球的缓释性能，可使药物达到长效的目的，进而避免了频繁给药的不便。

如何解决家畜用硫酸头孢喹诺普通制剂所存在的局限性，提高其应用价值，深度开发以其为原料的新制剂，并应用到生产实际中是本发明要解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂及其制备方法，制剂载药量较高，包封率也大大提高，可以实现药物选择性集中于肺部，提高药效，减少毒副反应，同时可实现药物在肺部缓慢释放，起到长效的作用。

为了达到上述目的，本发明提供了一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其中，其制备方法为：

1)分别称取硫酸头孢喹诺药物和PLGA载体，以探头超声将药物分散到5～20％明胶溶液，作为内水相，将PLGA加入到有机溶剂中，涡旋溶解作为油相；

2)将所述内水相和所述油相按照体积比为1:7～15混合，探头超声乳化，形成初乳；

3)配制1％PVA水溶液作为外水相，将步骤2)得到的所述初乳与所述外水相按照体积比1:5～20混合，在2500～5000rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化20-30s，形成复乳；

4)将步骤3)得到的所述复乳分散到0.25％PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3～5h，挥发除去有机溶剂，然后4000rpm离心5-10min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，抽滤，冷冻干燥，即得肺靶向PLGA微球制剂。

其中，所述步骤1)中硫酸头孢喹诺与PLGA的质量比为：1:5-20。

其中，所述肺靶向PLGA微球制剂的粒径范围为7-35um。

其中，上述步骤1)中明胶溶液的浓度为10-15％。

其中，所述明胶溶液中还含有海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠，所述明胶、海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠的质量比为：10-15:0.05-0.1:0.01-0.05：0.03-0.3:0.01-0.1。

其中，所述步骤1)中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂，质量比为：1:0-3:1；或者，所述步骤1)中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、丙酮的混合溶剂，质量比为：1-2:0.1-1：0.1-0.5:0.2-0.6。

其中，PLGA的浓度为5～30％，所述PLGA中PLA与PGA的聚合比例为：1:0-9:1。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl、1％KCl和1％ZnCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl、1％ZNCl。

本发明的有益效果是：本发明所制备的微球包封率在60％以上，85％以上的微球粒径分布在7～35um范围内，因此微球制剂可靶向富集到肺部，有效提高药物的疗效，降低药物的毒副作用；同时可延长药物在肺部的滞留时间，维持血药浓度平稳，起到长效的作用。

说明书附图

图1为本发明载药PLGA微球的表观形态图：(A)载药PLGA微球光学显微镜下放大100倍；(B)载药PLGA微球光学显微镜下放大400倍；(C)和(D)SEM观察结果；

图2为载药PLGA微球体外溶出速率图；

图3为单剂量尾静脉注射后，药物在各脏器中的分布图；

具体实施方式

为了达到上述目的，本发明提供了一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其中，其制备方法为：

1)分别称取硫酸头孢喹诺药物和PLGA载体，以探头超声将药物分散到5～20％明胶溶液，作为内水相，将PLGA加入到有机溶剂中，涡旋溶解作为油相；

2)将所述内水相和所述油相按照体积比为1:7～15混合，探头超声乳化，形成初乳；

3)配制1％PVA水溶液作为外水相，将步骤2)得到的所述初乳与所述外水相按照体积比1:5～20混合，在2500～5000rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化20-30s，形成复乳；

4)将步骤3)得到的所述复乳分散到0.25％PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3～5h，挥发除去有机溶剂，然后4000rpm离心5-10min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，抽滤，冷冻干燥，即得肺靶向PLGA微球制剂。

其中，所述步骤1)中硫酸头孢喹诺与PLGA的质量比为：1:5-20。

其中，所述肺靶向PLGA微球制剂的粒径范围为7-35um。

其中，上述步骤1)中明胶溶液的浓度为10-15％。

其中，所述明胶溶液中还含有海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠，所述明胶、海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠的质量比为：10-15:0.05-0.1:0.01-0.05：0.03-0.3:0.01-0.1。

其中，所述步骤1)中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂，质量比为：1:0-3:1；或者，所述步骤1)中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、丙酮的混合溶剂，质量比为：1-2:0.1-1：0.1-0.5:0.2-0.6。

