CN104994865A - 用于同步小母猪的授精时间的方法 - Google Patents

用于同步小母猪的授精时间的方法 Download PDF

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CN104994865A CN201380071570.3A CN201380071570A CN104994865A CN 104994865 A CN104994865 A CN 104994865A CN 201380071570 A CN201380071570 A CN 201380071570A CN 104994865 A CN104994865 A CN 104994865A
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S.K.韦贝尔
M.E.斯万森
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Abstract

提供用于同步小母猪的授精时间的方法和组合物。更具体而言，提供使用促性腺激素释放激素和用于同步发情的激素而用于同步小母猪的授精时间的方法和组合物。

Description

用于同步小母猪的授精时间的方法
相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C. § 119(e)要求2012年11月28日提交的美国临时申请系列号61/730,763的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
发明领域
本发明涉及用于同步小母猪(gilt)的授精时间的方法和组合物。更具体而言，本发明涉及使用促性腺激素释放激素和用于同步发情(estrus)的激素而用于同步小母猪的授精时间的方法和组合物。
发明背景
促性腺激素释放激素是一种10个氨基酸的肽，也被称为促黄体激素释放激素(LHRH)。促性腺激素释放激素在下丘脑中生成，并负责促卵泡激素和促黄体激素从垂体释放。促性腺激素释放激素从下丘脑的神经元中释放，并在促卵泡激素和促黄体激素释放的复杂调节中起作用。促卵泡激素和促黄体激素以结合形式调节性腺的功能，从而在睾丸产生睾酮和在卵巢产生孕酮和雌激素，并调节配子的产生和成熟。例如，促卵泡激素在卵巢刺激未成熟的卵泡的生长和补充，并且促黄体激素触发排卵。
雌性和雄性的促性腺激素释放激素的分泌具有差别。在雄性中，促性腺激素释放激素以恒频脉冲分泌，但在雌性中，该脉冲频率在发情周期期间变化，并且临排卵前有大量高涨的促性腺激素释放激素。促性腺激素释放激素的分泌在所有脊椎动物中是脉动的，并且对恰当的生殖功能是必需的。因此，促性腺激素释放激素控制雌性的卵泡生长、排卵和黄体保持和雄性的精子发生的复杂过程。
促性腺激素释放激素已被分离并表征为十肽。可应用合成形式的促性腺激素释放激素，并且对促性腺激素释放激素的十肽结构的修饰已得到多种促性腺激素释放激素类似物，它们刺激或抑制促性腺激素(诸如促黄体激素和促卵泡激素)的释放。
对于商业猪的生产而言，重要的是最大化生殖的效率，以使得猪生产更有利润。目前需要劳动密集型方法，诸如每日检查发情，来增加猪诸如小母猪和母猪的人工授精成功的可能性。目前必需对发情检测的每日检查投入时间、人工劳动和材料成本，因为不使用需要每日发情检测的方法难以预测发情的时间(即，预测授精的最佳时间)。因此，需要更简单、更不劳动密集但同样有效的方法优化猪(包括小母猪和母猪)的授精成功，减少劳动成本、材料成本，并增加猪生产的利润率。
高母猪替代率对替代小母猪管理以维持一致的猪生产流程施加了显著的压力。与小母猪排卵过程相关的变化是有关优化生殖性能的极为重要的问题之一。因此，需要更精确地控制排卵的有效处理，使得以小组形式的所有小母猪可无需用于监测发情的每日作息制度而授精。
发明概要
申请人已发现更精确地控制小母猪排卵的有效处理，使得以小组形式(in a group)的小母猪可无需用于监测发情的每日作息制度(daily regimen)而授精。本文描述的方法和组合物比每日发情检测简单得多，但出乎意料地在优化小母猪生殖性能方面(包括但不限于胎仔数和总出生存活小猪(total piglets born alive))与用于监测发情的每日作息制度一样有效。
在一个实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，和3)使小母猪授精而无发情检测，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天检测一次。
在另一实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，2)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使小母猪授精，和3)如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
在又一实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，2)在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精，和3)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。
下面条款中描述的实施方案或其任何组合也被考虑用于本发明中。
1. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；和
使小母猪授精，而不监测发情，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天监测一次。
2. 根据条款1的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
3. 根据条款2的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求2的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
4. 根据条款1至3中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
5. 根据条款1至4中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
6. 根据条款1至5中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
7. 根据条款1至6中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
8. 根据条款1至7中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
9. 根据条款1至8中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
10. 条款1至9中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
11. 根据条款1至10中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管(deposition catheter)、手工给药和注射。
12. 条款11的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
13. 条款11的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
14. 根据条款1至13中任一项的方法，其中所述激素为乙酸盐形式。
15. 根据条款1至12或14中任一项的方法，其中所述激素在包含凝胶的组合物中给药。
16. 根据条款15的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
17. 根据条款16的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
18. 条款17的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
19. 条款18的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
20. 根据条款15的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
21. 条款1至12或14至20中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
22. 条款21的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
23. 根据条款1至22中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
24. 根据条款2至23中任一项的方法，其中在所述式中，X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
25. 条款1至24中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
26. 条款1至25中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
27. 根据条款1至12或14至26中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
28. 条款1至12或14至27中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
29. 条款1至12或14至28中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
30. 条款29的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
31. 条款1至12或14至30中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
32. 条款31的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
33. 根据条款1至14或21至26中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
34. 条款33的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
35. 条款1至34中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
36. 条款1至35中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
37. 条款1至36中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
38. 条款1至36中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
39. 条款1至38中任一项的方法，其中使小母猪在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时授精。
40. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使小母猪授精；和
如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
41. 根据条款40的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
42. 根据条款41的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求41的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
43. 根据条款40至42中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
44. 根据条款40至43中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
45. 根据条款40至44中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
46. 根据条款40至45中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
47. 根据条款40至46中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
48. 根据条款40至47中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
49. 条款40至48中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
50. 根据条款40至49中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
51. 根据条款50的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
52. 根据条款50的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
53. 根据条款40至52中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为乙酸盐形式。
54. 根据条款40至51或53中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在包含凝胶的组合物中给药。
55. 根据条款54的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
56. 根据条款55的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
57. 条款56的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
58. 条款57的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
59. 根据条款54的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
60. 条款40至51或53至59中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
61. 条款60的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
62. 根据条款40至61中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
63. 根据条款41至62中任一项的方法，其中在式中X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
64. 条款40至63中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
65. 条款40至64中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
66. 根据条款40至51或53至65中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
67. 条款40至51或53至66中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
68. 条款40至51或53至67中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
69. 条款68的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
70. 条款40至51或53至69中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
71. 条款70的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
72. 根据条款40至53或60至65中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
73. 条款72的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
74. 条款40至73中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
