CN104974207A - 一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法,采用以下步骤:A、先将咸水卤虫卵在40~45℃烘箱中预先烘干,将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比1:1~10的比例混合均匀,然后通过高压均质机进行粉碎,过滤网除杂,冷冻干燥,得咸水卤虫卵粉块;B、将咸水卤虫卵粉块,装入超临界萃取釜中,萃取温度为40~50℃,萃取压力为30~45Mpa,乙醇作为夹带剂,乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5~10%,CO2的流量控制在200~400L/h,萃取时间2~3h;分离釜温度为20~30℃,分离压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥后获得粉状物。本发明具有绿色环保、无三废排放、收率高、生产成本低,有利于工业化生产的优点。
Description
技术领域
本发明涉及超临界流体萃取技术领域,特别涉及一种化妆品原料的制备方法,从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取四磷酸二鸟苷 (GP4G)的方法。
背景技术
咸水卤虫(Artemia Salina)是海洋浮游生物中的一种,早在恐龙年代就存活于地球上,咸水卤虫卵中含有较高浓度的四磷酸二鸟苷。
四磷酸二鸟苷(Diguanosine Tetraphosphate) 为4个磷酸基结合于两个鸟苷的化合物(GPPPPG),简称GP4G,可水解转化成三磷酸腺苷(ATP),为细胞供给能量。四磷酸二鸟苷目前作为一种功能性原料应用于化妆品行业,GP4G对人体肌肤细胞的独特功效有,(1)补充细胞能量,唤醒休眠细胞,直接快速地补充细胞能量;(2)激活肌肤细胞的各种生理活动及新陈代谢,加速各种保持肌肤健康状态起到关键作用的蛋白的合成;(3)可促进真皮层成纤维细胞分裂增殖,使胶原纤维、网状纤维和弹性纤维增加,调节基质中胶原酶、透明质酸、硫酸软骨素、肝素的含量和活性,维持肌肤真皮结缔组织中的水分,使结缔组织处于疏松状态,防止胶原蛋白由溶解状态变为不溶解状态,从而防止皱纹的产生,并有效修复已经形成的皱纹;(4)保护及修复肌肤细胞的基因免受外界环境因素的损伤,增强肌肤细胞抵抗力,保持肌肤柔软光滑,能够强烈保护DNA的三维立体螺旋结构,并在其结构受到损伤时,对它进行有效的修复;(5)能有效俘虏自由基,抑制黑色素的形成,抵御自由基造成的肌肤老化,促进肌肤活力;能够有效修复自由基对细胞造成的损伤,对肌肤暗沉有明显的改善。
目前有报道的关于GP4G 的提取方法见于F.J.FINAMORE 和A.H.WARNER 于1963年在The Journal of Biological Chemistry 发表的文章The occurrence of P1,P4~Diguanosine 5’-Tetraphosphate in Brine shrimp eggs中生产操作步骤复杂,而专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》生产过程中产生大量废液,每处理1kg样品,大概约产生20L酸碱废液,后处理麻烦,不利于环境保护。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提一种操作简单、环保、制备过程无废液产生的从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法,其特征在于采用以下步骤:
A、先将咸水卤虫卵在40~45℃烘箱中预先烘干,将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比1:1~10的比例混合均匀,将混合液在常温、70~150Mpa压力下通过高压均质机进行破壁处理,将混合液通过300目过滤网除杂,然后将所得混合液在冻干机中冷冻干燥,得咸水卤虫卵粉块;
B、称步骤A所得咸水卤虫卵粉块,装入超临界萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温度为40~50℃,萃取压力为30~45Mpa,乙醇作为夹带剂,乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5~10%,CO2的流量控制在200~400L/h, 萃取时间2~3h;分离釜温度为20~30℃,分离压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥后获得粉状物。
本发明提供的制备方法简单可行,首先通过高压均质机对咸水卤虫卵进行预处理,将咸水卤虫卵进行粉碎,然后采用超临界CO2萃取技术,萃取咸水卤虫卵粉块中的四磷酸二鸟苷 (GP4G),最后冷冻干燥得粉状物,萃取得率在70%~75%之间, 远高于The occurrence of P1,P4~Diguanosine 5’-Tetraphosphate in Brine shrimp eggs论文中所述方法的萃取得率(得率为10%)和专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》的萃取得率(得率为50%)。经高效液相色谱法测定本发明制备的粉状物,GP4G的纯度不低于为85%。超临界萃取过程中使用乙醇为夹带剂,安全、环保、可回收。传统提取方法需要经过原料预处理、脱水、破碎、浸取、中和、吸附、洗脱、脱盐和真空浓缩等工艺过程,其四磷酸二鸟苷 (GP4G)的收率低,纯度低,设备要求条件高,生产成本高,不利于工业化生产。
本发明具有绿色环保、无三废排放、收率高、萃取得率在70%~75%之间,纯度不低于85%,生产成本低,有利于工业化生产的优点。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A: 原料预处理过程:卤虫卵在40℃烘箱中预先烘干,按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:1的质量比例混合均匀,常温下,在70Mpa条件下通过高压均质机,将咸水卤虫卵粉碎,收集通过300目过滤网的混合液,将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块,回收乙醇;
B:超临界萃取过程:称取1000g预处理的卤虫卵粉末,装入萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温40℃,萃取压力30Mpa,乙醇作为夹带剂,添加量为5%(质量百分比),CO2的流量200L/h,萃取时间2h;
