CN104974147B - 紫杉醇、多西紫杉醇衍生物及组合物和其抗肿瘤应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了紫杉醇、多西紫杉醇衍生物及组合物和其抗肿瘤应用。具体而言公开了如通式（A）所示的半合成紫杉醇衍生物及其药学上可接受的盐。这类化合物的制备方法包括2步，步骤1中优选的还原剂选自：氰基硼氢化钠；步骤2中优选的脱除Troc保护基选自：以氯化铵和锌粉处理。一种药物组合物，这种药物组合物含有有效剂量的通式（A）所示的化合物或其药学上可接受的盐和药效学可接受的载体。这类化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一类新的紫杉醇衍生物及盐，其制备方法，含有这类化合物的药物组合物，和化合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
背景技术
紫杉醇是一种短叶红豆杉(Taxus brevifolia)分离得到的天然产物(Wani MC,Taylor HL,Wall ME,The isolation and structure of taxol,a novel antileukemicand antitumor agent from tausbrevifolia,J.Am.Chem.Soc.1971,93,2325)。该化合物能在细胞内促进微管聚合并阻止其解聚(Horwitz SB,Fant J,Schiff PB,Promotion ofmicrotubule assembly in vitro by taxol,Nature,1979,277,665)，从而阻断细胞有丝分裂进程，具有很强的细胞毒性和抗肿瘤作用。随后对其深入研究还发现具有较广的抑瘤谱，目前已经在世界多国获准上市，用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤。
紫杉醇的分子结构复杂，水溶性极低，临床应用必须经静脉滴注给药，所以制剂难度很高。临床使用的紫杉醇制剂需添加较大量的聚乙氧代蓖麻油(Cremophore EL)以增加化合物的水相溶解度，实际应用发现此种增溶剂可导致相当部分病人的过敏反应，因此提高紫杉醇的水溶性和开发安全有效的临床制剂一直是人们的研究重点。多西他赛(taxotere)是一个通过结构改造获得的紫杉醇衍生物，具有较紫杉醇更好的抗癌活性和生物利用度，且毒副作用也较小，特别是该化合物水溶性的改善使其更易于制成制剂，目前已在40多个国家上市，成为肿瘤治疗的一线用药。专利WO9638138(Protaxol,novel toxoids,Biophysica Foundation)，WO9858927(巴克·诺顿药物有限公司)，CN00115426.5(紫杉醇的多羟基水溶性衍生物及其制备方法，复旦大学)公开了几种新型的可溶性紫杉醇衍生物，可用于治疗肿瘤或其他紫杉醇敏感性疾病，但此类在紫杉醇分子中加缀水溶性附加基团的新化合物至今未能发展成临床治疗药物。因此，研究和开发水溶性好、高效低毒的紫杉醇衍生物仍有重要意义。
发明人在前一项专利(CN101062925A)中公开了一类侧链含有二级胺基的紫杉醇衍生物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
发明内容
本发明要解决的一个技术问题是提供一种的新的紫杉醇衍生物及其药学上可接受的盐。
本发明要解决的另一个技术问题是提供这种新的紫杉醇衍生物的制备方法。
本发明要解决的又一个技术问题是提供一种药物组合物，其中包括作为活性成分的通式(A)的化合物及其药学上可接受的载体。
本发明要解决的再一个技术问题是提供一种新的紫杉醇衍生物及其组合物作为抗肿瘤剂的应用。
为解决上述问题，本发明在前一项专利(CN101062925A)公开的内容基础上，采用如下技术方案，即采用如通式(A)所示的半合成紫杉醇衍生物及其药学上可接受的盐：
其中R1选自氢、乙酰基；
R3选自取代或非取代的苯基；
所述取代苯基的取代基选自C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷氨基、C1-C5酰基、C1-C5酰氧基、C1-C5酰胺基、羟基、羟甲基、卤素、硝基、氨基、氰基和叠氮基。
R2选自
其中R21、R22、R23、R24表示一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷硫基、氨基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰基、羧基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰胺基、卤素、硝基、氰基、取代或非取代的五或六元芳基、取代或非取代的含有1-4个选自N,O或S的杂原子的五或六元杂芳基；
取代或非取代的C1-6直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C1-6烷氧C1-6烷基；
取代或非取代的五-六元芳基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C1-6烷氧C1-6烷基；
取代或非取代的含有1-4个选自N,O或S的杂原子的五-六元杂芳基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C1-6烷氧C1-6烷基；
优选的五元芳基选自
优选的六元芳基选自
优选的含有1-4个选自N,O或S的杂原子的五元杂环基选自：
优选的含有1-4个选自N,O或S的杂原子的六元杂环基选自：
优选的R2选自但不限定于
其中R211表示一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的C1-4直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷硫基、C1-4烷氧C1-4烷基、氨基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基；
取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。
优选的R2选自但不限定于
其中R212表示一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的C1-4直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷硫基、C1-4烷氧C1-4烷基、氨基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基；
取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。
优选的R2选自但不限定于
其中R213表示一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的C1-4直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷硫基、C1-4烷氧C1-4烷基、氨基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基；
取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。
优选的R2选自但不限定于
其中R214表示一个或多个取代基，并且相互独立的选自：氢、取代或非取代的C1-4直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷硫基、C1-4烷氧C1-4烷基、氨基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基酰基、羧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷胺酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰胺基、卤素、硝基、氰基；
取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。
更优选的式A化合物选自但不限定于式I和II所示的化合物。
其中R1选自氢(I)、乙酰基(II)；
R3选自取代或非取代的苯基；
所述取代苯基的取代基选自C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、C1-C5烷氨基、C1-C5酰基、C1-C5酰氧基、C1-C5酰胺基、羟基、羟甲基、卤素、硝基、氨基、氰基和叠氮基。
最优选的R2选自如下杂环：
本发明最优选化合物选自下列群组：
| 化合物 | R<sup>1</sup> | R<sup>2</sup> | R<sup>3</sup> |
| Ia | H | 2-噻吩基 | Ph |
| Ib | H | 3-噻吩基 | Ph |
| Ic | H | 4-噻唑基 | Ph |
| Id | H | 5-噻唑基 | Ph |
| Ie | H | 5-对甲氧基苯基-2-噻吩基 | Ph |
| If | H | 4,5-二甲基-2-噻吩基 | Ph |
| Ig | H | 3-甲基-4,5苯并-2-噻吩基 | Ph |
| Ih | H | 4,5苯并-2-噻吩基 | Ph |
| Ii | H | 5-(2’-噻吩)-2-噻吩基 | Ph |
| Ij | H | 3-溴-2-噻吩基 | Ph |
| Ik | H | 3-氯-2-噻吩基 | Ph |
| Il | H | 4-溴-2-噻吩基 | Ph |
| Im | H | 5-甲基-2-噻吩基 | Ph |
| In | H | 5-乙基-2-噻吩基 | Ph |
| Io | H | 3-甲基-2-噻吩基 | Ph |
| Ip | H | 4-甲基-2-噻吩基 | Ph |
| IIa | Ac | 2-噻吩基 | Ph |
| IIb | Ac | 3-噻吩基 | Ph |
| IIc | Ac | 4-噻唑基 | Ph |
| IId | Ac | 5-噻唑基 | Ph |
| IIe | Ac | 5-对甲氧基苯基-2-噻吩基 | Ph |
| IIf | Ac | 4,5-二甲基-2-噻吩基 | Ph |
| IIg | Ac | 3-甲基-4,5苯并-2-噻吩基 | Ph |
| IIh | Ac | 4,5苯并-2-噻吩基 | Ph |
| IIi | Ac | 5-(2’-噻吩)-2-噻吩基 | Ph |
| IIj | Ac | 3-溴-2-噻吩基 | Ph |
| IIk | Ac | 3-氯-2-噻吩基 | Ph |
| IIl | Ac | 4-溴-2-噻吩基 | Ph |
| IIm | Ac | 5-甲基-2-噻吩基 | Ph |
| IIn | Ac | 5-乙基-2-噻吩基 | Ph |
| IIo | Ac | 3-甲基-2-噻吩基 | Ph |
| IIp | Ac | 4-甲基-2-噻吩基 | Ph |