75. 条款40至74中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
76. 条款40至75中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
77. 条款40至75中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
78. 条款40至77中任一项的方法，其中如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中，在给予所述促性腺激素释放激素的约2小时时间内使小母猪第一次授精。
79. 条款40至78中任一项的方法，其中在第六天在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时使小母猪授精。
80. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精；和
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。
81. 根据条款80的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
82. 根据条款81的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求81的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
83. 根据条款80至82中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
84. 根据条款80至83中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
85. 根据条款80至84中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
86. 根据条款80至85中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
87. 根据条款80至86中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
88. 根据条款80至87中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
89. 条款80至88中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
90. 根据条款80至89中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
91. 条款90的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
92. 条款90的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
93. 根据条款80至92中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为乙酸盐形式。
94. 根据条款80至91或93中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在包含凝胶的组合物中给药。
95. 根据条款94的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
96. 根据条款95的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
97. 条款96的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
98. 条款97的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
99. 根据条款94的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
100. 条款90至91或93至99中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
101. 条款100的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
102. 根据条款80至101中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
103. 根据条款81至102中任一项的方法，其中在式中X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
104. 条款80至103中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
105. 条款80至104中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
106. 根据条款80至91或93至105中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
107. 条款80至91或93至106中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
108. 条款80至91或93至107中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
109. 条款108的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
110. 条款80至91或93至109中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
111. 条款110的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
112. 根据条款80至93或100至105中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
113. 条款112的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
114. 条款80至113中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
115. 条款80至114中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
116. 条款80至115中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
117. 条款80至115中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
118. 条款80至117中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约4小时使小母猪第一次授精。
119. 条款80至118中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时使小母猪第二次授精。
120. 条款80至119中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约3小时使小母猪第一次授精。
121. 条款1至120中任一项的方法，其中小母猪的胎仔数
与基于每日发情检测而授精的对照小母猪的胎仔数类似。
122. 条款1至121中任一项的方法，其中小母猪的总出生存活小猪与基于每日发情检测而授精的对照小母猪的总出生存活小猪类似。
附图简述
图1显示在重复1中末次MATRIX®喂食后96小时(VG 96)给予溶媒凝胶后或末次MATRIX®喂食后96小时(TG 96)、120小时(TG 120)或144小时(TG 144)给予含有200 µg曲普瑞林的曲普瑞林凝胶后排卵的小母猪的累积百分比。
图2显示在重复2中末次MATRIX®喂食后96小时(VG 96)给予溶媒凝胶后或末次MATRIX®喂食后96小时(TG 96)、120小时(TG 120)或144小时(TG 144)给予含有200 µg曲普瑞林的曲普瑞林凝胶后排卵的小母猪的累积百分比。
图3显示在合并的重复1和2中末次MATRIX®喂食后96小时(VG 96)给予溶媒凝胶后或末次MATRIX®喂食后96小时(TG 96)、120小时(TG 120)或144小时(TG 144)给予含有200 µg曲普瑞林的曲普瑞林凝胶后排卵的小母猪的累积百分比。
图4显示在末次喂食MATRIX®后120小时给予溶媒或含有100、200或400 mcg曲普瑞林的曲普瑞林凝胶后排卵的小母猪的平均累积百分比。
示例性实施方案详述
申请人已发现本文描述的方法、试剂盒和组合物，其提供更精确地控制小母猪排卵的有效处理，使得以小组形式的小母猪可无需用于监测发情的每日作息制度而授精。本文描述的方法和组合物比每日发情检测简单得多，但出乎意料地在优化生殖性能方面(包括但不限于胎仔数和总出生存活小猪)与用于监测发情的每日作息制度一样有效。
在一个实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，和3)使所述小母猪授精，而不监测发情，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天监测一次。
在另一实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，3)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使小母猪授精，和4)如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
在又一实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，3)在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精，和4)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。对于上述实施方案中的每一个，本专利申请的示例性实施方案的详述部分中描述的任何特征或其组合都是适用的。
例如，下面条款中描述的实施方案或其任何组合也被考虑用于本发明的方法和组合物中。
1. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；和
使小母猪授精，而不监测发情，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天监测一次。
2. 根据条款1的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
3. 根据条款2的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求2的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
4. 根据条款1至3中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
5. 根据条款1至4中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
6. 根据条款1至5中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
7. 根据条款1至6中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
8. 根据条款1至7中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
9. 根据条款1至8中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
10. 条款1至9中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
11. 根据条款1至10中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管(deposition catheter)、手工给药和注射。
12. 条款11的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
13. 条款11的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
14. 根据条款1至13中任一项的方法，其中所述激素为乙酸盐形式。
15. 根据条款1至12或14中任一项的方法，其中所述激素在包含凝胶的组合物中给药。
16. 根据条款15的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
17. 根据条款16的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
18. 条款17的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
19. 条款18的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
20. 根据条款15的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
21. 条款1至12或14至20中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
22. 条款21的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
23. 根据条款1至22中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
24. 根据条款2至23中任一项的方法，其中在所述式中，X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
25. 条款1至24中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
26. 条款1至25中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
27. 根据条款1至12或14至26中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
28. 条款1至12或14至27中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
29. 条款1至12或14至28中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
30. 条款29的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
31. 条款1至12或14至30中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
32. 条款31的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
33. 根据条款1至14或21至26中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
34. 条款33的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
35. 条款1至34中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
36. 条款1至35中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
37. 条款1至36中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
38. 条款1至36中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
39. 条款1至38中任一项的方法，其中使小母猪在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时授精。
40. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使小母猪授精；和
如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
41. 根据条款40的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
