CN104905015A - 一种复合饲料添加剂及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中草药复合饲料添加剂，属于饲料添加剂技术领域。所述复合饲料添加剂由以下重量份数的原料组成：香菇子实体粉3-6份，板蓝根粉碎物3-6份，天门冬粉碎物6-10份，黑曲霉培养物10-25份，甘草粉1-2份。本发明含中草药成分，并与黑曲霉培养物复配，利用黑曲霉培养物中含有大量菌体和纤维素酶，能够在机体消化过程中促进中草药植物细胞壁的溶解，使更多的植物细胞内容物溶解出来，并将一些不易消化的大分子多糖、蛋白质和脂类降解成小分子物质，有利于猪胃肠道的消化吸收，从而将猪体内中草药有益成分的吸收率提高了26％，有效的提高了本发明产品预防和治疗猪的呼吸道疾病的效力，增强猪的抗病毒能力及自身免疫力，提高猪的健康度，促进猪生长。

Description

一种复合饲料添加剂及其制备

技术领域

本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种中草药复合饲料添加剂。

背景技术

猪呼吸道疾病综合症的发生通常是多因素导致的，其致病原因主要有：1、原发性病原：经常是几种病原同时存在，如猪繁殖与呼吸综合症病毒，俗称“蓝耳病”、肺炎支原体、猪圆环病毒II型、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、猪胸膜肺炎放线杆菌等；2、继发性病原：猪感染了原发性病原后，由于抵抗力和免疫力下降而继发，常见的继发性病原有：猪链球菌、猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、弓形体、附红细胞体、猪瘟病毒等相关的呼吸道症状疾病；3、不良的环境条件，如饲养密度太大、舍内通风透气不好。

目前常用抗生素类药物治疗，易产生耐药性，滥用抗生素造成“超级细菌”的出现，霉菌毒素的危害加重，以及饲养环境的污染、不重视生物安全体系的建立等。发生上述问题的根本原因是猪群中免疫力低下所造成的，提高猪只的特异性免疫力与非特异性免疫力就成为解决问题的关键所在。

中草药饲料抗菌保健剂无残留、无耐药性，其作用机理不仅仅在于对病原微生物的抑杀作用，更重要的是对机体抗病修复能力的调整，即提高机体的抗应激能力、提高机体免疫功能和抗病防御机能，从而达到提高动物生产性能和饲料利用效率的目的。

一些中草药原料的介绍如下：

天门冬：其药用部位主要是块根，具有养阴清热、润燥生津的功效，现代药理学研究表明对肺结核、支气管炎、白喉、百日咳、口干咽燥等症状具有良好的疗效，同时可以具有抗菌免疫和抗氧化功能。天门冬含天门冬素、B-谷甾醇、甾体皂甙，粘液质、糠醛衍生物等成分。实验证明，天门冬有升高血细胞、增强网状内皮系统舌噬功能和延长抗体存在时间的作用。《名医别录》载“去寒热，养肌肤，益气力”。《月华于本草》载“镇心，润五脏，益皮肤，悦颜色”。能使肌肤艳丽，保持青春活力。

板蓝根：别名靛青根、蓝靛根、大青根，其药用部位主要是根茎及根，可以败火解毒、预防疾病，性味苦寒；具有清热解毒、凉血消肿、利咽之功效；主治外感发热，温病初起，咽喉肿痛；温毒发斑，痄腮，丹毒，臃肿疮毒。

香菇子实体：为香菇的食用部份；含丰富的维生素D原、多糖类物质和酪氨酸氧化酶等30多种酶，还含有一种特殊的物质香菇素；其中香菇多糖能提高辅助性T细胞的活力而增强机体体液免疫功能，降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力，对癌细胞有强烈的抑制作用；香菇含有的多种酶类物质能够降低血脂、防治人体酶缺乏症，充足的维生素D源可以防治佝偻病及贫血；香菇还含有双链核糖核酸，其含有抗病毒成分，还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇，对于增强抗疾病和预防感冒及治疗有良好效果；香菇中含有一种干扰素的诱导剂，能诱导体内干扰素的产生，干扰病毒蛋白质的合成，使其不能繁殖，从而使机体产生免疫作用，提高机体适应力。

