CN104962654A - lncRNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用 - Google Patents

lncRNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了lncRNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变(PVR)诊断试剂中的应用。本发明还提供了一种PVR诊断的MALAT1检测试剂盒。该试剂盒包括RNA抽提体系、反转录反应体系和PCR反应体系。本发明的试剂盒利用实时荧光定量PCR方法，通过检测血清或者血浆中MALAT1的相对含量，进行PVR的早期诊断。该方法具有创伤性小，操作方便等特点。

Description

lncRNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用
技术领域
本发明属于医学生物检测技术领域，具体涉及lncRNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用以及一种辅助PVR疾病早期诊断的MALAT1试剂盒，及其在辅助PVR的早期诊断中的应用和检测方法。
背景技术
增生性玻璃体视网膜病变(PVR)常见于过强的冷凝、电凝、外伤后、巨大视网膜裂孔、多发视网膜裂孔、长期孔源性视网膜脱离、多次眼内手术、眼外伤以及眼内炎症等，其潜在的危险因素尚不十分肯定，发病机制十分复杂。因此，PVR疾病的早期诊断仍然是眼科学家面临的最严峻挑战之一，然而迄今为止，并没有特异性强用于PVR疾病辅助诊断的生物学指标。
PVR目前的治疗主要是采用玻璃体手术治疗。手术中应用膜剥除、视网膜切开或切除、眼内光凝等使视网膜复位，然后用长效气体或硅油充填。虽然在大多数病例，手术中通常可以使视网膜复位，但术后眼内细胞增生复发，仍是手术失败的主要原因。在体外或动物实验的药物包括糖皮质激素和抗代谢药，以及放射疗法等，显示了不同程度的效果。然而在临床应用过程仍然是收效甚微。因此，亟需寻找PVR发生的生物标记物，对PVR发生和患者的预后判断进行科学地判断。
长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，它们并不编码蛋白，而是以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达水平。在许多人类疾病发生过程，包括肿瘤、心血管、神经系统和血液疾病等发生过程发生异常表达。最近研究表明，部分lncRNA可以形成稳定的二级结构，稳定地存在于血清/血浆中，使其免受血液中大量存在的RNase的降解，表现出高度地稳定性。
肺腺癌转移相关转录子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1，NCBI Reference Sequence:NR_002819.2)属于LncRNA家族成员，编码基因定位于染色体11q13.1，普遍表达于人类和鼠的组织细胞中，尤以神经系统突出。MALAT1最早于2003年由Ji等(Ji P,Diederichs S,Wang W,et al.MALAT-1,a novel noncodingRNA,and thymosin beta4predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.Oncogene,2003,22:8031-41)在观察早期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的转移现象时被发现，并因此得名。后诸多研究显示，MALAT1与乳腺、胰腺、肺、结肠、前列腺和肝脏等组织恶性肿瘤均显著相关。
目前，尚无lncRNA-MALAT1作为增生性玻璃体视网膜病变早期诊断的生物学标记物的报道。
发明内容
本发明目的在于提供了lncRNA-MALAT1的新的用途，可作为诊断试剂用于增生性玻璃体视网膜病变的诊断，特别是增生性玻璃体视网膜病变的早期诊断。
本发明具体技术方案如下：
核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的lnc RNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用。
本发明的另一个目的在于提供一种增生性玻璃体视网膜病变诊断的lnc RNA-MALAT1检测试剂盒，包括RNA抽提体系、RNA反转录反应体系和PCR反应体系，其中PCR反应体系含有特异性扩增如权利要求1所述SEQ ID NO:1基因序列的引物序列。进一步的，所述引物序列为MALAT1特异性的qRT-PCR的上下游引物。
上述检测试剂盒，所述RNA抽提体系包括RNA抽提试剂；RNA逆转录反应体系包括反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂；PCR反应体系包括扩增系统和引物系统，所述扩增系统为SYBR Premix Ex TaqTM试剂；所述引物系统包括RNA反转录随机引物和MALAT1特异性的qRT-PCR的引物，其中，
上述RNA反转录随机引物可以选择GAPDH和/或Beta-tubulin的定量PCR引物序列。
GAPDH定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示；