42. 根据条款41的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求41的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
43. 根据条款40至42中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
44. 根据条款40至43中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
45. 根据条款40至44中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
46. 根据条款40至45中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
47. 根据条款40至46中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
48. 根据条款40至47中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
49. 条款40至48中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
50. 根据条款40至49中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
51. 根据条款50的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
52. 根据条款50的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
53. 根据条款40至52中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为乙酸盐形式。
54. 根据条款40至51或53中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在包含凝胶的组合物中给药。
55. 根据条款54的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
56. 根据条款55的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
57. 条款56的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
58. 条款57的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
59. 根据条款54的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
60. 条款40至51或53至59中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
61. 条款60的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
62. 根据条款40至61中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
63. 根据条款41至62中任一项的方法，其中在式中X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
64. 条款40至63中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
65. 条款40至64中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
66. 根据条款40至51或53至65中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
67. 条款40至51或53至66中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
68. 条款40至51或53至67中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
69. 条款68的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
70. 条款40至51或53至69中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
71. 条款70的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
72. 根据条款40至53或60至65中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
73. 条款72的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
74. 条款40至73中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
75. 条款40至74中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
76. 条款40至75中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
77. 条款40至75中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
78. 条款40至77中任一项的方法，其中如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中，在给予所述促性腺激素释放激素的约2小时时间内使小母猪第一次授精。
79. 条款40至78中任一项的方法，其中在第六天在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时使小母猪授精。
80. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精；和
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。
81. 根据条款80的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
82. 根据条款81的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求81的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
83. 根据条款80至82中任一项的方法，其中所述授精为人工授精。
84. 根据条款80至83中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约1 µg至约500 µg。
85. 根据条款80至84中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约100 µg至约300 µg。
86. 根据条款80至85中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
87. 根据条款80至86中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约200 µg/mL。
88. 根据条款80至87中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约50 µg/mL至约150 µg/mL。
89. 条款80至88中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素的浓度为约100 µg/mL。
90. 根据条款80至89中任一项的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
91. 条款90的方法，其中所述促性腺激素释放激素使用放置导管给药。
92. 条款90的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过注射给药。
93. 根据条款80至92中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为乙酸盐形式。
94. 根据条款80至91或93中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在包含凝胶的组合物中给药。
95. 根据条款94的方法，其中所述凝胶为选自纤维素、右旋糖酐和海藻酸盐的多糖。
96. 根据条款95的方法，其中所述多糖为纤维素且所述纤维素为甲基纤维素。
97. 条款96的方法，其中所述凝胶包含约0.5重量%至约4.0重量%的甲基纤维素。
98. 条款97的方法，其中所述凝胶为1.2%甲基纤维素。
99. 根据条款94的方法，其中所述凝胶具有约200 cP至约5,000 cP的粘度。
100. 条款90至91或93至99中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素通过阴道内给药。
101. 条款100的方法，其中所述促性腺激素释放激素给药至阴道前部。
102. 根据条款80至101中任一项的方法，其中所述方法导致小母猪多产。
103. 根据条款81至102中任一项的方法，其中在式中X为H2CC(O)NH2，R1为氢，和R2为
。
104. 条款80至103中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
105. 条款80至104中任一项的方法，其中同步发情的激素为烯丙孕素。
106. 根据条款80至91或93至105中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物进一步包含稳定剂，其中所述稳定剂为L-甲硫氨酸。
107. 条款80至91或93至106中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在pH为约5至约6的组合物中。
108. 条款80至91或93至107中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在进一步包含防腐剂的组合物中。
109. 条款108的方法，其中所述防腐剂选自尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
110. 条款80至91或93至109中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在组合物中且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。
111. 条款110的方法，其中所述组合物包含含量为约0.09%重量/体积的尼泊金甲酯，含量为约0.01%重量/体积的尼泊金丙酯，含量为约0.91%重量/体积的氯化钠，含量为约0.186%重量/体积的柠檬酸钠，含量为约0.1%重量/体积的L-甲硫氨酸，含量为约0.07%重量/体积的柠檬酸，含量为约0.01%重量/体积的曲普瑞林，和含量为提供约250 cP至约400 cP的粘度的量的甲基纤维素。
112. 根据条款80至93或100至105中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在选自以下的赋形剂中：缓冲盐水、液体醇、二醇、葡萄糖溶液、酯、酰胺和无菌水。
113. 条款112的方法，其中所述赋形剂进一步包含选自以下的pH缓冲剂：乙酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸和磷酸氢二钠。
114. 条款80至113中任一项的方法，进一步包括使小母猪暴露至公猪的步骤。
115. 条款80至114中任一项的方法，其中用于同步发情的激素通过喂食给药。
116. 条款80至115中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约118至约124小时给药。
117. 条款80至115中任一项的方法，其中所述促性腺激素释放激素在最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约132小时给药。
118. 条款80至117中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约4小时使小母猪第一次授精。
119. 条款80至118中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时使小母猪第二次授精。
120. 条款80至119中任一项的方法，其中在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约3小时使小母猪第一次授精。
121. 条款1至120中任一项的方法，其中小母猪的胎仔数
与基于每日发情检测而授精的对照小母猪的胎仔数类似。
122. 条款1至121中任一项的方法，其中小母猪的总出生存活小猪与基于每日发情检测而授精的对照小母猪的总出生存活小猪类似。
如本文所用，“基于每日发情检测而授精的对照小母猪”是指基于农场使用的标准程序(即，用于监测发情的每日作息制度)而授精的小母猪，其中监测小母猪发情2至8或更多天以预测最佳的授精时间。下面描述的所有示例性实施方案、变体和替代形式可适用于之前在该示例性实施方案的详述部分的段[00139]至[00264]中描述的实施方案和发明概要中描述的实施方案。
本文描述的用于同步小母猪的授精时间的方法包括向小母猪给予一定剂量的促性腺激素释放激素的步骤。根据一个实施方案，将所述激素给予任何猪品种，例如，母猪或小母猪(即，初次交配前的雌性猪)，包括青春期小母猪，并且包括性成熟(即，已具有至少一个发情周期)或性不成熟(即，未具有发情周期)的小母猪。本文描述的方法可导致小母猪多产。本文描述的方法典型地在优化小母猪的生殖性能方面(包括但不限于胎仔数和总出生存活小猪)与用于监测发情的每日作息制度一样有效。
在一个实施方案中，提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，和3)使所述小母猪授精，而不监测发情，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天监测一次。
示例性地，在段[00267]的实施方案中，在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素(例如，烯丙孕素)后第五天小母猪典型地接受单一剂量的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素。在该实施方案中，所述促性腺激素释放激素可，例如，在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天给药。在另一示例性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给药，例如，在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约120或约128小时给药。如本文所用的短语“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天”、“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天”和“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天”分别是指向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第4天、第5天或第6天，其中向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素为第0天。
在段[00267]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约105至约120、约105至约136、约116至约126、约117至约125、约117至约124、约118至约122、约119至约121或约120小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约117、约118、约119、约120、约121、约122、约123或约124小时给药。
在段[00267]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约134、约125至约133、约125至约132、约126至约130、约127至约129或约128小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约125、约126、约127、约128、约129、约130、约131或约132小时给药。