甘草：具有清热解毒，润肺止咳，调和诸药性；还能补脾益气，除药用之外，食品上也大量用甘草做糕点添加剂，它的甜度是蔗糖的百倍。西方国家大量进口甘草，从中提取甘草次酸，治艾滋病。

发明内容：

本发明所解决的技术问题是应用中医的传统医药理论，采用复配中草药形式添加到饲料中，可以有效增强猪的免疫力，对导致猪呼吸道疾病综合症的原发性病原和继发性病原具有显著的抑制作用，可有效预防和治疗猪呼吸道疾病的发生，提高猪的健康度，促进猪生长，提高经济效益。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种复合饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：

香菇子实体粉3-6份，板蓝根粉碎物3-6份，天门冬粉碎物6-10份，黑曲霉培养物10-25份，甘草粉1-2份。

所述香菇子实体粉制备方法如下：将香菇子实体经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述板蓝根粉碎物制备方法如下：将板蓝根经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述天门冬粉碎物制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述黑曲霉培养物的制备方法如下：

斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上，逐级培养获得种子液后，将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30+0.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。

本发明饲料添加剂的制备方法如下：

按照原料组成将香菇子实体粉、板蓝根粉碎物、天门冬粉碎物、黑曲霉培养物、甘草粉混合均匀即得。

本发明产品在生长猪日粮中的添加量为500-1000克／吨；

有益效果：

香菇子实体含多糖类物质；香菇多糖能提高辅助性T细胞的活力而增强机体体液免疫功能，降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力，对癌细胞有强烈的抑制作用；还含有双链核糖核酸，其含有抗病毒成分，还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇，对于增强抗疾病和预防感冒及治疗有良好效果；其含有的干扰素的诱导剂，能诱导体内干扰素的产生，干扰病毒蛋白质的合成，从而使机体产生免疫作用，提高机体适应力；天门冬对肺结核、支气管炎、白喉、百日咳、口干咽燥等症状具有良好的疗效，同时可以具有抗菌免疫和抗氧化功能；板蓝根可败火解毒，预防疾病，但其性味苦寒；甘草具有清热解毒，润肺止咳，调和诸药性，且味甜；本复合饲料添加剂中含上述中草药成分，通过在其中添加了的黑曲霉培养物，黑曲霉培养物中含有大量菌体和纤维素酶，能够在机体消化过程中促进上述几种中草药植物细胞壁的溶解，使更多的植物细胞内容物溶解出来，并能将一些不易消化的大分子多糖、蛋白质和脂类降解成小分子物质，有利于猪胃肠道的消化吸收，从而将猪体内中草药有益成分的吸收率提高了26％，有效的提高了本发明产品预防和治疗猪的呼吸道疾病的效力，增强猪的抗病毒能力及自身免疫力，提高猪的健康度，促进猪生长。

本发明所添加的黑曲霉培养物中含有的纤维素酶，还能激活猪体内内源酶的分泌，补充内源酶的不足，并对内源酶进行调整，保证猪正常的消化吸收功能，起到防病、促生长的作用，还可以降低消化物的黏稠度，增加内源酶的扩散，提高酶与养分的接触面积，促进饲料消化；同时，纤维素酶是一种由蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和纤维素酶等组成的多酶复合物，在这种多酶复合体系中，一种酶的产物可以成为另一种酶的底物，从而使消化道内的消化作用得以顺利进行。即纤维素酶除直接降解纤维素、促进其分解为易被动物消化吸收的低分子化合物外，还和其它酶共同作用，提高猪对饲料营养物质的分解和消化，从而多方面综合促进猪对中草药有益成分的吸收，以提高猪群体自身的抗应激能力、机体免疫功能和抗病防御机能，从而减少饲料资源的浪费，提高猪的生产性能和经济效益。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明产品组成及工艺。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中分离提取条件进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