“取代或非取代的C1-6直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C1-6烷氧C1-6烷基”；上述定义中“所述的取代或非取代的C1-6直链或支链烷基”不仅包括取代或非取代的C1-6直链或支链烷基上的烷基，而且包括取代或非取代的C1-6直链或支链烷氧基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷硫基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷氨基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰氧基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷胺酰基以及取代或非取代的C1-6直链或支链烷基酰胺基等取代基上的烷基；
“取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、氟、氯、溴、硝基、氰基。”上述定义中“所述的取代或非取代的C1-4直链或支链烷基”不仅包括取代或非取代的C1-4直链或支链烷基上的烷基，而且包括取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷硫基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氨基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷氧基酰基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰氧基、取代或非取代的C1-4直链或支链烷胺酰基以及取代或非取代的C1-4直链或支链烷酰胺基等取代基上的烷基；
除非另有指明，否则这里的公开不是对具体步骤、起始原料，或诸如此类等的限定，这些可以变化。也可以理解，此处所用的术语是仅仅为了的描述特定实施例的目的，并不意味着限制。
如在说明书和附加的权利要求书中所用的，单数形式“一种”和“这种”包括复数对象，除非上下文中另有明确规定。例如，举例说明，提及“一种反应物”不但包括单独一个反应物，而且包括两个或更多不同的反应物的组合形式或混合形式，提及“一种取代基”不仅包括单独一种取代基也包括两个或更多个取代基，以此类推。
在本发明中描述和权利要求的，特定的术语如下文记载的限定一致。应当理解，本文提供的定义并不意味着相互排斥。相应的，某些化学基团可以落入不止一个术语的定义中。
如本文所用,短语"具有结构式"或"具有结构"并不意味着限制，并且和常用的术语"包含"的同样的方式使用。本文使用的术语"相互独立的选自"表明所述的要素可以是相同的或不同的。
术语治疗剂的"有效剂量"是指有益的制剂具有足够的量获得期望的效果。
如本文所用,并且除非特别声明，否则,有益制剂的“有效剂量”是指该剂量不仅覆盖治疗有效剂量而且覆盖预防有效剂量。
如本文所用,活性制剂的"治疗有效剂量"是指能有效获得期望的治疗效果的剂量,活性制剂的"预防有效剂量"是指有效预防或缓解不希望生理状况的严重程度的剂量。
"药学上可接受的"成分含义是该成分没有生物活性或其他不良活性的,例如该成分可以纳入公开的药物制剂并给与本文所述的患者，但不引起显著的不良生物效果或以有害的方式和该制剂中包含的其他成分产生相互作用。术语"药学上可接受的"是用来指辅料,通常意味着该成分符合毒性和制造测试的标准或其包括在美国食品和药品监督管理局编制的非活性成分指南中。
所用的术语"卤代"和"卤素"在传统意义上是指氯,溴,氟或碘取代基。
术语"含有杂原子"如在"含有杂原子的烷基"(也被称为"杂烷"取代基)或"含有杂原子的芳基"(也被称为"杂芳"基团)是指原子、分子、连接键或取代基其中一个或更多个碳原子被除碳原子以外的原子取代,例如,氮,氧,硫,磷或硅,典型的有氮,氧或硫。类似的,术语"杂烷基"是指含有杂原子的烷基,术语"杂环"是指含有杂原子的环取代基,术语"杂芳基"和“杂芳香环"分别是指含有杂原子的"芳基"和"芳香基"取代基,等等。杂烷基的例子包括烷氧基芳基,烷硫取代的烷基,N-烷基化的胺基烷基,等等。杂芳取代基的例子包括吡咯基,吡咯烷基,吡啶基,喹啉基,吲哚基,嘧啶基,咪唑基,1,2,4-三唑基,四唑基,等等。含有杂原子的脂环基的例子包括吡咯烷,吗啉基,哌嗪基,哌啶基,等等。
另外，上述的取代基团，如果特定的取代基允许，可以被至少一个另外的取代基团进一步取代，例如上述具体列举的那些。特别是,上述的任一基团，如果允许，可以被卤代(包括全卤代)或含有卤素取代基。代表性的例子包括全卤代的C1-C6烷基羰基或酰氧基。
当术语“取代的”出现在一系列可能的取代基之前，其意思是该术语用于该组中每一个基团。举例说明，短语“取代的烷基，烯基，和芳基"解释为“取代的烷基，取代的烯基，和取代的芳基。”类似的，当术语“含有杂原子”出现在一系列可能的含有杂原子的取代基之前，其意思是该术语用于该组中每一个基团。举例说明，短语“含有杂原子烷基，烯基，和芳基”解释为“含有杂原子的烷基，含有杂原子的取代烯基，和含有杂原子的取代芳基。”
上述取代基不是必须相互排斥的，并且任一给定的基团可以落入不止一个定义中。举例说明，苄基(也就是,-CH2-C6H5)能被分类为芳烷基和取代的烷基。在整个说明书中,除非另外特别说明，否则一个定义的引述(例如,“烷基”)和另外一个重叠定义的没有引述(例如,“芳烷基”)并不意味着排除那些取代基同时落入两个定义之中。举例说明,对于一个取代基Rx限定为“氢或烷基，”这些定义应当解释为包括烷基，也落入其他分类的术语(例如,苄基).
本发明涉及的化合物可以按如下路线制备：
R2和R3的定义和上述一致。
该方法包括如下步骤：
1)以具有通式(III)或(IV)所示的已知中间体化合物，与相应的杂环芳醛反应，然后用还原剂还原得到通式(V)或(VI)所示化合物；
2)脱除通式(V)或(VI)所示化合物的Troc保护基，得到相应的化合物(I)或(II)。
优选的还原剂选自：氰基硼氢化钠。
脱除Troc保护基优选以氯化铵和锌粉处理。
以氯化铵和锌粉处理脱除Troc保护基得到通式(V)或(VI)所示化合物较已知方法(CN101062925A)更优，具有如下的优点：
由于反应在有机溶液(甲醇)中近中性条件下进行，避免了强酸性条件下的副反应；无机副产物及残余锌粉可简单过滤除去，避免了大量水相萃取操作，提高了产物的回收率，从而大幅度提高了该步反应的产率。
药学上可接受的盐可从任何药学上可接受的有机酸、任何药学上可接受的无机酸、或它们的组合来制备。利用公知的方法，将具有碱性的如通式(I)或(II)所示的化合物与无机酸和/或有机酸反应，得到相应的盐。
用于制备酸加成盐的合适的有机酸包括，例如：C1-C6烷基羧酸、C6-C12芳基羧酸、二羧酸和三羧酸，如乙酸、丙酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、羟基乙酸、柠檬酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、邻苯二甲酸和对苯二甲酸，和芳基和烷基磺酸如甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸等等。
用于制备酸加成盐的合适的无机酸包括，例如：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等。酸加成盐可以通过合适的碱处理重新转换为游离碱。
对上述方法制备的化合物进行了人癌细胞的细胞毒性筛选(表一，见药理实验例1)，证明了化合物Ia和IIa有良好的抗肿瘤活性。
对以上两个化合物又扩展了其他五种人癌细胞的细胞毒性筛选(表二，见药理实验例2)。
结果表明化合物Ia和IIa的抗SKOV3卵巢癌活性与紫杉醇和多西他赛相当；IIa的抗MX-1乳腺癌活性与紫杉醇相当，比多西他赛活性高；化合物Ia和IIa抗其余三种肿瘤的活性虽较紫杉醇和多西他赛低，但仍表明具有抗肿瘤活性。
为了比较本发明采用的代表性化合物Ia和IIa与发明人前一项专利(CN101062925A)所述化合物I-4和I-13的活性，运用裸鼠移植MX-1型肿瘤模型对这四个化合物进行了体内活性试验，说明在同等剂量下化合物Ia和IIa的体内抗肿瘤活性优于I-4和I-13(表三，见药理实验例3)。
本发明的优点在于提供了一种可形成胺盐的紫杉醇衍生物，抗肿瘤活性与紫杉醇和多西他赛相似，动物体内活性优于发明人前一项相关专利(CN101062925A)中公开的化合物；由于该类衍生物的侧链含有二级胺基团，可和相应的酸根生成盐，从而具有明显高于紫杉醇或多西他赛的水溶性。
本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.1-100mg/Kg体重，更优选为1-60mg/Kg体重，最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
本文提及的所有专利、专利申请和出版物在此均被引入作为整体参考。然而，当含有明确定义的专利、专利申请、或出版物被引入作为参考时，这些明确的定义应被理解为仅适用于发现这些定义的被引入的专利、专利申请或出版物，而不适用于本申请文本中的其余部分，尤其是本申请的权利要求书。
具体实施方式
应当理解的是，虽然本发明是结合优选的具体实施例描述的，但是，之前的描述和下面的例子是用来解释而不是限制本发明的范围。本领域技术人员显而易见的熟知，在不脱离本发明范围的情况下，可以做各种改变和同等替代，进一步的，其他的方面、优势和修改对本发明涉及领域的技术人员是显而易见的。
按已知方法(CN101062925A)分别以10-脱乙酰基-巴卡丁III和巴卡丁III为原料制备13-[(2R’,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-氨基-丙酰基]-10-脱乙酰基-7,10-双Troc-巴卡丁III(化合物III)和13-[(2R’,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-氨基-丙酰基]-7-Troc-巴卡丁III(化合物IV)。
本发明的化合物通过如下反应路线制备
实施例1 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻吩-2-甲基)胺基-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ia,R1＝H,R2＝噻吩-2-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III211mg(0.2mmol)，樟脑磺酸19mg(0.08mmol)，噻吩-2-甲醛90mg(0.8mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠10mg(0.16mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体135mg,收率59％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物80mg(0.07mmol)，以3.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵75mg(1.4mmol)，锌粉98mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ia41mg，收率73％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.09–8.03(m,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.8Hz,2H),7.44–7.33(m,4H),7.25(d,J＝1.7Hz,1H),7.14(dd,J＝5.1,1.1Hz,1H),6.87(dd,J＝5.1,3.4Hz,1H),6.81(d,J＝2.9Hz,1H),6.06(dd,J＝9.0,8.0Hz,1H),5.61(d,J＝7.1Hz,1H),5.18(s,1H),4.95–4.87(m,1H),4.30(d,J＝5.7Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.19(dd,J＝10.7,6.7Hz,1H),4.14(d,J＝8.6Hz,1H),4.01(d,J＝5.7Hz,1H),3.94(d,J＝14.1Hz,1H),3.81(d,J＝7.0Hz,1H),3.73(d,J＝14.1Hz,1H),2.62–2.46(m,1H),2.18(s,3H),1.90(dd,J＝15.4,8.9Hz,2H),1.85(d,J＝0.9Hz,3H),1.83–1.80(m,1H),1.71(s,3H),1.20(s,3H),1.09(s,3H).