在段[00267]的实施方案中，使接受促性腺激素释放激素处理的小母猪典型地在给予所述促性腺激素释放激素后20小时(或20小时± 2 hr)、22小时(或22小时± 2 hr)、23小时(或23小时± 2 hr)、24小时(或24小时± 2 hr)、25小时(或25小时± 2 hr)、26小时(或26小时± 2 hr)、27小时(或27小时± 2 hr)、28小时(或28小时± 2 hr)、29小时(或29小时± 2 hr)或30小时(或30小时± 2 hr)授精单次。
在段[00267]的实施方案中，还可使小母猪，例如，在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时授精一次。在各种其他示例性实施方案中，使小母猪在给予所述促性腺激素释放激素后约22至约30小时、给予所述促性腺激素释放激素后约10至约40小时、约23至约29小时、约24至约27小时或约23至约30小时授精。在该实施方案中，使小母猪授精而不监测发情。如本文所用的短语“不监测发情”是指不进行本领域熟知用于检测动物是否处于发情的试验。
提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，3)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，4)如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使小母猪授精，和5)如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
示例性地，在段[00273]的实施方案中，小母猪典型地在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素(例如，烯丙孕素)后接受单一剂量的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素。在该实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在，例如，向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天给药。在另一示例性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给药，例如，在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约120或约128小时给药。对于该实施方案，短语“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天”、“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天”和“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天”分别是指向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第4天、第5天或第6天，其中向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素为第0天。
在段[00273]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在该实施方案中向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约105至约120、约105至约136、约116至约126、约117至约125、约117至约124、约118至约122、约119至约121或约120小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约117、约118、约119、约120、约121、约122、约123或约124小时给药。
在段[00273]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约134、约125至约133、约125至约132、约126至约130、约127至约129或约128小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约125、约126、约127、约128、约129、约130、约131或约132小时给药。
在段[00273]的实施方案中，使接受促性腺激素释放激素处理的小母猪授精1或2次。如果小母猪在最后一次每日给予用于同步发情的激素(例如，烯丙孕素)后第五天处于发情中，可以与给予所述促性腺激素释放激素组合的形式使所述小母猪授精。如本文所用，“与给予所述促性腺激素释放激素组合”是指在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精并且在同一天(即，第五天)向小母猪给予所述促性腺激素释放激素。使小母猪授精和给予所述促性腺激素释放激素可以任何顺序完成。例如，可使小母猪在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天早晨授精，并且可在第五天期间此后的任何时间向小母猪给予所述促性腺激素释放激素。在该实施方案中，优选使小母猪授精后至少2小时向小母猪给予所述促性腺激素释放激素。在另一实施方案中，可首先向小母猪给予所述促性腺激素释放激素，例如，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天早晨。然后可在第五天期间在向小母猪给予所述促性腺激素释放激素后的任何时间使小母猪授精。在该实施方案中，优选在给予所述促性腺激素释放激素后至少2小时使小母猪授精。在各种其他实施方案中，在给予所述促性腺激素释放激素时间的约2小时内使小母猪授精。例如，所述授精可在给予所述促性腺激素释放激素时间的约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟、约75分钟或约120分钟内完成，不管小母猪授精和向小母猪给予所述促性腺激素释放激素的顺序如何。
因此，在段[00273]的实施方案中，第五天的授精可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约108至约120、约108至约132、约116至约126、约117至约125、约117至约124、约118至约122、约119至约121或约120小时完成。在其他示例性实施方案中，第五天的授精可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约134、约125至约133、约125至约132、约126至约130、约127至约129或约128小时完成。
在段[00273]的实施方案中，在第六天在给予促性腺激素释放激素后22小时(或22小时± 2 hr)、23小时(或23小时± 2 hr)、24小时(或24小时± 2 hr)、25小时(或25小时± 2 hr)、26小时(或26小时± 2 hr)、27小时(或27小时± 2 hr)、28小时(或28小时± 2 hr)、29小时(或29小时± 2 hr)或30小时(或30小时± 2 hr)使所述小母猪授精。
在段[00273]的实施方案中，可在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天，例如，给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时使小母猪授精。在各种进一步示例性实施方案中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天，在给予促性腺激素释放激素后约22至约30小时、给予所述促性腺激素释放激素后约10至约40小时、约23至约29小时、约24至约27小时或约23至约30小时，使小母猪授精。在该实施方案中，如果小母猪处于发情中(即，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情)，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精。在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精而不监测发情。
提供一种用于同步小母猪的授精时间的方法。所述方法包括步骤：1)向小母猪给予用于同步发情的激素，2)向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素，3)在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精，和4)在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。
示例性地，在段[00281]的实施方案中，小母猪典型地在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素(例如，烯丙孕素)后第五天接受单一剂量的所述促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素。在该实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在，例如，向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天给药。在另一示例性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天，例如，向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约120或约128小时给药。对于该实施方案，短语“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第四天”、“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天”和“最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天”分别是指向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第4天、第5天或第6天，其中向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素为第0天。
在段[00281]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在该实施方案中向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约105至约120、约105至约136、约116至约126、约117至约125、约117至约124、约118至约122、约119至约121或约120小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约117、约118、约119、约120、约121、约122、约123或约124小时给药。
在段[00281]的实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约124至约134、约125至约133、约125至约132、约126至约130、约127至约129或约128小时给药。在替代性实施方案中，所述促性腺激素释放激素可在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后约125、约126、约127、约128、约129、约130、约131或约132小时给药。
在段[00281]的实施方案中，典型地使接受促性腺激素释放激素处理的小母猪授精2次。在给予所述促性腺激素释放激素后约2小时至约8小时或给予所述促性腺激素释放激素后约2小时至约14小时使所述小母猪第一次授精。在其他实施方案中，所述第一次授精可在给予促性腺激素释放激素后约2小时至约7小时、约2小时至约6小时、约2小时至约5小时或约2小时至约4小时。
在段[00281]的实施方案中，在给予所述促性腺激素释放激素后22小时(或22小时± 2 hr)、23小时(或23小时± 2 hr)、24小时(或24小时± 2 hr)、25小时(或25小时± 2 hr)、26小时(或26小时± 2 hr)、27小时(或27小时± 2 hr)、28小时(或28小时± 2 hr)、29小时(或29小时± 2 hr)或30小时(或30小时± 2 hr)使所述小母猪第二次授精。
在段[00281]的实施方案中，还可使小母猪第二次授精，例如，在给予所述促性腺激素释放激素后约24至约28小时。在各种进一步示例性实施方案中，在给予所述促性腺激素释放激素后约22至约30小时、给予所述促性腺激素释放激素后约10至约40小时、约23至约29小时、约24至约27小时或约23至约30小时使小母猪第二次授精。在该实施方案中，使小母猪第一次和第二次授精而不监测发情。如本文所用的短语“不监测发情”是指不进行本领域熟知用于检测动物是否处于发情的试验。
任何下述实施方案适用于任何上述实施方案。任何下述实施方案(包括任何所述促性腺激素释放激素实施方案和任何给药方法(例如，注射或阴道内给药，在本文描述的凝胶组合物中))也适用于同步母猪的授精时间的方法，除了实施方案明确限于小母猪外。所述方法包括步骤：1)向所述母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在断奶后第四天给予所述促性腺激素释放激素，和3)使所述母猪授精，而不监测发情，仅在给予所述促性腺激素释放激素后约18至约24小时，例如，给予所述促性腺激素释放激素后约20 ± 2小时或约20 ± 1小时监测一次。
动物配种可通过任何方式，包括人工授精(AI)，或通过自然配种。在本文描述的任何实施方案中，可进行第二次配种或随后的配种(例如，人工授精)。在又一实施方案中，猪仅人工授精一次。在另一示例性方面，没有发情检测(即，监测发情)。在另一示例性实施方案中，本文描述的方法可进一步包括在监测发情过程中将小母猪或母猪暴露于公猪的步骤以建立人工授精的时机。
在本文描述的任何实施方案中，用于同步猪的授精时间的组合物包含：a)促性腺激素释放激素；和b)药学上可接受的pH缓冲剂，以提供范围为约pH 4至约pH 9的pH。所述组合物的pH范围可为约4至约9。在其他实施方案中，所述pH的范围可为约4至约8、约4至约7、约4.5至约6.5、约4.5至约6或约5至约6。
此外，所述促性腺激素释放激素组合物可根据剂型通过常规方法生产，所述常规方法通过适当地与添加剂混合、用添加剂稀释或溶解于添加剂，诸如各种赋形剂、崩解剂、粘合剂、盐类、润滑剂、局部麻醉药(例如，利多卡因)、稀释剂、防腐剂、螯合剂、缓冲剂、张度剂、抗菌剂(antiseptic agent)、湿润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、助溶剂或其组合。
示例性地，包含促性腺激素释放激素的组合物可以是凝胶形式，并且组合物可以具有例如约10 cP(厘泊)至约300,000 cP的粘度。在各种示例性实施方案中，组合物的粘度可为约100 cP至约100,000 cP、约250 cP至约400 cP、约300 cP至约400 cP、约500 cP至约100,000 cP、约700 cP至约100,000 cP、约200 cP至约20,000 cP、约200 cP至约10,000 cP、约200 cP至约5,000 cP、约200至约1,000 cP、约200 cP至约600 cP、约100 cP至约600 cP、约100 cP至约500 cP、约200 cP至约500 cP、约200 cP至约450 cP或约100,000 cP至约250,000 cP。根据本文描述的各种实施方案，组合物的粘度可为约200 cP、约250 cP、约300 cP、约400 cP、约500 cP、约1,000 cP、约15,000 cP、约20,000 cP、约30,000 cP、约40,000 cP、约50,000 cP、约75,000 cP、约100,000 cP、约200,000 cP或约300,000 cP。溶液的粘度可使用粘度计(诸如流变计)基于本领域熟知的技术进行测量。术语凝胶包括非固化的粘性溶液。
典型地，如本文所述的凝胶包含约0.001至约3.0%重量/重量(w/w)的促性腺激素释放激素或其盐，更典型地约0.5-5.0%(w/w)或约0.1-5.0%(w/w)的促性腺激素释放激素或其盐，防腐剂，凝胶(即，粘度调节剂诸如甲基纤维素)，用以保持pH在约5至约6之间的缓冲剂，和用以保持张度在约200至约400 mOsm/kG之间的张度剂。
根据本文描述的任何实施方案，所述组合物有充分的粘性以使得组合物可吸附在靶组织(例如，阴道组织)足够的时间以递送有效量的促性腺激素释放激素至小母猪或母猪。例如，典型粘度依赖例如应用的促性腺激素释放激素的渗透率和促性腺激素释放激素的数量的因素。合适的粘度调节剂包括但不限于：离子和非离子水溶性聚合物；交联的丙烯酸聚合物；亲水聚合物诸如聚环氧乙烷、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物和纤维素聚合物衍生物诸如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素和醚化纤维素；胶诸如黄蓍胶和黄原胶；海藻酸钠；明胶、透明质酸及其盐、壳聚糖、胶凝糖或其任何组合。
