CN105241993B - 纺织品中羊绒的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种纺织品中羊绒的检测方法。该方法首先确定了具有准确指向性的羊绒标志性肽段，该肽段特异性突出，当待测样品总蛋白中具有该肽段时可确切证明羊绒成分的存在，实验结果不会受到其他常规纺织品成分的影响。除了定性检测之外，可以利用上述标志性肽段的含量进行羊绒定量检测，肽段含量与羊绒含量间具有较好的线性关系，检测结果稳定、可靠。本发明以特异性的羊绒标志性肽段为基础开发了针对纺织品中羊绒的检测方法，该方法准确、有效且操作较为简便，具有突出的推广前景。

Description

纺织品中羊绒的检测方法

技术领域

本发明涉及纺织品检测技术领域，进一步涉及纺织品中羊绒的检测，具体涉及纺织品中羊绒的定量检测方法。

背景技术

山羊绒属于稀有的特种动物纤维，素有“纤维钻石”和“软黄金”之称。中国是世界最大的羊绒生产国，羊绒产量占世界总量的75％左右。中国也是世界第一大羊绒输出国，羊绒及其制品年出口总额超过15亿美元，同时国内的羊绒制品市场也十分广阔。

在巨大的经济利益驱使下，行业内掺杂使假和假冒伪劣等现象反复出现，这些都严重妨碍了羊绒产业的健康、良性、可持续性发展。现今市场上对羊绒类纺织纤维产品的混合掺假多为以羊毛等低价值原料掺入珍稀的山羊绒原料中，制成的织物在形貌和手感上都极难分辨。

目前对羊绒产品的质量检验方法以物理性的显微观察法为主，由检验人员对纤维的细度、异型纤维率、含杂率、长度、强度、伸长度等进行检验(参见《关于山羊绒国家质量标准的制定意见》)。这类检测方法需要检验人员接触过大量的羊绒样品，积累数十年的实践经验，主观性强。除了最常用的光学显微镜检测法，国外研究者也尝试过使用扫描电镜观察纺织纤维的表面形态和精细结构，但这种方法实验成本高、操作繁琐，而且无法区分与羊绒纤维形、结构非常近似的其他种类纤维，其中就以羊毛的混淆作用最为突出。另外，研究者也通过分析纤维材料中的脂质分子、DNA序列差异或者制备特异性识别羊绒的抗体来鉴别羊绒成分，这类探索性的方法往往受到生产过程中多种化学处理(比如漂白、染色)的干扰，使得结果出现偏差。

除了纺织品中羊绒成分的定性检测(纺织品中是否含有羊绒)之外，确定其中羊绒含量对产品品质评价更为重要。为了获得纺织品中的羊绒含量，首要的技术问题是确定一种有效的检测目标，由于纺织品中广泛存在其他蛋白成分，尤其存在诸如羊毛等与羊绒微观结构较为类似的蛋白，如果检测目标选择不合适则很容易影响检测结果。此外，标志物的检测信号与羊绒实际含量间的对应关系是否稳定、实验操作难度乃至实验结果的重现性等技术问题都有待突破。尽管现有技术的研究者做过诸多尝试，但截至目前尚缺乏一种针对纺织品中羊绒含量的有效检测方法。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种纺织品中羊绒的检测方法，以解决现有技术中难以确定纺织品中是否含有羊绒的技术问题。

本发明解决的另一技术问题是难以确定纺织品中羊绒含量。

本发明解决的再一技术问题是纺织品中羊绒含量检测操作较繁琐。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种纺织品中羊绒的检测方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中序列为SEQ ID NO1的肽段含量。

优选的，还包括步骤3)：利用与步骤2)相同的检测方法确定纺织品中羊绒含量与序列为SEQ ID NO1的肽段含量之间对应关系标准曲线，而后利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的序列为SEQ ID NO1的肽段含量确定出待测样品中羊绒含量。

另一种纺织品中羊绒的检测方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中序列为SEQ ID NO2的肽段含量。

优选的，还包括步骤3)：利用与步骤2)相同的检测方法确定纺织品中羊绒含量与序列为SEQ ID NO2的肽段含量之间对应关系标准曲线，而后利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的序列为SEQ ID NO2的肽段含量确定出待测样品中羊绒含量。