实施例2 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻吩-3-甲基)胺基-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ib,R1＝H,R2＝噻吩-3-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III400mg(0.378mmol)，樟脑磺酸35mg(0.15mmol)，噻吩-3-甲醛102mg(0.9mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠19mg(0.30mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体184mg,收率42％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物180mg(0.156mmol)，以4mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入醋酸702mg(11.7mmol)，锌粉294mg(4.5mmol)，于50℃油浴中加热1小时后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ib30mg，收率23.9％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.06(d,J＝7.3Hz,2H),7.66(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.43–7.32(m,4H),7.24(s,1H),7.22(dd,J＝4.8,3.0Hz,1H),7.03(d,J＝1.6Hz,1H),6.99(d,J＝4.2Hz,1H),6.06(t,J＝8.7Hz,1H),5.61(d,J＝7.0Hz,1H),5.19(s,1H),4.90(d,J＝9.3Hz,1H),4.29(d,J＝5.9Hz,1H),4.19(dd,J＝10.9,6.7Hz,1H),4.13(dd,J＝12.2,7.8Hz,2H),3.95(d,J＝5.9Hz,1H),3.80(d,J＝7.0Hz,1H),3.75(d,J＝13.6Hz,1H),3.58(d,J＝13.6Hz,1H),2.58–2.47(m,1H),2.16(s,3H),1.90(dd,J＝15.3,9.0Hz,1H),1.83(s,3H),1.82–1.74(m,2H),1.73(s,1H),1.19(s,3H),1.09(s,3H).
实施例3 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻唑-4-甲基)胺基-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ic,R1＝H,R2＝噻唑-4-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III500mg(0.47mmol)，樟脑磺酸45mg(0.19mmol)，噻唑-4-甲醛130mg(1.15mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入5mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠25mg(0.4mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体254mg,收率46％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物254mg(0.22mmol)，以5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入醋酸989mg(16.5mmol)，锌粉414mg(6.4mmol)，于50℃油浴中加热1小时后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ic72.5mg，收率41％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.76(d,J＝1.5Hz,1H),8.05(d,J＝7.4Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.42–7.33(m,4H),7.21(dd,J＝7.1,4.7Hz,1H),7.06(s,1H),6.01(t,J＝8.8Hz,1H),5.60(d,J＝7.1Hz,1H),5.18(s,1H),4.91(d,J＝8.8Hz,1H),4.34–4.29(m,1H),4.26(d,J＝8.2Hz,1H),4.20(dd,J＝10.8,6.6Hz,1H),4.14(d,J＝8.5Hz,1H),3.99(d,J＝6.7Hz,1H),3.94(d,J＝14.3Hz),3.79(t,J＝11.9Hz,2H),2.74–2.41(m,1H),2.18(s,3H),1.84(s,3H),1.77(t,J＝13.5Hz,1H),1.71(s,3H),1.71–1.60(m,2H),1.17(s,3H),1.08(s,3H).
实施例4 制备3-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻唑-5-甲基)胺基-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Id,R1＝H,R2＝噻唑-5-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III400mg(0.38mmol)，樟脑磺酸35mg(0.15mmol)，噻唑-5-甲醛103mg(0.91mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠19mg(0.3mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体110mg,收率25％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物100mg(0.156mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入醋酸390mg(6.5mmol)，锌粉163mg(2.5mmol)，于50℃油浴中加热1小时后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Id7mg，收率10％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.66:(s,1H),8.06(d,J＝7.5Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.62(s,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.44–7.34(m,4H),7.29(d,J＝5.5Hz,1H),6.07(t,J＝8.6Hz,1H),5.62(d,J＝7.0Hz,1H),5.20(s,1H),4.91(d,J＝9.1Hz,1H),4.34(s,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.20(dd,J＝10.9,6.7Hz,1H),4.16(s,1H),4.12(dd,J＝14.4,7.2Hz,3H),4.02(d,J＝5.5Hz,1H),3.85–3.79(m,2H),2.60–2.51(m,1H),2.19(s,3H),2.04(s,3H),1.92(dd,J＝15.4,9.0Hz,1H),1.86(s,3H),1.84(s,2H),1.73(s,3H),1.21(s,3H),1.10(s,3H).
实施例5 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-对甲氧苯基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ie,R1＝H，R2＝5-对甲氧苯基噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III106mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，5-对甲氧基苯基-噻吩-2-甲醛87mg(0.4mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体95mg,收率75％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物81mg(0.064mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵69mg(1.29mmol)，锌粉90mg(1.29mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ie41mg，收率70％。
1H NMR(400MHz,CDCl3+10％CD3OD)δ8.03(d,J＝7.6Hz,2H),7.71–7.64(m,1H),7.59–7.52(m,2H),7.44(dd,J＝14.2,7.5Hz,6H),7.28–7.22(m,1H),7.02(s,1H),6.92(s,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,2H),5.97(t,J＝9.2Hz,1H),5.56(d,J＝6.9Hz,1H),5.17(s,1H),4.90(d,J＝8.9Hz,1H),4.53(d,J＝5.2Hz,1H),4.24(d,J＝8.3Hz,1H),4.21–4.07(m,4H),3.90(d,J＝16.9Hz,1H),3.83(s,3H),3.75(d,J＝7.2Hz,1H),2.54–2.41(m,1H),2.21(s,3H),1.85(s,3H),1.81–1.74(m,2H),1.69(s,3H),1.53(dd,J＝15.7,6.6Hz,1H),1.13(s,3H),1.06(s,3H).