Beta-tubulin定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:6所示，下游引物序列如SEQID NO:7所示；
MALAT1特异性的qRT-PCR的上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示。
上述检测试剂盒，包括：
(a)抽提体系：
1)Trizol reagent，1管，2000μL/管；
2)氯仿，1管，500μL/管；
3)无水乙醇,1管，8000μL/管；
4)DEPC ddH2O，1管，1000μL/管；
5)ddH2O，1管，2000μL/管；
6)异丙醇，8000μL/管；
(b)反转录体系：
1)总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random6mers)，1管，浓度：50μM，50μL/管；
2)反转录酶(200U/μL)50μL；
3)dNTP Mixture(10mM each)50μL；
4)反转录buffer 50μL；
(c)PCR体系：
1)SYBR Premix Ex Taq酶；
2)buffer 100μL；
3)MALAT1特异性的qRT-PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
MALAT1特异性的qRT-PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
和/或，Beta-tubulin定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
Beta-tubulin定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
4)dNTP Mixture(10mM each)50μL。
本发明采用Agilent公司lncRNA microarray筛选出PVR疾病的视网膜增殖膜和其他眼科疾病的视网膜增殖膜的差异表达谱，并联合应用定量PCR方法验证芯片分析结果。最后，选用lncRNA分子MALAT1作为生物标记物，用于辅助PVR疾病的早期诊断。
本发明中确定lncRNA-MALAT1作为PVR疾病早期诊断的生物标记物包括如下步骤：
第一步：样本准备：眼科玻璃体手术后的视网膜前膜标本(实验组，n＝30)和白内障增殖膜标本(对照组，n＝30)，RNA采用TRIzol(Invitrogen)试剂提取，并保存于-80℃备用。
第二步：差异表达lncRNA筛选：采用美国Aglient公司的lncRNA表达谱芯片，分析PVR疾病发生相关的lncRNA；分析具体步骤为：采用标记酶将荧光基团标记lncRNA，得到用于与芯片杂交的荧光探针，在标注条件下使用MAUI杂交仪和芯片杂交；使用GenePix 4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度，并将实验结果转换成数值型数据进行保存；采用Genespring GX软件分析找出PVR发生相关的lncRNA分子；这时会筛选出一系列的差异表达lncRNA，然后结合GO和KEGG信号通路分析，结合TRANSFAC和catRAPID数据库，根据t-test unequal unpaired算法，将P＜0.05且差异倍数在2倍以上的lncRNA确定为差异表达lncRNA，最终确定lncRNA-MALAT1为与增生性玻璃体视网膜病变相关的研究靶点。
第三步：采用定量PCR验证芯片分析的实验结果。
第四步：验证靶点lncRNA-MALAT1在PVR病人、正常人和手术治疗PVR病人血浆和血细胞内的表达差异。
第五步：基于体外细胞实验，从基本原理方面揭示lncRNA-MALAT1通过调控RPE细胞的增殖和迁移，进而确证其参与PVR病理过程的调控。
本发明的另一目的在于提供lnc RNA-MALAT1反义核苷酸在制备治疗增生性玻璃体视网膜病变药物中的应用。
lnc RNA-MALAT1反义核苷酸与靶lnc RNA-MALAT1互补，抑制或封闭基因的转换和表达，或诱导Rnase H识别或切割lnc RNA-MALAT1，使其丧失功能，因此可以作为药物用于治疗增生性玻璃体视网膜病变。
本发明证明通过定量PCR技术，检测患者血浆或血清中MALAT1的表达来实现早期PVR的诊断是完全可行的。
本发明的试剂盒还适用于：根据患者年龄、病史以及局部体征初步怀疑为PVR的患者。
用本发明的试剂盒分别检测若干已知的PVR患者及若干的正常患者血浆或血清中MALAT1含量，同时测定内参基因的表达，计算出ΔCt＝目的基因Ct均数-参照基因Ct均数；根据ΔCt的范围，确定出PVR发生的易感性。
本发明的试剂盒是首次利用定量PCR方法，通过检测血浆或者血清中MALAT1含量，以辅助PVR的诊断，具有创伤性小和操作性强的特点，使得lncRNA-MALAT1有望成为生物标记物对PVR发生和患者的预后判断进行科学地判断。
附图说明
图1为PVR相关的lncRNA筛选流程图。
图2为lncRNA芯片分析筛选PVR疾病有关的lncRNA并进行验证的结果图(图A为箱线图分析芯片分析芯片分析的质量，其中每10个样本混合构成一个生物学重复，消除个体差异；图B为散点图从整体上显示PVR增殖膜与对照样本的lncRNA表达差异；图C为火山图筛选PVR相关的lncRNA；图D为定量PCR验证芯片分析结果)。
