CN104897790A - 一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段。该技术方案是一种针对特定蛋白质分子标志物的检测技术，该标志物本身特异性强、稳定性好、灵敏度高，不会因生产过程中受到的漂白、染色等理化处理所干扰，因此该标志对羊绒和羊毛的指向性稳定、可靠，利用该方法对羊绒和羊毛执行鉴别、检测有效性强。利用该技术我们能够快速、准确、客观的判断毛绒类纺织产品中是否含有羊绒、羊毛，为该类产品的质量检验提供科学、可靠的检测手段。

Description

一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段

技术领域

本发明涉及纺织品检测技术领域，具体涉及一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段。

背景技术

山羊绒属于稀有的特种动物纤维，素有“纤维钻石”和“软黄金”之称。中国是世界最大的羊绒生产国，羊绒产量占世界总量的75％左右。中国也是世界第一大羊绒输出国，羊绒及其制品年出口总额超过15亿美元，同时国内的羊绒制品市场也十分广阔。

在巨大的经济利益驱使下，行业内掺杂使假和假冒伪劣等现象反复出现，这些都严重妨碍了羊绒产业的健康、良性、可持续性发展。现今市场上对羊绒类纺织纤维产品的混合掺假多为以羊毛等低价值原料掺入珍稀的山羊绒原料中，制成的织物在形貌和手感上都极难分辨。

目前对羊绒产品的质量检验方法以物理性的显微观察法为主，由检验人员对纤维的细度、异型纤维率、含杂率、长度、强度、伸长度等进行检验(参见《关于山羊绒国家质量标准的制定意见》)。这类检测方法需要检验人员接触过大量的羊绒样品，积累数十年的实践经验，主观性强。除了最常用的光学显微镜检测法，国外研究者也尝试过使用扫描电镜观察纺织纤维的表面形态和精细结构，但这种方法实验成本高、操作繁琐，而且无法区分与羊绒纤维形、结构非常近似的其他种类纤维，其中就以羊毛的混淆作用最为突出。另外，研究者也通过分析纤维材料中的脂质分子、DNA序列差异或者制备特异性识别羊绒的抗体来鉴别羊绒成分，这类探索性的方法往往受到生产过程中多种化学处理(比如漂白、染色)的干扰，使得结果出现偏差。因而行业内亟需一种科学、客观、准确的羊绒类纺织纤维产品成分鉴别分析新技术。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种羊绒与羊毛的鉴别方法、用于该方法的标志物肽段，用以解决现有技术中缺乏一种用以区分羊绒与羊毛的、简便、快速且准确的鉴别方法的技术缺陷。

本发明解决的另一技术问题是提供一种以标志性氨基酸序列为检测、鉴定依据的羊绒、羊毛鉴别方法。

本发明解决的再一技术问题是提供一种专用于上述方法的羊绒标志性肽段；

本发明解决的又一技术问题是提供一种专用于上述方法的羊毛标志性肽段。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种羊绒与羊毛的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊绒标志性肽段。

针对该方法优选的，步骤1)包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

针对该方法优选的，步骤2)所述检测是氨基酸序列测定；在此基础上进一步优选的，步骤2)包括以下步骤：对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊绒标志性肽段；进一步优选的，步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫键还原剂孵育，而后加入巯基封闭试剂，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物；其中，所述二硫键还原剂可以优选为苏糖醇；所述巯基封闭试剂可以优选为碘乙酰胺。

针对该方法优选的，步骤2)所述生物质谱分析是通过色谱-生物质谱联用系统检测实现的。

本发明还提供了一种用于以上方法的肽段，该肽段作为羊毛的标志性肽段具有如下的氨基酸序列：YEEEVALR。

本发明还提供了一种用于以上方法的肽段，该肽段作为羊绒的标志性肽段具有如下的氨基酸序列：QCCESNLEPLFSGYIETLR。

在利用以上方法对待测样品执行检测后，若检测结果显示待测样品总蛋白中含有序列为YEEEVALR的肽段则判定该样品中含有羊毛成分，反之则不含有羊毛成分；若检测结果显示待测样品总蛋白中含有序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则判定该样品中含有羊绒成分，反之则不含有羊绒成分。依据该鉴别原则形成鉴别结论。