实施例6 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4,5-二甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(If,R1＝H，R2＝4,5-二甲基噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，4，5-二甲基-噻吩-2-甲醛84mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体120mg,收率68％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物68mg(0.058mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵62mg(1.16mmol)，锌粉75mg(1.16mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品If33mg，收率69％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.95(d,J＝7.4Hz,2H),7.73(t,J＝7.2Hz,1H),7.64(t,J＝7.5Hz,3H),7.42(t,J＝6.4Hz,2H),7.34(d,J＝7.2Hz,2H),7.22(t,J＝6.9Hz,1H),6.54(s,1H),6.10(s,1H)5.83(t,J＝8.7Hz,1H),5.40(d,J＝7.1Hz,1H),5.08(s,1H),5.00(d,J＝7.3Hz,1H),4.94(s,1H),4.88(d,J＝9.3Hz,1H),4.47(s,1H),4.11–3.95(m,6H),3.63(d,J＝6.9Hz,1H),2.36–2.23(m,2H),2.21(s,3H),2.08(s,4H,H-20a),2.00(s,4H),1.78(d,J＝17.3Hz),1.73(s,3H),1.51(s,3H),1.02(s,3H),0.98(s,3H)
实施例7 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-甲基-4,5-苯并-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ig,R1＝H，R2＝3-甲基-4,5-苯并噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，3-甲基-4,5苯并噻吩-2-甲醛106mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体105mg,收率57％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物86mg(0.07mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵74mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ig39mg，收率63％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(d,J＝7.5Hz,2H),7.85(d,J＝7.5Hz,1H),7.73(t,J＝7.7Hz,1H),7.64(dd,J＝14.8,7.4Hz,3H),7.48–7.33(m,5H),7.27(dd,J＝15.4,7.1Hz,2H),6.12(d,J＝5.3Hz,1H),5.86(t,J＝8.9Hz,1H),5.40(d,J＝6.7Hz,1H),5.22(d,J＝3.5Hz,1H),5.08(s,1H),5.00(d,J＝7.0Hz,1H),4.94(s,1H,OH-1),4.88(d,J＝9.5Hz,1H),4.47(s,1H),4.13–3.95(m,6H),3.64(d,J＝6.4Hz,1H),2.27(d,J＝8.7Hz,2H),2.13(s,3H),2.09(s,3H),1.75(s,3H),1.69–1.60(m,3H),1.51(s,3H),1.03(s,3H),0.98(s,3H).
实施例8 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4,5-苯并-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ih,R1＝H，R2＝4,5-苯并噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，4,5苯并噻吩-2-甲醛97mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体95mg,收率52％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物84mg(0.07mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵74mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ih41mg，收率68％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(d,J＝7.6Hz,2H),7.86(d,J＝8.3Hz,1H),7.72(d,J＝6.4Hz,2H),7.62(t,J＝7.9Hz,3H),7.49–7.34(m,4H),7.34–7.22(m,2H),7.18(s,1H),6.12(d,J＝6.0Hz,1H),5.86(t,J＝8.1Hz,1H),5.40(d,J＝6.6Hz,1H),5.08(s,1H),5.00(d,J＝7.3Hz,1H),4.94(s,1H),4.88(d,J＝8.2Hz,1H),4.48(s,1H),4.20–4.08(m,1H),4.00(dd,J＝18.2,8.1Hz,5H),3.64(d,J＝6.2Hz,1H),2.29–2.19(m,1H),2.10(s,3H),1.75(s,3H),1.69–1.60(m,3H),1.51(s,3H),1.03(s,3H),0.97(s,3H).
实施例9 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-(2’-噻吩)-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ii,R1＝H，R2＝5-(2’-噻吩)-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，5-(2’-噻吩)-噻吩-2-甲醛116mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体76mg,收率41％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物56mg(0.045mmol)，以2.3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵48mg(0.9mmol)，锌粉59mg(0.9mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ii28mg，收率69％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝7.6Hz,2H),7.66(t,J＝7.4Hz,1H),7.53(t,J＝7.7Hz,2H),7.43(d,J＝4.2Hz,4H),7.31–7.27(m,1H),7.16(d,J＝5.0Hz,1H),7.07(d,J＝3.2Hz,1H),6.98–6.92(m,2H),6.79(s,1H),6.04(t,J＝9.1Hz,1H),5.59(d,J＝6.9Hz,1H),5.17(s,1H),4.89(d,J＝9.0Hz,1H),4.44(d,J＝6.6Hz,1H),4.26(d,J＝8.6Hz,1H),4.22–4.08(m,4H),3.80(d,J＝7.3Hz,1H),3.76(d,J＝13.8Hz,1H),2.59–2.48(m,1H),2.20(s,3H),1.93(d,J＝17.1Hz),1.86(s,3H),1.80(d,J＝11.6Hz,2H),1.71(s,3H),1.15(s,3H),1.07(s,3H).
实施例10 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-溴-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ij,R1＝H，R2＝3-溴-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，3-溴-噻吩-2-甲醛115mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体109mg,收率58.9％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物86mg(0.07mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵74mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ij45mg，收率73％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18–7.95(m,2H),7.77–7.64(m,1H),7.64–7.52(m,2H),7.52–7.37(m,4H),7.30(dd,J＝8.7,5.2Hz,2H),6.92(t,J＝4.8Hz,1H),5.98(t,J＝9.6Hz,1H),5.57(d,J＝6.4Hz,1H),5.18(s,1H),4.93(d,J＝7.3Hz,1H),4.51(s,1H),4.34–4.08(m,6H),3.76(d,J＝6.6Hz,1H),2.61–2.44(m,1H),2.23(s,3H),1.91–1.77(m,6H),1.69(s,3H),1.14(s,3H),1.07(s,3H).
实施例11 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-氯-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ik,R1＝H，R2＝3-氯-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，3-氯-噻吩-2-甲醛88mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体97mg,收率54％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物83mg(0.07mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵74mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ik37mg，收率63％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.7Hz,2H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.46–7.37(m,4H),7.25(t,J＝7.0Hz,1H),7.20(d,J＝5.3Hz,1H),6.83(d,J＝5.3Hz,1H),6.00(t,J＝8.6Hz,1H),5.58(d,J＝7.2Hz,1H),5.18(s,1H),4.92(d,J＝9.2Hz,1H),4.42(d,J＝6.3Hz,1H),4.26(d,J＝8.5Hz,1H),4.16(dd,J＝12.7,7.5Hz,2H),4.08(d,J＝7.0Hz,1H),3.94(dd,J＝44.9,13.8Hz,2H),3.77(d,J＝7.1Hz,1H),2.58–2.45(m,1H),2.21(s,3H),1.86(s,3H),1.80(d,J＝9.5Hz,1H),1.70(s,3H),1.62(dd,J＝15.6,8.8Hz,2H),1.17(s,3H),1.08(s,3H).
实施例12 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4-溴-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Il,R1＝H，R2＝4-溴-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III159mg(0.15mmol)，樟脑磺酸14mg(0.06mmol)，4-溴-噻吩-2-甲醛115mg(0.6mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠12mg(0.12mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体102mg,收率55％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物86mg(0.07mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵74mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Il43mg，收率69.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.7Hz,2H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,2H),7.41(s,4H),7.26(s,1H),7.14(s,1H),6.83(s,1H),6.01(t,J＝8.5Hz,1H),5.58(d,J＝7.0Hz,1H),5.19(s,1H),4.94(d,J＝9.2Hz,1H),4.36(d,J＝7.3Hz,1H),4.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.16(dd,J＝11.7,7.5Hz,2H),4.08(d,J＝7.4Hz,1H),3.95(s,1H),3.90–3.52(m,2H),2.47(d,J＝15.3Hz,1H),2.20(s,3H),1.85(s,3H),1.81(d,J＝9.1Hz,1H),1.70(s,3H),1.68–1.54(m,2H),1.16(s,3H),1.09(s,3H).