图3为验证lncRNA-MALAT1在人类PVR增殖膜内的表达。(图A为定量PCR分析MALAT1在人类增殖膜中的表达；图B为定量PCR技术分析PVR相关的已报道基因的表达变化(作为阳性对照分析))。
图4为分析lncRNA-MALAT1在PVR病人血液标本(血清和血细胞)的表达(图A和图B分别为定量PCR技术分析lncRNA-MALAT1在正常人和PVR病人血浆和血细胞的表达差异；图C和图D分别为定量PCR技术分析lncRNA-MALAT1在正常人和PVR手术后病人血浆和血细胞的表达差异)。
图5为分析lncRNA-MALAT1干预对PVR相关病理过程的影响(图A为MTT方法测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的细胞活力影响；图B和C为台盼蓝方法测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的存活的影响；图D和图E为JC-1染色测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的线粒体膜电位的影响；图F为细胞迁移实验分析lncRNA-MALAT1干预对RPE的迁移的影响)。
具体实施方案
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
实施例1lncRNA-MALAT1与增生性玻璃体视网膜病变相关性验证
(1)lncRNA芯片分析筛选PVR疾病有关的lncRNA并进行验证，具体流程如图1所示。
第一步：样本准备：眼科玻璃体手术后的视网膜前膜标本(实验组，n＝30)和白内障增殖膜标本(对照组，n＝30)，总RNA采用TRIzol(Invitrogen)试剂提取，并保存于-80℃备用。
第二步：差异表达lncRNA筛选：
采用美国Aglient公司的lncRNA表达谱芯片，分析PVR疾病发生相关的lncRNA；分析具体步骤为：采用标记酶将荧光基团标记lncRNA，得到用于与芯片杂交的荧光探针，在标注条件下使用MAUI杂交仪和芯片杂交；使用GenePix 4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度，并将实验结果转换成数值型数据进行保存；各个样本的分布如图2的图A和B所示，图A为箱线图分析芯片分析芯片分析的质量，其中每10个样本混合构成一个生物学重复，消除个体差异；图B为散点图从整体上显示PVR增殖膜与对照样本的lncRNA表达差异。采用Genespring GX软件分析找出PVR发生相关的lncRNA分子，筛选出一系列的差异表达lncRNA，如图2的图C所示，图C为火山图筛选PVR相关的lncRNA。
第三步：采用定量PCR验证芯片分析的实验结果，验证结果如图2的图D所示；然后结合GO和KEGG信号通路分析，结合TRANSFAC和catRAPID数据库，根据t-testunequal unpaired算法，将P＜0.05且差异倍数在2倍以上的lncRNA确定为差异表达lncRNA，最终确定lncRNA-MALAT1为与增生性玻璃体视网膜病变相关的靶点，并且MALAT1在基因芯片上对应的多个探针位点均检测到MALAT1的差异表达，进一步表明MALAT1与PVR疾病相关。
第四步：收集临床病人的样本，包括PVR增殖膜和PVR增殖膜(实验组)和白内障前膜(对照组)；采用Trizol试剂提取总RNA，通过反转录PCR的方法得到总RNA的cDNA；通过定量PCR的方法，检测靶点lncRNA-MALAT1在PVR增殖膜(实验组)和白内障前膜(对照组)的表达差异，结果如图3所示，图A为定量PCR分析MALAT1在人类增殖膜中的表达；图B为定量PCR技术分析PVR相关的已报道基因的表达变化(作为阳性对照分析))，结果表明MALAT1特异地在PVR增殖膜上调；同时检测了一系列表达规律已知的基因，例如PDGFA、PDGFC和KNG1等，结果发现MALAT1与PVR增殖膜上调基因的表达规律一致；
收集PVR病人、正常人和手术治疗PVR病人的血液，通过离心方法获得血浆和血细胞组分；采用Trizol试剂提取总RNA，通过反转录PCR的方法得到总RNA的cDNA；通过定量PCR的方法，检测靶点lncRNA-MALAT1在PVR病人、正常人和手术治疗PVR病人内的表达差异，如图4所示，图A和图B分别为定量PCR技术分析lncRNA-MALAT1在正常人和PVR病人血浆和血细胞的表达差异；图C和图D分别为定量PCR技术分析lncRNA-MALAT1在正常人和PVR手术后病人血浆和血细胞的表达差异，结果表明MALAT1的表达与PVR严重性呈现正相关，且手术治愈后MALAT1表达明显下调。
第五步：基于体外细胞实验，从基本原理方面揭示lncRNA-MALAT1通过调控RPE细胞的增殖和迁移，进而确证其参与PVR病理过程的调控。其中通过MTT实验测定不同实验分组的细胞活力；采用台盼蓝染色技术测定细胞的存活率；采用JC-1荧光染料的染色方法，通过酶标仪和荧光显微镜观察细胞膜电位的变化；采用细胞的划痕实验，分析细胞的迁移能力。如图5所示，图A为MTT方法测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的细胞活力影响；图B和C为台盼蓝方法测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的存活的影响；图D和图E为JC-1染色测定lncRNA-MALAT1干预对RPE的线粒体膜电位的影响；图F为细胞迁移实验分析lncRNA-MALAT1干预对RPE的迁移的影响。MTT实验结果表明，MALAT1的敲低影响RPE的细胞活力；台盼蓝实验结果表明，MALAT1的敲低影响RPE的存活；细胞膜电位测定结果表明，MALAT1的敲低影响RPE的凋亡；划痕实验结果表明，MALAT1的敲低影响RPE的迁移。