本发明是一种针对特定蛋白质分子标志物的检测技术，该标志物本身特异性强、稳定性好、灵敏度高，不会因生产过程中受到的理化处理(比如漂白、染色)所干扰，因此该标志对羊绒和羊毛的指向性稳定、可靠，利用该方法对羊绒和羊毛执行鉴别、检测有效性强。利用该技术我们能够快速、准确、客观的判断毛绒类纺织产品中是否含有羊绒、羊毛，为该类产品的质量检验提供科学、可靠的检测手段。

附图说明

图1是本发明实施例1中标准羊绒纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图2是本发明实施例1中标准羊毛纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图3是本发明实施例1中标准羊绒纤维与标准羊毛纤维混合物的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图4是本发明实施例1中标准羊绒纤维与标准牦牛毛纤维混合物的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图5是本发明实施例1中标准羊毛纤维与标准牦牛毛纤维混合物的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图6是本发明实施例2中含有5％标准羊绒纤维的羊绒-牦牛毛纤维混合样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图7是本发明实施例2中含有5％标准羊毛纤维的羊毛-牦牛毛纤维混合样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图8是本发明实施例3中代号为S1的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图9是本发明实施例3中代号为S2的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

在以上附图1～9中，所有可检出的标准肽段均标注在谱图中，未标注表示该标准肽段未被检出。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1(羊绒、羊毛组成鉴别方法的特异性实验)

一、材料

标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品及标准牦牛毛纤维由天津纺织工程研究院提供。

二、方法

分别取羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品、牦牛毛纤维进行两两混合。将上述混合样品及标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品、标准牦牛毛纤维样品作为受试物，提取总蛋白质并采用生物质谱分析技术检测标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及标志性肽段YEEEVALR。

(1)自纺织纤维样品中提取蛋白：

将纺织纤维样品剪碎，乙醇浸泡，氯仿-甲醇溶液浸泡。滤去浸泡溶液后干燥纤维样品，加入蛋白提取溶液提取。过滤，滤液离心，取上清液待进一步处理。

(2)胰酶酶解处理：

提取得到的蛋白样品采用碳酸氢铵溶解，加入二硫苏糖醇并于室温下孵育，再加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于37℃下孵育。酶解后的样本脱盐后热干，低温保存待分析。

(3)生物质谱分析

将上述处理后的纺织纤维蛋白的酶解样品注入色谱-生物质谱联用系统检测，利用生物质谱分析方法获得羊绒标志肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛标志肽段YEEEVALR的检测信号。

三、结果

如图1～5所示，羊绒成分标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR仅在羊绒标准品(图1)及含羊绒纤维的混合样品(图3、4)中鉴定到，羊毛成分标志性肽段YEEEVALR仅在羊毛标准品(图2)及含羊毛纤维的混合样品(图3、5)中鉴定到，牦牛毛纤维的存在对羊绒及羊毛组成的鉴定结果未产生干扰。因此本发明羊绒、羊毛标志性蛋白质及检测方法均显示很好的特异性。

实施例2(羊绒、羊毛成分标志蛋白质鉴定的灵敏度实验)

一、材料

羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品、牦牛毛纤维标准样品。

二、方法

分别取标准羊绒、标准羊毛纤维样品按不同比例分别与牦牛毛纤维标准样品混合，获得羊绒含量分别为5％-50％，羊毛含量分别为5％-50％共6个样品，提取总蛋白质，检测羊绒标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛标志性肽段YEEEVALR。