所述粘度调节剂可以是凝胶、糊剂、乳膏、软膏等形式。在一个实施方案中，所述组合物包含促性腺激素释放激素和凝胶(例如，形成粘性溶液)，其作为粘度调节剂，和所述促性腺激素释放激素在包含所述凝胶的组合物中给药。在一个实施方案中，所述凝胶是水凝胶、脂质体凝胶(lipogel)或粘性溶液。在另一实施方案中，所述凝胶是水凝胶。所述凝胶可以使用本领域已知的任何方法制备，例如，诸如在美国专利号6,908,623和7,456,207中描述的那些方法，其通过引用并入本文。
在本文描述的任何实施方案中，所述凝胶(即，粘度调节剂)包含多糖。根据本文描述的方法和组合物，多糖可包括例如海藻酸盐和葡萄糖，诸如糖原、淀淀(例如，直链淀粉和支链淀粉)、纤维素和右旋糖酐。所述多糖可以是例如甲基、乙基或丙基纤维素酯、醚、羟基醚、羟基烷基或羟基酯。为达到需要的粘度，可以使用足量的一种或多种多糖。典型地，约0.25至约10重量%的多糖(基于组合物的总重量)是希望的。在另一实施方案中，多糖的重量%为约0.25重量%至约3.0重量%、约1.0重量%至约7重量%、约1.0重量%至约4.0重量%或约1.0重量%至约2.0重量%。在其他实施方案中，多糖的重量%为约0.1%、约0.5%、约0.75%、约0.8%、约0.9%、约1.0%、约1.1%、约1.2%、约1.4%、约1.8%、约2.0%、约5%、约8%或约10%(全部均以重量/重量计)。为增加组合物的粘度，所述多糖可与一种或多种本领域已知的非多糖增粘剂一起使用。可与一种或多种多糖一起使用的非多糖增粘剂的实例包括黄原胶、海藻酸及其盐、硅酸镁铝、糊精、蔗糖及其衍生物，及其混合物。非多糖增粘剂(如果存在)的量可为约0.1重量%至约10重量%，这取决于所需的粘度。
在本文描述的任何实施方案中，所述凝胶可包含纤维素。如本文所述的纤维素的示例性实施方案包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟乙基甲基纤维素。所述纤维素可以是纤维素衍生物，优选非离子纤维素酯、醚、羟基醚或羟基酯，或非离子淀粉衍生物。典型地，约0.25重量%至约10重量%的纤维素(基于组合物的总重量)是希望的。在另一实施方案中，纤维素的重量%为约0.25重量%至约3.0重量%、约0.5重量%至约3.0重量%、约0.5重量%至约4.0重量%、约1.0重量%至约7重量%、约1.0重量%至约4.0重量%或约1.0重量%至约2.0重量%。在其他实施方案中，纤维素的重量%为约0.1%、约0.5%、约0.75%、约0.8%、约0.9%、约1.0%、约1.1%、约1.2%、约1.4%、约1.8%、约2.0%、约5%、约8%或约10%(全部以重量/重量计)。如果需要均匀的凝胶，可加入分散剂诸如醇、山梨醇或甘油，或可通过粉碎(tituration)、机械混合或搅拌或其组合来分散胶凝剂。
用于本文描述的方法的组合物中的可接受的稳定剂包括L-氨基酸，诸如L-甲硫氨酸。在其他实施方案中，可使用的稳定剂包括但不限于多糖诸如阿拉伯胶、琼脂、海藻酸、瓜尔胶和黄蓍胶、明胶以及合成和半合成的聚合物诸如卡波姆树脂、纤维素醚和羧甲基壳多糖。所述稳定剂的量通常为约0.05至约10%、约0.05至约5%、约0.05至约2.0%、约0.05至约1.0%、约0.05至约0.5%、约0.05至约0.2%、约0.1至约5%、约0.1至约10%、约0.1至约20%、约1至约5%、约1至约10%、约1至约20%(全部以重量/体积计)。在一个实施方案中，在如本文所述的稳定剂存在下，所述组合物的贮存期限可为至少12个月、至少18个月或至少24个月。在另一实施方案中，所述组合物可在范围为约2℃至约8℃的温度下储存。还可包括惰性载体，诸如乳糖、淀粉、糊精、磷酸二钙和硫酸钙。在包括稳定剂的一个实施方案中，所述组合物是化学稳定的，并保持至少97%、至少98%、至少99%纯度、至少99.5%纯度或至少99.7%纯度至少三个月。
所述张度剂可以是非离子的或离子的。示例性地，用于本文描述的方法的组合物中的可接受的张度剂包括，例如，离子试剂诸如氯化钠、氯化钾或平衡盐溶液。根据一个实施方案，张度剂以达到约200-400 mOsm/kG、约220-380 mOsm/kG或约250-340 mOsm/kG张度的量存在。非离子张度剂包括二醇，诸如甘油、甘露醇、赤藓醇、聚乙二醇、丙二醇；和糖诸如蔗糖和右旋糖。张度剂的量通常为约0.05至约10%、约0.05至约5%、约0.05至约2.0%、约0.05至约1.0%、约0.05至约0.5%、约0.05至约0.2%、约0.1至约5%、约0.1至约10%、约0.1至约20%，0.5至约2.0%、约0.6至约2.0%、约0.5至约1.8%、约0.6至约1.8%、约1.0至约5.0%、约1.0至约10%或约1.0至约20%(全部以重量/体积计)。
在本文描述的任何实施方案中，用于本文描述的方法的组合物中的pH缓冲剂是技术人员已知作为pH缓冲剂或组合物的那些试剂，并包括，例如，乙酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液，以及各种生物学缓冲剂，例如，TAPS、Bicine、Tris、Tricine、HEPES、TES、MOPS、PIPES、二甲胂酸盐和MES。其他pH缓冲剂包括盐酸、氢氧化钠、氧化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢盐、氨、碳酸、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸、磷酸氢二钠、硼砂、硼酸等。缓冲剂的量通常为约0.01至约10%、约0.02至约10%、约0.02至约5%、约0.02至约2.0%、约0.02至约1.0%、约0.02至约0.5%、约0.05至约10.0%、约0.05至约1.0%、约0.05至约0.5%、约0.05至约0.2%、约0.1至约5%、约0.1至约10%、约0.1至约20%、约1至约5%、约1至约10%、约1至约20%(全部以重量/体积计)。
用于本文描述的制剂中的pH缓冲剂可以在获得希望的pH范围所需的任何浓度下使用。例如，缓冲剂可以在约0.001M至约1M、约0.001M至约2M、约0.001M至约5M、约0.05M至约0.1M、约0.05M至约0.2M、约0.05M至约1M，0.05M至约2M、约0.05至约5M、约0.1M至约1M、约0.1M至约2M、约0.1M至约5M的浓度下使用。获得希望的pH范围所需的缓冲剂的任何量可用于本文描述的制剂中。典型地，药学上可接受的pH缓冲剂可用于提供范围为约pH 4至约pH 9的pH。本文描述的组合物的pH的范围可以为约3至约10或约4至约9。在本文描述的任何实施方案中，所述pH范围可为约4至约8、约4至约7、约4.5至约6.5、约4.5至约6、约5至约6、约5至约5.5、约4至约6或约4.5至约5.5。
在任何实施方案中，本文描述的组合物可包含一种或多种药学上可接受的防腐剂。如本文所用的术语“防腐剂”包括试剂或试剂组合，其有助于稳定组合物、抑制微生物生长，或两者。合适的防腐剂的实例包括对羟基苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸的甲基、乙基、丙基和丁基酯)、没食子酸丙酯、山梨酸和它的钠和钾盐、丙酸和它的钙和钠盐、“Dioxin”(6-乙酰氧基-2,4-二甲基-间-二氧杂环己烷)、“Bronopol”(2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇)和水杨酰苯胺诸如二溴水杨酰苯胺、三溴水杨酰苯胺、“Cinaryl”100和200或“Dowicil”100和200(1-(3-氯烯丙基-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷(azanidadamantane)氯化物的顺式异构体)、六氯酚、苯甲酸钠、柠檬酸、乙二胺四乙酸和它的碱金属和碱土金属盐、丁羟茴醚、丁羟甲苯、酚类化合物诸如氯代-和溴代甲酚和氯代-和溴代-二甲酚(oxylenol)、季胺化合物如苯扎氯铵、芳香醇诸如苯乙醇、苯甲醇等、氯丁醇、喹啉衍生物诸如碘氯代羟基喹啉等。当存在时，防腐剂的总量为约0.005重量%至约2重量%、约0.001重量%至1.0重量%、约0.005重量%至约0.25重量%或约0.05重量%至约0.2重量%，典型地为约0.01重量%至约0.1重量%(全部以重量/重量计)。
在任何实施方案中，用于本文描述的方法的药物组合物可含有螯合剂，诸如本领域技术人员已知的那些，例如，乙二胺四乙酸盐(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)和N,N-二(羧甲基)甘氨酸(NTA)或其盐。所述组合物可含有约0.003重量%至约1.0重量%、约0.02重量%至约0.2重量%、约0.01重量%至约1.0重量%或约0.02重量%至约0.5重量%(全部以重量/体积计)的螯合剂。
在本文描述的任何实施方案中，在用于本文描述的方法的组合物中可包括抗微生物剂。这种试剂可包括但不限于5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基)-苯酚、8-羟基喹啉、铜II化合物、邻苯二甲酸、氯己定、阿来西定、海克替啶、血根碱、苯扎氯铵、水杨酰苯胺、度米芬、西吡氯铵、十四基氯化吡啶、N-十四基-4-乙基氯化吡啶、奥替尼啶、碘、磺胺类、双缩二胍类(bisbiguanide)、酚类化合物、地莫匹醇、辛哌醇及其他哌啶基衍生物，和烟酸制备物、任何合适的抗生素诸如力百汀、阿莫西林、四环素、多西环素、米诺环素、甲硝哒唑、新霉素、卡那霉素和克林霉素，和适用的任何这些化合物的任何盐，和这些化合物的任何组合。在又一实施方案中，可包括抗真菌化合物，其单独或与任何上述抗微生物剂组合。适用于本文描述的组合物中的抗真菌剂包括但不限于制霉菌素、咪康唑、益康唑、克霉唑和氟胞嘧啶。可加入到本文描述的制剂中的抗微生物或抗真菌剂的量为约0.01至约10%、约0.01至约5%、约0.01至约2.0%、约0.01至约1.0%、约0.01至约0.5%、约0.01至约0.2%、0.05至约10%、约0.05至约5%、约0.05至约2.0%、约0.05至约1.0%、约0.05至约0.5%、约0.05至约0.2%、约0.1至约5%、约0.1至约10%、约0.1至约20%、约1至约5%、约1至约10%、约1至约20%(全部以重量/体积计)。
在用于本文描述的方法的组合物的任何实施方案中，还可加入抗氧化剂。例如，本文使用的抗氧化剂可包括β-胡萝卜素、维生素E、维生素C、维生素A、生育酚、丁羟甲苯、丁羟茴醚、叔丁基对苯二酚、没食子酸丙酯、抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠、尿酸、类胡萝卜素、黄酮类、褪黑激素和乙氧喹。抗氧化剂可以约0.01至约10%、约0.01至约5%、约0.01至约2.0%、约0.01至约1.0%、约0.01至约0.5%、约0.01至约0.2%、0.05至约10%、约0.05至约5%、约0.05至约2.0%、约0.05至约1.0%、约0.05至约0.5%、约0.05至约0.2%、约0.1至约5%、约0.1至约10%、约0.1至约20%、约1至约5%、约1至约10%、约1至约20%(全部以重量/体积计)的量加入到本文描述的制剂中。
在一个实施方案中，用于本文描述的方法的促性腺激素释放激素在组合物中并且所述组合物包含尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯化钠、柠檬酸钠、L-甲硫氨酸、柠檬酸、曲普瑞林和甲基纤维素。在另一方面，所述组合物包含尼泊金甲酯的量为约0.09%重量/体积，尼泊金丙酯的量为约0.01%重量/体积，氯化钠的量为约0.91%重量/体积，柠檬酸钠的量为约0.186%重量/体积，L-甲硫氨酸的量为约0.1%重量/体积，柠檬酸的量为约0.07%重量/体积，曲普瑞林的量为约0.01%重量/体积，和甲基纤维素的量为约1.2%重量/体积(或具有约250 cP至约400 cP的粘度)。
用于本文描述的方法的促性腺激素释放激素组合物含有当在本文描述的方法中使用时有效同步小母猪的授精时间的量的促性腺激素释放激素。如本文所用，“促性腺激素释放激素”是指任何促性腺激素释放激素，包括促性腺激素释放激素类似物和衍生物，以及促性腺激素释放激素激动剂和拮抗剂。在其他实施方案中，可使用促黄体激素或人绒毛膜促性腺激素，或其衍生物或类似物，及其组合来代替促性腺激素释放激素，或与促性腺激素释放激素组合使用。如本文所用，“促黄体激素”是指任何促黄体激素，包括促黄体激素类似物和衍生物，以及促黄体激素激动剂和拮抗剂。在一个实施方案中，所述促黄体激素可以是合成的。在另一实施方案中，所述促黄体激素可以是LH(参见，例如，美国专利号5,444,167，其通过引用并入本文)。如本文所用，“人绒毛膜促性腺激素”是指任何人绒毛膜促性腺激素，包括人绒毛膜促性腺激素类似物和衍生物，以及人绒毛膜促性腺激素激动剂和拮抗剂。在一个实施方案中，所述人绒毛膜促性腺激素可以是合成的。在另一实施方案中，所述人绒毛膜促性腺激素可以是hCG(参见，例如，美国专利号6,469,139、4,400,316和4,804,626，其通过引用并入本文)。在又一实施方案中，在本文描述的方法中不使用eCG、hCG和LH。
在一个实施方案中，所述促性腺激素释放激素可以是合成的。在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素可以是乙酸盐形式。在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素可以是GnRH(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH2)(参见，例如，美国专利号5,688,506，其通过引用并入本文)或曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)。
用于本文的促性腺激素释放激素激动剂的实例包括但不限于醋酸亮丙瑞林(leuprolide)、那法瑞林、布舍瑞林、[DAla6，去Gly-NH2 10]GnRH、[DLys6]GnRH，[DAla6]GnRH、[2-Me-Ala6]GnRH、[D-α-氨基丁酰基6，去-GlyNH2 10]GnRH、曲普瑞林、黄体瑞林、戈舍瑞林、地洛瑞林和组氨瑞林。通常，促性腺激素释放激素激动剂模仿天然促性腺激素释放激素十肽，典型地在6和10位由特定氨基酸置换而塑造的。曲普瑞林是促性腺激素释放激素激动剂的一个实例，其只在6-位单一置换。
促性腺激素释放激素拮抗剂的实例包括安肽(用式D-Ac-D-2-Nal1-DpClPhe2-D-3-Pal3-Ser4-NiLys5-D-NicLys6-Leu7-ILys8-Pro9-D-Ala10表示的十肽)、[Ac-D4ClDPhe1，D4ClDPhe2，DTrp3，DArg6，DAla10]GnRH、[Ac-4ClDPhe2，D3Pal3，Arg5，D2Nal6，DAla10]GnRH、[Ac-D2-Nal1，4ClDPhe2，DTrp3，DArg6，DAla10]GnRH、[Ac-D2Nal1，4FDPhe2，DTrp3，DArg6]GnRH、[Ac-D2Nal1，4ClDPhe2，DTrp3，DhArg(Et2)6，DAla10]GnRH和[Ac-Nal1，DME4ClPhe2，DPal3，Ser4，Tyr5，DArg6，Le7，ILys8，Pro9，DAla10]GnRH。
在本文描述的任何实施方案中，可使用式(I)的促性腺激素释放激素
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
在另一实施方案中，R1为亚甲基-芳基。在另一实施方案中，所述芳基为苯基或4-羟基苯基。在另一实施方案中，R1为亚甲基-杂芳基。在又一实施方案中，所述杂芳基选自吡啶基、噻唑基、哒唑基(pyridazolyl)、嘧啶基、喹啉基、吡唑基、咪唑基、吡咯基、吲哚基、苯并吡唑基和苯并咪唑基；和R2为氢或甲基。在各种其他实施方案中，R1为2-甲基丙基，R1为2-萘基甲基，R1为叔丁氧基甲基，R1为甲基，R1为4-氨基丁基，R1为乙基，R1和R2为甲基，R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，或R1为苄基。
在其他实施方案中，R2为氢，R2为氢并且上述促性腺激素释放激素在R1连接的碳处具有R-构型，R2为氢并且所述促性腺激素释放激素在R1连接的碳处具有S-构型，或R2为氢并且所述促性腺激素释放激素为在R1连接的碳处具有R-构型和在R1连接的碳处具有S-构型的促性腺激素释放激素的混合物。
在其他实施方案中，X为CH2(CO)NH2，X为HN(CO)NH2，X为乙基，X为氢，R5为氢，或R5为甲基。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢。
在又一实施方案中，提供前述实施方案中的任一个，其中X为CH2C(O)NH2­。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R。
在另一实施方案中，所述促性腺激素释放激素为式I的激素，其中R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