其中，PLGA的浓度为5～30％，所述PLGA中PLA与PGA的聚合比例为：1:0-9:1。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl、1％KCl和1％ZnCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl、1％ZnCl。

一、头孢喹诺肺靶向微球的特性考察

1.1微球外观形态观察

PLGA微球的表观形态是通过光学显微镜和扫描电镜来观察的。

光学显微镜观察前的样品处理方法：称取适量微球粉末，分散到一定体积的生理盐水中，玻璃棒蘸取一滴到载玻片上，将盖玻片自液滴一侧轻轻盖上，置于显微镜下观察即可。

扫描电镜观察前的样品处理方法：在样品台上粘贴好双面导电胶，用牙签蘸取微球样品粉末后，在导电胶上轻轻滚几下，使少量微球粉末沾到导电胶上，吹风机吹掉未粘住的样品后，喷金处理，上机观察。

1.2微球粒径测量

微球药物含量测定方法的建立及微球载药性能检测

色谱工作条件

色谱柱：Agilent C18柱(150mm×4.6mm，5μm)

流动相：乙腈-高氯酸钠溶液(12：88)

U V检测波长：269nm

进样量：20μL

流速：1.0mL/min

柱温：25℃

1.3载药性能检测

选取最佳制备工艺连续制备6批载药PLGA微球，分别检测其载药量和包封率。

1.4微球体外释放度考察

体外释放度考察参照药典上的透析法，并进行适当改动，具体方法如下：准确称取连续三个批次的硫酸头孢喹诺微球各50.0mg，分别装入三个透析袋(截留分子量8000-14000Da)中，另称取同质量的空白微球于透析袋中，添加适量药物(与载药微球中药物含量相当)与空白微球混匀，作为空白对照，用ph 7.4的PBS溶液(释放介质)2mL分散，并将透析袋两端用皮筋扎紧，置于250mL释放介质中，于37℃恒温摇床中150rpm转速下进行药物溶出速率研究。分别于5min、15min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h、24h和36h取样1mL，同时补加等量的37℃的释放介质(该过程30s内完成)。取样液经0.22μm滤膜过滤后，4℃保存待测。之后，将样品进HPLC分析，求出药物在各时间点的溶出百分率，绘制累积释放百分率-时间释药曲线图。

1.5微球稳定性考察

微球的稳定性试验主要参考《中华人民共和国兽药典》(2010版)第一部附录246页关于药物制剂稳定性试验指导原则来进行。

影响因素实验

(1)高温实验

(2)高湿度实验

(3)强光照射实验

1.6加速试验

2结果与讨论

1.1微球表观形态观察结果

PLGA微球表观形态

直接制备若干批载药PLGA微球，采用光学显微镜和扫描电镜观察微球表观形态。

由图1的微球照片A、B可知，PLGA微球在生理盐水中分散性较好，基本无粘连，球形圆整，大小均匀；不同于明胶微球，PLGA微球在光镜下呈现深黑色泽，放大400倍后可发现微球中包有较多物质。由照片C和D可知，PLGA微球球形圆整，表面光滑致密，未见较多的未包封药物结晶出现，证明工艺中洗涤环节比较充分。

2.2微球粒径测定结果

PLGA微球粒径测定结果

依照下表制备的13批次微球的粒径及粒径分布见表1-1。

PLGA微球载药性能

实验组	LE％	EE％
			1	1.29	18.96

2	3.23	47.54
			3	4.26	62.81
4	4.81	70.89
			5	4.56	67.24
6	6.65	52.96
			7	3.49	75.14
8	3.90	60.60
			9	2.47	40.26
10	5.94	87.56
			11	3.85	56.78
12	2.67	41.42
			13	4.68	70.85

表1-1 PLGA微球不同制备条件的粒径及其分布测量结果

实验组	平均粒径(μm)	粒径分布(％)
			1	25.36	89.36
2	25.89	88.46
			3	27.65	86.98
4	32.56	80.34
			5	30.06	81.25
6	29.45	79.68
			7	26.87	87.86
8	28.64	79.32
			9	30.32	75.34
10	27.84	86.24
			11	28.23	87.66
12	24.35	88.69
			13	29.64	82.64