实施例13 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Im,R1＝H，R2＝5-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III106mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，5-甲基-噻吩-2-甲醛43mg(0.4mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入3mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体95mg,收率81％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物85mg(0.07mmol)，以3.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵75mg(1.4mmol)，锌粉98mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Im46mg，收率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.7Hz,2H),7.69(t,J＝7.2Hz,1H),7.57(t,J＝7.5Hz,2H),7.43(d,J＝3.8Hz,4H),7.35(s,1H),6.73(s,1H),6.58(s,1H),5.96(t,J＝8.6Hz,1H),5.56(d,J＝7.1Hz,1H),5.18(s,1H),4.93(d,J＝9.1Hz,1H),4.46(d,J＝7.0Hz,1H),4.25(d,J＝8.4Hz,1H),4.14(dd,J＝16.2,8.8Hz,3H),4.01(d,J＝13.0Hz,1H),3.82(d,J＝14.0Hz,1H),3.75(d,J＝7.0Hz,-H),2.49(dd,J＝13.6,7.6Hz,1H),2.42(s,3H),2.20(s,3H),1.84(s,4H),1.80–1.73(m,2H),1.69(s,3H),1.14(s,3H),1.07(s,3H).
实施例14 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-乙基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(In,R1＝H，R2＝5-乙基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III125mg(0.12mmol)，樟脑磺酸12mg(0.05mmol)，5-乙基-噻吩-2-甲醛67(0.48mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2.4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠6mg(0.096mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体101mg,收率72％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物85mg(0.07mmol)，以3.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵75mg(1.4mmol)，锌粉91mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品In36mg，收率60％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝7.3Hz,2H),7.69(t,J＝7.1Hz,1H),7.57(t,J＝7.2Hz,2H),7.44(s,4H),7.33(s,1H),6.78(s,1H),6.63(s,1H),5.95(t,J＝8.3Hz,1H),5.56(d,J＝6.8Hz,1H),5.17(s,1H),4.92(d,J＝9.1Hz,1H),4.52(d,J＝7.2Hz,1H),4.25(d,J＝8.1Hz,1H),4.12(dd,J＝25.5,10.3Hz,4H),3.88(d,J＝13.2Hz,1H),3.74(d,J＝6.4Hz,1H),2.79(dd,J＝13.8,6.6Hz,2H),2.48(dd,J＝19.0,11.2Hz,1H),2.21(s,3H),1.84(s,4H),1.75(d,J＝10.3Hz,2H),1.68(s,3H),1.26(s,3H),1.13(s,3H),1.07(s,3H).
实施例15 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Io,R1＝H，R2＝3-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III125mg(0.12mmol)，樟脑磺酸12mg(0.05mmol)，3-甲基-噻吩-2-甲醛60(0.48mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2.4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠6mg(0.096mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体116mg,收率83％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物80mg(0.07mmol)，以3.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵75mg(1.4mmol)，锌粉98mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Io41mg，收率73％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.2Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.45–7.34(m,4H),7.29–7.21(m,1H),7.02(d,J＝5.1Hz,1H),6.72(d,J＝5.0Hz,1H),6.04(t,J＝8.3Hz,1H),5.61(d,J＝7.0Hz,1H),5.17(d,J＝11.5Hz,1H),4.91(d,J＝8.2Hz,1H),4.30(d,J＝5.7Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.19(dd,J＝11.0,6.6Hz,1H),4.15(d,J＝8.5Hz,1H),4.02(d,J＝5.8Hz,1H),3.83(t,J＝10.3Hz,2H),3.67(d,J＝14.0Hz,1H),2.62–2.48(m,1H),2.18(s,3H),2.02(s,3H),1.91(dd,J＝15.5,9.0Hz,1H),1.86(s,3H),1.81–1.74(m,2H),1.72(s,3H),1.19(s,3H),1.09(s,3H).
实施例16 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4-甲基-2-噻吩甲基)胺-丙酰基]-10-脱乙酰基-巴卡丁III(Ip,R1＝H，R2＝4-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物III125mg(0.12mmol)，樟脑磺酸12mg(0.05mmol)，4-甲基-噻吩-2-甲醛60(0.48mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2.4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠6mg(0.096mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体107mg,收率77％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物80mg(0.07mmol)，以3.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入氯化铵75mg(1.4mmol)，锌粉98mg(1.4mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品Ip43mg，收率76.8％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.96(d,J＝7.3Hz,2H),7.74(t,J＝7.3Hz,1H),7.64(t,J＝7.6Hz,2H),7.41(t,J＝6.3Hz,2H),7.34(d,J＝6.9Hz,2H),7.23(t,J＝6.7Hz),6.92(s,1H),6.68(s,1H),6.08(s,1H),5.86(t,J＝8.6Hz,1H),5.40(d,J＝7.1Hz,1H),5.08(d,J＝1.6Hz,1H),5.00(d,J＝7.2Hz,1H),4.94(d,J＝1.8Hz,1H),4.89(d,J＝9.6Hz,1H),4.51(s,1H),4.14–3.92(m,6H),3.63(d,J＝7.1Hz,1H),2.31–2.19(m,1H),2.14(s,3H),2.08(s,3H),1.86–1.76(m,1H),1.73(s,3H),1.70–1.60(m,2H),1.51(s,3H),1.02(s,3H),0.98(s,3H).
实施例17 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻吩-2-甲基)胺基-丙酰基]-巴卡丁III(IIa,R1＝Ac,R2＝噻吩-2-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV300mg(0.32mmol)，樟脑磺酸30mg(0.13mmol)，噻吩-2-甲醛87mg(0.78mmol)，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入4mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应1小时。加入氰基硼氢化钠17mg(0.26mmol)，继续反应4小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体270mg。收率：82％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物270mg(0.27mmol)，以7.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.75ml(13.1mmol)，锌粉285mg(4.38mmol)，于50℃油浴中加热30分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品215mg。甲醇/水(5：1)重结晶，得到纯品白色固体121mg，母液经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝100:1)得到白色固体产品IIa77mg。总收率：89％。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.06(d,J＝7.02H),7.67(t,J＝7.3Hz,1H),7.54(t,J＝7.8Hz,2H),7.48(m,2H),7.43(t,J＝7.8Hz,2H),7.26-7.31(m,1H),7.21(m,1H),6.91(m,2H),6.25(s,1H),6.04(t,J＝8.8Hz,1H),5.60(d,J＝7.0Hz,1H),4.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.35(m,1H),4.26(d,J＝8.5Hz,1H),4.12(d,J＝8.5Hz,1H),4.11-4.13(m,1H),4.06(m,1H),3.81(m,1H),3.68(d,J＝7.0Hz,1H),2.50-2.63(m,2H),2.25(s,3H),2.24(s,3H),1.85(s,3H),1.64(s,3H)，1.20(s,3H)，1.11(s,3H).