本文所用的促性腺激素释放激素，诸如上式描述的那些，可以药学上可接受的无毒盐或复合物的形式给药。所述盐包括酸加成盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、草酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、鞣酸盐、马来酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、海藻酸盐、苹果酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐等。所述复合物可以具有金属，诸如锌、钡、钙、镁、铝等。
用于本文描述的方法中的可接受的激素的其他实例包括前列腺素、孕激素、孕酮、雄激素、睾酮、雌激素和雌二醇、其衍生物和类似物、其组合等。在本文描述的方法中，用于同步发情的激素可以是烯丙孕素(来自Intervet，Inc. Summit，New Jersey 的MATRIX®)。用于同步发情的激素(例如，烯丙孕素或任何其他合适的黄体酮)可通过喂食，例如，通过将激素与小母猪饲料混合或将激素施加至小母猪饲料，来给予小母猪。用于将烯丙孕素喂食至小母猪的方法是本领域熟知的。例如，在一个实施方案中，0.22%烯丙孕素溶液(或任何其他合适浓度)可用于在小母猪饲料中每天一次给予每只小母猪15 mg烯丙孕素达14天。在另一实施方案中，0.22%烯丙孕素溶液(或任何其他合适浓度)可用于在小母猪饲料中每天一次给予每只小母猪20 mg烯丙孕素达18天。可根据本发明使用给予烯丙孕素或用于同步发情的另一激素(例如，任何其他合适的黄体酮)的任何其他合适方案。用于同步发情的激素可通过本领域已知的任何合适方法(包括通过喂食)给予小母猪。
用于本文描述的方法和组合物中的促性腺激素释放激素的有效量取决于许多参数，包括促性腺激素释放激素的分子量、它的给药途径和它是否是它的天然形式。在本文的描述中，激素的“有效量”是使用本文描述的方法足以在小母猪或母猪中同步排卵或同步授精时间的量。
给予小母猪或母猪的促性腺激素释放激素的有效量的范围可为约100 ng至约2000 µg、约100 ng至约1000 µg、约100 ng至约500 µg、约1 µg至约2000 µg、约1 µg至约500 µg、约1 µg至约100 µg、约1 µg至约50 µg、约1 µg至约10 µg、约10 µg至约2000 µg、约10 µg至约1000 µg、约10 µg至约500 µg、约10 µg至约100 µg、约10 µg至约50 µg、约50 µg至约2000µg、约50µg至约1000µg、约50 µg至约500 µg、约50 µg至约300 µg、约50 µg至约200 µg、约100 µg至约200 µg、约100 µg至约300 µg、约100 µg至约500 µg、约100 µg至约1000µg、约200µg至约2000µg或约0.05 mg至约50 mg。在各种示例性方面，所述促性腺激素释放激素可以约1 µg、约2 µg、约5 µg、约10 µg，20 µg、约50 µg、约75 µg、约100 µg、约150 µg、约180 µg、约200µg、约225 µg、约250 µg、约300 µg、约400 µg、约500 µg、约750 µg、约1000 µg、约1500 µg或约2000 µg的促性腺激素释放激素的剂量给予小母猪或母猪。所述促性腺激素释放激素可以一个或多个剂量给药。典型地，所述促性腺激素释放激素在不使用任何其他同步排卵的激素的情况下给药。
用于本文描述的方法的组合物中的促性腺激素释放激素可以，例如，约0.1 μg/mL、约0.5 μg/mL、约1 μg/mL、约5 μg/mL、约10 μg/mL、约50 μg/mL至约500 μg/mL、约50 μg/mL至约400 μg/mL、约50 μg/mL至约300 μg/mL、约50 μg/mL至约200 μg/mL、约50 μg/mL至约150 μg/mL、约50 μg/mL至约250 μg/mL或约100 μg/mL的浓度给药。在示例性实施方案中，所述组合物可以各种体积给药，包括例如0.1 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4mL或5 mL的剂量体积。可使用任何合适的给药体积，这取决于，例如，给予动物的途径、给予激素的动物大小、给予激素的动物品种以及本领域技术人员已知的其他因素。
在本文描述的任何实施方案中，所述促性腺激素释放激素是根据本文描述的方法以有效地刺激卵泡排卵和有效地同步排卵的量给药。该剂量的促性腺激素释放激素可以使用选自以下的方法给药：1)使用放置导管，2)手工给药，3)注射，或任何其他本领域公认用于给予药物组合物的手段，例如，任何其他本领域公认用于阴道给予药物组合物(诸如含有激素的组合物)的手段。在一个实施方案中，所述促性腺激素释放激素可以给予多于一只的小母猪或母猪。
用于有效促性腺激素释放激素给药的方法的实例，除了阴道给药外，包括肠胃外给药至小母猪或母猪，例如，皮下、肌内、腹膜内、鞘内或静脉内，或与可接受的载体组合。肠胃外给药的合适方法包括针(包括显微针)注射器、无针注射器和灌输技术。用于本发明的肠胃外组合物可以是可重构的冻干形式，其包含一个或多个剂量的促性腺激素释放激素组合物。肠胃外剂型的实例包括所述促性腺激素释放激素组合物在熟知的可接受的液体载体中的水溶液，诸如液体醇、二醇(例如，聚乙二醇)、葡萄糖溶液(例如，5%)、酯、酰胺、无菌水、缓冲盐水(包括缓冲剂如磷酸盐或乙酸盐；例如，等渗盐水)。
在本文描述的任何实施方案中，可将用于本文描述的方法中的促性腺激素释放激素组合物局部(locally)给予至小母猪或母猪。用于本文的局部给药方法的实例包括表面(topical)、阴道内和直肠内。用于该实施方案中的剂型的实例包括乳膏、软膏、凝胶、糊剂、粉剂、洗剂、透皮贴剂、子宫内装置、阴道环和阴道片剂。在一个示例性实施方案中，将所述促性腺激素释放激素组合物给予至小母猪或母猪的阴道前部。所述促性腺激素释放激素还可配制成阴道或直肠组合物诸如栓剂，例如，含有常规栓剂基质，诸如可可脂、碳蜡、聚乙二醇或其他甘油酯，其全部在体温下熔融，而在室温下固化。
可通过任何有用的程序将所述促性腺激素释放激素给予至小母猪或母猪，并可用任何有效剂量和合适的剂型，包括本领域已知的口服剂型，诸如丸剂、小丸或胶囊，并可将有效剂量以标准或改性释放剂型给药。改性释放剂量制剂包括延缓的、持续的、脉冲的、受控的、定向的和程序性的释放制剂。
所述促性腺激素释放激素组合物还可包含合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物诸如聚乙二醇。
在另一示例性方面，用于本文描述的方法中的促性腺激素释放激素可以是试剂盒形式。所述试剂盒可包含一个剂量或多个剂量的如本文所述的促性腺激素释放激素。在该实施方案中，所述试剂盒可进一步包含用于手工给药的施用器、放置导管和/或注射器以将激素组合物施用于小母猪或母猪。在又一实施方案中，所述促性腺激素释放激素在包含如本文所述的凝胶的组合物中。在一个示例性实施方案中，所述试剂盒可包含分开的促性腺激素释放激素和凝胶，用于在给予小母猪或母猪前混合，或他们可共同在一个组合物中。在另一实施方案中，所述试剂盒可包含在容器中混合的促性腺激素释放激素和凝胶，用于直接给药。
在又一实施方案中，所述试剂盒含有使用说明书。所述说明书可指出，授精应通过一种或多种人工授精。所述说明书还可提供如本文所述的给予所述促性腺激素释放激素和用于同步发情的激素至小母猪的时机，和人工授精的时机。
在又一实施方案中，提供制备的物品。所述制备的物品可包含用于本文描述的方法中的本文描述的任何促性腺激素释放激素组合物。所述促性腺激素释放激素组合物可以在主容器中，例如，玻璃管瓶，诸如带橡皮塞和/或揭开性铝封口的琥珀色玻璃管瓶。在另一实施方案中，所述主容器可以是塑料的或铝的，并且该主容器可被封口。在另一实施方案中，所述主容器可以包含在第二容器内，以进一步保护组合物免受光照。所述第二容器可以是例如卡纸板。这些实施方案中的任一个还可用于上述的试剂盒实施方案，并且本文描述的促性腺激素释放激素组合物实施方案中的任一个可用于制备的物品。
实施例
实施例1
研究设计和处理
所有小母猪分别以15 mg/小母猪/天的推荐率以MATRIX®作为饲料(top-dress)喂食14天。小母猪从MATRIX®喂食撤出(在第0天早晨末次喂食(top feed))并分配为处理组。在MATRIX®撤出(末次饲料)后96小时，对照用不含曲普瑞林的1.2%甲基纤维素凝胶制剂处理。剩余的小母猪在MATRIX®撤出后的不同时间阴道内接受200 mcg在1.2%甲基纤维素凝胶制剂中的乙酸盐形式的曲普瑞林。四种处理为：1)在MATRIX®撤出后96小时溶媒凝胶(VG)处理，2)在MATRIX®撤出后96小时曲普瑞林凝胶(TG)处理，3)在MATRIX®撤出后120小时TG处理和4)在MATRIX®撤出后144小时TG处理。如下所述监测所有小母猪的发情和排卵状态。重复1中所包括的小母猪选自处于生长/肥育猪舍(finish barn)的终端系商业化生产的小母猪。性成熟(如由一个或多个发情周期所指示的)未在MATRIX®喂食开始前进行验证。重复2中所包括的小母猪选自母系小母猪群体。性成熟通过经验证的至少一个发情周期进行验证并在开始MATRIX®喂食前记录。
试验物质
曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)以乙酸盐形式提供，来自Bachem，Torrance，CA(Item H-4075 CGMP级)。曲普瑞林凝胶(200 μg/2 mL)由Argenta(Auckland，NZ)在由Methocel Premium A4000(Dow Chemical)、柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)、NaCl、甲硫氨酸和EDTA(作为潜在的稳定剂)以及尼泊金甲酯和丙酯(作为防腐剂)组成的凝胶中配制。将五十四毫升的曲普瑞林凝胶(100 mcg乙酸曲普瑞林/mL)包装在具有灰色丁基药用血清瓶塞(Gray Butyl Pharmaceutical Serum Vial Stopper)(73828A-SS)和标准铝封口(Standard Aluminum Seal)(SAS20NAT)的琥珀色硼硅玻璃血清瓶(Amber Borosilicate Glass Serum Vial)(610206-50)中。曲普瑞林凝胶溶媒含有与曲普瑞林凝胶相同的制剂赋形剂，除了它不含有曲普瑞林或潜在的稳定剂、甲硫氨酸和EDTA以外。MATRIX®以美国市售的形式提供。
发情观察
对于处理后的发情检测，将小母猪安置在单个围栏中。将公猪安置在单独的房间，和/或至少12 m的距离且顺风。为了激发发情的迹象，让成熟的公猪在小母猪箱前面的通道里缓慢行走，使每只试验小母猪暴露于来自公猪的视觉、听觉和嗅觉信号长达5分钟。保持商业农场的标准做法，当公猪靠近小母猪箱前面时，由有经验的人向小母猪的上腹部施加背压结合侧部摩擦来测试发情。当小母猪对背压表现僵直站立、没有发声且具有一些耳朵反射的迹象时，证实发情。
对于重复一，从第5天至第8天每天一次对小母猪进行发情检测。对于重复二，从第0天至第8天每天一次对小母猪进行发情检测。
排卵监测
通过经直肠超声检查监测所有小母猪的排卵状态。对于重复一，在第5天监测排卵2次，然后从第6天到第8天每天三次。对于重复二，从第5天到第8天每天监测排卵三次。为此目的，使用具有7.5 MHz线阵式换能器的Aloka 500超声机，所述换能器连接至固定角度的PVC稳定杆以便于插入直肠。换能器和PVC杆涂有妇科润滑剂，并轻轻地插入直肠直至卵巢可视，一次一个。每次扫描时记录三个最大的卵泡直径(至最接近0.1 mm)。当大卵泡(≥ 6.5 mm)的数量降至少于3个时，宣布小母猪已经排卵。
给药
用导管将单个2 mL剂量的曲普瑞林凝胶或溶媒凝胶置于子宫颈后大约1-2 cm，与用于人工授精的那些类似。使用连接至导管的标准多剂量施用器递送剂量。围绕导管的新的一次性护套用于每只小母猪。
统计学分析
使用SAS的混合模型程序分析数据。模型包括最后喂食MATRIX®后处理的时间、重复以及处理与重复的相互作用的主效应。用P <0.05的T检验，根据最小二乘均值估值检验处理之间的差异。用于分析的数据进行数据正态性假设的检验。
结果
重复1中的五只小母猪和重复2中的三只小母猪因为与处理不相关的原因从数据分析排除。结果呈现在图1和2中，其中重复1和2的表列数据分别呈现在表1和2中。与重复1相比，MATRIX®后检测到重复2中更多的小母猪发情。
重复1在整理研究机构(finishing research facility)中用性成熟水平较低的杂交PIC C-22 X系337终端系雌性进行，与PIC C-22母系雌性相比，PIC C-22母系雌性更加性成熟且在重复2中处于高度保持的环境繁殖机构中。与重复2相比，重复1中较低比例的小母猪在MATRIX®喂食前显示出其首次发情。重复2不仅在与重复1不同的位置进行，而且重复2中的小母猪性成熟也更高，如通过MATRIX®喂食开始之前在所有小母猪中记录的发情周期所证实的。在重复1中，发情周期在MATRIX®喂食开始之前不能可靠地在所有小母猪中记录。
末次MATRIX®喂食至排卵的间隔受处理和重复的影响。曲普瑞林凝胶处理至排卵的间隔预计在处理后40-48小时达到峰值。因此，当在MATRIX®后96、120或144小时给予曲普瑞林凝胶时，MATRIX®至排卵的间隔预计会有所不同。这示于表4中并描绘于图3中。每组的排卵峰发生在处理后48小时。然而，对于96、120和140小时处理组，峰分别位于MATRIX®后144、168和192小时。溶媒处理组未显示出同步的排卵峰，而是排卵百分比稳定的增加，其从未达到曲普瑞林凝胶处理的小母猪所观察到的同样水平。
重复的影响或可能更重要的性成熟的影响通过表1和表2的比较来显示。表2中呈现的小母猪被证实为性成熟，而重复或表1中的那些则没有。可在图1和2中看出差异。对于三个处理时间中的每一个，性成熟的小母猪(图2)在曲普瑞林凝胶处理后48小时显示出较高的排卵应答。例如，在TG 120处理时间里将重复2的90%与重复1的60%进行比较。即使这两组小母猪之间性成熟的水平不同，但当比较图1与图2时一致趋势是明显的，且数据呈现在图3中。溶媒对照和在144小时处理的曲普瑞林凝胶小母猪的排卵曲线的时间几乎是相同的，不管是否未成熟(图1)或成熟(图2)，且图3中的合并图表明在144小时用曲普瑞林凝胶处理不能有效地同步排卵。因此在许多小母猪中144小时的处理时间显然在LH内源性释放后并且因此太晚了而不能诱导同步排卵。然而，有趣的是，注意到曲普瑞林凝胶后40和48小时之间，在未成熟的小母猪中144小时的处理确实提前和同步排卵(图1)，而在性成熟的小母猪中100%的小母猪经过40小时已经排卵(图2)。这些数据表明，与成熟小母猪比较，对于性未成熟的可建议不同的处理时间。
在96或120小时曲普瑞林凝胶处理确实提前且产生更多的同步排卵，与溶媒对照处理的小母猪或在144小时处理的小母猪相比。在48小时内排卵的小母猪比例和排卵的同步性对于在120小时处理的小母猪(72%)更大，与在96小时处理的小母猪(54.2%)相比(表4)。对于性成熟的小母猪(图2和表2)，在48小时内排卵差异更明显，其中对于TG 120和TG 96分别为90.0%和77.8%。这些数据表明，末次MATRIX®喂食后120小时是处理的更有效时间。
表1. 在重复1中末次喂食MATRIX®和VG或TG处理后的各种时间间隔排卵小母猪的累积百分比。
表2. 在重复2中末次喂食MATRIX®和VG或TG处理后的各种时间间隔排卵小母猪的累积百分比。
表3. 对MATRIX®后小母猪测量的响应变量的最小二乘均值，分配其在MATRIX®撤出后96小时接受VG，或在末次MATRIX®喂食后在96、120或144小时接受TG，在合并的重复1和2中。
重复在这些的每一个中都是显著的，除 MOV136 以外。
表4. 在合并的重复1和2中末次喂食MATRIX®和VG或TG处理后的各种时间间隔排卵小母猪的累积百分比。
实施例2
研究设计和处理
两百九十七(297)只小母猪以15 mg/小母猪/天的推荐率以MATRIX®作为饲料喂食14天。MATRIX®的末次喂食在5:30 AM(第0天)。将大约一百只小母猪分配至每一下列处理：
1. 第1组，对照(n=100)；MATRIX®处理，但无OvuGel™处理，发情期间每天授精，如通常实施的(每只小母猪平均授精1.9次)。
2. 第2组(n=98)；在第5天6:30 am(+/-1 hr) OvuGel™处理，如果表达发情，在第5天OvuGel™处理后2至11小时授精。所有小母猪在第6天OvuGel™处理后26小时(+/-2.5 hrs)授精一次，无论是否在发情状态。
3. 第3组(n=99)；在第5天6:30 am(+/-1 hr) OvuGel™处理，并在第5天OvuGel™处理后2.5至9.5小时授精一次，在第6天OvuGel™处理后26.5小时(+/-3 hrs)再授精一次，无论在任一天发情。
试验物质
曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)以乙酸盐形式提供，来自Bachem，Torrance，CA(Item H-4075 CGMP级)。曲普瑞林凝胶(200 mcg/2 mL)由DPT实验室(San Antonio，Texas)在由Methocel Premium A4000(Dow Chemical)和其他非活性制剂赋形剂组成的凝胶中配制。将五十四毫升的曲普瑞林凝胶(100 mcg乙酸曲普瑞林/mL)包装在具有灰色丁基药用血清瓶塞(73828A-SS)和标准铝封口(SAS20NAT)的琥珀色硼硅玻璃血清瓶(610206-50)中。
