CN104886151A

CN104886151A - 杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法

Info

Publication number: CN104886151A
Application number: CN201510318234.5A
Authority: CN
Inventors: 张灵玲; 朱小丽; 陈慧成; 刘健楠; 徐卓吟; 郭雅洁
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2015-06-11
Filing date: 2015-06-11
Publication date: 2015-09-09

Abstract

本发明涉及一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法。杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂的制备方法，包括配料、配制氯化钙溶液、制备漂浮剂、硬化并干燥。本发明以海藻酸钠为载体，氯化钙为交联剂；加入苏云金芽孢杆菌原粉为有效活性成分，具有高效的杀蚊活性。通过空心玻璃微珠使剂型达到漂浮缓释作用，减少了紫外线的辐射，延长了持效期。加入黑色素为紫外保护添加剂，增强了该菌的抗紫外辐射能力。本发明的产品为固体，配方合理，杀虫毒力高；使用时只需将本产品洒入蚊虫滋生的水面上，防治效果好，为开发推广与普及应用提供了方便。

Description

杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物农药及其制备方法，具体涉及一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法，属于生物农药技术领域。

背景技术

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt），是一种革兰氏阳性细菌，苏云金芽孢杆菌在芽孢形成阶段产生的伴孢晶体（即δ-内毒素）具有杀虫活性。利用Bt制成的商业化杀虫剂，被广泛地应用于农林业以及媒介害虫的生物防治。Bt具有不污染环境、对人畜无害、不易产生抗性等优点，是目前研究最深入、应用最广泛的微生物杀虫剂。Bt以色列亚种（B. thuringiensis subsp.israelensis，简称Bti）对多种蚊虫具有高效活性，已成功开发为生物杀虫剂用于蚊虫等卫生害虫的防治，在疟疾、登革热、黄热病等蚊媒疾病的控制上发挥了重要的作用。但是，目前市面上流通的Bt制剂产品应用受限，主要是由于在使用过程中其活性成分芽孢和晶体易受环境中紫外线的照射而使其杀虫活性下降或丧失。从而降低产品的杀虫活性以及持效期。

目前提高Bt杀虫剂抗紫外辐射能力的方式主要是利用剂型研究或添加助剂的方法，通过包裹等制剂形式或者在菌剂中添加紫外吸收剂和保护剂，以减少紫外线对菌体的直接辐射。主要是着色剂和荧光增白剂等。这些添加剂对Bt制剂起到了很好的紫外保护作用，大大延长了Bt制剂的有效期。目前报道已上市商品化的Bt剂型主要分为固体型和液体型，固体有粉剂、颗粒剂、粉末剂、球剂；液体有悬浮剂、乳剂、胶囊剂等。微胶囊漂浮剂是目前新剂型中被认为最有效和最具开发前景的一种剂型形式。这些剂型不仅使得颗粒剂可以稳定的运输与保存，而且对紫外线辐射等不利的环境因素具有很好的保护作用。因此，Bt制剂加工程度与其杀虫剂开发应用密切相关。

Bt颗粒剂是目前农药剂型中技术含量最高的一种，它是针对孑孓生活习性而设计的一种专用剂型，具有漂浮和持续释放能力。目前的常规剂型在投入孑孓的滋生地后，由于其大部分有效物质密度比水大，经一段时间便会因为重力作用沉入水底并吸附在塘泥上，减少了Bt与幼蚊的接触时间，而降低药效。在适宜的温度和环境条件下，蚊虫完成一个周期通常只需7天左右。需频繁施药才能较理想的控制害虫数量，但容易增大对环境的压力，并且造成浪费。

微胶囊化颗粒剂是解决Bt菌野外使用的最佳方法，它可以减少紫外线辐射，增强制剂漂浮、缓慢释放能力，并延长Bt菌使用的持效期。目前海藻酸钠微胶囊化最常用的方法是锐孔滴入法，即将含有微生物的海藻酸钠溶液通过不同孔径的针头滴入到二价交联溶液中，微胶囊的大小取决于海藻酸钠溶液的粘度以及针头的大小。该方法工艺简单、操作方便。本文采用锐孔滴入法并且添加漂浮剂、紫外保护剂等，不仅起到漂浮保护作用，而且还增强制剂毒力，从而延长了持效期。

发明内容

本发明的目的在于提供一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂的制备方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）配料：取海藻酸钠、空心玻璃微珠、苏云金芽孢杆菌原粉、黑色素、苯甲酸钠和水，配制成混合溶液，各原料占制剂的重量百分比分别为0.5%~1.0%、2.0%~4.0%、2.5%~3.5%、0.01%~0.02%、0.1%~0.3%、其余水；