由表1-1可知，不同条件下制备的PLGA微球粒径分布均比较居中，可能是剪切的乳化效果比机械磁力搅拌好的原因导致。其中10号样品包封率最高，平均粒径27.84μm，集中在7-35μm间的微球占总数的86.24％，粒径分布比较集中。从表还可看出，影响微球粒径的主要因素是分子量、PLA/PGA的比例及PLGA的浓度，这是因为这些因素均可导致乳液的粘度不同，乳液粘度越大，相同转速下，粒径即会变大。

2.3微球载药性能检测结果

采用最佳制备工艺，制备5批PLGA微球，按照建立的检测方法检测药物的载药量和包封率，结果见表1-2。从表可看出，制备工艺稳定，重现性良好。

PLGA微球载药量和包封率采用破球-萃取法来测定，即将载药微球加到二氯甲烷中，以探头超声辅助其溶解，使药物充分释放，加水将药物萃取出来，结合高效液相色谱进行检测，以如下公式来计算载药量和包封率：

载药量＝微球中药物的质量/载药微球的质量*100％；

包封率＝微球中药物的质量/加入药物的质量*100％；

表1-2 PLGA微球载药性能结果

实验组	载药量(％)	x±SD(％)	包封率(％)	x±SD(％)
					1	5.86		86.32
2	5.81		85.68
					3	6.04	5.87±0.16	89.06	86.58±2.40
4	5.64		83.17
					5	6.02		88.67

2.4微球体外释放度考察结果

PLGA微球的体外释放情况见图2，结果表明，缓释作用较明显，前8h药物释放达到60.97％，到72h时，释放度达到最大值85.04％。

3小结

本部分针对PLGA微球进行了综合评价。从微球的表观形态、粒径及粒径分布、载药性能、体外释放情况等方面进行了综合考察，并建立液相检测方法。结果表明，优化出的工艺所制备的PLGA微球，形态圆整且分散；PLGA微球平均粒径为27.84μm，粒径大小符合靶向微球的要求，粒径分布主要集中在7～35μm；建立的检测方法稳定可行，PLGA微球的平均载药量分别可达5.87％，平均包封率分别可达86.58％；体外释放结果表明，PLGA微球有一定的缓释性能；稳定性考察结果表明，微球在室温下防潮避光保存性质比较稳定。

二、头孢喹诺肺靶向PLGA微球在小鼠体内的组织分布研究

1实验材料

1.1主要试剂

硫酸头孢喹诺标准品	含量95％	齐鲁晟华制药
			硫酸头孢喹诺PLGA微球	合格	实验室自制
磷酸	色谱纯	天津市科密欧化学试剂厂
			浓盐酸	分析纯	国药集团
乙腈	色谱纯	美国TEDIA
			甲醇	色谱纯	美国TEDIA

1.2主要仪器

1.3溶液的配制

硫酸头孢喹诺肺靶向微球制剂：无菌条件下，根据微球制剂中硫酸头孢喹诺的载药量，用灭菌生理盐水配制成一定药物含量的混悬注射剂，现配现用；

硫酸头孢喹诺标准储备液(1600μg/mL)：称取1.6mg硫酸头孢喹诺标准品于1mL离心管中，精确加1mL去离子水，制成含硫酸头孢喹诺1600μg/mL的母液，4℃冰箱保存；

硫酸头孢喹诺标准工作液：用去离子水稀释硫酸头孢喹诺标准储备液(1600μg/mL)至所需浓度的溶液，即为标准工作液，现配现用；

0.1％甲酸水溶液：取1mL色谱甲酸，去离子水稀释至1000mL；

7.5％盐酸水溶液：取75mL浓盐酸，加去离子水稀释至1000mL；

C18柱润洗液洗液：甲醇：水(20:80)；

C18柱洗脱液：甲醇：7.5％盐酸水溶液(5:95)

1.4实验动物

清洁级昆明小白鼠，体重20±2g，雌雄兼用，实验前预饲养3天以适应环境，所喂饲料不含任何抗生素，自由饮水。

2试验方法

2.1动物给药和组织样品采集

硫酸头孢喹诺PLGA微球制剂组小白鼠每只按15mg/kg·bw剂量单次尾静脉注射给药。

各实验组小白鼠均于尾静脉注射后0.25、0.5、2、6、12、24、48、72h剖杀，采集小鼠心、肝、脾、肺和肾五种脏器于10mL离心管中，-80℃低温箱保存备用。