实施例18 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻吩-3-甲基)胺基-丙酰基]-巴卡丁III(IIb,R1＝Ac,R2＝噻吩-3-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV450mg(0.49mmol)，樟脑磺酸45mg(0.19mmol)，噻吩-3-甲醛140mg(1.2mmol)，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入8mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应1小时。加入氰基硼氢化钠54mg(0.86mmol)，继续反应4小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体390mg。收率：79％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物390mg(0.39mmol)，以14mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸2.2ml(38.4mmol)，锌粉420mg(6.45mmol)，于50℃油浴中加热30分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品290mg。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝100:1)得到白色固体产品IIb297mg。收率：92％。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.07(d,J＝7.02H),7.68(t,J＝7.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,2H),7.42-7.39(m,4H),7.29-7.23(m,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.01(d,J＝4.5Hz,1H),6.24(s,1H),6.07(t,J＝8.8Hz,1H),5.61(d,J＝7.0Hz,1H),4.92(d,J＝8.5Hz,1H),4.36(m,2H),4.12(d,J＝8.5Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.12(d,J＝8.5Hz,1H),3.96(m,1H),3.80(m,1H),3.69(d,J＝7.5Hz,1H),3.61(d,J＝13.0Hz,1H),2.50-2.54(m,2H),2.23(s,3H),2.19(s,3H),1.88(s,3H),1.64(s,3H),1.22(s,3H),1.11(s,3H).
实施例19 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻唑-4-甲基)胺基-丙酰基]-巴卡丁III(IIc,R1＝Ac,R2＝噻唑-4-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV180mg(0.19mmol)，樟脑磺酸18mg(0.08mmol)，噻唑-4-甲醛53mg(0.47mmol)，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应1小时。加入氰基硼氢化钠10mg(0.16mmol)，继续反应6小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝2:1)得到白色固体140mg。收率：70％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物140mg(0.14mmol)，以5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.8ml(13.96mmol)，锌粉150mg(2.31mmol)，于50℃油浴中加热30分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠调pH至8，蒸出甲醇，用二氯甲烷提取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品108mg。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝100:1)得到白色固体产品IIc88mg。收率：76％。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.78(s,1H),8.05(d,J＝7.52H),7.68(t,1H,J＝7.3Hz),7.55(t,J＝7.8Hz,2H),7.37-7.43(m,4H),7.29-7.21(m,1H),7.05(d,J＝6.0Hz,1H),6.23(s,1H),6.03(t,J＝8.5Hz,1H),5.60(d,J＝7.0Hz,1H),4.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.38-4.36(m,2H),4.11(d,J＝8.5Hz,1H),4.26(d,J＝8.5Hz,1H),4.00-3.95(m,1H),3.97(m,1H),3.82(m,1H),3.68(d,J＝7.0Hz,1H),2.53-2.49(m,2H),2.20(s,3H),2.18(s,3H),1.85(s,3H),1.64(s,3H)，1.21(s,3H)，1.11(s,3H).
实施例20 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(噻唑-5-甲基)胺基-丙酰基]-巴卡丁III(IId,R1＝Ac,R2＝噻唑-5-基,R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV400mg(0.43mmol)，樟脑磺酸40mg(0.17mmol)，噻唑-5-甲醛120mg(1.06mmol)，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入5mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应1小时。加入氰基硼氢化钠22mg(0.35mmol)，继续反应6小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝2:1)得到白色固体360mg。收率：81％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物360mg(0.35mmol)，以10mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸1ml(17.45mmol)，锌粉380mg(5.9mmol)，于50℃油浴中加热30分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠调pH至8，蒸出甲醇，用二氯甲烷提取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品275mg。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝100:1)得到白色固体产品IId238mg。收率：80％。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:8.66(s,1H),8.06(d,J＝7.52H),7.68(t,1H,J＝7.3Hz),7.62(s,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,2H),7.41-7.47(m,4H),7.29-7.23(m,1H),6.25(s,1H),6.07(t,J＝9.0Hz,1H),5.61(d,J＝7.5Hz,1H),4.92(d,J＝8.5Hz,1H),4.37(m,1H),4.12(d,J＝8.5Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.00(m,1H),4.37(m,1H),4.00(m,1H),3.82(m,1H),3.68(d,J＝7.0Hz,1H),2.54-2.50(m,2H),2.23(s,3H),2.21(s,3H),1.85(s,3H),1.65(s,3H)，1.22(s,3H)，1.12(s,3H).
实施例21 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-对甲氧苯基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIe,R1＝Ac,R2＝5-对甲氧苯基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，5-(4-甲氧基苯基)-噻吩-2-甲醛52mg(0.24mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体54mg,收率48％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物42mg(0.037mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉44mg(0.67mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIe21mg，收率59％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝8.0Hz,2H),7.66(t,J＝7.2Hz,1H),7.53(t,J＝7.6Hz,2H),7.48–7.39(m,4H),7.23(d,J＝8.0Hz,3H),6.94(d,J＝3.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.4Hz,2H),6.77(s,1H),6.24(s,1H),6.06(t,J＝8.4Hz,1H),5.83(d,J＝6.8Hz,1H),4.90(d,J＝9.2Hz,1H),4.39–4.29(m,1H),4.24(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(q,J＝7.2Hz,2H),4.06(d,J＝5.6Hz,1H),3.95(d,J＝14.0Hz,1H),3.81(s,3H),3.74(d,J＝14.4Hz,1H),3.68(d,J＝6.8Hz,1H),2.55–2.48(m,1H),2.22(s,3H),2.02(s,3H),1.99–1.88(m,1H),1.83(s,3H),1.77–1.71(m,2H),1.64(s,3H),1.26(s,3H),1.18(s,3H).
实施例22 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4,5-二甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIf,R1＝Ac,R2＝4,5-二甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，4,5-二甲基-噻吩-2-甲醛34mg(0.24mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体73mg,收率69％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物39mg(0.037mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉44mg(0.67mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIf18mg，收率55％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.6Hz),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.39(d,J＝6.1Hz,4H),7.23(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),6.50(s,1H),6.24(s,1H),6.03(t,J＝8.8Hz,1H),5.59(d,J＝7.1Hz,1H),4.92(d,J＝8.1Hz,1H),4.32(t,J＝7.3Hz,1H),4.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(q,J＝6.8Hz,2H),4.02(d,J＝6.5Hz,1H),3.86(d,J＝9.7Hz,1H),3.69(d,J＝7.0Hz,1H),3.62(d,J＝14.0Hz,1H),2.53(dt,J＝16.0,8.5Hz,1H),2.23(s,6H),2.18(s,3H),1.99(s,3H),1.89(dd,J＝15.5,8.9Hz),1.82(s,3H),1.75–1.68(m,2H),1.64(s,3H),1.26(s,3H),1.21(s,3H).
实施例23 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-甲基-4,5-苯并-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIg,R1＝Ac,R2＝3-甲基-4,5-苯并噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，3-甲基-4,5苯并噻吩-2-甲醛42mg(0.24mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体52mg,收率48％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物40mg(0.036mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉47mg(0.72mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIg17mg，收率50％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03(d,J＝7.7Hz,2H),7.69–7.62(m,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.49–7.35(m,5H),7.28(d,J＝6.7Hz,1H),7.25–7.14(m,2H),6.23(s,1H),6.01(t,J＝8.8Hz,1H),5.56(d,J＝7.1Hz,1H),4.89(d,J＝8.3Hz,1H),4.40–4.33(m,1H),4.31(d,J＝5.6Hz,1H),4.23(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(d,J＝8.4Hz,1H),4.02–3.90(m,2H),3.82(d,J＝14.4Hz,1H),3.65(d,J＝7.1Hz,1H),2.48(dd,J＝9.4,6.5Hz,1H),2.22(s,3H),2.16(s,3H),2.15(s,3H),1.87(dd,J＝15.7,9.8Hz,3H),1.80(s,3H),1.63(s,3H),1.19(s,3H),1.09(s,3H).
实施例24 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4,5苯并-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIh,R1＝Ac,R2＝4,5苯并噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，4,5苯并噻吩-2-甲醛39mg(0.24mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体65mg,收率61％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物50mg(0.036mmol)，以2mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.2ml(3.2mmol)，锌粉61mg(0.94mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIh24mg，收率57％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(d,J＝7.8Hz,2H),7.72–7.64(m,1H),7.51(dt,J＝7.6,5.8Hz,3H),7.45–7.34(m,5H),7.27(d,J＝9.6Hz,2H),7.20–7.15(m,2H),7.02(s,1H),6.23(s,1H),6.03(t,J＝8.7Hz,1H),5.57(d,J＝7.1Hz,1H),4.89(d,J＝8.5Hz,1H),4.39–4.34(m,1H),4.32(d,J＝5.4Hz,1H),4.23(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(d,J＝8.4Hz,1H),4.05–3.98(m,2H),3.81(d,J＝14.5Hz,1H),3.66(d,J＝7.0Hz,1H),2.56–2.44(m,1H),2.22(s,3H),2.15(s,3H),1.92–1.83(m,3H),1.81(s,3H),1.63(s,3H),1.20(s,3H),1.09(s,3H).
