CN104906214B - 一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，利用碳酸二甲酯溶液洗脱新鲜枇杷叶后得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液，经真空浓缩后，再加乙醇溶液重结晶，得到黄酮类物质成品；得到的回流残渣利用乙醇溶液洗脱，得到三萜酸类物质乙醇提取液，经真空浓缩后用水重结晶，得到三萜酸类物质成品。本发明方法绿色、环保，分离与纯化集合于一体，工艺简单，节能省时。

Description

一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法

技术领域

本发明属于食品科学和天然产物分离提取领域，具体涉及一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法。

背景技术

中国是最主要的枇杷生产国，栽培面积和产量占世界的2/3以上，主产区为江苏、福建和浙江。枇杷全身都是宝。目前，枇杷主要为鲜果供应，枇杷其它部位的综合开发利用少见。其中，枇杷叶为传统的药用植物，在《名医别录》、《神农本草经》及《本草纲目》等古籍和《中国药典》所收载，为传统的止咳平喘的中药，具有化痰止咳、和胃降逆之功效，在临床主要用于急慢性支气管炎等呼吸系统疾病的治疗。目前大多数的枇杷叶作为垃圾处理。据估算，在不影响枇杷果生产的前提下，全国可年采收枇杷叶干品5万吨。因此，对枇杷叶进行深度开发利用，对综合利用枇杷资源，开发新产品，提高枇杷的经济价值，具有十分重要的经济效益和社会效益。

枇杷叶中的活性物质有挥发油类、黄酮类、三萜酸类、水溶性多糖和有机酸等活性成分。其中，黄酮类化合物和三萜酸类化合物是枇杷叶各种成分中含量较高、最具提取价值的化合物，也是被研究的最广泛、最具有药理价值的枇杷叶提取物。黄酮类化合物是一种很强的抗氧化剂，药理活性强，可有效清除人体内氧自由基，降低胆固醇，改善血液循环。也可作为甜味剂、抗氧化剂和食用色素等应用于饮料和食品。枇杷叶中三萜酸类物质主要为熊果酸和齐墩果酸等，具有减肥、降血糖、抗癌、抗肝损伤、抗炎和抗病毒等多种生物学活性，有望开发成具有消炎平喘、化痰止咳、抗病毒、抗肿瘤、抗肝炎功能的新型治疗药物和保健食品。

目前，枇杷叶中黄酮类物质的提取方法有一些专利和文献报道。一般均是以不同浓度的乙醇或甲醇等亲水性溶剂进行提取，有的还辅之以超声或微波提取。有的提取完再进一步进行了大孔树脂富集和重结晶等过程进行纯化。这种方法提取与纯化分开进行，时间较长，工艺较为繁琐，且枇杷叶中只提取了黄酮类物质，其它生物活性物质没有得到利用。对于枇杷叶中三萜酸类物质的提取，也与黄酮类物质提取相似，一般采取亲水性有机溶剂如乙醇水溶液来提取枇杷叶中三萜酸，如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇和丙酮等亲水性有机溶剂，提取完后再进行纯化，耗时较长且工艺繁琐。这些提取过程也存在只提取一类物质既三萜酸类化合物的缺点，其它生物活性物质没有被提取分离。而且，对比黄酮类和三萜酸类物质的提取方法可以发现，由于所使用的提取溶剂性质极为相似，往往提取一类物质时会混有大量的另一类物质，这为后续分离和提纯带来相应的困难。因此，寻找一种集成式阶梯提取方法，可以使枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质依次被提取和分离纯化出来，对于枇杷叶的综合利用极具经济价值和社会效益。

发明内容

针对现有的枇杷叶中生物活性物质的提取方法存在的一种方法只提取一类物质、提取与纯化分开进行耗时长且工艺繁琐的缺点，本发明的目的是将分离与提纯集合为一体，使黄酮类和三萜酸类物质依次被提取和纯化，提供一种能集成式阶梯提取与纯化枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的方法。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，包括以下步骤：

1)将新鲜枇杷叶干燥粉碎，加入5-10倍干重的碳酸二甲酯为溶剂，加热搅拌回流；

2)将碳酸二甲酯提取液经1-5倍枇杷叶干重的硅胶组成的硅胶层洗脱，得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液；

3)在回流残渣中加入5-10倍初始枇杷叶干重的80-95％的乙醇溶液，继续加热搅拌回流；

4)经上述硅胶层洗脱，得到三萜酸类物质乙醇提取液；

5)将得到的黄酮类碳酸二甲酯提取液真空浓缩，加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的5-20％的乙醇溶液重结晶，得到黄酮类物质成品；

6)将得到的三萜酸类物质乙醇提取液真空浓缩，加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的水溶液，调pH值至6-7，结晶得到三萜酸类物质成品。

进一步，

步骤(1)中加热搅拌的条件为：温度为90-110℃，时间2-5h，搅拌速度500-2000转每分钟。

步骤(2)所述的硅胶为100-200目的普通二氧化硅硅胶，孔径比表面为400～600m²/g，孔容0.60-0.85/g。

步骤(3)中加热搅拌的条件为：温度80-100℃，时间2-4h，搅拌速度500-2000转每分钟。

步骤(5)所述的黄酮类物质为槲皮素、山奈酚及以其为母核的芦丁、金丝桃苷等一种或几种化合物，纯度80-95％。

步骤(6)所述的三萜酸类物质为熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物的一种或几种化合物，纯度85-98％。

