CN104878050A - 一种从海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法 - Google Patents

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    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
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Abstract

本发明公开了一种海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法，属于海洋微藻开发利用技术领域。该提取方法包括：取眼点拟微球藻，接种至装有培养基的三角瓶中，所述眼点拟微球藻和培养基按1.5∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，培养10天；然后置于光照培养箱中摇床培养，眼点拟微球藻培养好后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液，对萃取液进行后处理得到EPA藻油成品。本发明方法获得的EPA的提取率为95％。

Description

一种从海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法
技术领域
本发明属于海洋微藻开发利用技术领域，特别是涉及一种快速有效地从海洋微藻中提取EPA的方法。
背景技术
EPA即二十碳五烯酸，是一种多不饱和脂肪酸。同DHA一样，EPA组成磷脂、胆固醇酯等，是大脑、神经系统的重要组成部分。在人体内，亚麻酸可以转化成EPA，所以EPA并不是人体必需脂肪酸。EPA对降低低密度脂蛋白胆固醇有很好的作用。EPA存在于鱼类、母乳等食物中，EPA有许多功效，可以治疗人体自身免疫缺陷，例如风湿性关节炎；可以促进循环系统的健康；有助于生长发育，保持身体里的Ω-3脂肪酸含量处于一个适当平衡的位置对正常的生长和发育是十分必要的；对肺病、肾病、糖尿病、大肠溃疡和节段性回肠炎的治疗都会起到积极的作用。EPA还具有帮助降低胆固醇和甘油三酯的含量，促进体内饱和脂肪酸代谢。从而起到降低血液粘稠度，增进血液循环，提高组织供氧而消除疲劳，防止脂肪在血管壁的沉积，预防动脉粥样硬化的形成和发展、预防脑血栓、脑溢血、高血压等心血管疾病。
但是目前现有技术中对于EPA的提取率低，亦或有操作复杂和固定资产投资成本高等问题，均不适于大规模生产。采用溶剂萃取的方法从海洋微藻中提取EPA，工艺相对简单，固定资产投资需求小，容易放大规模生产，所以如何提高EPA的提取率是目前研究者们研究的主要问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从海洋微藻中提取EPA的方法，该方法通过海洋微藻的培养制备和有效提取，从而显著提高了EPA的提取率。
其技术解决方案包括：
一种海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法，包括以下步骤：
a眼点拟微球藻的培养
取眼点拟微球藻，接种至装有培养基的三角瓶中，所述眼点拟微球藻和培养基按1.5∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，培养10天；然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，培养9-12天；所述培养基的配方如下：硝酸钠0.03g/L，磷酸氢二钾0.01g/L，硼酸10mg/L，氯化锰12mg/L,硫酸铜0.005mg/L，FeC6H507 0.2mg/L；pH值在7.5到8之间；
b溶剂萃取EPA
眼点拟微球藻培养好后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液；所述萃取剂是由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成；然后对萃取液进行后处理得到EPA藻油成品。
步骤a中的培养基采用海水配制，海水在使用前进行加温杀菌处理。
步骤a中pH值为7.8。
本发明的有益技术效果是：
本发明先采用特制的培养基配方，对海洋微藻进行培育，通过外因的优化提高EPA的表达量，然后采用溶剂萃取法，选取由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成的萃取剂，二者综合作用显著提高了EPA的提取率，而且操作步骤简单，成本低，环境污染小，有利于大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
取眼点拟微球藻，接种至装有特制培养基的三角瓶中，按1∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，可吸收CO2，以防止因碳源不足而影响藻类生长，培养10天。所述特制培养基的配方如下：硝酸钠0.03g/L，磷酸氢二钾0.01g/L，硼酸10mg/L，氯化锰12mg/L，硫酸铜0.005mg/L，FeC6H5070.2mL/L；培养基采用海水配制，调节其pH值为7.5。海洋微藻培养完成后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液。所述萃取剂是由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成。然后对萃取液进行常规处理得到EPA藻油成品。经检测EPA的提取率为93％。EPA提取率＝EPA藻油成品中EPA的量/眼点拟微球藻中EPA的量×100％。
实施例2
取眼点拟微球藻，接种至装有特制培养基的三角瓶中，按1∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，可吸收CO2，以防止因碳源不足而影响藻类生长，培养10天。所述特制培养基的配方如下：硝酸钠0.03g/L，磷酸氢二钾0.01g/L，硼酸10mg/L，氯化锰12mg/L，硫酸铜0.005mg/L，FeC6H5070.2mL/L；培养基采用海水配制，调节其pH值为7.8。海洋微藻培养完成后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液。所述萃取剂是由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成。然后对萃取液进行常规处理得到EPA藻油成品。经检测EPA的提取率为95％。EPA提取率＝EPA藻油成品中EPA的量/眼点拟微球藻中EPA的量×100％。
实施例3：
取眼点拟微球藻，接种至装有特制培养基的三角瓶中，按1∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，可吸收CO2，以防止因碳源不足而影响藻类生长，培养10天。所述特制培养基的配方如下：硝酸钠0.03g/L，磷酸氢二钾0.01g/L，硼酸10mg/L，氯化锰12mg/L，硫酸铜0.005mg/L，FeC6H5070.2mL/L；培养基采用淡水配制，调节其pH值为7.8。海洋微藻培养完成后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液。所述萃取剂是由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成。然后对萃取液进行常规处理得到EPA藻油成品。经检测EPA的提取率为93.5％。EPA提取率＝EPA藻油成品中EPA的量/眼点拟微球藻中EPA的量×100％。

Claims (3)

1.一种从海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法，其特征在于包括以下步骤：
a眼点拟微球藻的培养
取眼点拟微球藻，接种至装有培养基的三角瓶中，所述眼点拟微球藻和培养基按1.5∶2的比例进行接种，然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，培养10天；然后置于光照培养箱中摇床培养，温度为28℃，光暗周期为12h/12h，振摇时保持三角瓶开口，培养9-12天；所述培养基的配方如下：硝酸钠0.03g/L，磷酸氢二钾0.01g/L，硼酸10mg/L，氯化锰12mg/L,硫酸铜0.005mg/L，FeC6H507 0.2mg/L；pH值在7.5到8之间；
b溶剂萃取EPA
眼点拟微球藻培养好后，通过离心收集海藻体，然后冷冻干燥，得到干燥藻体；选取萃取剂萃取干燥藻体，得到萃取液；所述萃取剂是由正己烷与乙醇按照体积比1:2的比例配制而成；然后对萃取液进行后处理得到EPA藻油成品。
2.根据权利要求1所述的一种从海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法，其特征在于：步骤a中的培养基采用海水配制，海水在使用前进行加温杀菌处理。
3.根据权利要求1所述的一种从海洋微藻中提取二十碳五烯酸的方法，其特征在于：步骤a中pH值为7.8。
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