CN104946568B - 一株耐重金属的多环芳烃降解菌、组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株耐重金属的多环芳烃降解菌、组合物及其用途。所述菌为浅黄分枝杆菌Mycobacterium gilvum，保藏号为CGMCC No.10941。所述菌可用于去除或降解多环芳烃，尤其是去除或降解土壤、水环境中的多环芳烃；还可以用于在多环芳烃污染的土壤、水环境中生物修复，尤其是重金属及多环芳烃复合污染的土壤或水。同时所述菌与表面活性剂协同可增强去除或降解多环芳烃的能力。

Description

一株耐重金属的多环芳烃降解菌、组合物及其用途

技术领域

本发明涉及微生物工程领域，尤其涉及一株耐重金属的多环芳烃降解菌、组合物及其用途。

背景技术

土壤是污染物的源和汇，随着工业化进程的加速，土壤污染的现象日趋严重。当前环境中无机污染物及有机污染物复合存在的现象较为普遍。复合污染场地中的无机污染主要是重金属元素含量超标，而这些重金属主要是汞、镉、铬、铜、锌、铅、镍、砷、硒等。复合污染场地中有机污染物主要包括有机氯农药(OCPs)、多环芳烃（PAHs)、多氯联苯(PCBs)、邻苯二甲酸酯（PAEs）等。其中多环芳烃（Polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs)是土壤中一类典型的持久性有机污染物，具有致癌、致畸、致突变的“三致”作用。多环芳烃具有生物累积性，可以通过食物链和食物网威胁到生态安全和人体健康。早在上世纪八十年代，美国环保局（USEPA）将16种PAHs列为环境中优先监控的污染物。

如上所述，土壤中重金属污染、有机物污染及两者复合污染的现象越来越普遍。当前已有较多的重金属耐受菌或多环芳烃降解菌从污染场地中被筛选分离出来，但能耐受重金属同时又具备多环芳烃降解能力的微生物则少有报道。因此，针对重金属及多环芳烃复合污染场地中多环芳烃的的去除，同时具有良好的重金属耐受性及高效多环芳烃降解能力微生物的筛选、分离至关重要。

当前已分离到较多的多环芳烃降解菌，但针对实际的多环芳烃污染和老化严重的场地，因多环芳烃生物有效性低而难以被功能微生物利用而去除，使得微生物修复技术在此类场地中的运用受限制。表面活性剂是一类能显著降低界面张力的物质，对难溶有机化合物（HOCs）具有增溶的作用，因此可向土壤中添加表面活性剂“活化”老化的多环芳烃。因此，具有良好的重金属耐受性及高效多环芳烃降解能力微生物在表面活性剂协同作用下去除污染场地中的多环芳烃是针对解决上述有机无机复合污染土壤中多环芳烃去除的一种可行的手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能耐受重金属的多环芳烃降解菌。

为实现上述目的，本发明提供一株耐重金属的多环芳烃降解菌，其特征在于，所述菌株为浅黄分枝杆菌Mycobacterium gilvum，保藏号为CGMCC No.10941。

进一步，所述降解菌的16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

进一步，所述重金属为Cu、Cd、Pb、Zn、As中的一种或一种以上。

进一步，所述多环芳烃为萘、芴、菲、蒽、荧蒽、芘中的一种或一种以上。

另一方面，本发明保护所述耐重金属的多环芳烃降解菌用于去除或降解多环芳烃的用途。

进一步，所述用途是指去除或降解土壤、水环境中的多环芳烃的用途。

进一步，所述土壤、水为重金属污染的土壤、水。

另一方面，本发明保护所述耐重金属的多环芳烃降解菌在多环芳烃污染的土壤、水环境中生物修复中的应用。

进一步，所述土壤、水有多环芳烃或重金属和多环芳烃复合污染。

另一方面，本发明还保护一种菌株组合物，其特征在于，由菌株CGMCC No.10941和表面活性剂Brij 30组成；

优选的，所述菌株补充保藏信息和表面活性剂Brij 30的用量为，表面活性剂Brij30在土壤悬液中含量为10-30g/L，游离菌MI的添加量为以10⁹-10¹¹ CFU/g 土壤的接种量接种所述菌株。

另一方面，本发明保护一种去除污染土壤中多环芳烃去除的方法，其特征在于，采用表面活性剂Brij 30 协同菌株CGMCC No.10941去除污染土壤中的多环芳烃优选的，所述菌株CGMCC No.10941和表面活性剂Brij 30的用量为，表面活性剂Brij 30在土壤悬液中含量为10-30g/L，游离菌MI的添加量为以10⁹-10¹¹ CFU/g 土壤的接种量接种所述菌株。