（2）配氯化钙溶液：配制重量百分浓度为1%~5%的氯化钙水溶液；

（3）制备颗粒剂：用无菌注射器将步骤（1）的混合溶液逐滴加入到步骤（2）的氯化钙水溶液中，液滴形成颗粒状微珠并凝固；

（4）硬化并干燥：步骤（3）的液滴在氯化钙溶液中硬化时间不少于5.2 h，弃氯化钙溶液，将硬化的颗粒状微珠用蒸馏水清洗，风干，即可。

所述海藻酸钠、苯甲酸钠、氯化钙为分析纯；杀蚊苏云金杆菌为Bt以色列亚种（已公开，菌株保藏号为：CGMCC 1.1754）；苏云金芽孢杆菌原粉，纯度为5400ITU/mg；空心玻璃微珠的规格为OLH-D，粒度范围15~120微米；上述原料均由市场购得。

本发明还保护利用上述方法制备的杀蚊苏云金芽孢杆菌漂浮剂。

本发明的优点及技术原理：本发明以海藻酸钠为载体，氯化钙为交联剂。加入苏云金芽孢杆菌原粉为有效活性成分，具有高效的杀蚊活性。由于玻璃微珠的作用，使得剂型具有漂浮缓释作用，并且能够有效减少紫外线的辐射，延长了Bt产品的持效期。黑色素是产品的紫外保护添加剂，增强了苏云金芽孢杆菌的抗紫外能力。为了避免苏云金芽孢杆菌漂浮剂因为水体物质变质发霉而致使漂浮能力下降等情况发生，苯甲酸钠对菌具有一定的防腐保护作用。苏云金芽孢杆菌制剂的配方与杀虫效果关联紧密，对产品的实际野外杀蚊效果及经济效益具有显著影响。本漂浮剂为固体颗粒剂，配方合理且杀虫毒力高；使用时只需将本颗粒剂洒入蚊虫滋生的水面上，防治效果好，并且抗紫外能力强，延长野外持效期，为产品的开发与推广应用提供了有力的支持。

具体实施方式

为了充分公开本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法，以下结合实施例加以说明。

实施例1：一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂制备方法，包括以下步骤：

（1）取海藻酸钠、、空心玻璃微珠、苏云金芽孢杆菌原粉、黑色素、苯甲酸钠和水，配制成混合溶液，各原料占制剂的重量百分比分别为0.7%、2.9%、3.1%、0.015%、0.2%、其余水；

（2）配制重量百分浓度为4.3%的氯化钙水溶液；

（3）用无菌注射器将步骤（1）的混合溶液逐滴加入到步骤（2）的氯化钙水溶液中，液滴形成颗粒状并凝固；

（4）步骤（3）的液滴在氯化钙溶液中硬化时间为5.2 h，弃氯化钙水溶液，将硬化的颗粒状微珠用蒸馏水清洗2次，风干。

称取2g本发明的杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂加入到8L的水中，放入500只致倦库蚊Ⅳ龄幼虫，实验重复3次并对照。观察 24h死亡率，当处理死亡率超过50%时，更换新鲜水及移入新的试虫；每24h统一更换新鲜水和新鲜试虫。本发明的杀蚊苏云金杆菌颗粒剂杀虫效果如表1所示，其漂浮率如表2所示。

表1杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂处理后不同时间内对致倦库蚊III龄幼虫平均校正死亡率

备注：以上数据结果为3次重复的平均值。

表2杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂处理后不同时间内平均漂浮率

备注：以上数据结果为3次重复的平均值。

如表1所示，杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂处理后，随着处理时间的延长，试虫平均相对死亡率呈逐渐升高趋势，至192h试虫相对死亡率达到99%。如表2所示，杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂有着较好的机械性能和持久的漂浮性，直到120h才开始出现下沉，到192h漂浮率仍保持84.00%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1. 一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂制备方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）配料：取海藻酸钠、空心玻璃微珠、苏云金芽孢杆菌原粉、黑色素、苯甲酸钠和水，配制成混合溶液，各原料占颗粒剂的重量百分比分别为0.5%~1.0%、2.0%~4.0%、2.5%~3.5%、0.01%~0.02%、0.1%~0.3%，其余为水；

（3）制备漂浮剂：用无菌注射器将步骤（1）的混合溶液逐滴加入到步骤（2）的氯化钙水溶液中，液滴形成颗粒状微珠并凝固；

2.根据权利要求1所述的一种杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂制备方法，其特征在于所述配料，取海藻酸钠、苏云金芽孢杆菌原粉、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸钠和水，配制成混合溶液，各原料占制剂的重量百分比分别为0.7%、2.9%、3.1%、0.015%、0.2%，其余为水。

3.由权利要求1或2所述的方法制备的杀蚊苏云金芽孢杆菌颗粒剂。