本发明提供的黑曲霉(Aspergillus niger)Li-2013-03是由天津工业大学实验室保藏的一株产纤维素酶的黑曲霉(Aspergillus niger)Li-2010经亚硝基胍多轮诱变筛选，然后对优良菌株经发酵性能测试筛选得到产高活力纤维素酶的黑曲霉菌株(Aspergillus niger)Li-2013-03。

所述黑曲霉(Aspergillus niger)Li-2013-03，该菌株已于2013年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101)，保藏号为CGMCC NO.7927。

本发明黑曲霉菌株(Aspergi11us niger)Li-2013-03(CGMCC No.7927)具有以下微生物学特征：

1、形态学特征：

黑曲霉菌株CGMCC No.7927，生物学形态为包括分生孢子、胞梗、顶囊、产胞结构等几部分。分生孢子头球形至辐射形，直径150-450μm，分生孢子梗发生于基质。胞梗茎1000-3000(长度)×12-20(直径)μm，黄色或黄褐色，壁平滑；顶囊球形或近似球形，直径45-75μm，表面全面可育；产胞结构双层，梗基10-20(长度)×4.5-7.0(直径)μm，瓶梗6-10(长度)×2.5-3.5(直径)μm，分生孢子球形或近球形，直径3-4.5μm，褐色，壁粗糙。

2、培养学特征：

菌株在麦芽汁琼脂培养基上生长迅速，28℃4天孢子可铺满斜面；质地丝绒状或稍带絮状；分生孢子结构大量，褐黑色，无渗出液；菌落反面略带黄色。

3、生理生化特征：

黑曲霉菌株CGMCC No.7927可在玉米秸秆、稻草、木屑、马铃薯、玉米粉、可溶性淀粉、糖蜜等碳源上生长，最适pH范围5-6，最适生长温度范围28-33℃，最适产酶温度范围28-30℃。

本发明黑曲霉菌株CGMCC No.7927的筛选技术路线为：出发菌株→斜面培养→孢子悬液的制备→诱变处理→平板分离→初筛→复筛→遗传稳定性测定→扩大实验(发酵性能测定)。

按诱变筛选方案，对突变株逐级筛选淘汰，最后对优良菌株经发酵性能测试筛选，得到一株高产酶性能菌株黑曲霉菌(Aspergillus niger)Li-2013-03，发酵96小时后纤维素酶的外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U／mL、1289U／mL、456U／mL和732U／mL。

28℃发酵4天直径75mm，发酵液纤维素酶的的外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U／mL、1289U／mL、456U／mL和732U／mL，分别比出发菌株提高了9.21倍、7.43倍、8.15倍和10.31倍。

产高活力纤维素酶菌株的筛选方法，包括以下步骤：

1)斜面培养：将原始黑曲霉菌株(Aspergillus niger)Li-2010划线接种斜面培养基，30℃培养2～3d，直至菌丝体成熟、产大量黑色孢子。所述斜面培养基组成如下：12^OBrix麦芽汁1000mL，pH值自然，121℃灭菌20min；

2)孢子悬液制备(以下步骤均在无菌条件下操作)：向试管斜面加入15mL无菌水，把孢子刮下，用滤纸过滤，将滤过液倒入已灭菌、并加有5-10粒无菌玻璃珠的150mL三角瓶中，将三角瓶放入摇床振荡10-15min，使孢子分散。

3)亚硝基胍(NTG)诱变

A.用无菌水将孢子悬浮液调节为稀释成10⁶-10⁷个／mL。

B.取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg／mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。

C.在30℃下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心10min收集菌体，用无菌生理盐水洗涤数次，中止反应。

D.适当稀释将孢子浓度调节为10³个／mL，取最后稀释度的菌液0.2mL，稀释涂布于纤维素-刚果红平板筛选培养基上。在30℃培养2～3天后挑取透明圈／菌落直径较大的菌株200支。(所述纤维素-刚果红平板筛选培养基组成如下：纤维素粉10g、刚果红0.2g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1g、氯化钠0.1g、明胶2g、琼脂20g、自来水定容1000mL，pH值5-6，121℃灭菌20min)。