2.2组织样品前处理

精确称取0.1g各组织脏器于10mL离心管中，加入0.5％甲酸水溶液1mL，匀浆处理，置于1.5mL离心管中，加150μl浓盐酸沉降蛋白，于4℃离心机中12000rpm离心15min，取上清液。

C18固相萃取柱以5mL甲醇，5mL C18柱润洗液洗液，5mL去离子水，3mL C18柱洗脱液润洗；将上述组织提取的上清液加0.5％甲酸水溶液，稀释到2mL立即过柱，控制流速小于1mL/min，收集柱后流出液；以2mL C18柱洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，合并到上述柱后流出液中。

将上述的过柱合并液于-80℃低温箱中冷冻过夜，冻干，加0.5mL 0.5％甲酸水溶液涡旋溶解残渣，12000rpm离心10min，取上清过0.22μm滤膜，以10μl的进样量用UPLC-MS/MS检测。

2.3 UPLC-MS/MS检测

2.3.1色谱工作条件和质谱参数

色谱柱：Agilent SB-C8柱，2.1×100mm，1.8μm

流动相：A(0.1甲酸水溶液)，B(乙腈)

质谱系统：Infinity喷射流离子聚焦串联四极杆6460质谱仪

电离模式：正离子模式(ESI+)

扫描类型：MRM

头孢喹诺定量离子(m/z)：134

表1 梯度洗脱程序

阶段	时间(min)	A(％)	B(％)	流速(mL/min)
					1	0.00	95.0	5.0	0.2
2	4.00	65.0	35.0	0.2
					3	5.00	65.0	35.0	0.2
4	5.01	0	100.0	0.2

5	7.00	0	100.0	0.2
					6	7.01	95.0	5.0	0.2
7	9.00	95.0	5.0	0.2

表2 质谱仪主要参数

参数	参数值
		Precursor Ion(m/z)	529
Product Ion(m/z)	134
		Dwell	200
Fragmentor	65
		Collision Energy(eV)	13
Cell Accelerator Voltage	3
		Gas Temp(℃)	350
Gas Fiow(l/min)	8
		Nebulizer(psi)	25
Sheath Gas Temp(℃)	350
		Sheath Gas Flow(l/min)	7
Capillary(V)	4000

2.3.2组织标准曲线的制定

分别取各脏器的空白组织0.1g，加入1mL 0.1％甲酸水溶液匀浆，分别添加一定体积的硫酸头孢喹诺标准品工作液，使得匀浆组织液中药物浓度分别为5、25、50、100、250、500、2500ng/g，处理，通过液质检测。以组织中的硫酸头孢喹诺添加浓度为横坐标(X)，液质检测的峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回顾方程和相关系数。样品浓度超出线性范围的，以流动相稀释检测。

2.3.3回收率测定

分别取各脏器的空白组织0.1g，加入1mL 0.1％甲酸水溶液匀浆，分别添加一定体积的硫酸头孢喹诺标准品工作液，使得匀浆组织液中药物浓度分别为25、100、500ng/g，处理，各浓度平行5次，通过液质检测峰面积(A1)。

另分别取各脏器的空白组织0.1g，加入1mL 0.1％甲酸水溶液匀浆，处理后，分别添加一定体积的硫酸头孢喹诺标准品工作液，使得溶液终浓度分别为25、100、500ng/g，各浓度平行5次，通过液质检测峰面积(A2)。

回收率＝A1/A2×100％。

2.3.4精密度测定

分别取各脏器的空白组织0.1g，加入1mL 0.1％甲酸水溶液匀浆，分别添加一定体积的硫酸头孢喹诺标准工作液，使得样品中药物浓度分别为25、100、500ng g，处理，通过液质检测。每个浓度在同一工作日内平行5份(日内)，在不同工作日处理5批次(日间)，计算日内和日间相对标准偏差。

2.3.5检测限和定量限

取空白组织，添加一定浓度的头孢喹诺标准工作液，处理后，进行UPLC-MS/MS检测，按信噪比S/N＝3为检测限(LOD)，S/N＝10为定量限(LOQ)。求组织中头孢喹诺的检测限和定量限。

