CN104975002A - 微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法，是将昆虫头部切下放入置于灭菌后的离心管内，将离心管浸入液氮中，然后在旋涡震荡器上震荡使昆虫触角全部脱离，向离心管内加入预冷的丙酮溶液，将昆虫触角全部冲洗出来置于灭菌滤纸上过滤，再迅速集中在体视显微镜下镜检，后收集于去RNA酶离心管中备用提取RNA、DNA、蛋白质等。本发明克服了传统昆虫触角分离方法所存在的局限，能使微小体型鞘翅目昆虫的触角和头部在一个相对密闭的环境中快速分离，在短时间内能够收集到大量有生物活性的昆虫触角，抽提得到的昆虫触角RNA能达到要求的纯度和浓度，而且RNA其它质量指标均很好，本发明有效的提高了昆虫解剖学领域的科研效率和精确性。
Description
技术领域
本发明涉及一种昆虫触角的分离方法，特别是涉及一种微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法，属于昆虫解剖学领域。
技术背景
昆虫的触角是昆虫嗅觉、触觉与听觉的功能器官，在昆虫的种间和种内化学通讯、声音通讯及触觉通讯中起着极其重要的作用。昆虫的触角是昆虫学、农学、林学、仿生学等学科领域的重要研究对象。在昆虫分子生物学研究中，经常要将昆虫的触角单独分离出来，提取触角RNA、DNA、蛋白等，用于触角转录组测序、检测某种基因在触角中的表达情况、触角蛋白质组研究等。这些研究中都需要大量单独分离出来的触角，并且需要快速将其从虫体上分离，防止污染，以保证其生物活性，避免影响后续试验。
鞘翅目昆虫的前翅强烈骨骼化，坚硬，后翅膜质，后翅平时折叠于前翅内，通称为甲虫。坚硬的体壁和鞘质的前翅保护甲虫免遇侵害，所以得到极大的发展，是昆虫纲乃至动物界中种类最多，分布最广的第一大目，所以也是生物研究中的一大类群。鞘翅目昆虫的触角在不同类群中变化很大，有线状、念珠状、锯齿状、棍棒状、锤状、棒状、膝状、腮叶状等，所以触角分离比较困难。
体型较大的鞘翅目昆虫触角也比较大，在无需借助显微镜的条件下就可以用手术刀、镊子或小剪刀进行触角分离，并且只需要分离相对数量较少的触角就能抽提到所需的RNA、DNA或蛋白质等物质的量，以满足试验需求。但是对于微小体型的鞘翅目昆虫，由于其触角相对较小，有的甚至需要在显微镜下才能看清，普通的分离方法根本无法完成，所以目前分离微小体型鞘翅目昆虫触角传统的方法是在体视显微镜下用手术刀将其一根一根切下，分离极其不便，费时耗神，效率低下。同时要提取到所需的核酸或蛋白质等物质量，通常需要分离相对数量较多的触角，而且时间需要1到2天，解剖分离时间过长还会增加触角在空气中的暴露时间而导致污染，使其中的RNA、DNA、蛋白质等物质降解，影响到后续的试验效果。目前尚未见公开一种微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法。
发明内容
本发明的目的是为了提高微小体型鞘翅目昆虫触角的分离效率，缩短解剖时间，减小人为原因造成的污染，从而减小RNA、DNA和蛋白质等的降解，为后续微小体型鞘翅目昆虫触角核酸、蛋白等物质的提取纯化等研究做好物质基础，而公开一种微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法。
本发明的技术方案如下：
a.用手术刀将微小体型鞘翅目昆虫头部快速切下，迅速放入置于冰上的灭菌后的离心管内；
b.待离心管内放入所需数量的昆虫头部后，将离心管底部浸入液氮中，浸入时间为15s；
c.然后迅速将离心管放在旋涡震荡器上震荡5～10s，震荡频率为500～3000rpm/min；
d.重复步骤b与步骤c程序2～8次，随时取出昆虫头部在体视显微镜下观察，使其达到昆虫触角全部脱离而其它组织不脱落；
e.将昆虫触角全部脱落的昆虫头部从离心管内倒出，可看到分离出的昆虫触角都黏附在离心管内壁上；
f.向离心管内加入-20℃预冷的丙酮溶液，将离心管内壁上的昆虫触角全部冲洗出来，置于9cm灭菌滤纸上进行过滤；