E.复筛：将获得的200株菌分别用无菌牙签接种于斜面培养基，30℃培养至孢子铺满斜面。分别将孢子以无菌水洗下接种于装有50mL复筛培养基的250mL三角瓶中进行发酵，接种量10％(v／v)，30℃、100r／min培养96h，分别测定各菌株的纤维素酶活性。(所述复筛培养基组成如下：纤维素粉50g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1g、氯化钠0.1g、自来水定容1000mL，pH值5-6，121℃灭菌20min)。选取纤维素酶酶活力最高的菌株进行放大实验。

4)遗传稳定性试验

将Li-2013-03菌株在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指标都正常，说明该菌种的遗传稳定性较强。

5)放大试验

①种子培养：将纤维素酶酶活力最高的菌株(Aspergillus niger)Li-2013-03接入500mL三角瓶中，种子培养基装量100毫升，30℃、150rpm摇床培养72-96h。

②种子罐培养：将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30％。所述发酵培养基组成为：纤维素粉100g、硫酸铵5g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1g、氯化钠0.1g、自来水定容1000mL，pH值5-6，121℃灭菌20min。

发酵结束后，取发酵上清液(粗酶液)进行酶活力检测经测定，菌株(Aspergillus niger)Li-2013-03的外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和滤纸酶活力分别达到620U／mL、1289U／mL、456U／mL和732U／mL，分别比出发菌株(Aspergillus niger)Li-2010提高了9.21倍、7.43倍、8.15倍和10.31倍。

实施例1

一种复合饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：

香菇子实体粉5份，板蓝根粉碎物5份，天门冬粉碎物8份，黑曲霉培养物20份，甘草粉2份。

所述香菇子实体粉制备方法如下：将香菇子实体经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述板蓝根粉碎物制备方法如下：将板蓝根经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述天门冬粉碎物制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述黑曲霉培养物的制备方法如下：

斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子液后，将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0，培养温度30℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶1，培养时间96h，溶解氧25％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。

本发明饲料添加剂的制备方法如下：

按照原料组成将香菇子实体粉、板蓝根粉碎物、天门冬粉碎物、黑曲霉培养物、甘草粉混合均匀即得。

本发明产品在生长猪日粮中的添加量为800克／吨。

实施例2

一种复合饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：

香菇子实体粉6份，板蓝根粉碎物6份，天门冬粉碎物6份，黑曲霉培养物15，甘草粉1份。

所述香菇子实体粉制备方法如下：将香菇子实体经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述板蓝根粉碎物制备方法如下：将板蓝根经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述天门冬粉碎物制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述黑曲霉培养物的制备方法如下：

斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子液后，将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.2，培养温度29.9℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶0.8，培养时间96h，溶解氧20％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。

制备方法：同实施例1

本发明产品在生长猪日粮中的添加量为500克／吨；

实施例3

一种复合饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：

香菇子实体粉3份，板蓝根粉碎物3份，天门冬粉碎物10份，黑曲霉培养物25份，甘草粉2份。

所述香菇子实体粉制备方法如下：将香菇子实体经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述板蓝根粉碎物制备方法如下：将板蓝根经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述天门冬粉碎物制备方法如下：将天门冬经粉碎机粉碎至粒径为2毫米以下；

所述甘草粉制备方法如下：将甘草经粉碎机粉碎至粒径为1毫米以下；

所述黑曲霉培养物的制备方法如下：

斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上逐级培养获得种子液后，将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为5.8，培养温度30.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶1.2，培养时间96h，溶解氧30％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。

制备方法：同实施例1。

本发明产品在生长猪日粮中的添加量为1000克／吨；

采用实施例1制备的复合饲料添加剂做以下验证。

试验方法：

试验动物选择养殖场平均体重为(7.11±0.1)kg的健康断奶仔猪120头，经统计分析体重差异不显著。采用单因子随机化设计，将120头健康断奶仔猪，按公母各半，分成2组(对照组和试验组)，每组6个重复，每个重复10头猪。试验组添加实施例1制得的本发明产品，对照组不添加本发明产品。连续饲喂15天，与对照组相比，使用发明饲料添加剂可获得如下效果：