本发明所述菌株的菌落橘黄色，圆形，表面凸起，干燥，不透明，边缘整齐。菌体呈短杆状，0.4 μm × 0.8 – 1.5 μm，单个或成对排列，革兰氏阳性（见图1和图2）。能够利用葡萄糖酸钾和甘露醇为碳源，可以自甘油、D-果糖、肌醇、甘露醇产酸，过氧化氢酶、脲酶实验阳性，β-半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶实验阴性，吐温80水解阳性，七叶苷水解、明胶水解阴性，硝酸盐还原阳性，45℃不能生长。菌株16srDNA测序序列如SEQ ID NO:1所示，测序由上海美吉生物医药科技有限公司完成。经过NCBI BLAST比对，同源性为99%。

在初始含量均为50mg/L的萘、苊、二氢苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并芘9中多环芳烃中，本发明所述菌株不能降解其中的苊、二氢苊、苯并芘，但菌株对萘、芴、菲、蒽、荧蒽、芘在第四天和第八天均能对进行有效降解。本发明所述菌株具有广泛的底物广谱性。

本发明所述菌株对初始浓度50mg/L的芘在第4天降解率可达57.85%，第9天时可达96.76%。

本发明所述菌株对多环芳烃具有较高的耐受浓度。对于初始浓度分别为50、75、100、200mg/L的芘，接种等量的本发明所述菌株，在相同时间内，随着培养体系中芘含量的增加，菌株对芘的去除量增加，由此表明在所实验的浓度中，菌株能适应环境中含量高达200mg/L的芘。

本发明所述菌株在Cu²⁺浓度为5-100 mg/L培养液中生长良好；

本发明所述菌株在Cd²⁺浓度为0.5-50 mg/L培养液中生长良好；

本发明所述菌株在Pb²⁺浓度为1-500 mg/L培养液中生长良好；

本发明所述菌株在Zn²⁺浓度为0.5-100 mg/L培养液中生长良好；

本发明所述菌株在As³⁺浓度为0.5-1mM/L培养液中生长良好；

本发明所述菌株在As⁵⁺浓度为2.5-10 mM/L培养液中生长良好。

综上，本发明的菌株在5-100 mg/L Cu²⁺；0.5-50 mg/L Cd²⁺，1-500 mg/L Pb²⁺，0.5-100 mg/L Zn²⁺，0.5-1mM/L As³⁺； 2.5-10 mM/L As⁵⁺浓度中生长良好，即菌株对上述重金属具有良好的耐受性。

所述菌株保藏信息：

保藏机构：中国普通微生物菌种保藏管理中心，简称CGMCC；

保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；

保藏日期：2015年6月1日；

保藏编号：CGMCC No.10941。

保藏菌株分类命名为：浅黄分枝杆菌Mycobacterium gilvum。

附图说明

图1是Mycobacterium gilvum生长于LB平板形态图。

图2是Mycobacterium gilvum扫描电镜图（放大5000倍）。

图3是菌株系统发育树图。

图4是Mycobacterium gilvum菌株降解多环芳烃的底物广谱性试验结果图。

图5是Mycobacterium gilvum菌株对芘的降解试验结果图。

图6是Mycobacterium gilvum菌株对培养液中不同初始含量的芘去除量试验结果图。

图7是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度Cu²⁺中的生长曲线图。

图8是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度Cd²⁺中的生长曲线图。

图9是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度Pb²⁺中的生长曲线图。

图10是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度Zn²⁺中的生长曲线图。

图11是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度As³⁺中的生长曲线图。

图12是Mycobacterium gilvum菌株在不同浓度As⁵⁺中的生长曲线图。

图13是添加表面活性剂后Mycobacterium gilvum菌株对16 EPA-PAHs的去除效率图。

图14是添加表面活性剂后Mycobacterium gilvum菌株对芘的去除效率图。

图15是添加表面活性剂后Mycobacterium gilvum菌株对荧蒽的去除效率图。

图16是添加表面活性剂后Mycobacterium gilvum菌株对菲的去除效率图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

以下实施例所用培养基配方为：

所述Mycobacterium gilvum的LB培养基成份为：胰蛋白胨 10g/L,酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L。

所述LB培养基固体平板成份为：胰蛋白胨 10g/L,酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，15g/L纯化琼脂粉。

所述MSM培养液的成分为：K₂HPO₄ 6.0g/L, KH₂PO₄ 5.5g/L ,Na₂SO₄ 2.0g/L ,KCL2g/L , MgSO₄.7H₂O 0.2g/L, 1ml微量金属盐溶液/L。所述微量金属盐溶液配方为：N(CH₂COOH)₃ 1.5g/L, MnSO₄.H₂O 0.5g/L, NaCl 1.0g/L, FeSO₄.7H₂O 0.1g/L, CoSO₄.7H₂O0.18g/L, CaCl₂.2 H₂O 0.1g/L, ZnSO₄.7H₂O 0.18g/L, CuSO₄.5H₂O 0.01g/L, KAl(SO₄)₂.12H₂O 0.02g/L, H₃BO₃ 0.01g/L, Na₂MoO₄.2 H₂O 0.01g/L, NiCl₂.6H₂O 0.025g/L,Na₂SeO₃ .5H₂O 0.3g/L。pH值为7.8。

所述MSM培养基固体平板的成份为：上述MSM培养液成份，15g/L纯化琼脂粉。

以下实施例所用本发明菌株（浅黄分枝杆菌Mycobacterium gilvum）简称M1菌。

实施例1：菌株的筛选与分离

富集培养：以北京焦化厂多环芳烃污染土壤为菌源，称取10g土壤，加入90ml无菌水和0.5 g玻璃珠，在180r/min，30℃摇床中震荡3h，静置30min后，取上清液5ml接种到含芘50mg/L己灭菌的45ml MSM培养液中,30℃,180 r/min摇床培养。每隔10天转接5ml培养液于45ml芘浓度梯度成100、200、300、500mg/L递增的新鲜灭菌MSM培养液,经过5次转接完成多环芳烃降解菌的富集。

菌株筛选：取一定量最后一次富集培养液涂布于MSM固体平板后，平板倒扣于装有芘的烧杯中，采用升华法在MSM固体平板铺上一层芘膜。涂有芘膜的平板置于30℃恒湿培养箱中培养，培养期间多次观察，出现透明圈的菌落即为芘降解菌。

菌株分离纯化：挑选出现透明圈的菌落，经过多次平板划线分离得到降解菌的纯菌株，菌株名记为MI。MI用LB培养基30℃培养7天，菌落橘黄色，圆形，表面凸起，干燥，不透明，边缘整齐。菌体呈短杆状，0.4 μm × 0.8 – 1.5 μm，单个或成对排列，革兰氏阳性（见图1和图2）。能够利用葡萄糖酸钾和甘露醇为碳源，可以自甘油、D-果糖、肌醇、甘露醇产酸，过氧化氢酶、脲酶实验阳性，β-半乳糖苷酶、精氨酸双水解酶实验阴性，吐温80水解阳性，七叶苷水解、明胶水解阴性，硝酸盐还原阳性，45℃不能生长。

菌株16srDNA测序（上海美吉生物医药科技有限公司）序列如SEQ ID NO:1所示。经过NCBI BLAST比对，同源性为99%。

SEQ ID NO:1序列为：

GGGGTTAGGCCACCGGCTTCGGGTGTTACCGACTTTCATGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCGTTGCTGATCTGCGATTACTAGCGACTCCGACTTCACGGGGTCGAGTTGCAGACCCCGATCCGAACTGAGACCGGCTTTGAAAGGATTCGCTCCACCTCACGGCATCGCAGCCCTTTGTACCGGCCATTGTAGCATGTGTGAAGCCCTGGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCTCACGAGTCCCCACCATAACGTGCTGGCAACATGAGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGCACACAGGCCACAAGGGAACCGACATCTCTGCCGGCGTCCTGTGCATGTCAAACCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTTCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGTACTTAATGCGTTAGCTACGGCACGGATCCCAAGGAAGGAAACTCACACCTAGTACCCACCGTTTACGGCGTGGACTACCAAGGTATATAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACTGCCCAGAGACCCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTCCACGCTACACAGAATTCCAGTCTCCCCTGCAGTACTCAAGTCTGCCCGTATCGCCCGCACGCCCACAGTTAAGCTGTGAGTTTTCACGAACAACGCGACAAACCACCTACGAGCTCTTTACGCCCAGTAATTCCGGACAACGCTCGGACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTGGCCGGTCCTTCTTCTCCAGGTACCGTCACTTGCGCTTCGTCCCTGGCGAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTATCTCAGTCCCAGTGTGGCCGGTCACCCTCTCAGGCCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTAAGCCATTACCTCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGGGCCCATCCCACACCGCAAAAGCTTTCCACCACACACCATGAAGCATGCGGTCCTATTCGGTATTAGACCCAGTTTCCCAGGCTTATCCCAAAGTGCAGGGCAGATCACCCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTCGAGTACCCCGAAGGGC

菌株经CICC鉴定为浅黄分支杆菌（Mycobacterium gilvum）

鉴定单位信息：中国工业微生物菌种保藏管理中心，简称CICC，地址为北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼，中国食品发酵工业研究院。菌株系统发育树见图3。

实施例2：菌株降解多环芳烃的底物广谱性试验

在装有已灭菌MSM培养液的100ml三角瓶中分别加入溶于丙酮中的萘、苊、二氢苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并芘，待丙酮挥发后加入MSM培养液，使上述9种多环芳烃含量均为50mg/L（以下多环芳烃均以此法加入）。以10%的接种量接种0D₆₀₀=1.0的Mycobacterium gilvum 菌液（实施例1所得，以下均同此）。所有三角瓶均放置于30℃，180r/min摇床中震荡培养，分别于第0、4、8天取样测定三角瓶中各多环芳烃的残余量。实验结果表明菌株不能降解上述多环芳烃中的苊、二氢苊、苯并芘，对其他6种多环芳烃的降解情况结果见表1和图4。

表1 mycobactrial gilvum菌株对多环芳烃的降解率表

注：RSD表示标准方差。

从表1可以看出，当多环芳烃含量均为50mg/L的情况下，本发明的菌株在第四天和第八天均能对萘、芴、菲、蒽、荧蒽、芘进行有效降解，说明本发明的菌株对多环芳烃底物具有广谱性。

实施例3：菌株对芘的降解试验

在装有已灭菌MSM培养液的100ml三角瓶中加入一定量的芘，使芘初始含量为50mg/L。以10%的接种量接种0D₆₀₀=1.0的Mycobacterium gilvum 菌液。三角瓶放置于30℃，180r/min摇床中震荡培养，分别于第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天破坏性取样测定三角瓶中芘残余量。结果见图5，从图5可以看出，菌株对初始浓度50mg/L的芘在第4天降解率可达57.85%，第9天时可达96.76%。

实施例4：菌株对芘的耐受性试验

在装有已灭菌MSM培养液的100ml三角瓶中加入不同量的芘，使MSM培养液中芘含量为50、75、100、200mg/L。然后以10%的接种量接种0D₆₀₀=1.0的Mycobacterium gilvum 菌液。所有三角瓶均放置于30℃，180r/min摇床中震荡培养，于第0、8天破坏性取样测定各三角瓶中芘残余量。结果见图6，从图6可以看出，本发明所述菌株对多环芳烃具有较高的耐受浓度。对于初始浓度分别为50、75、100、200mg/L的芘，接种等量的本发明所述菌株，在相同时间内，随着培养体系中芘含量的增加，菌株对芘的去除量增加（100mg/L除外），由此表明在所实验的浓度中，菌株能适应环境中含量高达200mg/L的芘。

实施例5：菌株对重金属的耐受性试验

Cu²⁺ 耐性测定：以LB培养液为溶剂，配制CuSO₄浓度梯度为5、10、50、100、500mg/L的溶液，121℃高压灭菌30min。向不同Cu浓度梯度的溶液中接种一定量OD₆₀₀=1.0的Mycobacterium gilvum的种子液，使溶液初始OD₆₀₀=0.1。再各取200ul接种后的溶液于96孔板中培养并监测溶液OD₆₀₀值的变化。

Cd²⁺耐性测定：Cd²⁺浓度梯度设置为0.5、1、5、10、50、100mg/L，其余操作同Cu²⁺。

Pb²⁺耐性测定：Pb²⁺浓度梯度设置为5、10、50、100、500mg/L，其余操作同Cu²⁺。

Zn耐性测定：Zn浓度梯度设置为0.5、5、10、50、100mg/L，其余操作同Cu²⁺。

As³⁺耐性测定：配制100mM As³⁺母液，过滤除菌。以已灭菌LB为溶剂，用100mM As³⁺母液配制As³⁺浓度梯度为0.5、1、5、10mM/L的溶液。向不同As³⁺浓度梯度的溶液中接种一定量OD₆₀₀=1.0的Mycobacterium gilvum的种子液，使溶液初始OD₆₀₀=0.1。再各取200ul接种后的溶液于96孔板中培养并监测溶液OD₆₀₀值的变化。

As⁵⁺耐性测定：配制母液，过滤除菌。As⁵⁺浓度梯度为50、100、500、1000、2000、5000、10000uM/L，其余操作同As³⁺。

试验结果见图7-12。从图7-12可以看出，菌株在Cu浓度为5-100 mg/L培养液中生长良好；菌株在Cd浓度为0.5-50 mg/L培养液中生长良好；菌株在Pb浓度为1-500 mg/L培养液中生长良好；菌株在Zn浓度为0.5-100 mg/L培养液中生长良好；菌株在As³⁺浓度为0.5-1mM/L培养液中生长良好；菌株在As⁵⁺浓度为2.5-10 mM/L培养液中生长良好。也就是说，本发明的菌株在5-100 mg/L Cu；0.5-50 mg/L Cd，1-500 mg/L Pb，0.5-100 mg/L Zn，0.5-1mM/L As³⁺； 0.5-10 mM/L As⁵⁺浓度中生长良好，即菌株对上述重金属具有耐受性。

实施例6：表面活性剂Brij 30 协同菌株对污染土壤中的多环芳烃的去除

土壤悬液的制备：称取北京焦化厂多环芳烃污染土壤5g放于灭菌的150ml三角瓶中，再向其中加入50ml灭菌的新鲜MSM培养液，三角瓶置于30℃，180r/min摇床中震荡培养2天进行土壤的复苏，制备得土壤：溶液=1:10重量体积比的土壤悬液。

向上述复苏后的土壤悬液中添加表面活性剂Brij 30，其在土壤悬液中含量为20g/L，再以1.69x10¹⁰ CFU/g 土壤的接种量接种本发明的Mycobacterium gilvum菌液。

实验对照处理如下：

多环芳烃初始含量测定组：土壤复苏后破坏性取样冻存于-80℃冰箱。

自然去除组（Natural Remove）：土壤复苏后，土壤悬液无任何添加置于30℃，180r/min摇床中震荡培养18天。

2% Brij 30组：土壤复苏后，土壤悬液中添加表面活性剂Brij 30，使其在土壤悬液中含量为20g/L，然后置于加置于30℃，180r/min摇床中震荡培养18天。

游离菌MI组：土壤复苏后，土壤悬液中以1.69x10¹⁰ CFU/g 土壤的接种量接种本发明的Mycobacterium gilvum菌液，然后置于加置于30℃，180r/min摇床中震荡培养18天。

2% Brij 30+游离菌MI组：土壤复苏后，土壤悬液中同时添加表面活性剂Brij 30和游离菌MI。其中表面活性剂Brij 30在土壤悬液中含量为20g/L，游离菌MI的添加量以1.69x10¹⁰ CFU/g 土壤的接种量接种本发明的Mycobacterium gilvum菌液；然后置于30℃，180r/min摇床中震荡培养18天。

结果：

1）添加表面活性剂后本发明菌株对16 EPA-PAHs的去除：见表2和图13。可以看出，在本实验条件下，多环芳烃污染土壤短期处理18天后，自然情况下（即自然去除组）去除率仅3.45%，单独添加2% Brij 30（即2% Brij 20组）或游离菌MI（即游离菌MI组）的去除率分别为12.89%和10.75%，而添加本发明的组合物（2% Brij 30和Mycobacterium gilvum菌液）（即2% Brij 30 + 游离菌MI组）去除率可达26.84%，即本发明组合物能显著提高污染土壤中多环芳烃的去除率。

去除率={1-[（18天后土壤悬液固相中多环芳烃含量+水相中多环芳烃含量）/（第0天土壤悬液固相中多环芳烃含量+水相中多环芳烃含量）]}*100%

多环芳烃含量测定方法

固相中多环芳烃测定方法简介：固相土壤中多环芳烃测定方法参照EPA 3540C。

水相中多环芳烃测定方法参照《水和废水监测分析方法》（4.14.2）。

表2 添加表面活性剂后本发明菌株对16 EPA-PAHs的去除率表

实验处理	自然去除组	2% Brij 20组	游离菌MI组	2% Brij 30 + 游离菌MI组
					16 EPA-PAHs	3.45%	12.89%	10.75%	26.84%

2）添加表面活性剂后本发明菌株对芘、荧蒽、菲的去除：见表3和图14-16。可以看出，利用本发明的组合物可以显著提高多环芳烃污染土壤中芘、荧蒽、菲的去除，去除率分别可达48.06%、32.41%、45.93%。

表3：添加表面活性剂后本发明菌株对芘、荧蒽、菲去除率表

	自然去除组	2% Brij 20组	游离菌MI组	2% Brij 30 + 游离菌MI组
					芘	0.51%	33.72%	19.74%	48.06%
荧蒽	2.22%	4.41%	-0.11%	32.41%
					菲	3.97%	31.05%	47.30%	45.93%

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院城市环境研究所

<120> 一株耐重金属的多环芳烃降解菌及其用途

<130> P12405

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1350

<212> DNA

<213> Mycobacterium gilvum菌

<400> 1

ggggttaggc caccggcttc gggtgttacc gactttcatg acgtgacggg cggtgtgtac 60

aaggcccggg aacgtattca ccgcagcgtt gctgatctgc gattactagc gactccgact 120

tcacggggtc gagttgcaga ccccgatccg aactgagacc ggctttgaaa ggattcgctc 180

cacctcacgg catcgcagcc ctttgtaccg gccattgtag catgtgtgaa gccctggaca 240

taaggggcat gatgacttga cgtcatcccc accttcctcc gagttgaccc cggcagtctc 300

tcacgagtcc ccaccataac gtgctggcaa catgagacaa gggttgcgct cgttgcggga 360

cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacagccat gcaccacctg cacacaggcc 420

acaagggaac cgacatctct gccggcgtcc tgtgcatgtc aaacccaggt aaggttcttc 480

gcgttgcatc gaattaatcc acatgctccg ccgcttgtgc gggcccccgt caatttcttt 540

gagttttagc cttgcggccg tactccccag gcggggtact taatgcgtta gctacggcac 600

ggatcccaag gaaggaaact cacacctagt acccaccgtt tacggcgtgg actaccaagg 660

tatataatcc tgttcgctcc ccacgctttc gctcctcagc gtcagttact gcccagagac 720

ccgccttcgc caccggtgtt cctcctgata tctgcgcatt ccacgctaca cagaattcca 780

gtctcccctg cagtactcaa gtctgcccgt atcgcccgca cgcccacagt taagctgtga 840

gttttcacga acaacgcgac aaaccaccta cgagctcttt acgcccagta attccggaca 900

acgctcggac cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta gttggccggt ccttcttctc 960

caggtaccgt cacttgcgct tcgtccctgg cgaaagaggt ttacaacccg aaggccgtca1020

tccctcacgc ggcgtcgctg catcaggctt gcgcccattg tgcaatattc cccactgctg1080

cctcccgtag gagtctgggc cgtatctcag tcccagtgtg gccggtcacc ctctcaggcc1140

ggctacccgt cgtcgccttg gtaagccatt acctcaccaa caagctgata ggccgcgggc1200

ccatcccaca ccgcaaaagc tttccaccac acaccatgaa gcatgcggtc ctattcggta1260

ttagacccag tttcccaggc ttatcccaaa gtgcagggca gatcacccac gtgttactca1320

cccgttcgcc actcgagtac cccgaagggc 1350

Claims (7)

1.一株耐重金属的多环芳烃降解菌，其特征在于，所述菌株为浅黄分枝杆菌(Mycobacterium gilvum)，保藏号为CGMCC No.10941。

2.一种权利要求1所述耐重金属的多环芳烃降解菌用于去除或降解多环芳烃的用途。

3.权利要求2所述用途，其特征在于，所述用途是指去除或降解土壤、水环境中的多环芳烃的用途；所述土壤、水为重金属污染的土壤、水。

4.一种权利要求1所述耐重金属的多环芳烃降解菌在多环芳烃污染的土壤、水环境中生物修复中的应用。

5.权利要求4所述应用，其特征在于，所述土壤、水有重金属及多环芳烃复合污染。

6.一种菌株组合物，其特征在于，由菌株CGMCC No.10941和表面活性剂Brij 30组成；

所述菌株CGMCC No.10941和表面活性剂Brij 30的用量为，表面活性剂Brij 30在土壤悬液中含量为10-30g/L，菌株CGMCC No.10941的添加量为以10⁹-10¹¹ CFU/g 土壤的接种量接种所述菌株。

7.一种去除污染土壤中多环芳烃的方法，其特征在于，采用表面活性剂Brij 30 协同菌株CGMCC No.10941去除污染土壤中的多环芳烃；

所述菌株CGMCC No.10941和表面活性剂Brij 30的用量为，表面活性剂Brij 30在土壤悬液中含量为10-30g/L，菌株CGMCC No.10941的添加量为以10⁹-10¹¹ CFU/g 土壤的接种量接种所述菌株。