g.待丙酮溶液过滤完后，迅速将滤纸上的昆虫触角集中在体视显微镜下镜检，将非昆虫触角的其它虫体组织用尖头镊子分离剔出；
h.将纯净的昆虫触角收集于去RNA酶离心管中，备用提取RNA、DNA、蛋白质等。
本发明克服了传统昆虫触角分离方法所存在的局限，能使微小体型鞘翅目昆虫的触角和头部在一个相对密闭的环境中快速分离，在短时间内能够收集到大量有生物活性的昆虫触角，而且分离后的昆虫头部无残余触角，相比传统解剖分离方法缩短了3到5倍的时间；试验表明抽提得到的昆虫触角RNA都能达到要求的纯度和浓度，而且RNA其它质量指标均很好，本发明有效的提高了昆虫解剖学领域的科研效率和精确性。
附图说明
附图1为本发明解剖后的华山松大小蠹头部的放大图片。
附图2为本发明分离后的华山松大小蠹头部的放大图片。
附图3为本发明分离下来的华山松大小蠹触角的放大图片。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案做进一步叙述如下：
a.用手术刀将华山松大小蠹头部快速切下，迅速放入置于冰上的15ml灭菌后的离心管内；
b.待收集200个华山松大小蠹头部后将离心管底部浸入液氮中，侵入时间为15s；
c.迅速将离心管放在旋涡震荡器上震荡5s，震荡频率为3000rpm/min；
d.重复步骤b与步骤c程序，当震荡第4次后在体视显微镜下快速镜检发现触角全部脱落；
e.将华山松大小蠹触角全部脱落的头部从离心管内倒出，可看到分离出的华山松大小蠹触角都黏附在离心管内壁上；
f.向离心管内加入-20℃预冷的丙酮溶液，将管内壁上的昆虫触角全部冲洗出来，置于9cm灭菌滤纸上进行过滤；
g.待丙酮溶液过滤完后，迅速将滤纸上的华山松大小蠹触角集中在体视显微镜下迅速镜检，将非昆虫触角的其它虫体组织用尖头镊子分离剔出；
h.将纯净的华山松大小蠹触角收集于1.5ml去RNA酶离心管中，备用提取RNA。
Claims (2)
1.微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法，其特征在于所采用的技术方案如下：
a.用手术刀将微小体型鞘翅目昆虫头部快速切下，迅速放入置于冰上的灭菌后的离心管内；
b.待离心管内放入所需数量的昆虫头部后，将离心管底部浸入液氮中，浸入时间为15s；
c.然后迅速将离心管放在旋涡震荡器上震荡5～10s，震荡频率为500～3000rpm/min；
d.重复步骤b与步骤c程序2～8次，随时取出昆虫头部在体视显微镜下观察，使其达到昆虫触角全部脱离而其它组织不脱落；
e.将昆虫触角全部脱落的昆虫头部从离心管内倒出，可看到分离出的昆虫触角都黏附在离心管内壁上；
f.向离心管内加入-20℃预冷的丙酮溶液，将离心管内壁上的昆虫触角全部冲洗出来，置于9cm灭菌滤纸上进行过滤；
g.待丙酮溶液过滤完后，迅速将滤纸上的昆虫触角集中在体视显微镜下镜检，将非昆虫触角的其它虫体组织用尖头镊子分离剔出；
h.将纯净的昆虫触角收集于去RNA酶离心管中，备用提取RNA、DNA、蛋白质等。
2.根据权利要求1所述的微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法，其特征在于：
a.用手术刀将华山松大小蠹头部快速切下，迅速放入置于冰上的15ml灭菌后的离心管内；
b.待收集200个华山松大小蠹头部后将离心管底部浸入液氮中，侵入时间为15s；
c.迅速将离心管放在旋涡震荡器上震荡5s，震荡频率为3000rpm/min；
d.重复步骤b与步骤c程序，当震荡第4次后在体视显微镜下快速镜检发现触角全部脱落；
e.将华山松大小蠹触角全部脱落的头部从离心管内倒出，可看到分离出的华山松大小蠹触角都黏附在离心管内壁上；
f.向离心管内加入-20℃预冷的丙酮溶液，将管内壁上的昆虫触角全部冲洗出来，置于9cm灭菌滤纸上进行过滤；
g.待丙酮溶液过滤完后，迅速将滤纸上的华山松大小蠹触角集中在体视显微镜下迅速镜检，将非昆虫触角的其它虫体组织用尖头镊子分离剔出；
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