3结果与讨论

3.1结果

3.1.1色谱行为

在上述色谱条件下，硫酸头孢喹诺的出峰时间大约在4.03min，峰型良好，无杂质干扰。

3.1.2组织标准曲线结果

通过测定，小鼠各脏器组织中药物添加浓度在5～2500ng/g之间，药物组织浓度与峰面积线性关系良好，结果见图3。各脏器组织中药物的线性方程和相关系数见表3，由表可知，各脏器标准曲线的相关系数均可达0.9990以上。

表3 线性方程和相关系数

样本	标准曲线方程	相关系数(R)
			心脏	Y＝20.694X+10.781	0.9998
肝脏	Y＝21.105X-7.1858	0.9997
			脾脏	Y＝20.179X-96.843	0.9990
肺脏	Y＝14.009X-15.962	0.9999
			肾脏	Y＝22.038X+84.284	0.9994

3.1.3回收率测定结果

表4 心脏中药物的回收率

表5 肝脏中药物的回收率

表6 脾脏中药物的回收率

表7 肺脏中药物的回收率

表8 肾脏中药物的回收率

3.1.4精密度测定结果

表9 心脏中药物的精密度

表10 肝脏中药物的精密度

表11 脾脏中药物的精密度

表12 肺脏中药物的精密度

表13 肾脏中药物的精密度

3.1.5检测限和定量限

根据2.3.5项下方法测得头孢喹诺在空白组织中的检测限为0.5ng/g，定量限为2ng/g。

3.1.5组织中的药物浓度测定结果

小鼠单剂量尾静脉注射后，药物在不同脏器组织不同时间点的浓度见表14。

表14 单剂量尾静脉注射PLGA微球制剂后小鼠组织中药物浓度

3.1.6药动学参数

表15 单剂量尾静脉注射硫酸头孢喹诺PLGA微球后不同脏器组织中的主要药动学参数

药动学参数	单位			器官
									肺脏	肾脏	肝脏	心脏	脾脏
t 1/2β	h	10.637	0.156	0.346	3.28	5.593
							AUC	Ng/L*h	336723.644	20500.045	6450.417	5621.733	5790.471
CL	L/h/kg	55.643	746.529	2609.175	2369.341	1786.367

3.1.7靶向性分析

微球制剂的靶向性可通过靶向效率这一参数来评价。靶向效率te＝(AUC)靶/(AUC)非靶，其中，式中te表示药物制剂或药物溶液对靶器官的选择性。靶向效率值大于1表示药物制剂对靶器官的选择性高于非靶器官；靶向效率值越大，证明药物制剂对靶器官的选择性更强。为评价本课题所制备微球制剂对肺部的靶向性，分析了肺相比于其他器官的靶向效率，结果见表16。

表16 单剂量尾静脉注射微球制剂后小鼠肺的靶向效率

4小结

本部分首先采用UPLC-MS/MS法建立了组织样品中检测硫酸头孢喹诺的检测方法，灵敏度高，样品组织的添加回收率均在60％以上，方法稳定，空白组织中药物检测限0.5ng/g。为评价微球制剂靶向性，以小白鼠为实验对象，尾静脉注射头孢喹诺PLGA微球制剂，检测结果表明，PLGA微球注射后其他脏器微球很少，基本都聚集在肺部，靶向效果明显。

总结，PLGA微球在生理盐水中分散性较好，基本无粘连，球形圆整，大小均匀；包封率在60％以上，85％以上的微球粒径分布在7～35um范围内；缓释作用较明显，前8h药物释放达到60.97％，到72h时，释放度达到最大值85.04％；PLGA微球注射后其他脏器微球很少，基本都聚集在肺部，靶向效果明显。

为了进一步说明本发明，下面通过具体实施方式来陈述。

实施例1

准确称取45mg硫酸头孢喹诺，加到15％明胶溶液(W/V)0.4mL中，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散均匀作为内水相W1；称取450mg PLGA(分子量10万)，涡旋溶解到3mL二氯甲烷(DCM)中，制成15％浓度(W/V)的PLGA二氯甲烷溶液作为油相O；将上述内水相W1超声乳化到油相O中，形成W1/O型初乳；将该初乳迅速转移到35mL 1％(W/V)PVA水溶液W2中，在3000rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化30s，形成W1/O/W2型复乳；将该复乳溶液加到150mL含1％NaCl的0.25％(W/V)PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3h，室温下挥发除去二氯甲烷；4000rpm离心5min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，冷冻干燥，得到PLGA微球。

