CN104988231B - 一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重pcr法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及食药检测技术领域，具体涉及一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重PCR法，用于鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。包括：首先采用液氮研磨改良的SDS法从阿胶中提取高质量的DNA，然后设计通用引物P1和P2进行第一轮扩增，将扩增产物作为第二轮PCR的模板；再使用包含通用引物P1和4种物种(驴、马、猪和牛)特异性引物A、B、C和D的混合引物进行第二轮多重PCR扩增，电泳检测第二轮扩增产物，根据电泳条带的大小，判断阿胶中是否掺假。本发明技术方案能够在保证检测特异性的前提下，提高现有以PCR技术为基础的阿胶真伪检测方法的检测灵敏度，同时缩短检测时间。

Description

一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重PCR法
技术领域
本发明涉及食药检测技术领域，具体涉及一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重PCR法，用于鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。
背景技术
阿胶在中国有数千年的食用历史，具有补血止血，滋阴润肺的功效。它是驴皮熬制后形成的一种特殊中药材，主要成分为胶原蛋白。纯正的阿胶必需来自百分百的驴皮，方能保证产品的营养功效。由于阿胶功效独特，供不应求，多地均出现假冒伪劣产品。这些劣质胶多采用猪、牛、马等动物皮、骨、结缔组织熬制，用肉眼难以鉴别，常规的鉴别方法也难以区分，临床使用后不仅达不到治疗效果，反而会出现中毒现象。
2002卫生部发布的《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》，规定了阿胶被列为既是食品又是药品。阿胶在《中国药典2010》有相关质量规定：以驴皮熬制的胶为阿胶正品。但作为食品和保健品，目前还没有国家标准，造成了目前阿胶的监管不明朗，同时也为阿胶造假提供了较大的空间。这些伪品的存在严重干扰了市场正常秩序，损害消费者利益，影响正规产品的信誉。为了取缔和预防假冒伪劣阿胶产品，除了需要质量监管部门加大执法力度，首要前提就是要具备科学可靠的检测方法。
中国专利(CN201510018058.3)公开了鉴别阿胶中多种动物源性的引物探针组合物、试剂盒及多重实时荧光定量PCR检测方法，检测特异性不佳，检测灵敏度以及检测时间均不能满足期望。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种能同时鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分的方法，能够在保证检测特异性的前提下，提高现有以PCR技术为基础的阿胶真伪检测方法的检测灵敏度，实现同时检测多种动物源性成分，缩短了检测时间。
本发明的技术方案是一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重PCR法，包括如下步骤：
(1)采用液氮研磨法处理阿胶样品，再用改良的SDS法提取DNA，备用；
(2)根据物种线粒体DNA序列设计通用引物正向引物P1和反向引物P2，然后以步骤(1)中制备的DNA为模板进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；
(3)以步骤(2)中PCR扩增产物为模板，用正向通用引物P1和特异反向引物A、B、C、D进行第二轮多重PCR扩增；
(4)将(3)中PCR产物电泳，根据电泳条带大小判断阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。
进一步的，所述步骤(2)正向引物P1核苷酸序列为5’-CCMTCAAACATYTCATCATG-3’，反向引物P2核苷酸序列为5’-CTGGGTCTCCMAGMAGGTC-3’。
进一步的，所述步骤(3)中第二轮多重PCR的引物核苷酸序列分别如下：
驴特异反向引物A：5’-TTTCACAGTAATAGCCACAGCAT-3’；
马特异反向引物B：5’-TCATCACAGCCCTGGTAGTCGTA-3’；
猪特异反向引物C：5’-GCCTTCCACTTTATCCTGCCATTC-3’；
牛特异反向引物D：5’-AGGCGGATTCTCAGTAGACAAAGC-3’。
进一步的，所述步骤(2)中第一轮PCR条件为：引物P1和P2浓度为1μM，比例为1∶1，退火温度50℃，反应循环数25，延伸时间7min。
进一步的，所述步骤(3)中第二轮PCR条件为：引物P1、A、B、C和D浓度为1μM，比例为4∶1∶1∶1∶1，退火温度48℃，反应循环数30，延伸时间10min。
本发明的检测方法流程如下：
1.4种动物(驴、马、猪和牛)皮和阿胶DNA的提取
(1)称取适量(0.2g)的样品，放入用液氮预冷的研钵中，然后缓缓地向研钵中加入液氮，迅速研磨，直到样品成细微的粉末状，置于1.5ml离心管中；
(2)向处理过的样品中加入600μL预冷的TE裂解液，然后再加入60μL的10％SDS溶液和10μL的蛋白酶K，55℃放置3-12h；
(3)将上述消化液降至室温，加入无DNA酶的RNA酶10μL，37℃放置0.5-1h；
(4)将样品放置冷却至室温，然后加入200μL的醋酸钾溶液，在振荡器上剧烈振荡20s，使其充分混合。4℃下12000r/min离心5min；
(5)小心将上清液转移到另一个1.5ml离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1，v/v)溶液，充分混合后，12000r/min离心5min，多次重复此操作步骤，直到两相中间不能看到明显的变性蛋白质为止；