本发明的有益效果为：1)所用的提取溶剂为碳酸二甲酯与乙醇，无毒无害，符合绿色环保要求。2)将分离与纯化集合于一体，工艺简单，节能省时。3)先后依次提取了黄酮类和三萜酸类物质，使枇杷叶中有效化学成分得到充分利用。4)所提取的黄酮类和三萜酸类物质，提取率高且纯度也较高。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。

实施例1

一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，包括以下步骤：

1)取新鲜枇杷叶干燥粉碎粉末500g，加入2500mL碳酸二甲酯为溶剂，在95℃温度条件下搅拌速度1000转每分钟，回流时间3.5h；

2)将碳酸二甲酯提取液经500g硅胶组成的硅胶层洗脱，得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液1500mL，硅胶为100-200目的普通硅胶，硅胶层孔径比表面为400-600m²/g，孔容0.60-0.85/g；

3)在步骤(2)回流残渣中加入浓度为85％的乙醇溶液2500mL，在温度95℃条件下搅拌回流时间3h；

4)经上述硅胶层洗脱，得到三萜酸类物质乙醇提取液1500mL；

5)将得到的黄酮类碳酸二甲酯提取液真空浓缩，加入浓度为10％的乙醇溶液100mL重结晶，得到黄酮类物质成品3.75g，纯度为88％；

6)将得到的三萜酸类物质乙醇提取液真空浓缩，加入水100mL，调pH值至6-7，结晶得到三萜酸类物质成品3.5g，纯度为90％。

实施例2

一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，包括以下步骤：

1)取新鲜枇杷叶干燥粉碎粉末400g，加入溶剂碳酸二甲酯2300mL，在温度105℃条件下搅拌速度1200转每分钟，回流时间3.8h；

2)将碳酸二甲酯提取液经550g硅胶组成的硅胶层洗脱，得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液1600mL硅胶为100-200目的普通硅胶，硅胶层孔径比表面为400-600m²/g，孔容0.60-0.85/g；

3)在步骤(2)回流残渣中加入浓度为90％的乙醇溶液2200mL，在温度100℃条件下搅拌回流时间3.2h；

4)经上述硅胶层洗脱，得到三萜酸类物质乙醇提取液1400mL；

5)将得到的黄酮类碳酸二甲酯提取液真空浓缩，加入浓度为15％的乙醇溶液85mL重结晶，得到黄酮类物质成品3.2g；纯度为90％；

6)将得到的三萜酸类物质乙醇提取液真空浓缩，加入水溶液80mL，调pH值至6-7，结晶得到三萜酸类物质成品3.1g；纯度为94％。

实施例3

本发明的另一实施方案，预先在提取装置(专利ZL200920138048.3所报道的提取设备)的分离纯化室加入1-5倍枇杷叶干重的硅胶。

1)以新鲜枇杷叶为原料，经干燥粉碎，置于提取装置的成分提取室，在溶剂池中加入5-10倍枇杷叶干重的碳酸二甲酯，加热搅拌回流，开始提取黄酮类物质。

2)上述加热循环回流提取过程为2-5小时，然后将碳酸二甲酯提取液从溶剂池放出，得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液。

3)往上述提取装置中加入5-10倍枇杷叶干重的80-95％的乙醇溶液，继续加热搅拌回流，开始提取三萜酸类物质。

4)此次加热循环回流提取过程为2-4小时，然后将乙醇提取液从溶剂池放出，得到三萜酸类物质乙醇提取液。

5)将得到的黄酮类碳酸二甲酯提取液真空浓缩，回收部分碳酸二甲酯。浓缩液加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的5-20％的乙醇溶液重结晶，得到黄酮类物质成品，黄酮类物质含量90％以上。

6)将得到的三萜酸类物质乙醇提取液真空浓缩，加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的水，调pH值至6-7，结晶得到三萜酸类物质成品，三萜酸类物质含量90％以上。

Claims (6)

1.一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将新鲜枇杷叶干燥粉碎，加入5-10倍干重的碳酸二甲酯为溶剂，加热搅拌回流；

2)将碳酸二甲酯提取液经1-5倍枇杷叶干重的硅胶组成的硅胶层洗脱，得到黄酮类物质碳酸二甲酯提取液；

3)在回流残渣中加入5-10倍初始枇杷叶干重的80-95％的乙醇溶液，继续加热搅拌回流；

4)经上述硅胶层洗脱，得到三萜酸类物质乙醇提取液；

5)将得到的黄酮类碳酸二甲酯提取液真空浓缩，加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的5-20％的乙醇溶液重结晶，得到黄酮类物质成品；

6)将得到的三萜酸类物质乙醇提取液真空浓缩，加入0.5-1.5倍于枇杷叶干重的水溶液，调pH值至6-7，结晶得到三萜酸类物质成品。

2.根据权利要求1所述的一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于：步骤(1)中加热搅拌的条件为：温度为90-110℃，时间2-5h，搅拌速度500-2000转每分钟。

3.根据权利要求1所述的一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的硅胶为100-200目的普通二氧化硅硅胶，孔径比表面为400～600m²/g，孔容0.60-0.85/g。

4.根据权利要求1所述的一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于：步骤(3)中加热搅拌的条件为：温度80-100℃，时间2-4h，搅拌速度500-2000转每分钟。

5.根据权利要求1所述的一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于：所述的黄酮类物质为槲皮素、山奈酚及以其为母核的芦丁、金丝桃苷等一种或几种化合物。

6.根据权利要求1所述的一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，其特征在于：所述的三萜酸类物质为熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物的一种或几种化合物。