上述制备的微球，光学显微镜观察发现微球大小均匀且较少粘连，平均粒径27.65μm，98.98％的微球分布在7～35μm范围内；扫描电镜显示外观圆整，表面致密光洁；载药量为4.26％，包封率为62.81％，药物体外释放度72h可达85.04％。

实施例2

准确称取60mg硫酸头孢喹诺，加到10％明胶溶液(W/V)0.4mL中，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散均匀作为内水相W₁；称取450mg PLGA(分子量10万)，涡旋溶解到2.7mL二氯甲烷和0.3mL乙酸乙酯的混合溶剂中，制成15％浓度(W/V)的PLGA溶液作为油相O；将上述内水相W₁超声乳化到油相O中，形成W₁/O型初乳；将该初乳迅速转移到35mL含1％NaCl的1％(W/V)PVA水溶液W₂中，在3200rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化30s，形成W₁/O/W₂型复乳；将该复乳溶液加到150mL含1％NaCl的0.25％(W/V)PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3h，室温下挥发除去二氯甲烷和乙酸乙酯；4000rpm离心5min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，冷冻干燥。

上述制备的微球，光学显微镜观察发现微球大小均匀且较少粘连，平均粒径27.84μm，86.24％的微球分布在7～35μm范围内；扫描电镜显示外观圆整，表面光洁有较少微孔；载药量为5.94％，包封率为87.56％，药物体外释放可达72h以上。

实施例3

准确称取60mg硫酸头孢喹诺，加到10％明胶溶液(W/V)0.4mL中，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散均匀作为内水相W₁；称取450mg PLGA(分子量10万)，涡旋溶解到450mg有机溶剂中，15％浓度(W/V)的PLGA溶液作为油相O；将上述内水相W₁超声乳化到油相O中，形成W₁/O型初乳；将该初乳迅速转移到35mL 1％(W/V)PVA水溶液W₂中，在3200rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化30s，形成W₁/O/W₂型复乳；将该复乳溶液加到150mL 0.25％(W/V)PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3h，室温下挥发除去有机溶剂；4000rpm离心5min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，冷冻干燥，得到PLGA微球制剂。

其中，明胶溶液中还含有20mg海藻酸丙二醇酯、4mg瓜尔豆胶、12mg羟甲基纤维素和4mg酪蛋白酸钠。

其中，步骤1)中的有机溶剂为272.7mg二氯甲烷、136.4mg乙酸乙酯、13.64mg乙醚、27.26mg丙酮的混合溶剂。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl、1％KCl和1％ZnCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl、1％ZNCl。

上述制备的微球，光学显微镜观察发现微球大小均匀且较少粘连，平均粒径27.88μm，86.75％的微球分布在7～35μm范围内；扫描电镜显示外观圆整，表面光洁有较少微孔；载药量为6.04％，包封率为87.76％，药物体外释放可达72h以上。

实施例4

准确称取45mg硫酸头孢喹诺，加到10％明胶溶液(W/V)0.4mL中，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散均匀作为内水相W₁；称取450mg PLGA(分子量10万)，涡旋溶解到450mg有机溶剂中，15％浓度(W/V)的PLGA溶液作为油相O；将上述内水相W₁超声乳化到油相O中，形成W₁/O型初乳；将该初乳迅速转移到35mL 1％(W/V)PVA水溶液W₂中，在3200rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化30s，形成W₁/O/W₂型复乳；将该复乳溶液加到150mL 0.25％(W/V)PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3h，室温下挥发除去有机溶剂；4000rpm离心5min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，冷冻干燥，得到PLGA微球制剂。

其中，明胶溶液中还含有40mg海藻酸丙二醇酯、20mg瓜尔豆胶、120mg羟甲基纤维素和40mg酪蛋白酸钠。

其中，步骤1)中的有机溶剂为219.5mg二氯甲烷、109.8mg乙酸乙酯、54.9mg乙醚和65.8mg丙酮的混合溶剂。

其中，PLGA的浓度为15％，所述PLGA中PLA与PGA的聚合比例为：75:25。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl、1％KCl和1％ZnCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl、1％ZnCl。

