CN104982389A - 一种筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法 - Google Patents
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Abstract
一种筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法。首先取某地野生卤虫卵孵化的无节幼体，分别隔离养殖在超生态范围的长和短光照周期中进行培养，并分别计算两种光周期条件下以卵胎生模式繁殖的个体比例进行单因素方差分析，若PA<0.05则为光周期敏感性强的卤虫；再对上述卤虫种群所产无节幼体—子代卤虫，以同样的方法获得PB值，若PA<0.05且PB<0.01，即判定是光周期敏感性极强的卤虫种群，若PA<0.05且PB<0.05，即判定为光周期敏感性强的卤虫种群。利用本发明筛选出的卤虫种群作为养殖种源，通过调控繁殖模式解决了卤虫养殖户的生产困境，增加至少25％的经济收入，而且可大大提高卤虫杂交育种的速度。
Description
技术领域
本发明涉及水产经济动物种质筛选研究领域，特别是涉及一种筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法。
背景技术
卤虫是一类重要的水产经济甲壳动物，其休眠卵因易于贮藏和运输，且孵化的无节幼体和成体卤虫用于水产苗种的开口饵料操作简单方便，其优良的营养价值和较高的经济价值而被誉为“软黄金”。近年来随着水产养殖业的快速发展提升了对卤虫卵的需求，在天然捕捞卤虫卵市场价格居高不下的刺激下，许多内陆和沿海的养殖户尝试对卤虫开展人工增养殖以获取收益。但由于缺乏人工良种,且养殖过程中不能有效的控制卤虫的繁殖模式(卤虫具有两种繁殖模式,分别是卵生模式：母体产休眠卵；卵胎生模式：母体产无节幼体)，在水产动物苗种(如高档鱼、虾、蟹、海蜇等)培育期本希望获得更多的无节幼体或成体，养殖的卤虫却往往产休眠卵；而在非苗种培育季节，养殖户却往往收获的是大量无节幼体及其长成的卤虫成体，由于加工、运输和使用的不便，卤虫成体销售困难，因此经济价值大打折扣。近年来研究发现光照周期是影响卤虫繁殖方式比较重要的因素之一，因此筛选光周期敏感型的卤虫种群作为养殖种源将有利于通过控制光周期(延长或缩短)实现卤虫的繁殖模式光控化养殖，另外也可以在杂交育种中作为亲本之一用于培育同时具有光周期敏感性和其他经济性状的杂交良种。
在本世纪初全球共发现卤虫分布点600多个，而中国分布点也接近300个，从如此众多的卤虫种群中准确筛选出光周期敏感型卤虫任务艰巨,显然建立光周期敏感性卤虫的筛选方法，并以此判定出光周期敏感型卤虫用于卤虫的繁殖模式光控化养殖产业，和杂交育种将具有重要的经济意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法，为实现卤虫的繁殖模式光控化人工养殖以及卤虫杂交育种提供重要的技术支持，以弥补现有技术的不足。
本发明的光周期敏感型包括两种：光周期敏感性强和光周期敏感性极强的卤虫种群。
本发明的步骤如下：
第一步，首先取野生卤虫休眠卵孵化的卤虫无节幼体各100只，分别隔离养殖在超生态范围的长光照周期和短光照周期中进行培养，即为长光照周期L16-18:D8-6和为短光照周期L8-6：D16-18；且两种光照周期下，光照期间光强均为1000-2000Lux，黑暗期间光照强度低于10Lux，两种养殖水体的盐度和温度相同即盐度70-110ppt、温度20-25℃，按照常规的饲喂方法养殖，养殖至卤虫性成熟并开始繁殖，按照实验生态学操作规范,各组均设置3个生物学重复试验。
第二步，然后统计两种光照周期下各组中所有参与繁殖的成体卤虫第一胎的繁殖类型---卵胎生模式或者卵生模式，并分别计算两种光照周期养殖条件下卵胎生模式的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例A，分别记作A1,A2；对A1,A2进行单因素方差分析，如果PA>0.05,则光周期敏感性弱，判定为非光周期敏感型卤虫；如果PA<0.05，则为光周期敏感性强的卤虫种群。
对上述筛选出光周期敏感性强的卤虫种群,为了满足筛选目的的差异化需求，进一步筛选的步骤如下：
首先取上述PA<0.05光周期敏感性强的卤虫种群，并将养殖在L16-18:D8-6光照周期条件下获得的无节幼体(子代卤虫)，再分成2组，每组100只，同样设置三组生物学重复试验,并分别养殖在上述长、短两种光照周期的养殖条件下，至性成熟并开始繁殖；
然后记录上述子代卤虫成熟后第一胎的繁殖类型，分别统计两种光照周期下卵胎生模式繁殖的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例B，记作B1,B2；对B1,B2进行单因素方差分析，如果PB<0.01，则子代卤虫光周期敏感性极强；如果PB<0.05，则子代卤虫光周期敏感性强；如果PB>0.05,在子代卤虫光周期敏感性弱，仍判定为非光周期敏感型卤虫。