实施例25 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-(2’-噻吩)-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIi,R1＝Ac,R2＝5-(2’-噻吩)-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，2，2’-双噻吩-2-甲醛47mg(0.24mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体85mg,收率77％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物70mg(0.064mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.3ml(5.2mmol)，锌粉83mg(1.27mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIi32mg，收率54％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(d,J＝7.3Hz,2H),7.66(t,J＝7.3Hz,1H),7.53(t,J＝7.5Hz,2H),7.46–7.33(m,4H),7.26–7.20(m,1H),7.15(d,J＝4.4Hz,1H),7.03(d,J＝2.5Hz,1H),6.98–6.92(m,1H),6.91(d,J＝3.4Hz,1H),6.72(d,J＝3.0Hz,1H),6.25(s,1H),6.07(t,J＝8.5Hz,1H),5.59(d,J＝7.0Hz,1H),4.90(d,J＝8.8Hz,1H),4.37(dd,J＝10.6,6.8Hz,1H),4.32(d,J＝5.7Hz,1H),4.24(d,J＝8.2Hz,1H),4.12(dd,J＝14.0,7.2Hz,1H),4.02(d,J＝5.7Hz,1H),3.91(d,J＝14.3Hz,1H),3.76–3.65(m,2H),2.57–2.46(m,1H),2.22(s,3H),2.18(s,3H),1.94(dd,J＝15.4,9.0Hz,2H),1.83(s,3H),1.74(dd,J＝15.4,9.2Hz),1.64(s,3H),1.19(s,3H),1.10(s,3H).
实施例26 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-溴-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIj,R1＝Ac,R2＝3-溴-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，3-溴-噻吩-2-甲醛76mg(0.4mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体87mg,收率79％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物70mg(0.064mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.3ml(5.2mmol)，锌粉83mg(1.27mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIj37mg，收率62.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09–8.04(m,2H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.43–7.35(m,4H),7.24(d,J＝6.1Hz,1H),7.11(d,J＝5.3Hz,1H),6.83(d,J＝5.3Hz,1H),6.25(s,1H),6.05(t,J＝8.9Hz,1H),5.60(d,J＝7.1Hz,1H),4.92(d,J＝8.0Hz,1H),4.37(dd,J＝10.8,6.6Hz,1H),4.31–4.23(m,2H),4.13(d,J＝8.5Hz,1H),3.98(d,J＝5.8Hz,1H),3.85(d,J＝14.6Hz,1H),3.76–3.65(m,2H),2.52(ddd,J＝16.0,9.7,6.7Hz),2.23(s,3H),2.19(s,3H),1.94–1.88(m,1H),1.82(s,3H),1.72(dd,J＝15.2,9.1Hz,2H),1.64(s,3H),1.22(s,3H),1.11(s,3H).
实施例27 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-氯-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIk,R1＝Ac,R2＝3-氯-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，3-氯-噻吩-2-甲醛35mg(0.4mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体79mg,收率75％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物67mg(0.064mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.3ml(5.2mmol)，锌粉83mg(1.27mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIk32mg，收率57％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.4Hz,2H),7.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.40(d,J＝4.3Hz,4H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.12(d,J＝5.3Hz,1H),6.77(d,J＝5.3Hz,1H),6.25(s,1H),6.05(t,J＝8.8Hz,1H),5.60(d,J＝7.1Hz,1H),4.92(d,J＝8.9Hz,1H),4.38(d,J＝8.9Hz,1H),4.33(d,J＝6.7Hz,1H),4.27(d,J＝8.4Hz,1H),4.14(d,J＝4.3Hz,1H),3.99(d,J＝6.0Hz,1H),3.90(d,J＝14.5Hz,1H),3.76(d,J＝14.5Hz,1H),3.69(d,J＝7.0Hz,1H),2.51(dd,J＝13.1,8.0Hz,1H),2.20(s,3H),2.20(s,3H),1.96–1.88(m,1H),1.83(s,3H),1.76–1.69(m,2H),1.65(s,3H),1.22(s,3H),1.11(s,3H).
实施例28 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4-溴-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIl,R1＝Ac,R2＝4-溴-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，4-溴-噻吩-2-甲醛76mg(0.4mmol)和分子筛50mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体91mg,收率83％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物70mg(0.064mmol)，以3mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.3ml(5.2mmol)，锌粉83mg(1.27mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIl47mg，收率79.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.8Hz,2H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.45–7.33(m,4H),7.22(d,J＝9.0Hz,1H),7.07(s,1H),6.75(s,1H),6.25(s,1H),6.07(t,J＝8.7Hz,1H),5.62(t,J＝6.2Hz,1H),4.93(d,J＝8.7Hz,1H),4.41–4.33(m,1H),4.31(d,J＝8.7Hz,1H),4.27(d,J＝8.5Hz,1H),4.16(d,J＝9.3Hz,1H),4.00(d,J＝5.8Hz,1H),3.88(d,J＝6.0Hz,1H),3.72(d,J＝6.4Hz,1H),3.69(s,1H),2.59–2.48(m,1H),2.24(s,3H),2.19(s,3H),1.96–1.85(m,1H),1.83(s,3H),1.77(dd,J＝15.5,9.2Hz,2H),1.65(s,3H),1.23(s,3H),1.11(s,3H).
实施例29 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIm,R1＝Ac,R2＝5-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，5-甲基-噻吩-2-甲醛30mg(0.24mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体82mg,收率79％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物51mg(0.05mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉52mg(0.8mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIm30mg，收率69％。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.2Hz,2H),7.68(t,J＝7.3Hz,1H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.45–7.32(m,4H),7.25–7.19(m,1H),6.57(d,J＝3.1Hz,1H),6.47(d,J＝2.2Hz,1H),6.25(s,1H),6.06(t,J＝8.8Hz,1H),5.60(d,J＝7.0Hz,1H),4.92(d,J＝8.1Hz,1H),4.38(dd,J＝10.6,6.9Hz,1H),4.28(t,J＝7.5Hz,2H),4.13(d,J＝8.5Hz,1H),3.98(d,J＝5.9Hz,1H),3.87(d,J＝14.1Hz,1H),3.70(d,J＝6.9Hz,1H),3.64(d,J＝14.2Hz,1H),2.52–2.45(m,1H),2.33(s,3H),2.23(s,3H),2.18(s,3H),1.92(dd,J＝15.6,9.0Hz),1.82(s,3H),1.76(dd,J＝15.5,9.3Hz,2H),1.64(s,3H),1.23(s,3H),1.11(s,3H).
实施例30 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(5-乙基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIn,R1＝Ac,R2＝5-乙基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，5-乙基-噻吩-2-甲醛34mg(0.24mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体78mg,收率74％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物52mg(0.05mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉52mg(0.8mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIn27mg，收率62％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.2Hz,2H),7.66(d,J＝7.5Hz,1H),7.58–7.51(m,2H),7.40(d,J＝6.2Hz,5H),6.64(d,J＝2.4Hz,1H),6.54(d,J＝3.0Hz,1H),6.25(s,1H,H-1),6.04(t,J＝8.1Hz,1H),5.60(d,J＝7.1Hz,1H),4.91(d,J＝8.9Hz,1H),4.37(dt,J＝18.5,7.6Hz,2H),4.26(d,J＝8.3Hz,1H),4.12(d,J＝8.1Hz,1H),4.04(d,J＝5.8Hz,1H),3.92(dd,J＝12.7,6.9Hz,1H),3.72–3.65(m,1H),2.57–2.45(m,1H),2.25(s,2H),2.23(s,3H),2.19(s,3H),1.93–1.84(m,1H),1.83(s,3H),1.75(t,J＝12.3Hz,2H),1.64(s,3H),1.22(s,3H),1.21(s,3H),1.11(s,3H).