项目	对照组	试验组	备注
				始重(kg)	7.05	7.02
末重(kg)	10.78	11.45
				日增重(g/d/头)	248.7	295.3
日采食量(g/d/头)	336.5	337.5
				料肉比	1.35	1.14
呼吸道疾病发病率(％)	24.4	7.8

试验结果表明，在断奶仔猪日粮中添加本产品，在日采食量基本相同的情况下，仔猪的日增重比对照组有较大提高；料肉比有明显降低；饲料利用率显著提高，猪的呼吸道疾病发病率显著降低。

本发明例1饲料添加剂在哺乳母猪中的使用效果试验

在猪场进行了为期21天的饲喂试验。试验采用单因素对比设计，随机选取30头健康的、产仔头数与出生均重相近的、胎次均为2或3胎的哺乳母猪，随机分为2组(即试验组和对照组)，每组15个重复。其中：试验组日粮添加由实施例1制备得的本产品，对照组不添加本发明产品。记录仔猪断奶重、死亡率和呼吸道疾病发病率。

项目	对照组	试验组	备注
				平均产活仔数(头数)	11.1	10.7
出生均重(kg)	1.48	1.45
				21天平均断奶仔猪(头)	9	10
死亡率％	17.9	7.42
				21天断奶窝重(kg)	64.2	74.7
21天断奶均重(kg)	7.1	7.44
				呼吸道疾病发病率(％)	18.3	6.1

试验结果表明，在哺乳母猪日粮中添加本产品，产猪仔的体重比对照组有较大提高；仔猪呼吸道疾病发病率显著降低。

以上两例试验表明：本发明产品可改善母猪和仔猪机体自身的抗应激能力、机体免疫功能和抗病防御机能，显著降低仔猪的呼吸道疾病发病率，提高猪的生产性能和经济效益。

Claims (7)

1.一种复合饲料添加剂，由以下重量份数的原料组成：香菇子实体粉3-6份，板蓝根粉碎物3-6份，天门冬粉碎物6-10份，黑曲霉培养物10-25份，甘草粉1-2份；所述黑曲霉保藏编号为保藏号为CGMCC NO.7927。

2.根据权利要求1所述复合饲料添加剂，其特征在于，黑曲霉培养物的制备方法如下：斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上，逐级培养获得种子液后，将种子液以10％接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(1∶0.8-1.2)，培养时间96h，溶解氧20-30％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。

3.根据权利要求1所述复合饲料添加剂，其特征在于，由以下重量份数的原料组成：香菇子实体粉5份，板蓝根粉碎物5份，天门冬粉碎物8份，黑曲霉培养物20份，甘草粉2份。

4.根据权利要求1所述复合饲料添加剂，其特征在于，由以下重量份数的原料组成：香菇子实体粉6份，板蓝根粉碎物6份，天门冬粉碎物6份，黑曲霉培养物15，甘草粉1份。

5.根据权利要求1所述复合饲料添加剂，其特征在于，由以下重量份数的原料组成：香菇子实体粉3份，板蓝根粉碎物3份，天门冬粉碎物10份，黑曲霉培养物25份，甘草粉2份。

6.一种制备如权利要求1-5所述的复合饲料添加剂的方法，包括如下步骤：按照原料组成将香菇子实体粉、板蓝根粉碎物、天门冬粉碎物、黑曲霉培养物、甘草粉混合均匀即得。

7.如权利要求6所述制备复合饲料添加剂的方法，其特征在于，黑曲霉培养物的制备方法如下：斜面菌种活化培养转接到斜面培养基上，逐级培养获得种子液后，将种子液以10％(v／v)接种量接入装有7.5L发酵液的10L发酵罐中，控制pH值恒定为6.0±0.2，培养温度30±0.1℃，搅拌速度300rpm，通风量(v／v)1∶0.8-1.2，培养时间96h，溶解氧20-30％。发酵结束后经板框过滤、浓缩和干燥工艺获得含有菌体和酶制剂的混合物，即得到黑曲霉培养物。