上述的PA<0.05且PB<0.01的卤虫种群是光周期敏感性极强的种群，作为亲本之一应用于卤虫杂交育种和作为养殖种源应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
上述的PA<0.05且PB<0.05的卤虫种群，即光周期敏感性强的种群，作为养殖种源，应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
显然，本发明首先选择了野生卤虫作为筛选对象，依据卤虫的繁殖特性提供了用于准确地筛选光周期敏感型这种具有经济价值的卤虫种质资源的方法,即为养殖户和水产科技人员选择繁殖模式光控化人工养殖种源提供了便捷的方法,通过选用该方法快速筛选的卤虫作为养殖种源，可以达到人为控制卤虫的繁殖模式，实现在水产经济动物育苗季节，调控卤虫以卵胎生模式繁殖，使得卤虫养殖池塘多出产无节幼体和成体，满足当季水产经济动物苗种饵料需求，增加经济收入；而在非水产经济动物育苗季节，控制卤虫以卵生方式繁殖，解决了卤虫养殖户在该季节销售成体卤虫的困难，比传统的养殖方式经济收入至少提高25％；同时筛选出获得的光周期极敏感型的卤虫种群有利于卤虫育种科技人员提高卤虫杂交育种的速度,为卤虫养殖的产业化发展提供技术支持。
具体实施方式
首先取某产地野生卤虫卵孵化的卤虫无节幼体各100只，分别隔离养殖在超生态范围的长光照周期和短光照周期中进行培养(由于不同产地的卤虫临界光照周期可能有所差异，为了保证本发明的广泛适用性，本发明采用了超生态范围的光照周期，所谓超生态范围光照周期是指超过地球上自然光周期范围的光照周期，如长光照周期为L16-18:D8-6，即光照时长16-18小时，相对应的黑暗时长8-6小时；短光照周期为L8-6：D16-18，即光照时长8-6小时，黑暗时长16-18小时)，即为长光照周期L16-18:D8-6和为短光照周期L8-6：D16-18；两种光照周期下光照期间光强均为1000-2000Lux，黑暗期间光照强度低于10Lux，且两种养殖水体的盐度和温度相同，即盐度70-110ppt、温度20-25℃，按照常规的饲喂方法养殖，养殖25-30天至卤虫性成熟并开始繁殖，按照实验生态学操作规范,各组均设置3个生物学重复试验；
然后统计两种光照周期下各组中所有参与繁殖的成体卤虫第一胎的繁殖类型---卵胎生模式或者卵生模式(由于前人研究证实卤虫各胎次间繁殖模式无显著差异，因此只统计第一胎次即可以代表所有胎次的情况)，并分别计算两种光照周期养殖条件下卵胎生模式的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例A，分别记作A1,A2；对A1,A2进行单因素方差分析，如果PA>0.05,则光周期敏感性弱，判定为非光周期敏感型卤虫；如果PA<0.05，则筛选获得光周期敏感性强的卤虫种群。
为了满足筛选目的的差异化需求,进一步子代筛选的步骤如下：首先取上述PA<0.05的卤虫种群，将该种群在前述筛选中养殖在L16-18:D8-6光照周期条件下获得的无节幼体(子代卤虫)作为进一步筛选的对象，分成2组，各100只，分别养殖在长、短两种光照周期的养殖条件下，25-30天后至性成熟并开始繁殖，同样设置三组生物学重复；
然后记录上述子代卤虫成熟后第一胎的繁殖类型，分别统计两种光照周期下卵胎生模式繁殖的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例，记作B1,B2；对B1,B2进行单因素方差分析，如果PB<0.01，则该子代卤虫光周期敏感性极强；如果PB<0.05，则子代卤虫光周期敏感性强；PB>0.05,则子代卤虫光周期敏感性弱，仍判定为非光周期敏感型；
根据野生卤虫卵和子代卤虫的筛选结果，能够得到如下结论：
如果PA<0.05且PB<0.01，该卤虫种群光周期敏感性极强，判定为光周期极敏感型卤虫。可以作为亲本之一用于杂交育种和作为养殖种源应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
如果PA<0.05且PB<0.05，该卤虫种群光周期敏感性强，判定为光周期敏感型卤虫。可以作为养殖种源应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
如果PB>0.05或PB>0.05，均判定为光周期不敏感型卤虫或非光周期敏感型卤虫。
本发明通过如下2个实施例来详细说明具体的操作方法或步骤，分别判定出一个光周期极敏感型卤虫种群和一个光周期不敏感型的卤虫种群。
实施例1
本实施例选用了取自中国尕海湖卤虫卵用于筛选和判定其是否是光周期敏感型卤虫。
首先利用常规方法孵化该卤虫卵，孵化完成后取无节幼体各100只，分别隔离养殖(本例养殖在50mL离心管中)在光照周期L18:D6和L6:D18，盐度70ppt、温度25℃的水体中(光照周期和温度由光照培养箱调控实现)，按照常规的饲喂方法养殖25天，卤虫性成熟并开始繁殖,按照实验生态学操作规范，各组均设三个重复组。