C:萃取物收集过程:分离釜温度为20~35℃,分力压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥得GP4G粉状物,萃取得率为70%,高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.5%。
实施例2:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A: 原料预处理过程: 卤虫卵在42℃烘箱中预先烘干,按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:3的质量比例混合均匀,常温下,在100Mpa条件下通过高压均质机,将咸水卤虫卵粉碎,收集通过300目过滤网的混合液,将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块,回收乙醇;
B:超临界萃取过程:称取1000g预处理的卤虫卵粉末,装入萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温45℃,萃取压力30Mpa,乙醇作为夹带剂,添加量为8%(质量比),CO2的流量300L/h,萃取时间2.5h;
C:萃取物收集过程:分离釜温度为20℃,分力压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥得GP4G粉状物,萃取得率为73.5%,高效液相色谱发测定GP4G纯度为86.5%。
实施例3:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A: 原料预处理过程:卤虫卵在45℃烘箱中预先烘干,按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:8的质量比例混合均匀,常温下,在120Mpa条件下通过高压均质机,将咸水卤虫卵粉碎,收集通过300目过滤网的混合液,将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块,回收乙醇;
B:超临界萃取过程:称取1000g预处理的卤虫卵粉末,装入萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温45℃,萃取压力40Mpa,乙醇作为夹带剂,添加量为10%(质量比),CO2的流量400L/h,萃取时间2.5h;
C:萃取物收集过程:分离釜温度为25℃,分力压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥得GP4G粉状物,萃取得率为75.0%,高效液相色谱发测定GP4G纯度为87.5%。
实施例4:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A: 原料预处理过程:卤虫卵在45℃烘箱中预先烘干,按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:10的质量比例混合均匀,通过高压均质机,常温下,在150Mpa条件下,将咸水卤虫卵粉碎,收集通过300目过滤网的混合液,将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块,回收乙醇;
B:超临界萃取过程:称取1000g预处理的卤虫卵粉末,装入萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温50℃,萃取压力45Mpa,乙醇作为夹带剂,添加量为10%(质量比),CO2的流量400L/h,萃取时间3h;
C:萃取物收集过程:分离釜温度为30℃,分力压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥得GP4G粉状物,萃取得率为74.0%,高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.0%。
实施例5:
一种从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取GP4G的方法,采用以下步骤制备:
A: 原料预处理过程:卤虫卵在45℃烘箱中预先烘干,按咸水卤虫卵:无水乙醇=1:5的质量比例混合均匀,常温下,在120Mpa条件下通过高压均质机,将咸水卤虫卵粉碎,收集通过300目过滤网的混合液,将混合液在冻干机中冷冻干燥后得卤虫卵粉块,回收乙醇;
B:超临界萃取过程:称取1000g预处理的卤虫卵粉末,装入萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温45℃,萃取压力45Mpa,乙醇作为夹带剂,添加量为10%(质量比),CO2的流量400L/h,萃取时间3h;
C:萃取物收集过程:分离釜温度为25℃,分力压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥得GP4G粉状物,萃取得率为75.0%,高效液相色谱发测定GP4G纯度为85.5%。
Claims (1)
1.一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法,其特征在于采用以下步骤:
A、先将咸水卤虫卵在40~45℃烘箱中预先烘干,将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比1:1~10的比例混合均匀,将混合液在常温、70~150Mpa压力下通过高压均质机,将混合液通过300目过滤网除杂,然后将所得混合液在冻干机中冷冻干燥,得咸水卤虫卵粉块;
B、称步骤A所得咸水卤虫卵粉块,装入超临界萃取釜中,在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉,阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板,萃取温度为40~50℃,萃取压力为30~45Mpa,乙醇作为夹带剂,乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5~10%(质量比),CO2的流量控制在200~400L/h, 萃取时间2~3h;分离釜温度为20~30℃,分离压为5Mpa,回收乙醇,冷冻干燥后获得粉状物。
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