实施例31 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(3-甲基-2-噻吩亚甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIo,R1＝Ac,R2＝3-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，3-甲基-噻吩-2-甲醛30mg(0.24mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体69mg,收率66.8％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物51mg(0.05mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉52mg(0.8mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIo32mg，收率75％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.4Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.41(d,J＝4.4Hz,4H),7.28(d,J＝4.2Hz,1H),7.05(d,J＝5.0Hz,1H),6.73(d,J＝5.1Hz,1H),6.25(s,1H),6.05(t,J＝8.2Hz,1H),5.60(d,J＝7.0Hz,1H),4.92(d,J＝8.9Hz,1H),4.37(dd,J＝10.8,6.9Hz,2H),4.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.13(d,J＝8.4Hz,1H),4.05(d,J＝6.1Hz,1H),3.91(d,J＝14.4Hz,1H),3.71(t,J＝11.0Hz,2H),2.59–2.45(m,1H),2.23(s,3H),2.21(s,3H),2.01(s,3H),1.96–1.86(m,2H),1.83(s,3H),1.72(dd,J＝12.6,6.0Hz),1.64(s,3H),1.21(s,3H),1.11(s,3H).
实施例32 制备13-[(2’R,3’S)-3’-苯基-2’-羟基-3’-(4-甲基-2-噻吩甲基)胺-丙酰基]-巴卡丁III(IIp,R1＝Ac,R2＝4-甲基-噻吩-2-基，R3＝Ph)
步骤1
在干燥反应瓶中加入化合物IV92mg(0.1mmol)，樟脑磺酸9mg(0.04mmol)，4-甲基-噻吩-2-甲醛30mg(0.24mmol)和分子筛100mg，密封，交换氩气并用氩气球保护，最后加入2mL无水二氯甲烷，室温搅拌条件下反应4小时。加入氰基硼氢化钠5mg(0.08mmol)，继续反应1小时，TLC检测原料点消失。反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱分离(石油醚：丙酮＝5:1)得到白色固体87mg,收率84％。
步骤2
在反应瓶中加入上述步骤1所得化合物51mg(0.05mmol)，以1.5mL无水甲醇溶解，室温搅拌条件下依次加入冰醋酸0.15ml(2.6mmol)，锌粉52mg(0.8mmol)，于45℃油浴中加热10分钟后立即取出反应瓶降至室温，过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液中和，二氯甲烷/甲醇(20:1)混合溶剂提取，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩得到白色固体粗品。经柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1–30:1)得到白色固体产品IIp27mg，收率63.7％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝7.4Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.7Hz,2H),7.47–7.39(m,4H),7.28(d,J＝6.2Hz,1H),6.76(s,1H),6.70(s,1H),6.24(s,1H),6.03(t,J＝8.7Hz,1H),5.59(d,J＝7.0Hz,1H),4.90(d,J＝8.6Hz,1H),4.51–4.44(m,1H),4.36(dd,J＝10.6,6.7Hz,1H),4.26(d,J＝8.4Hz,1H),4.12(d,J＝8.3Hz,2H),4.04(d,J＝14.1Hz,1H),3.75(d,J＝14.2Hz,1H),3.68(d,J＝7.1Hz,1H),2.53(ddd,J＝23.0,14.8,8.1Hz,1H),2.22(s,6H),2.15(s,3H),1.92–1.86(m,2H),1.82(s,3H),1.71(d,J＝9.0Hz,1H),1.64(s,3H),1.20(s,3H),1.11(s,3H).
药理实验
实验例1
对本发明合成的化合物进行五种肿瘤细胞系的细胞毒性筛选，与紫杉醇和多西他赛进行比较。采用的方法是MTT(四氮唑)法。
将对数生长期的各种人癌细胞接种于96孔板，每孔800-1500个细胞，培养24小时后加药，一般每个药物设5个浓度，每个浓度设3个平行孔。在RPMI,1640(GIBCO产品)培养基、37℃、2％CO2条件下培养4天，用Bio-Red450酶标仪，以450和570nm双波长检测，计算细胞生长抑制率，并求IC50(半数抑制浓度)。结果列于表1。
表1化合物Ia-p、IIa-p、紫杉醇和多西他赛对人癌细胞的细胞毒作用
结果表明多数上述化合物具有一定的抗肿瘤活性，其中化合物Ia和IIa活性比较突出。
实验例2
对Ia和IIa进行五种其他肿瘤细胞系的细胞毒性筛选。实验方法与实验例1相同。结果列于表2。
表2化合物Ia、IIa、紫杉醇和多西他赛对其它人癌细胞的细胞毒作用
以上表明化合物Ia和IIa的抗SKOV3卵巢癌活性与紫杉醇和多西他赛相当；IIa的抗MX-1乳腺癌活性与紫杉醇相当，比多西他赛活性高；化合物Ia和IIa抗其余三种肿瘤的活性虽较紫杉醇和多西他赛低，但仍表明具有一定的抗肿瘤活性。
实验例3
采用MX-1型裸鼠移植肿瘤动物模型，对Ia、IIa、发明人前一项相关专利(CN101062925A)所述化合物I-4和I-13进行动物体内活性试验。I-4和I-13的结构如下：
| 化合物 | R<sub>1</sub> | R<sub>2</sub> | R<sub>3</sub> | R<sub>4</sub> |
| Ⅰ<sub>4</sub> | OH | 2-噻唑甲基 | Ph | OH |
| Ⅰ<sub>13</sub> | OAc | 2-噻唑甲基 | Ph | OH |
无菌条件下收集MX-1肿瘤细胞，用灭菌生理盐水调整细胞密度至5×107个/ml，取0.2ml接种于裸鼠腋窝皮下，待肿瘤生长至直径1cm大小，无菌条件下取出，切成1mm×1mm大小的瘤块，均匀接种于裸鼠腋窝皮下。5日后分组给药，每组6-7只。设阴性对照组；Taxol10mg/kg剂量组；Taxoere10mg/kg剂量组；I-4,I-13,Ia和IIa5mg/kg剂量组。隔日腹腔注射给药1次，共给药4次。每隔1-2天称量体重并用游标卡尺测量肿瘤的长度和宽度，按照公式V＝a×b2/2计算出肿瘤的体积，其中a为肿瘤的长度，b为肿瘤的宽度。于接种后第12天，将裸鼠脱臼处死并拍照，剥离肿瘤后，称重、拍照，计算肿瘤相对体积、生长率以及抑制率。
表3化合物Ia、IIa、I-4、I-13、紫杉醇和多西他赛的体内抗肿瘤活性
*：P<0.05；**：P<0.01，***：P<0.001,与阴性对照组比较；#：P<0.05；###：P<0.001,与阴性对照组比较。
实验结果(表3)表明Ia和IIa的体内抗肿瘤活性与紫杉醇和多西他赛相当，明显优于I-4和I-13。
Claims (6)
1.如下化合物及其药学上可接受的盐：
。
2.制备权利要求1化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
R2和R3的定义和权利要求1的定义相同；
1)以具有通式(III)或(IV)所示的已知中间体化合物，与相应的杂环芳醛反应，然后用还原剂还原得到通式(V)或(VI)所示化合物；
2)脱除通式(V)或(VI)所示化合物的Troc保护基，得到相应的化合物(I)或(II)。
3.根据权利要求2的方法，其特征在于，
所述的还原剂选自：氰基硼氢化钠；
所述的脱除Troc保护基选自：以氯化铵和锌粉处理。
4.一种药物组合物，其特征在于，包括有效剂量的权利要求1化合物或其药学上可接受的盐和药效学可接受的载体。
5.权利要求1化合物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自黑色素瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、肝癌、口腔表皮癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、膀胱癌。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |