CN104920216A - 一种东方百合的保存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种东方百合的保存方法，包括如下步骤：选择生长正常，长势旺盛，经ISSR分子标记检测为未发生遗传变异的植株，培育成合格的东方百合种球；定植基质为泥炭：珍珠岩按体积比8：5配制而成。本发明的有益效果是：本发明的方法，提高了离体保存效率，并大大降低保存成本，且使其存活率得到提升。
Description
技术领域
本发明涉及种植技术领域，尤其涉及一种东方百合的保存方法。
背景技术
百合，学名（Lilium brownii var. viridulum Baker）又名强蜀、番韭、山丹、倒仙、重迈、中庭、摩罗、重箱、中逢花、百合蒜、大师傅蒜、蒜脑薯、夜合花等，是百合科百合属（学名：Lilium）多年生草本球根植物，原产于中国，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球已发现有至少120个品种，其中55种产于中国。近年更有不少经过人工杂交而产生的新品种，如亚洲百合、香水百合、火百合等。鳞茎含丰富淀粉，可食，亦作药用。
东方百合为多年生观赏植物，主要用于切花栽培，近年我国百合切花生产量年增长达15以上，但是目前无法实现东方百合种质资源离体保存。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明提供了一种东方百合的保存方法。
本发明提供了一种东方百合的保存方法，包括如下步骤：
A.培养基的配制：包括基本培养基和离体保存，各阶段培养基的组分与各组分在每升培养基内所含重量为：
（1）基本培养基：其中，
诱导培养基为白糖40至45g/L，琼脂粉3 g/L，pH5.7的MS培养基；
增殖培养基为白糖45至49g/L，琼脂粉6 g/L，pH5.7的MS培养基；
离休保存与试管鳞茎膨大同步培养基为蔗糖80 g/L，琼脂粉8g/L，pH5.8的MS培养基；
（2）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（3）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（4）增殖培养基：5MS+6-BA0.6 m g/L++IBA0.3m g/L；
（5）离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基：1MS+NAA 0.3 m g/L+PP333 7 m g/L+甘露醇3.0 g/L+AC 6 m g/L；
B.种源鳞茎处理与灭菌：将种源鳞茎以8摄氏度低温处理2个月打破其休眠，再用透气塑料薄膜包裹该鳞茎置于含水量为80%的潮湿泥炭中，置65摄氏度培养箱内热处理80分钟，剥离外层鳞片，取其内5cm长的种源鳞茎芽，用3%洗洁液浸泡15分钟，经清水冲洗后进行种源鳞茎芽灭菌处理后，备用；
C.鳞茎芽的诱导培养：取灭菌后种源鳞茎芽录取其内0.5mm的茎尖作为外植体，接种于诱导培养基1，在温度25摄氏度，光照8h/d，光照强度2000Lx的环境条件下培养55d至诱导出鳞茎芽；将该鳞茎芽切去顶部叶片并纵向切成2块后转接至诱导培养基1，在同上环境条件下培养80d至诱导形成丛生状鳞茎芽；放入光照培养箱内按32、36、39、42摄氏度的顺序，每4d变换一档进行循环热处理50-60d后，剥取其内0.5mm的茎尖为外植体接种于诱导培养基2进行二次诱导培养，在同上环境条件下培养78d至诱导形成鳞茎芽后，置5摄氏度低温处理75d，以恢复该鳞茎芽的生长活性；
D.鳞茎芽的增殖培养：将低温处理后的鳞茎芽，切去叶片和部分基部组织后纵切成7至8块接种在增殖培养基上，在25摄氏度条件下培养85d形成鳞茎芽；
E.种质离体保存与试管鳞茎膨大同步培养：将步骤D鳞茎芽切去芽顶部和部分基部组织并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在25摄氏度和黑暗条件下培养13个月至切块基部形成的鳞茎芽膨大成直径为1cm的试管鳞茎；即可出苗或切除该试管鳞茎根系并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在相同条件下可循环再进行5至7次的保存与试管鳞茎膨大同步培养；7次后则需经田间种植恢复后再按上述步骤进行离体再保存，直至满足对该种质离体保存期的需要；
F.试管鳞茎的出苗与冷藏：将试管鳞茎用清水洗去琼脂、包裹于消毒过的含水量为80%的泥炭中，15摄氏度预处理15d后，于8摄氏度冷藏处理55d 至打破休眠期后，定植或在5摄氏度条件下4个月的延长贮藏期内择时定植；
G.定植：选择海拔1600米具夏季冷凉气候的山区，在避雨和防虫隔离条件下，将步骤F中冷藏后的鳞茎于4月中旬至5月上荀定植在消毒过的基质里，15d后始萌芽出苗、生长；
H.种质遗传稳定性的检测：选择生长正常，长势旺盛，经ISSR分子标记检测为未发生遗传变异的植株，培育成合格的东方百合种球；
所述的定植基质为泥炭：珍珠岩按体积比8：5配制而成。
作为本发明的进一步改进，所述的种源鳞茎芽灭菌处理为80%酒精浸泡1.5min，无菌水冲洗8次，再用0.3%升汞溶液灭菌25min，无菌水冲洗8次，再用20%的次氯酸钠水溶液灭菌18min，无菌水冲洗8次。
本发明的有益效果是：本发明的方法，提高了离体保存效率，并大大降低保存成本，且使其存活率得到提升。
具体实施方式
本发明公开了一种东方百合的保存方法，包括如下步骤：
A.培养基的配制：包括基本培养基和离体保存，各阶段培养基的组分与各组分在每升培养基内所含重量为：
（1）基本培养基：其中，
诱导培养基为白糖40至45g/L，琼脂粉3 g/L，pH5.7的MS培养基；
增殖培养基为白糖45至49g/L，琼脂粉6 g/L，pH5.7的MS培养基；
离休保存与试管鳞茎膨大同步培养基为蔗糖80 g/L，琼脂粉8g/L，pH5.8的MS培养基；
（2）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（3）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（4）增殖培养基：5MS+6-BA0.6 m g/L++IBA0.3m g/L；
（5）离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基：1MS+NAA 0.3 m g/L+PP333 7 m g/L+甘露醇3.0 g/L+AC 6 m g/L；
B.种源鳞茎处理与灭菌：将种源鳞茎以8摄氏度低温处理2个月打破其休眠，再用透气塑料薄膜包裹该鳞茎置于含水量为80%的潮湿泥炭中，置65摄氏度培养箱内热处理80分钟，剥离外层鳞片，取其内5cm长的种源鳞茎芽，用3%洗洁液浸泡15分钟，经清水冲洗后进行种源鳞茎芽灭菌处理后，备用；
C.鳞茎芽的诱导培养：取灭菌后种源鳞茎芽录取其内0.5mm的茎尖作为外植体，接种于诱导培养基1，在温度25摄氏度，光照8h/d，光照强度2000Lx的环境条件下培养55d至诱导出鳞茎芽；将该鳞茎芽切去顶部叶片并纵向切成2块后转接至诱导培养基1，在同上环境条件下培养80d至诱导形成丛生状鳞茎芽；放入光照培养箱内按32、36、39、42摄氏度的顺序，每4d变换一档进行循环热处理50-60d后，剥取其内0.5mm的茎尖为外植体接种于诱导培养基2进行二次诱导培养，在同上环境条件下培养78d至诱导形成鳞茎芽后，置5摄氏度低温处理75d，以恢复该鳞茎芽的生长活性；
D.鳞茎芽的增殖培养：将低温处理后的鳞茎芽，切去叶片和部分基部组织后纵切成7至8块接种在增殖培养基上，在25摄氏度条件下培养85d形成鳞茎芽；
E.种质离体保存与试管鳞茎膨大同步培养：将步骤D鳞茎芽切去芽顶部和部分基部组织并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在25摄氏度和黑暗条件下培养13个月至切块基部形成的鳞茎芽膨大成直径为1cm的试管鳞茎；即可出苗或切除该试管鳞茎根系并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在相同条件下可循环再进行5至7次的保存与试管鳞茎膨大同步培养；7次后则需经田间种植恢复后再按上述步骤进行离体再保存，直至满足对该种质离体保存期的需要；
F.试管鳞茎的出苗与冷藏：将试管鳞茎用清水洗去琼脂、包裹于消毒过的含水量为80%的泥炭中，15摄氏度预处理15d后，于8摄氏度冷藏处理55d 至打破休眠期后，定植或在5摄氏度条件下4个月的延长贮藏期内择时定植；
G.定植：选择海拔1600米具夏季冷凉气候的山区，在避雨和防虫隔离条件下，将步骤F中冷藏后的鳞茎于4月中旬至5月上荀定植在消毒过的基质里，15d后始萌芽出苗、生长；
H.种质遗传稳定性的检测：选择生长正常，长势旺盛，经ISSR分子标记检测为未发生遗传变异的植株，培育成合格的东方百合种球；
所述的定植基质为泥炭：珍珠岩按体积比8：5配制而成。
所述的种源鳞茎芽灭菌处理为80%酒精浸泡1.5min，无菌水冲洗8次，再用0.3%升汞溶液灭菌25min，无菌水冲洗8次，再用20%的次氯酸钠水溶液灭菌18min，无菌水冲洗8次。
本发明所保存的试管鳞茎根系发达，至一次保存期结束（12-15个月）试管鳞茎重量可达0.5g/粒以上，根数量在16条/粒以上，且便于低温处理，经低温处理至打破休眠的试管鳞茎，既可立刻定植，也可在2摄氏度3个月的延长贮藏期内，根据气候、土壤条件选择适宜时期集中定植，便于栽培管理，从而克服了传统的生根组培苗出瓶后必须随时定植不能延误，导致成活率低下的难题，定植成活率可达98%以上，而一般生根组培苗的根数量在5条/株，定植成活率为85%。
本发明的方法，提高了离体保存效率，并大大降低保存成本，且使其存活率得到提升。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种东方百合的保存方法，其特征在于，包括如下步骤：
A.培养基的配制：包括基本培养基和离体保存，各阶段培养基的组分与各组分在每升培养基内所含重量为：
（1）基本培养基：其中，
诱导培养基为白糖40至45g/L，琼脂粉3 g/L，pH5.7的MS培养基；
增殖培养基为白糖45至49g/L，琼脂粉6 g/L，pH5.7的MS培养基；
离休保存与试管鳞茎膨大同步培养基为蔗糖80 g/L，琼脂粉8g/L，pH5.8的MS培养基；
（2）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（3）诱导培养基1：MS+6-BA 1.5 g/L+IBA0.3m g/L+AC2 m g/L；
（4）增殖培养基：5MS+6-BA0.6 m g/L++IBA0.3m g/L；
（5）离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基：1MS+NAA 0.3 m g/L+PP333 7 m g/L+甘露醇3.0 g/L+AC 6 m g/L；
B.种源鳞茎处理与灭菌：将种源鳞茎以8摄氏度低温处理2个月打破其休眠，再用透气塑料薄膜包裹该鳞茎置于含水量为80%的潮湿泥炭中，置65摄氏度培养箱内热处理80分钟，剥离外层鳞片，取其内5cm长的种源鳞茎芽，用3%洗洁液浸泡15分钟，经清水冲洗后进行种源鳞茎芽灭菌处理后，备用；
C.鳞茎芽的诱导培养：取灭菌后种源鳞茎芽录取其内0.5mm的茎尖作为外植体，接种于诱导培养基1，在温度25摄氏度，光照8h/d，光照强度2000Lx的环境条件下培养55d至诱导出鳞茎芽；将该鳞茎芽切去顶部叶片并纵向切成2块后转接至诱导培养基1，在同上环境条件下培养80d至诱导形成丛生状鳞茎芽；放入光照培养箱内按32、36、39、42摄氏度的顺序，每4d变换一档进行循环热处理50-60d后，剥取其内0.5mm的茎尖为外植体接种于诱导培养基2进行二次诱导培养，在同上环境条件下培养78d至诱导形成鳞茎芽后，置5摄氏度低温处理75d，以恢复该鳞茎芽的生长活性；
D.鳞茎芽的增殖培养：将低温处理后的鳞茎芽，切去叶片和部分基部组织后纵切成7至8块接种在增殖培养基上，在25摄氏度条件下培养85d形成鳞茎芽；
E.种质离体保存与试管鳞茎膨大同步培养：将步骤D鳞茎芽切去芽顶部和部分基部组织并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在25摄氏度和黑暗条件下培养13个月至切块基部形成的鳞茎芽膨大成直径为1cm的试管鳞茎；即可出苗或切除该试管鳞茎根系并纵向切成7至8块后接种在离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基中，在相同条件下可循环再进行5至7次的保存与试管鳞茎膨大同步培养；7次后则需经田间种植恢复后再按上述步骤进行离体再保存，直至满足对该种质离体保存期的需要；
F.试管鳞茎的出苗与冷藏：将试管鳞茎用清水洗去琼脂、包裹于消毒过的含水量为80%的泥炭中，15摄氏度预处理15d后，于8摄氏度冷藏处理55d 至打破休眠期后，定植或在5摄氏度条件下4个月的延长贮藏期内择时定植；
G.定植：选择海拔1600米具夏季冷凉气候的山区，在避雨和防虫隔离条件下，将步骤F中冷藏后的鳞茎于4月中旬至5月上荀定植在消毒过的基质里，15d后始萌芽出苗、生长；
H.种质遗传稳定性的检测：选择生长正常，长势旺盛，经ISSR分子标记检测为未发生遗传变异的植株，培育成合格的东方百合种球；
所述的定植基质为泥炭：珍珠岩按体积比8：5配制而成。
2.根据权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述的种源鳞茎芽灭菌处理为80%酒精浸泡1.5min，无菌水冲洗8次，再用0.3%升汞溶液灭菌25min，无菌水冲洗8次，再用20%的次氯酸钠水溶液灭菌18min，无菌水冲洗8次。
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| CN112450208A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-03-09 | 内蒙古蒙草生态环境（集团）股份有限公司 | 一种百合的活体保存方法 |
| CN112450208B (zh) * | 2020-12-28 | 2022-04-29 | 内蒙古蒙草生态环境（集团）股份有限公司 | 一种百合的活体保存方法 |
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