实施例2：制备本发明的试剂盒
MALAT1的序列如SEQ ID:NO:1所示，其特异性定量PCR上下游引物以及内参GAPDH和/或Beta-tubulin的定量PCR上下游引物，通过Primer5设计，由Invitrogen公司负责引物合成，纯度为PAGE级，合成后的引物采用DEPC H2O溶解，总浓度为10μM。
制备包括以下组成成分的试剂盒：
(a)抽提体系
1)Trizol reagent，1管，2000μL/管；
2)氯仿，1管，500μL/管；
3)无水乙醇,1管，8000μL/管；
4)DEPC ddH2O，1管，1000μL/管；
5)ddH2O，1管，2000μL/管；
6)异丙醇，8000μL/管；
(b)反转录体系
1)总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random6mers)，1管，浓度：50μM，50μL/管；
2)反转录酶(200U/μL)50μL；
3)dNTP Mixture(10mM each)50μL；
4)反转录buffer 50μL；
(c)PCR体系
1)SYBR Premix Ex Taq酶；
2)buffer 100μL；
3)MALAT1特异性的qRT-PCR的上游引物(SEQ ID NO:4)，1管，10μM，100μL/管；
MALAT1特异性的qRT-PCR下游引物(SEQ ID NO:5)，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR上游引物(SEQ ID NO:2)，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR下游引物(SEQ ID NO:3)，1管，10μM，100μL/管；
和/或，Beta-tubulin定量PCR上游引物(SEQ ID NO:6)，1管，10μM，100μL/管；
Beta-tubulin定量PCR下游引物(SEQ ID NO:7)，1管，10μM，100μL/管；
4)dNTP Mixture(10mM each)50μL。
实施例3：本发明的试剂盒检测
一、血浆和血细胞样本的分离
收集获得被检查个体及其作为参考的健康个体的血液样本，使用肝素抗凝管，采用离心方式从中分离血清和血细胞，用于lncRNA的检测。离心条件为4℃，12,000rpm,10min。
二、血浆和血细胞样本的RNA提取
分别在分离的血细胞和血浆样本中，使用本发明所述试剂盒的总RNA抽提体系，加入TRIzol后室温放置10min，使样品充分裂解(注：如不进行下一步操作，样品可放入-70℃长期保存)。每1ml TRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5min使其自然分相。4℃12,000rpm离心15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中。在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15min。4℃12,000rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。RNA沉淀中加入1ml75％乙醇(用RNase-free水配制)，温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml TRIzol加入1ml75％乙醇。4℃8,000rpm离心5min，弃上清。室温放置晾干后，在沉淀内加入50μl RNase-free水，以充分溶解RNA，-70℃保存。
三、RNA质量检测
在260nm和280nm吸光度处，采用紫外分光光度计测定RNA的浓度；RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。同时，结合琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，紫外透射光下观察并拍照。
四、RNA逆转录获得cDNA样本
逆转录采用本发明所述试剂盒的RNA逆转录逆转体系：PrimeScriptTM RT reagent Kit，取体系20μl分别加入：
将以上体系置于无Rnase的0.2μl EP管中，按下面程序反转为cDNA：37℃15min,85℃，5sec,得到的cDNA放于-20℃中保存。
四、实时荧光定量PCR
取本发明所述试剂盒的PCR反应体系(50μl)，配置如下：SYBR Green Mix 25μl，MALAT1特异性的qRT-PCR的上游引物、MALAT1特异性的qRT-PCR下游引物、GAPDH定量PCR上游引物、GAPDH定量PCR下游引物各1μl，和/或Beta-tubulin定量PCR上游引物、Beta-tubulin定量PCR下游引物各1μl，dNTP 2μl,待测样品cDNA2μl，ddH2O 19μl。
PCR条件：
92℃5min,(92℃，30s；56℃，30s；72℃，30s 38个循环)，72℃，5min。
五、数据分析