然后在上述两种光照周期养殖条件下，统计所有参与繁殖的成体卤虫第一胎的繁殖类型，并计算卵胎生模式的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例A，经单因素方差分析检验PA<0.05，具体结果见表1。
表1两种光照周期养殖条件下繁殖模式的实验结果
确定该种群为光周期敏感性卤虫种群的基础上，进行进一步筛选步骤如下：首先取L18:D6光照周期养殖条件下雌性个体卵胎生繁殖获得的无节幼体(子代卤虫)再次分成2组，各100只，分别隔离养殖在与前述相同的两种长、短光照周期条件下，约25天后达到性成熟并开始繁殖，同第一步相同设置三个重复。
然后统计子代卤虫在两种光照周期养殖条件下，卵胎生模式繁殖的雌性个体占所有参与繁殖的雌性的比例B。经单因素方差分析检验PB<0.01，具体结果见表2。
由于本种群PA<0.05且PB<0.01，因此该种群是光周期敏感性极强的种群。可以作为亲本之一用于杂交育种，当然也可以用于养殖种源开展繁殖模式光控化人工养殖的种源。
表2两种光照周期养殖条件下繁殖模式的实验结果
实施例2
本实施例是选用了来自中国阿其库勒湖的卤虫卵用于筛选和判定其是否是光周期敏感型卤虫。
首先利用常规方法孵化该种群卤虫卵，孵化完成后取无节幼体各100只，分别隔离养殖(本例养殖在50mL离心管中)在光照周期L18:D6和L6:D18，盐度70ppt、温度25℃的水体中(光照周期和温度由光照培养箱调控实现)，按照常规的饲喂方法养殖30天，卤虫性成熟并开始繁殖，按照实验生态学操作规范，各组均设三个重复组。
然后在两种长、短光照周期养殖条件下，统计所有参与繁殖的成体卤虫第一胎的繁殖类型，计算卵胎生模式的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例A，具体结果见表3，经单因素方差分析检验PA>0.05，阿其库勒湖的卤虫光周期敏感性弱，判定为非光周期敏感型卤虫，因此不能应用于繁殖模式光控化人工养殖的种源。
表3两种光照周期养殖条件下繁殖模式的实验结果
显然，本发明依据卤虫的繁殖特性提供了用于准确地筛选光周期敏感型这种具有经济价值的卤虫种质资源的方法,通过该方法快速筛选的卤虫种群可以作为养殖种源，解决了卤虫养殖户的生产困境、增加经济收入，也可以提高卤虫育种科技人员杂交育种的速度,将为卤虫养殖的产业化发展提供重要的技术支持。
Claims (4)
1.一种筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法，其特征是步骤如下：
第一步，首先取野生卤虫卵孵化的卤虫无节幼体各100只，分别隔离养殖在超生态范围的长光照周期和短光照周期中进行培养，即为长光照周期L16-18:D8-6和为短光照周期L8-6：D16-18；且两种光照周期下，光照期间光强均为1000-2000Lux，黑暗期间光照强度低于10Lux，两种养殖水体的盐度和温度相同即盐度70-110 ppt、温度20-25℃，按照常规的饲喂方法养殖，养殖至卤虫性成熟并开始繁殖，按照实验生态学操作规范,各组均设置3个生物学重复试验；
第二步，然后统计两种光照周期下各组中所有参与繁殖的成体卤虫第一胎的繁殖类型---卵胎生模式或者卵生模式，并分别计算两种光周期养殖条件下卵胎生模式的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例A，分别记作A1,A2；对A1,A2进行单因素方差分析，如果PA>0.05,则光周期敏感性弱，判定为非光周期敏感型卤虫；如果PA<0.05，则为光周期敏感性强的卤虫。
2.如权利要求1所述的筛选和判定光周期敏感型卤虫种群的方法，其特征是对上述筛选出光周期敏感性强的卤虫,为了满足筛选目的的差异化需求进一步筛选的步骤如下：
首先取上述PA<0.05光周期敏感性强的卤虫种群，并将其养殖在L16-18:D8-6光照周期条件下获得的无节幼体—子代卤虫，再分成2组，每组100只，同样设置三组生物学重复试验,并分别养殖在上述长、短两种光照周期的养殖条件下，至性成熟并开始繁殖；
然后记录上述子代卤虫成熟后第一胎的繁殖类型，分别统计两种光周期下卵胎生模式繁殖的雌性个体占所有参与繁殖的雌性个体的比例B，记作B1,B2；对B1,B2进行单因素方差分析，如果PB<0.01，则子代卤虫光周期敏感性极强；如果PB<0.05，则子代卤虫光周期敏感性强；如果PB>0.05,在子代卤虫光周期敏感性弱，仍判定为非光周期敏感型卤虫。
3.权利要求2中的PA<0.05且PB<0.01的卤虫种群是光周期敏感性极强的卤虫种群，作为亲本之一应用于卤虫杂交育种和作为养殖种源，应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
4.权利要求2中的PA<0.05且PB<0.05的卤虫种群，即光周期敏感性强的种群，作为养殖种源，应用于卤虫繁殖模式的光控化人工养殖。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151021 |