发情观察
将小母猪安置在单个围栏中。将公猪安置在至少12 m的距离且顺风。为测定发情的起始和持续期，从末次喂食MATRIX®后第4天每天观察小母猪发情直至第8天或直至证实发情结束，看哪个首先到来。为了便于检测发情，让成熟的公猪在小母猪围栏前面的通道里缓慢行走，使每只小母猪暴露于来自公猪的视觉、听觉和嗅觉信号长达5分钟。当公猪靠近小母猪围栏前面时，由有经验的人向小母猪的上腹部施加背压结合侧部摩擦来测试发情。当小母猪对背压表现僵直站立、没有发声且具有一些耳朵反射的迹象时，证实发情。
给药
用导管将单个2 mL剂量的OvuGel™置于子宫颈后大约1-2 cm，与用于人工授精的那些类似。使用连接至导管的标准多剂量施用器递送剂量。围绕导管的新的一次性护套用于每只小母猪。
统计学分析
使用SAS(版本9.2)的PROC MIX程序对数据进行方差分析以确定处理、重复以及处理与重复的相互作用对产仔率和胎仔数的主效应。用T检验，P <0.05，根据最小二乘均值估值检验处理之间的差异。
结果
将两百九十七(297)只小母猪分配为处理组(第1组：100，第2组：98，第3组：99)。一只对照小母猪在第8天完成断奶后发情状态前由于受伤从研究中排除，并因此从最终的数据集中排除。表5至8呈现所有小母猪的最小二乘均值和统计学分析。当小母猪在第5天授精时，重复之间存在时间差异。重复1的小母猪在第5天，OvuGel™处理后7.5至11小时授精。重复2中第5天授精的小母猪在OvuGel™给药后2.25至4.5小时繁殖。由于这种差异，怀孕、产仔和出生存活数据的最小二乘均值和统计学分析通过重复呈现在表9中。这些变量的任一个都没有处理与重复的相互作用(P>0.60)而仅有产仔率的重复效应的趋势(P<0.09)。原始数据和未调整的均值示于表10至13中。如表5所示，对于所有处理，在授精后30天怀孕的小母猪百分比是相同的(P>0.94)，如产仔的小母猪的百分比(P>0.79)。处理之间每窝出生的总小猪(P>0.74)和每窝出生存活的小猪(P> 0.44)无差异。小猪指数也没有处理差异(P>0.80)。表6呈现MATRIX®后表达发情的最小二乘均值。第5天(P>0.35)或第六天(P>0.15)首次表达发情的小母猪的百分比没有处理差异。
基于小母猪首次表达发情时间的怀孕率示于表7中。对照和在第5天表达发情的处理2的小母猪具有比处理3的小母猪更高的30天怀孕百分比(P<0.04)。与处理2和3的小母猪相比，在第6天表达发情的对照小母猪之间具有更高的怀孕百分比的趋势(P=0.10)。然而，当比较表达发情的所有小母猪的总怀孕率时，处理之间无差异(P>0.94)。表8显示基于它们首次表达发情时间的小母猪的产仔率。处理之间的唯一差异在第5天表达发情的小母猪。处理2的那些小母猪具有比对照或处理3的小母猪更高(P <0.03)的产仔率(分别为94.1%对76.0和66.7%)。
本研究结果表明MATRIX®和OvuGel™处理后，在固定时间授精的小母猪中产仔率和胎仔数与MATRIX®处理后检测到发情而授精的小母猪无差异。这些数据也与断奶母猪的先前试验一致，其中30至60%的不表达发情的母猪或小母猪在固定时间授精后怀孕。在第5天和第6天的授精时机与在实施例1试验中观察到的排卵数据的时间一致。
该方案在两个单独的地点进行，其具有不同的结果。第一个地点的小母猪全部表达发情至少三次，它们中有许多在开始MATRIX®前已经经历4或5个发情周期。第二个地点的小母猪在开始MATRIX®前只有一个证实的发情。在另一地点，对照小母猪的产仔率比OvuGel™处理的小母猪更高。小母猪的年龄差异可能有助于结果的差异。在第一个地点，平均30.1%的年长小母猪在MATRIX®后第5天首次表达发情。在第二个地点，仅7.4%的年幼小母猪在第5天显示发情。截至MATRIX®后第7天，只有16.2%的年长对照小母猪和2%的接受OvuGel™的年长小母猪正第一次表达发情。在第二个地点，在年幼小母猪中，仍有41.3%的对照和18.3%的OvuGel™小母猪在第7天表达第一次发情。
第一个地点的性成熟小母猪的结果表明，末次喂食MATRIX®后~120小时给予OvuGel™且随后或者在第5天有条件的授精搭配第6天固定时间授精，或者在第5天和第6天双固定时间授精，与发情检测后授精的小母猪相比，导致类似的产仔率和胎仔数。
表5. 小母猪表现。
表6. MATRIX®后的发情表达
第6天后接受OvuGel™的小母猪(处理2和3)的发情检查是不可靠的。对对照小母猪继续进行发情检查直至所有小母猪表达发情并交配(MATRIX®后9至32天)。
表7. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表8. 基于小母猪表达发情时间的产仔率
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表9. 重复的表现
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。第5天繁殖的重复1的第2组和第3组小母猪在OvuGel™处理后9.5至11小时授精。第2组和第3组的重复2小母猪在第5天OvuGel™给药后2.25至4.5小时授精。
表10.表现 – 未调节的均值
。
表11. MATRIX®后的发情表达–未调节的均值
第6天后接受OvuGel™的小母猪(处理2和3)的发情检查是不可靠的。对对照小母猪继续进行发情检查直至所有小母猪表达发情并交配(MATRIX®后9至32天)。
表12. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率– 未调节的均值
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表13. 基于小母猪表达发情时间的产仔率–未调节的均值
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
实施例3
研究设计和处理
三百一十二(312)只小母猪以15 mg/小母猪/天的推荐率以MATRIX®作为饲料喂食14天。MATRIX®的末次喂食在6:30 AM(第0天)。将一百零四只小母猪分配至每一下列处理：
1. 第1组，对照(n=104)；MATRIX®处理，但无OvuGel™处理，发情期间每天授精，如通常在现场实施的(每只小母猪平均授精1.8次)。
2. 第2组(n=104)；在第5天7:00 am(+/-1.5小时) OvuGel™处理，如果表达发情，在第5天OvuGel™处理后2至4小时授精。所有小母猪在第6天OvuGel™处理后26小时(+/-2 hrs)授精一次，无论是否在发情状态。
3. 第3组(n=104)；在第5天7:00 am(+/-1.5小时) OvuGel™处理，并在第5天OvuGel™处理后2至4小时授精一次，在第6天OvuGel™处理后26小时(+/-2 hrs)再授精一次，无论在任一天发情。
试验物质
曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)以乙酸盐形式提供，来自Bachem，Torrance，CA(Item H-4075 CGMP级)。曲普瑞林凝胶(200 mcg/2 mL)由DPT实验室(San Antonio，Texas)在由Methocel Premium A4000(Dow Chemical)和其他非活性制剂赋形剂组成的凝胶中配制。将五十四毫升的曲普瑞林凝胶(100 mcg乙酸曲普瑞林/mL)包装在具有灰色丁基药用血清瓶塞(73828A-SS)和标准铝封口(SAS20NAT)的琥珀色硼硅玻璃血清瓶(610206-50)中。
发情观察
将小母猪安置在单个围栏中。将公猪安置在至少12 m的距离且顺风。为测定发情的起始和持续期，从末次喂食MATRIX®后第4天每天观察小母猪发情直至第8天或直至证实发情结束，看哪个首先到来。为了便于检测发情，让成熟的公猪在小母猪围栏前面的通道里缓慢行走，使每只小母猪暴露于来自公猪的视觉、听觉和嗅觉信号长达5分钟。当公猪靠近小母猪围栏前面时，由有经验的人向小母猪的上腹部施加背压结合侧部摩擦来测试发情。当小母猪对背压表现僵直站立、没有发声且具有一些耳朵反射的迹象时，证实发情。
给药
用导管将单个2 mL剂量的OvuGel™置于子宫颈后大约1-2 cm，与用于人工授精的那些类似。使用连接至导管的标准多剂量施用器递送剂量。围绕导管的新的一次性护套用于每只小母猪。
统计学分析
使用SAS(版本9.2)的PROC MIX程序对数据进行方差分析以确定处理、重复、地点、处理与地点的相互作用以及处理与重复的相互作用对产仔率和胎仔数的主效应。用T检验，P <0.05，根据最小二乘均值估值检验处理之间的差异。
结果
将三百一十二(312)只小母猪分配为处理组(第1组：104，第2组：104，第3组：104)。由于这些数据是由两个不同人员在农场内的两个不同地点收集的，因此对怀孕、产仔和胎仔数数据进行地点效应和地点与处理相互作用分析。出生存活小猪数(P>0.94)、30天怀孕(P>0.77)或产仔(P>0.68)率不存在地点效应。这些变量的任一个也不存在处理与地点的相互作用(P>0.46)。因此，表14至21中呈现的数据显示两个地点的组合结果。表14至17呈现所有小母猪的最小二乘均值和统计学分析。原始数据和未调整的均值示于表18至21中。
表14中对照组(91.3%)30天怀孕的小母猪百分比高于(P<0.02)第2组或第3组(分别为76.9和82.7%)。对照小母猪相比于第2组和第3组的小母猪也具有更高的(P<0.01)产仔率(分别为90.1%、72.8%和80.8%)。各组之间每窝出生存活小猪平均数(P>0.22)和每窝出生总小猪(P>0.28)无差异。对照组(989)小母猪的小猪指数相比于第2组(773)或第3组(822)的小母猪更高(P<0.02)。
表15呈现MATRIX®后表达发情的最小二乘均值。MATRIX®后第5天和第6天表达发情的小母猪百分比的处理之间没有差异(P>0.53)，但第7天首次表达发情的对照小母猪的百分比(41.3%)高于(P<0.0001)第2组和第3组(分别为16.3和20.2%)。至MATRIX®后第8天未表达发情的OvuGel™处理的小母猪(第2组和第3组)的百分比(分别为26.0和23.1%)大于(P<0.0001)对照组(2.9%)。
基于小母猪首次表达发情时间的怀孕率示于表16中。第5天和第6天首次表达发情的小母猪的处理之间怀孕率没有差异(P>0.16)。第7天表达发情的对照小母猪的30天怀孕百分比(97.7%)大于(P<0.003)第2组小母猪(64.7%)。
表17显示基于它们首次表达发情时间的小母猪的产仔率。第7天表达发情的对照小母猪的产仔百分比(97.7%)大于(P<0.003)第2组小母猪(64.7%)。第2组和第3组中未表达发情的OvuGel™小母猪具有大约78%的产仔率(51个未表达发情中40个产仔)。
这个农场的结果表明，相比于发情期间每日授精的小母猪，末次喂食MATRIX®(第0天)后~120小时给予OvuGel™且随后或者在第5天发情依赖性条件授精搭配第6天固定时间授精，或者在第5天和第6天双固定时间授精，导致类似的胎仔数。
表14. 小母猪表现
仅包括MATRIX®后8天内繁殖的小母猪的怀孕和产仔数据。
表15. MATRIX®后的发情表达。
表16. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表17. 基于小母猪表达发情时间的产仔率
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表18.表现–未调节的均值
仅包括MATRIX®后8天内繁殖的小母猪的怀孕和产仔数据。
表19. MATRIX®后的发情表达–未调节的均值。
表20. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率–未调节的均值
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
表21. 基于小母猪表达发情时间的产仔率–未调节的均值
MATRIX®后第5天表达发情的第2组小母猪在第5天和第6天接受2次授精。所有其他第2组小母猪仅在第6天接受单次授精。所有第3组小母猪在第5天和第6天接受授精，无论何时表达发情。
实施例4
研究设计和处理
三百(300)只小母猪以15 mg/小母猪/天的推荐率以MATRIX®作为饲料喂食14天。MATRIX®的末次喂食在7:00 AM(第0天)。将一百只小母猪分配至每一下列处理：
1. 第1组，对照(n=100)；MATRIX®处理，但无OvuGel™处理，发情检测后每天授精，如通常在现场实施的(每只小母猪的授精平均数=1.9)。
2. 第2组(n=100)；在第5天8:00 am(+/-1 hr) OvuGel™处理，并在第5天OvuGel™处理后4至6小时授精，无论是否在发情状态。
3. 第3组(n=100)；在第5天8:00 am(+/-1 hr) OvuGel™处理，并在第6天OvuGel™处理后25小时(+/- 1 hr)授精，无论是否发情。
试验物质
曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)以乙酸盐形式提供，来自Bachem，Torrance，CA(Item H-4075 CGMP级)。曲普瑞林凝胶(200 mcg/2 mL)由DPT实验室(San Antonio，Texas)在由Methocel Premium A4000(Dow Chemical)和其他非活性制剂赋形剂组成的凝胶中配制。将五十四毫升的曲普瑞林凝胶(100 mcg乙酸曲普瑞林/mL)包装在具有灰色丁基药用血清瓶塞(73828A-SS)和标准铝封口(SAS20NAT)的琥珀色硼硅玻璃血清瓶(610206-50)中。
发情观察
将小母猪安置在单个围栏中。将公猪安置在至少12 m的距离且顺风。为测定发情的起始和持续期，从末次喂食MATRIX®后第4天每天观察小母猪发情直至第8天或直至证实发情结束，看哪个首先到来。为了便于检测发情，让成熟的公猪在小母猪围栏前面的通道里缓慢行走，使每只小母猪暴露于来自公猪的视觉、听觉和嗅觉信号长达5分钟。当公猪靠近小母猪围栏前面时，由有经验的人向小母猪的上腹部施加背压结合侧部摩擦来测试发情。当小母猪对背压表现僵直站立、没有发声且具有一些耳朵反射的迹象时，证实发情。
给药
用导管将单个2 mL剂量的OvuGel™置于子宫颈后大约1-2 cm，与用于人工授精的那些类似。使用连接至导管的标准多剂量施用器递送剂量。围绕导管的新的一次性护套用于每只小母猪。
统计学分析
使用SAS(版本9.2)的PROC MIX程序对数据进行方差分析以确定处理、重复以及处理与重复的相互作用对产仔率和胎仔数的主效应。用T检验，P <0.05，根据最小二乘均值估值检验处理之间的差异。
结果
将三百(300)只小母猪分配为处理组(第1组：100，第2组：100，第3组：100)。两只对照小母猪由于受伤从研究中排除并从最终的数据集中排除。表22至25呈现所有小母猪的最小二乘均值和统计学分析。原始数据和未调整的均值示于表26至29中。
如表22所示，相比于第2组(72.0%)和第3组(65.0%)的小母猪，对照小母猪(90.8%).的至MATRIX®后第8天表达发情的小母猪百分比更大(P<0.0001)。相比于对照小母猪(6.3 d)，OvuGel™小母猪(第2组和第3组)具有更短(P<0.01)的MATRIX®至发情间隔(5.9 d)。所有处理的授精后30天小母猪怀孕百分比是相同的(P>0.26)。产仔的小母猪百分比在处理之间无差异(P>0.16)，小猪指数也无差异(P>0.18)，但对照小母猪确实具有比第2组和第3组数值更高的产仔率和小猪指数(分别为76.5对67.0和64.6%，以及888对727和789)。对第3组小母猪存在具有比对照或第2组小母猪更多的每窝出生存活小猪的趋势(P<0.09)。第3组小母猪(13.5)的每窝出生的总小猪高于(P<0.05)对照(12.8)或第2组小母猪(11.9)。
表23呈现MATRIX®后发情表达的最小二乘均值。更多的第2组小母猪在第5天表达发情(P<0.05，23.0%)，但在第6天无处理差异(P>0.48)。在MATRIX®后第7天，相比于对照小母猪(P<0.002)，更少的OvuGel™小母猪(第2组和第3组)首次表达发情。第2组和第3组的至MATRIX®后第9天未表达发情的小母猪百分比大于(P<0.0001)对照(分别为24.0%、33.0%、8.2%)。
基于小母猪首次表达发情时间的怀孕率示于表24中。无论哪种处理，第5、6和7天首次表达发情的小母猪在每天内具有类似的怀孕率(P>0.73)。
表25显示基于它们首次表达发情时间的小母猪产仔率。如怀孕数据所见，那些在第5、6、或7天表达发情的小母猪无论哪种处理在每天内具有类似的产仔率。第2组和第3组中未表达发情的小母猪具有大约49%的产仔率。
结果表明，相比于发情检测后授精的小母猪，末次喂食MATRIX®后~120小时给予OvuGel™，且随后或者在第5天单次授精或者在第6天单次授精，具有类似的产仔率和胎仔数。
表22. 小母猪表现
仅包括MATRIX®后8天内繁殖的小母猪的怀孕和产仔数据。
表23. MATRIX®后的发情表达。
表24. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率