在以上任一项技术方案基础上优选的，步骤1)包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

在以上任一项技术方案基础上优选的，步骤2)包括以下步骤：对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中序列为SEQ ID NO1的肽段含量或序列为SEQ ID NO2的肽段含量。在此基础上进一步优选的，步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而后加入巯基封闭试剂，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。进一步优选的，所述巯基封闭试剂是碘乙酰胺；加入碘乙酰胺后在室温条件下避光孵育。

同时，本发明还提供了一种用于上述方法的肽段，该肽段的序列如SEQ ID NO1所示。

同时，本发明还提供了一种用于上述方法的肽段，该肽段的序列如SEQ ID NO2所示。

在以上技术方案中，序列为SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的肽段被确定为羊绒的标志性肽段，当利用液相色谱-生物质谱方法检测发现待测物总蛋白中具有该序列的肽段时，则证明待测物中含有羊绒成分，反之则不含有羊绒成分。进一步的，可以利用待测物总蛋白中以上标志性肽段的含量反应其中羊绒的含量。

其中，确定羊绒含量与标志性肽段含量之间对应关系标准曲线，可以是通过以下方法实现的：取羊绒标准品，与其他纺织品混合成为其中含有5％、10％、20％、30％、50％、70％等不同含量羊绒的待测物，再利用上述已知羊绒含量的待测物执行目标肽段含量检测，从而得到羊绒含量与目标肽段含量之间的对应关系，进而可以绘制成标准曲线。

当绘制出标准曲线以后，可以将某待测物的检测结果带入标准曲线公式求得该待测物中的羊绒含量。在以上标准曲线的应用中，应当注意规避系统性误差。

实验发现，本发明所确定的、序列分别为SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的肽段具有很好的特异性，只要上述肽段能够通过生物质谱方法检出则可以确切证明羊绒成分的存在，实验结果不会受到其他常规纺织品成分的影响。除了定性检测之外，可以利用上述标志性肽段的含量进行定量检测，肽段含量与羊绒含量间具有较好的线性关系，检测结果稳定、可靠。本发明以指向性优异的标志性肽段为基础开发了针对纺织品中羊绒的检测方法，该方法准确有效同时操作较为简便，具有突出的推广前景。

附图说明

图1是本发明实施例1中标准羊绒纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图2是本发明实施例1中标准羊绒纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图3是本发明实施例1中标准羊毛纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图4是本发明实施例1中标准羊毛纤维的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图5是本发明实施例1中标准羊绒纤维与标准羊毛纤维混合物的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图6是本发明实施例2中羊绒纤维含量与SEQ ID NO1所示序列的肽段含量对应关系标准曲线；

图7是本发明实施例2中羊绒纤维含量与SEQ ID NO2所示序列的肽段含量对应关系标准曲线；

图8是本发明实施例3中代号为S1的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图9是本发明实施例3中代号为S2的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图10是本发明实施例3中代号为S3的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

图11是本发明实施例3中代号为S4的样品的液相色谱-生物质谱检测结果图；

在以上附图1～11中，所有可检出的标志性肽段均标注在谱图中，未标注表示相应的标志性肽段未被检出。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1(本发明羊绒鉴别方法的特异性实验)

一、材料

标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品由天津纺织工程研究院提供。

二、方法

分别取羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品进行混合。将上述混合样品及标准羊绒纤维样品、标准羊毛纤维样品作为受试物，提取总蛋白质并采用生物质谱分析技术检测标志性肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR。

(1)自纺织纤维样品中提取蛋白：

将纺织纤维样品剪碎，乙醇浸泡，氯仿-甲醇溶液浸泡。滤去浸泡溶液后干燥纤维样品，加入蛋白提取溶液提取。过滤，滤液离心，取上清液待进一步处理。

(2)胰酶酶解处理：

提取得到的蛋白样品采用碳酸氢铵溶解，加入二硫苏糖醇并于室温下孵育，再加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于37℃下孵育。酶解后的样本脱盐后热干，低温保存待分析。

(3)生物质谱分析

将上述处理后的纺织纤维蛋白的酶解样品注入色谱-生物质谱联用系统检测，利用生物质谱分析方法获得羊绒标志肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR的检测信号。