基因表达值用Delta Ct的方法计算，假设目的和参照基因扩增效率都接近100％且相对偏差不超过1Ct；ΔCt＝目的基因Ct均数-参照基因Ct均数；其中参照基因选择内参基因，GAPDH和/或Beta-tubulin；分别确定健康人和PVR病人的ΔCt范围。
六、结果判断
计算出待测样本的ΔCt，分析其是否在健康人的正常范围内，若待测样本的ΔCt在健康人的ΔCt范围内，或者大于该ΔCt范围，认为待测样本为PVR阴性；若待测样本ΔCt小于健康人ΔCt的范围，认为其为PVR阳性。健康人的ΔCt范围如表1所示。
表1：健康人的ΔCt范围
MALAT1Ct均数-GAPDH Ct均数 MALAT1Ct均数-Tubulin Ct均数
血浆样本 5.5-7.2 8.2-10.6
血细胞样本 3.8-5.8 5.1-7.3
根据上述结果，同时对照实际临床病理分析诊断的结果，分别选取30例未知的临床样本，评价基于MALAT1的方法检测的准确率，结果如表2所示。结果表明lncRNA-MALAT1可作为作为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)诊断的生物学标记物用于PVR病变的诊断。
表2：基于MALAT1的方法检测的准确率
MALAT1Ct均数-GAPDH Ct均数 MALAT1Ct均数-Tubulin Ct均数
血浆样本 78.60％ 72.80％
血细胞样本 83.10％ 86.50％

Claims (6)

1.核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的lnc RNA-MALAT1在制备增生性玻璃体视网膜病变诊断试剂中的应用。
2.一种增生性玻璃体视网膜病变诊断的lnc RNA-MALAT1检测试剂盒，其特征在于试剂盒包括RNA抽提体系、RNA反转录反应体系和PCR反应体系，其中PCR反应体系含有特异性扩增如权利要求1所述SEQ ID NO:1基因序列的引物序列。
3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于所述引物序列为MALAT1特异性的qRT-PCR的上下游引物。
4.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于所述RNA抽提体系包括RNA抽提试剂；RNA逆转录反应体系包括反转录酶、反转录体系缓冲液和RNA酶抑制剂；PCR反应体系包括扩增系统和引物系统，所述扩增系统为SYBR Premix Ex TaqTM试剂；所述引物系统包括RNA反转录随机引物和MALAT1特异性的qRT-PCR的引物，其中，
RNA反转录随机引物为GAPDH和/或Beta-tubulin的定量PCR引物序列，
GAPDH定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ IDNO:3所示；
MALAT1特异性的qRT-PCR的上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示；
Beta-tubulin定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:6所示，下游引物序列如SEQID NO:7所示。
5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：
(a)抽提体系：
1)Trizol reagent，1管，2000μL/管；
2)氯仿，1管，500μL/管；
3)无水乙醇,1管，8000μL/管；
4)DEPC ddH2O，1管，1000μL/管；
5)ddH2O，1管，2000μL/管；
6)异丙醇，8000μL/管；
(b)反转录体系：
1)总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random 6 mers)，1管，浓度：50μM，50μL/管；
2)反转录酶(200U/μL)50μL；
3)dNTP Mixture(10mM each)50μL；
4)反转录buffer 50μL；
(c)PCR体系：
1)SYBR Premix Ex Taq酶；
2)buffer 100μL；
3)MALAT1特异性的qRT-PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
MALAT1特异性的qRT-PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
GAPDH定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
和/或，Beta-tubulin定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管；
Beta-tubulin定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管；
4)dNTP Mixture(10mM each)50μL。
6.如权利要求1所述的lnc RNA-MALAT1反义核苷酸在制备治疗增生性玻璃体视网膜病变药物中的应用，其反义核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
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