所有第2组小母猪在第5天接受授精，无论何时表达发情。
所有第3组小母猪在第6天接受授精，无论何时表达发情。
表25. 基于小母猪表达发情时间的产仔率
所有第2组小母猪在第5天接受授精，无论何时表达发情。
所有第3组小母猪在第6天接受授精，无论何时表达发情。
表26.表现 – 未调节的均值。
表27. MATRIX®后的发情表达–未调节的均值。
表28. 基于小母猪表达发情时间的怀孕率–未调节的均值
所有第2组小母猪在第5天接受授精，无论何时表达发情。
所有第3组小母猪在第6天接受授精，无论何时表达发情。
表29. 基于小母猪表达发情时间的产仔率–未调节的均值
所有第2组小母猪在第5天接受授精，无论何时表达发情。
所有第3组小母猪在第6天接受授精，无论何时表达发情。
实施例5
研究设计和处理
所有小母猪分别以15 mg/小母猪/天的推荐率以MATRIX®作为饲料喂食14或15天。小母猪从MATRIX®喂食撤出(在第0天早晨末次饲料)并分配至每一下列处理。对照为MATRIX®撤出(末次饲料)后120 (+/- 2)小时溶媒凝胶(不含曲普瑞林的溶媒凝胶)处理。其他小母猪在MATRIX®撤出后120 (+/- 2)小时给予甲基纤维素凝胶制剂中的100、200或400 mcg乙酸盐形式的曲普瑞林。四个处理为：
1. 溶媒凝胶 (VG)：不含曲普瑞林的溶媒凝胶，在MATRIX®撤出后120 (+/- 2)小时。
2. TG 100：100 mcg (2 mL 50 mcg/mL)曲普瑞林凝胶，在MATRIX®撤出后120 (+/- 2)小时。
3. TG 200：200 mcg (2 mL 100 mcg/mL)曲普瑞林凝胶，在MATRIX®撤出后120 (+/- 2)小时。
4. TG 400：400 mcg (2 mL 200 mcg/mL)曲普瑞林凝胶，在MATRIX®撤出后120 (+/- 2)小时。
试验物质
曲普瑞林(pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)以乙酸盐形式提供，来自Bachem，Torrance，CA(Item H-4075 CGMP级)。曲普瑞林凝胶(100-400 mcg/2 mL剂量)由Argenta(Auckland，NZ)在由Methocel Premium A4000(Dow Chemical)、柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)、NaCl、甲硫氨酸以及尼泊金甲酯和丙酯组成的凝胶中配制。将五十四毫升的曲普瑞林凝胶(100 mcg乙酸曲普瑞林/mL)包装在具有灰色丁基药用血清瓶塞(73828A-SS)和标准铝封口(SAS20NAT)的琥珀色硼硅玻璃血清瓶(610206-50)中。曲普瑞林凝胶溶媒含有与曲普瑞林凝胶相同的制剂赋形剂，除了它不含有曲普瑞林以外。MATRIX®以美国市售的形式提供。
发情观察
对于处理后的发情检测，将小母猪安置在单个围栏中。将公猪安置在单独的房间，和/或至少12 m的距离且顺风。为了激发发情的迹象，让成熟的公猪在小母猪箱前面的通道里缓慢行走，使每只试验小母猪暴露于来自公猪的视觉、听觉和嗅觉信号长达5分钟。保持商业农场的标准做法，当公猪靠近小母猪箱前面时，由有经验的人向小母猪的上腹部施加背压结合侧部摩擦来测试发情。当小母猪对背压表现僵直站立、没有发声且具有一些耳朵反射的迹象时，证实发情。MATRIX®撤出后前三天(第0天至第2天)期间小母猪不暴露于公猪。从第3天至第7天每天对所有小母猪进行发情检测。
排卵监测
在第5天监测排卵两次(处理后8小时和16小时)并在第6天和第7天每8小时监测排卵一次或直至证实排卵或末次MATRIX®喂食后176小时。通过经直肠超声检查监测所有小母猪的排卵状态。为此目的，使用具有7.5 MHz线阵式换能器的Aloka 500超声机，所述换能器连接至固定角度的PVC稳定杆以便于插入直肠。换能器和PVC杆涂有妇科润滑剂，并轻轻地插入直肠直至卵巢可视，一次一个。每次扫描时记录三个最大的卵泡直径(至最接近0.1 mm)。当大卵泡(≥ 6.5 mm)的数量降至少于3个时，宣布小母猪已经排卵。
血液收集和LH 分析
将导管非外科手术地插入每个处理组的小母猪亚群(溶媒凝胶，n=8；100 mcg曲普瑞林，n=6；200 mcg曲普瑞林，n=7和400 mcg曲普瑞林，n=6)的颈静脉中(Kraeling等人 1982)。在处理前一个小时、处理后立即(0)和处理后0.5、1、2、4、6、12、18、24、36和48小时，每15分钟收集十毫升血样。将血样保持在4℃直至在收集12小时内以800 x g离心15分钟。将所得血清冷冻储存直至使用猪血清的验证程序测定LH (Kesner等人，1987和Kraeling等人，1982)。分析LH峰的起始、持续时间和强度。用SAS的一般线性模型程序分析LH数据。用T检验，P <0.05，根据最小二乘均值估值检验处理之间的差异。LH峰的起始为当血清LH浓度大于或等于预处理的血清LH浓度的均值的两个标准差时。LH峰的持续时间为起始与当血清LH浓度再次小于或等于预处理的血清LH浓度的均值的两个标准差之间的时间段。LH峰的强度为LH峰期间达到的最大血清LH浓度。
给药
用导管将单个2 mL剂量的曲普瑞林凝胶或溶媒凝胶置于子宫颈后大约1-2 cm，与用于人工授精的那些类似。使用连接至导管的标准多剂量施用器递送剂量。围绕导管的新的一次性护套用于每只小母猪。
结果
在该研究中，小母猪在末次MATRIX®喂食时为171±7天的年龄和130±9 kg的体重。MATRIX®末次喂食后表达发情的小母猪百分比(97%)和MATRIX®末次喂食至发情的间隔(146±22小时)在处理之间没有不同。八只小母猪因与处理不相关的原因从最终的数据集中排除。对于测定的任一参数未检测到重复和处理之间的相互作用，因此，合并两个重复的数据。结果呈现于图4和表30-32中。
总之，94%的小母猪在实验期间内排卵。相比于溶媒凝胶(VG)，至处理后48小时或末次MATRIX®喂食后168小时曲普瑞林凝胶(TG)处理组中排卵小母猪更多(P <0.01)。末次MATRIX®喂食直至排卵的间隔不受处理影响且平均为160小时或6.7天。处理对于在末次喂食MATRIX®后经128-152小时(处理后32小时)排卵的小母猪的累积百分比没有影响。然而，处理对于在末次喂食MATRIX®后经160-176小时(处理后40-56小时)排卵的小母猪的累积百分比有显著影响。处理组中经168小时(处理后48小时)排卵的小母猪累积百分比高于溶媒凝胶组(表30)。检测到排卵的时间和小母猪百分比(所述小母猪在曲普瑞林凝胶处理后每次超声观察时排卵)呈现于表30中。在任一处理组之间，曲普瑞林凝胶处理后检测到排卵的平均小时无显著差异。相比于对照，曲普瑞林凝胶处理后经48小时排卵的小母猪的百分比大于接受曲普瑞林的小母猪，但曲普瑞林处理组之间没有差异(P> 0.05)。
结果表明，相比于溶媒，在末次喂食MATRIX®后168小时，100-400 mcg曲普瑞林之间的曲普瑞林凝胶剂量促进排卵。表明该剂量范围的曲普瑞林凝胶在小母猪中用MATRIX®同步发情周期后，对于同步排卵是有效的。
在先前的研究中，我们证实在雌激素预处理的卵巢切除小母猪中，曲普瑞林凝胶中的100 mcg曲普瑞林刺激LH释放。显示LH峰的小母猪数、LH峰的参数、检测到排卵的时间和用含有0、100、200或400 mcg乙酸曲普瑞林的曲普瑞林凝胶处理后经48小时排卵的小母猪的百分比呈现于表31中。处理组之间的LH峰的平均起始、到最大血清LH浓度的时间或LH峰的强度没有显著差异。然而，0 mcg组的LH峰的持续时间大于(P = 0.04)经处理的小母猪。大体上，LH峰的这些参数类似于我们以前研究的那些，其中在雌激素预处理的卵巢切除小母猪中，曲普瑞林凝胶中的曲普瑞林阴道内给药刺激LH激增释放(surge release)。当检测来自单个小母猪的数据时，显示在血液采样期间未显示LH峰的那些小母猪，或在曲普瑞林凝胶处理时完成LH峰或在曲普瑞林凝胶处理前可能已经有LH峰。尽管统计学分析没有揭示在处理组之间LH峰的起始、到最大血清LH浓度的时间或LH峰的强度的显著差异，但这些参数的所有三个均值表明曲普瑞林处理的小母猪的LH峰早于0 mcg对照小母猪发生。此外，LH峰的强度似乎遵循剂量响应模式。与表30中所呈现的所有小母猪的数据类似，接受曲普瑞林的小母猪的曲普瑞林凝胶处理后经48小时排卵的小母猪的百分比大于对照。
总的来说，曲普瑞林凝胶处理对自末次MATRIX®喂食的排卵同步性具有有益效果。结果也表明，相比于末次喂食MATRIX®后168小时的溶媒，末次喂食MATRIX®后120小时给予100-400 mcg曲普瑞林之间的曲普瑞林凝胶剂量促进排卵，表明该剂量范围的曲普瑞林凝胶在小母猪中用MATRIX®同步发情周期后，对于同步排卵是有效的。血清LH数据与这些结论一致。
表30. 对MATRIX®后小母猪测量的响应变量的最小二乘均值，分配其在MATRIX®撤出后120小时接受溶媒、100、200或400 mcg曲普瑞林凝胶(TG)形式的曲普瑞林。
Matrix 至发情间隔、 Matrix 至 OV 间隔、 MOV 144 和 MOV 152 的重复是显著的。
表31. 显示LH峰的小母猪数、LH峰的参数、检测到排卵的时间(小时)和用含有0、100、200或400 mcg曲普瑞林的曲普瑞林处理后经48小时排卵的小母猪的百分比。
* 最小二乘均值±SE。
表32. 对MATRIX®后小母猪检测的响应变量的原始平均数，分配其在MATRIX®撤出后120小时接受溶媒(V)、100、200或400 mcg曲普瑞林(T)(包括PTK1-07的重复3)。
。
实施例6
含有曲普瑞林的组合物的制备
在混合下将尼泊金甲酯钠盐和尼泊金丙酯钠盐加入到纯净水中并继续混合5-10分钟。然后加入氯化钠USP并再混合10-15分钟，随后加入L-甲硫氨酸并混合10-15分钟。然后还加入柠檬酸钠USP并再混合10-20分钟。
在单独的混合器中，将柠檬酸加入到纯净水中并混合5-10分钟，然后加入乙酸曲普瑞林，然后继续混合10-20分钟。然后将含有尼泊金酯的组合物加入到含有曲普瑞林的组合物中并混合10-15分钟。然后缓慢加入甲基纤维素以避免凝集并再继续混合30-60分钟。然后检查混合物的pH并在必要时加入纯净水中的柠檬酸以调节组合物的pH。
实施例7
实施例制剂
用于本申请所述的组合物的实施例制剂示于表33和表34中。
表 33
。
表 34.
*标称量
**经测试至药典标准(compendial standard)。

Claims (20)

1. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；和
使所述小母猪授精，而不监测发情，仅在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天监测一次。
2.根据权利要求1的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
3.根据权利要求2的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求2的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
4.根据权利要求1的方法，其中所述授精为人工授精。
5.根据权利要求1的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
6. 根据权利要求1的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
7.权利要求1的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
8.一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天监测发情，如果小母猪处于发情中，则在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天使小母猪授精，其中以与给予所述促性腺激素释放激素组合的方式使小母猪授精；和
如果在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天小母猪处于发情中或不处于发情中，在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪授精，其中在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天不监测发情。
9.根据权利要求8的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
10.根据权利要求9的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求9的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
11.根据权利要求8的方法，其中所述授精为人工授精。
12.根据权利要求8的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
13. 根据权利要求8的方法，其中所述剂量的促性腺激素释放激素使用选自以下的方法给药：使用放置导管、手工给药和注射。
14.权利要求8的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
15. 一种用于同步小母猪的授精时间的方法，所述方法包括步骤：
向小母猪给予用于同步发情的激素；
向小母猪给予单剂量的用于同步排卵的促性腺激素释放激素，而不给予任何其他用于同步排卵的激素，其中在向小母猪最后一次每日给予用于同步发情的激素后第五天给予所述促性腺激素释放激素；
在给予所述促性腺激素释放激素后约2至约7小时使小母猪第一次授精；和
在最后一次每日给予用于同步发情的激素后第六天使小母猪第二次授精，其中所述第一次和第二次授精在不监测发情的情况下完成。
16.根据权利要求15的方法，其中所述促性腺激素释放激素具有式
或其溶剂合物、水合物或药学上可接受的盐，其中
R1和R2在每种情况下独立地为氢，或独立地选自烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、卤代烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基烷基，其各自任选被取代，或R1和R2与连接的碳形成碳环或杂环；
R5为氢或烷基；和
X为氢，或X选自烷基、环烷基、杂烷基、任选取代的亚烷基-甲酰胺和HNC(O)NR3R4，其中R3和R4在每种情况下独立地选自氢、烷基、杂烷基和卤代烷基。
17.根据权利要求16的方法，其中所述促性腺激素释放激素选自权利要求81的式的化合物，其中
a) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
b) R1为氢，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
c) R1为1H-1-苄基-咪唑-4-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
d) R1为2-甲基丙基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
e) R1为2-萘基甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；和R5为氢；
f) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为乙基；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
g) R1为苄基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
h) R1为叔丁氧基甲基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；
i) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；和R5为氢；
j) R1为甲基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
k) R1为1H-吲哚-3-基-甲基，R2为氢，X为乙基；R5为甲基；和R1连接的碳的构型为R；
l) R1为甲基，R2为氢，X为CH2(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
m) R1为4-氨基丁基，R2为氢，X为HN(CO)NH2；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R；
n) R1为甲基，R2为甲基，X为HN(CO)NH2；和R5为氢；和
o) R1为乙基，R2为氢，X为氢；R5为氢；和R1连接的碳的构型为R。
18.根据权利要求15的方法，其中所述授精为人工授精。
19.根据权利要求15的方法，其中所述促性腺激素释放激素以有效量给药并且所述促性腺激素释放激素的有效量为约200 µg。
20.权利要求15的方法，其中所述促性腺激素释放激素为曲普瑞林。
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