三、结果

如图1至图5所示，羊绒成分标志性肽段GLLDSEDCKLPCNPCATTNAYGK和GLGYGYGSSYGLGGYGGYGYGYFHPSFYGR仅在羊绒标准品(图1、图2)及含羊绒纤维的混合样品(图5)中鉴定到，羊毛纤维的存在对羊绒的鉴定结果未产生干扰(图3、图4)。因此本发明羊绒标志性肽段检测方法显示很好的特异性。

实施例2(纺织品中羊绒含量标志性肽段含量间对应关系的构建)

一、材料

羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品。

二、方法

分别取标准羊绒样品按不同比例分别与羊毛纤维标准样品混合，获得羊绒含量分别为5％-100％共7个样品，提取总蛋白质，采用内标法检测序列为SEQ ID NO1和SEQ IDNO2的羊绒标志性肽段。

三、结果

如图6、图7及表1所示，基于对上述羊绒标志性肽段的分析，羊绒定量标准曲线线性范围为5％-100％，线性相关系数(R²)均在0.99以上。上述结果表明，建立的羊绒定量检测方法的灵敏度及线性范围已足够满足羊绒纺织行业的质量检测要求。

表1羊绒成分标志肽段标准曲线测定结果

实施例3(供试材料中羊绒的鉴别、定量分析)

一、材料

羊绒纤维标准品、羊毛纤维标准品。市售羊绒衣料S1、S2、S3、S4，经纤维细度仪鉴定均为羊绒、羊毛混纺衣料，其中羊绒比例为30-40％。

二、方法

分别处理各供试品，提取总蛋白质，检测序列为SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的羊绒标志性肽段。根据定量标准曲线获得供试样品中羊绒的含量。

三、结果

如图8～11所示，所有供试材料中序列为SEQ ID NO1和SEQ ID NO2的羊绒标志性肽段均为鉴定阳性，说明供试品S1、S2、S3、S4中均含有羊绒成分。供试品S1、S2、S3、S4中羊绒检测结果列于表2，可见检测结果重复性好且与用纤维细度仪鉴定结果一致。

表2受试纺织衣料样品中羊绒含量检测结果

实施例4

一种利用序列为SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量。

其中步骤1)又具体包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

步骤2)包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而后加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。

实施例5

一种利用序列为SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量；

3)利用羊绒纯品与其他纺织品混合成为多组不同羊绒含量的纺织品混合物，各组纺织品混合物中羊绒含量已知，在此基础上利用与步骤2)相同的检测方法确定纺织品中羊绒含量与上述某一标志性肽段含量之间对应关系标准曲线，而后利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的羊绒标志性肽段含量确定出待测样品中羊绒含量。

其中步骤1)又具体包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

步骤2)包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而后加入碘乙酰胺室温避光孵育，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。

实施例6

一种利用序列为SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的羊绒标志性肽段检测纺织品中羊绒的方法，包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中上述某一羊绒标志性肽段的含量。

对于上述检测结果，若显示存在序列为SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的肽段则证明待测样品中含有羊绒，反之则不含有羊绒。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种羊毛发类纺织品中羊绒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)自待测样品中提取总蛋白质；

2)检测步骤1)所述的总蛋白质中序列为SEQ ID NO1的肽段含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于还包括步骤3)：利用与步骤2)相同的检测方法确定纺织品中羊绒含量与序列为SEQ ID NO1的肽段含量之间对应关系标准曲线，而后利用该标准曲线和步骤2)所检测得到的序列为SEQ ID NO1的肽段含量确定出待测样品中羊绒含量。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤1)包括以下步骤：将待测样品分别通过乙醇、氯仿-甲醇溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；弃沉淀、取上清液待用。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤2)包括以下步骤：对步骤1)得到的总蛋白进行胰酶酶解；而后通过生物质谱分析酶解产物中序列为SEQ ID NO1的肽段含量。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于步骤2)所述胰酶酶解包括以下步骤：将步骤1)得到的总蛋白溶解后加入二硫苏糖醇孵育，而后加入巯基封闭试剂，最后加入胰蛋白酶于35～39℃下孵育，将酶解后的蛋白脱盐、干燥，即得到酶解产物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述巯基封闭试剂是碘乙酰胺。