(6)取上清液，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀后12000r/min离心5min，弃上清液，加入1mL 70％的乙醇溶液，颠倒离心管数次，12000r/min离心5min。小心吸去上清液，空气中干燥DNA沉淀15min；
(7)将DNA溶解于30μL TE(pH7.6)或者超纯水中，-20℃保存备用。
2.根据驴、马、猪、牛4个物种线粒体同源序列设计半巢式-多重PCR的引物序列。
本发明使用的引物包括第一轮PCR所使用的正向通用引物P1和反向通用引物P2，第二轮多重PCR使用的正向引物仍为P1，反向引物为A(驴)、B(马)、C(猪)和D(牛)。引物P1和P2进行第一轮PCR反应，可以同时扩增出4个目标物种691bp的同源序列作为第二轮多重PCR的模板。引物序列见表1。
表1引物序列
引物名称 作用 序列(5’--3’)
P1 第一轮PCR正向通用引物 CCMTCAAACATYTCATCATG
P2 第一轮PCR反向通用引物 CTGGGTCTCCMAGMAGGTC
A 第二轮多重PCR驴特异性引物 TTTCACAGTAATAGCCACAGCAT
B 第二轮多重PCR马特异性引物 TCATCACAGCCCTGGTAGTCGTA
C 第二轮多重PCR猪特异性引物 GCCTTCCACTTTATCCTGCCATTC
D 第二轮多重PCR牛特异性引物 AGGCGGATTCTCAGTAGACAAAGC
3.PCR反应条件：引物浓度、多重PCR引物配比、退火温度、反应循环数、延伸时间。
(1)引物浓度：引物P1、P2、A、B、C、D浓度均为1μM
(2)多重PCR引物配比：P1∶A∶B∶C∶D＝4∶1∶1∶1∶1
(3)PCR反应条件见表2
表2PCR反应条件
退火温度 反应循环数 延伸时间
第一轮PCR 50C 25 7min
第二轮PCR 48C 30 10min
4.根据电泳条带大小判断阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。
本发明的有益效果是：
(1)本发明能同时鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分，同时为其他动物源成分的检测提供借鉴。
(2)本发明能够在保证检测特异性的前提下，提高现有以PCR技术为基础的阿胶真伪检测方法的检测灵敏度，实现同时检测多种动物源性成分，缩短了检测时间。
附图说明
图1：动物皮基因组提取电泳图；
图2：纯正阿胶基因组提取电泳图；
图3：半巢式-多重PCR结果电泳图。
图中，1-从驴皮中提取的基因组DNA；2-从马皮中提取的基因组DNA；3-从猪皮中提取的基因组DNA；4-从牛皮中提取的基因组DNA；5，6，7-阿胶DNA平行样；8-Maker标记；9-1号管中DNA多重PCR扩增结果；10-2号管中DNA多重PCR扩增结果；11-3号管中DNA多重PCR扩增结果；12-4号管中DNA多重PCR扩增结果；-5号管中DNA多重PCR扩增结果。
具体实施方式
下面通过实施例详细叙述本发明的技术内容。本领域技术人员应当理解，下述实施例均用于对本发明所要求保护的范围进行实例性的描述，以此概括本发明的各参数的相对范围，因此不能将之理解为对本发明的一种限制。
实施例1：
1.材料与试剂
液氮、研钵、1.5mlEP离心管、TE裂解液、10％SDS溶液、蛋白酶K、RNA酶、醋酸钾溶液、酚∶氯仿∶异戊醇、异丙醇、乙醇、引物、PCR酶、PCR Buffer
2.主要仪器与设备
PCR仪：杭州博日科技有限公司；凝胶电泳系统：北京六一机械厂；凝胶成像系统：美国Alpha。
3、检测方法
(1)4种动物(驴、马、猪和牛)皮和阿胶DNA的提取
依次称取0.2g 4种动物(驴、马、猪和牛)皮和阿胶，分别放入用液氮预冷的研钵中，然后缓缓的向研钵中加入液氮，迅速研磨，直到样品成细微的粉末，置于1.5ml离心管中；向处理过的样品中加入600μL预冷的TE裂解液，然后再加入加60μL的10％SDS溶液和10μL的蛋白酶K，55℃放置3h；将上述消化液降至室温，加入无DNA酶的RNA酶10μL，37℃放置0.5h；将样品放置冷却至室温，然后加入200μL的醋酸钾溶液，在振荡器上剧烈振荡20s，使其充分混合。4℃下12000r/min离心5min；小心将上清液转移到另一个1.5ml离心管中，加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1，v/v)溶液，充分混合后，12000r/min离心5min，多次重复此操作步骤，直到两相中间不能看到明显的变性蛋白质为止；取上清液，加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀后12000r/min离心5min，弃上清液，加入1mL 70％的乙醇，颠倒离心管数次，12000r/min离心5min。小心吸去上清液，空气中干燥DNA沉淀15min。将DNA溶解于30μLTE(pH7.6)中，待溶解完全后取1μLDNA进行琼脂糖凝胶电泳(采用6％的琼脂糖凝胶)，验证合格后(见附图1和2)将DNA-20℃保存备用。
(2)将正品阿胶D N A分为三等份，分别编为1号管、2号管、3号管，向1号管加入提取的牛DNA，向2号管加入提取的马DNA，3号管不添加外源DNA，仅含阿胶DNA；另设4号管和5号管，均不含阿胶DNA，分别加入牛和马DNA、猪和牛DNA后，进行PCR鉴别。
(3)半巢式-多重PCR鉴定阿胶真伪
分别从步骤(2)所得1-5号管中取1μL DNA，1μM引物P1和P2各1μL，Taq酶0.5μL，10×Loading Buffer 1μL，ddH205.5μL构建成10μL反应体系进行第一轮PCR反应，再取1μL反应产物作为模板，使用P1、A、B、C、D混合引物构建10μL反应体第二轮多重PCR反应，取2μL产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果见附图3，可以看出，除3号管为纯正阿胶DNA，1号管中含有驴和牛两种DNA成分，2号管中含有驴和马两种DNA成分，4号管中含有牛和马两种DNA成分，5号管中含有猪和牛两种DNA成分。