三、结果

如图6、7及表1所示，基于对羊绒标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR的分析可检测到含量为5％的羊绒成分(图6)。同样，基于对羊毛标志性肽段YEEEVALR的分析可检测到含量为5％的羊毛成分(图7)。该灵敏度测定结果表明，建立的羊绒、羊毛蛋白质组成鉴别方法的灵敏度已足够满足羊绒纺织行业的质量检测要求。

表1不同比例混合样本中羊绒、羊毛成分标志肽段鉴定结果

实施例3(供试材料中羊绒、羊毛的鉴别分析)

一、材料

市售羊绒衣料S1、S2、S3，市售羊毛衣料S4，经纤维细度仪鉴定S1、S2、均为羊绒、羊毛混纺衣料，S3为羊绒、牦牛毛混纺衣料，S4为羊绒、驼毛混纺衣料。

二、方法

分别处理各供试品，提取总蛋白质，检测羊绒标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛标志性肽段YEEEVALR。

三、结果

如图8、9及表2所示，供试材料S1及供试材料S2中羊绒成分标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛成分标志性肽段YEEEVALR均为鉴定阳性，说明此二供试品中均含有羊绒、羊毛成分。供试材料S3和S4中只检出羊绒成分标志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR，说明此供试品中含有羊绒成分而无羊毛成分。上述结果与用纤维细度仪鉴定结果一致。

表2供试材料中羊绒、羊毛成分标志肽段的鉴定结果

综合以上实施例1～3实验结果充分表明，本发明建立的羊绒标志物肽段及检测方法特异性好、灵敏度高，可作为一种纺织品中羊绒与羊毛成分的鉴别、检测方法。

实施例4

一种利用序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR肽段和序列为YEEEVALR的肽段鉴别羊毛与羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中是否含有上述肽段。

对于上述检测结果，若显示存在序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则证明待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒；若显示存在序列为YEEEVALR的肽段则证明待测样品中含有羊毛，反之则不含有羊毛。

实施例5

一种利用序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR肽段和序列为YEEEVALR的肽段鉴别羊毛与羊绒的方法，包括以下步骤：

1)将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中是否含有上述肽段。

对于上述检测结果，若显示存在序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则证明待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒；若显示存在序列为YEEEVALR的肽段则证明待测样品中含有羊毛，反之则不含有羊毛。

实施例6

一种利用序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR肽段和序列为YEEEVALR的肽段鉴别羊毛与羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中是否含有权利要求1所述肽段。

对于上述检测结果，若显示存在序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则证明待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒；若显示存在序列为YEEEVALR的肽段则证明待测样品中含有羊毛，反之则不含有羊毛。

实施例7

一种利用序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR肽段和序列为YEEEVALR的肽段鉴别羊毛与羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)对步骤1)得到的总蛋白先采用碳酸氢铵溶解，而后加入二硫苏糖醇于室温下孵育，再加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、热干，即得到酶解产物；而后通过生物质谱分析酶解产物中是否含有权利要求1所述肽段。

对于上述检测结果，若显示存在序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段则证明待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒；若显示存在序列为YEEEVALR的肽段则证明待测样品中含有羊毛，反之则不含有羊毛。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种羊绒与羊毛的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊绒标志性肽段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)所述检测是氨基酸序列测定。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤2)包括以下步骤：对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中是否含有：序列为YEEEVALR的羊毛标志性肽段或序列为QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊绒标志性肽段。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫键还原剂孵育，而后加入巯基封闭试剂，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述二硫键还原剂是苏糖醇。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述巯基封闭试剂是碘乙酰胺。

8.根据权利要求4所述方法，其特征在于步骤2)所述生物质谱分析是通过色谱-生物质谱联用系统检测实现的。

9.一种用于权利要求1所述方法的羊毛标志性肽段，其特征在于具有如下的氨基酸序列：YEEEVALR。

10.一种用于权利要求1所述方法的羊毛标志性肽段，其特征在于具有如下的氨基酸序列：QCCESNLEPLFSGYIETLR。