上述制备的微球，光学显微镜观察发现微球大小均匀且较少粘连，平均粒径27.76μm，86.37％的微球分布在7～35μm范围内；扫描电镜显示外观圆整，表面光洁有较少微孔；载药量为6.18％，包封率为87.84％，药物体外释放可达72h以上。

实施例5

准确称取45mg硫酸头孢喹诺，加到15％明胶溶液(W/V)0.4mL中，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散均匀作为内水相W₁；称取450mg PLGA(分子量10万)，涡旋溶解到450mg有机溶剂中，20％浓度(W/V)的PLGA溶液作为油相O；将上述内水相W₁超声乳化到油相O中，形成W₁/O型初乳；将该初乳迅速转移到35mL 1％(W/V)PVA水溶液W₂中，在3200rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化30s，形成W₁/O/W₂型复乳；将该复乳溶液加到150mL 0.25％(W/V)PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3h，室温下挥发除去有机溶剂；4000rpm离心5min收集微球，用超纯水洗涤微球三遍，冷冻干燥，得到PLGA微球制剂。

其中，明胶溶液中还含有0.28mg海藻酸丙二醇酯、0.12mg瓜尔豆胶、0.2mg羟甲基纤维素和0.2mg酪蛋白酸钠。

其中，步骤1)中的有机溶剂为204.5mg二氯甲烷、102.3mg乙酸乙酯、乙醚、143.2mg丙酮的混合溶剂。

其中，PLGA中PLA与PGA的聚合比例为：90:10。

其中，步骤3)中1％PVA水溶液含有1％NaCl、1％KCl和1％ZnCl；步骤4)中0.25％PVA水溶液含有1％NaCl、1％ZNCl。

上述制备的微球，光学显微镜观察发现微球大小均匀且较少粘连，平均粒径27.89μm，86.83％的微球分布在7～35μm范围内；扫描电镜显示外观圆整，表面光洁有较少微孔；载药量为6.11％，包封率为87.96％，药物体外释放可达72h以上。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，其制备方法为：

1）分别称取硫酸头孢喹诺和PLGA载体，以探头超声将硫酸头孢喹诺分散到5~20%明胶溶液，作为内水相，将PLGA加入到有机溶剂，涡旋溶解作为油相；

2）将所述内水相和所述油相按照体积比为1:7~15混合，探头超声乳化，形成初乳；

3）配制1%PVA水溶液作为外水相，将步骤2）得到的所述初乳与所述外水相按照体积比1:5~20混合，在2500~5000 rpm转速下，以高速剪切机剪切乳化20-30 s，形成复乳；

4）将步骤3)得到的所述复乳分散到0.25%PVA水溶液中，置于磁力搅拌器上低速搅拌3~5 h，挥发除去有机溶剂，然后4000 rpm离心5-10min 得到微球，用超纯水洗涤微球三遍，抽滤，冷冻干燥，即得肺靶向PLGA微球制剂；

所述步骤1）中硫酸头孢喹诺与PLGA的质量比为：1:5-20；

PLGA的浓度为5~30%，所述PLGA中PLA与PGA的聚合比例为：1:0-9:1；

所述明胶溶液中还含有海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠，所述明胶、海藻酸丙二醇酯、瓜尔豆胶、羟甲基纤维素和酪蛋白酸钠的质量比为：10-15:0.05-0.1:0.01-0.05：0.03-0.3:0.01-0.1。

2.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，所述肺靶向PLGA微球制剂的粒径范围为7-35um。

3.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，上述步骤1）中明胶溶液的浓度为10-15%。

4.根据权利要求1-3任一项所述的硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，所述步骤1）中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶剂，质量比为：1:0-3:1；或者，所述步骤1）中的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、丙酮的混合溶剂，质量比为：1-2:0.1-1：0.1-0.5:0.2-0.6。

5.根据权利要求1-3任一项所述的硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，步骤3）中1%PVA水溶液含有1%NaCl；步骤4）中0.25%PVA水溶液含有1% NaCl。

6.根据权利要求1-3任一项所述的硫酸头孢喹诺的肺靶向PLGA微球制剂，其特征在于，步骤3）中1%PVA水溶液含有1%NaCl、1%KCl和1%ZnCl₂；步骤4）中0.25%PVA水溶液含有1%NaCl、1%ZnC l₂。