Claims (3)

1.一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重PCR法，其特征在于由如下步骤组成：
(1)采用液氮研磨法处理阿胶样品，再用SDS法提取DNA，备用；
(2)根据物种线粒体DNA序列设计通用引物正向引物P1和反向引物P2，然后以步骤(1)中制备的DNA为模板进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；
(3)以步骤(2)中PCR扩增产物为模板，用正向通用引物P1和特异反向引物A、B、C、D进行第二轮多重PCR扩增；
(4)将(3)中PCR产物电泳，根据电泳条带大小判断阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分；
所述步骤(2)正向引物P1核苷酸序列为5’-CCMTCAAACATYTCATCATG-3’，反向引物P2核苷酸序列为5’-CTGGGTCTCCMAGMAGGTC-3’；
所述步骤(3)中第二轮多重PCR的引物核苷酸序列分别如下：
驴特异反向引物A：5’-TTTCACAGTAATAGCCACAGCAT-3’；
马特异反向引物B：5’-TCATCACAGCCCTGGTAGTCGTA-3’；
猪特异反向引物C：5’-GCCTTCCACTTTATCCTGCCATTC-3’；
牛特异反向引物D：5’-AGGCGGATTCTCAGTAGACAAAGC-3’。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中第一轮PCR条件为：引物P1和P2浓度为1μM，比例为1:1，退火温度50℃，反应循环数25，延伸时间7min。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中第二轮PCR条件为：引物P1、A、B、C和D浓度为1μM，比例为4:1:1:1:1，退火温度48℃，反应循环数30，延伸时间10min。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105586420B (zh) * 2016-01-29 2020-08-28 湖南省药品检验研究院 一种鉴定阿胶原料中驴源性成分的特异引物对及其方法
CN105837676B (zh) * 2016-03-18 2020-07-31 青岛海关技术中心 一组鉴别阿胶及其制品中牛源性成分的多肽
CN105734156A (zh) * 2016-04-28 2016-07-06 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种阿胶中驴、猪源性巢式荧光pcr检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法与应用
CN105755145A (zh) * 2016-04-28 2016-07-13 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种阿胶中驴、牛源性巢式荧光pcr检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法与应用
CN110129315A (zh) * 2019-05-30 2019-08-16 北华大学 一种从阿胶中快速提取dna的优化方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101265500A (zh) * 2008-02-29 2008-09-17 华东理工大学 源自真核生物的中药及中药材的pcr鉴定方法
CN102776289A (zh) * 2012-08-09 2012-11-14 南京市产品质量监督检验院 一种同时鉴别食品中猪牛羊鸡四种成分的试剂盒及应用
CN104046616A (zh) * 2014-07-06 2014-09-17 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种从阿胶中快速提取dna的试剂盒及其提取方法
CN104531884A (zh) * 2015-01-14 2015-04-22 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别阿胶中多种动物源性的引物探针组合物、试剂盒及多重实时荧光定量pcr检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101265500A (zh) * 2008-02-29 2008-09-17 华东理工大学 源自真核生物的中药及中药材的pcr鉴定方法
CN102776289A (zh) * 2012-08-09 2012-11-14 南京市产品质量监督检验院 一种同时鉴别食品中猪牛羊鸡四种成分的试剂盒及应用
CN104046616A (zh) * 2014-07-06 2014-09-17 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种从阿胶中快速提取dna的试剂盒及其提取方法
CN104531884A (zh) * 2015-01-14 2015-04-22 山东省农业科学院生物技术研究中心 鉴别阿胶中多种动物源性的引物探针组合物、试剂盒及多重实时荧光定量pcr检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
细胞色素B基因PCR-RFLP鉴定阿胶原料;汪小龙 等;《中国海洋大学学报》;20060731;第36卷(第4期);645-648 *
阿胶的半巢式-多重PCR鉴别方法研究;张慧 等;《食品研究与开发》;20160930;第37卷(第17期);103-106 *

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