CN104872371A - 一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法 - Google Patents

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诸辉
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Abstract

本发明提供一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法，包括以下步骤：取非洲沙丁鱼去除表面鱼鳞、内脏，并清洗干净后，切片、蒸熟、压榨、粉碎，加入水，得到鱼粉溶液；在鱼粉溶液中加入0.05-0.5％的复合酶进行酶解，所述复合酶由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按1︰(1-5)的质量比混合而成，酶解温度保持在30-70℃，先调PH值至7-8，酶解1h后再调PH值至7-8，继续酶解3-10h，得到含小肽蛋白的酶解混合物；然后灭酶处理；过振动筛，收集滤过液；将滤过液离心收集上清液，进行超滤，收集滤过液，真空浓缩喷雾干燥，得到小肽蛋白。该方法简单可控、得到的小肽蛋白成分和含量相对稳定，可作为优良的动物饲料。

Description

一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法
技术领域
本发明涉及生物制品和生物加工技术领域，具体涉及一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法。
背景技术
沙丁鱼，又称萨丁鱼、鳁和鰯，富有惊人的营养价值，富含磷脂、蛋白质和钙，主要用作食用，其鱼肉、主要是蛋白质亦可制为动物饲料。
沙丁鱼肽是沙丁鱼自身固有的或沙丁鱼蛋白在特定条件下将其具有一定功能特性的氨基酸序列片段从蛋白质肽链中切断并释放出来，且可能显示出一种或多种生物活性的肽类物质。沙丁鱼肽因其优良的理化性质、感官性能及特定的生理功能而受到广泛关注。研究已经证实，小肽的吸收利用速率远远高于氨基酸，且小肽具有较高的生物活性，对畜禽生长和健康具有重要作用。小肽具有超越其所含蛋白和氨基酸的额外的效果。
目前，制备鱼肽的方法主要是鱼蛋白可控酶解法，但是通过酶解工艺获得的蛋白质分子的大小、组成、结构等方面呈现不可避免的多样性和复杂性，限制了其进一步应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法，该方法简单可控、得到的小肽蛋白成分和含量相对稳定，可作为优良的动物饲料。
本发明所采用的技术方案为：
一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法，包括以下步骤：
(1)取非洲沙丁鱼为原材料，去除表面鱼鳞、内脏，并用水清洗干净后，切片、蒸熟(去除油脂，使酶解更充分)、压榨、粉碎(有利于充分酶解)，得到鱼粉；
(2)在鱼粉加入水，鱼粉与水的质量比为1︰(3-8)，搅拌均匀，得到鱼粉溶液；
(3)在鱼粉溶液中加入0.05-0.5％(重量百分比)的复合酶进行酶解，所述复合酶由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按1︰(1-5)的质量比混合而成，酶解温度保持在30-70℃，先调PH值至7-8，酶解1h后再调PH值至7-8，继续酶解3-10h，得到含小肽蛋白的酶解混合物；
(4)酶解完成后升高温度至70-100℃，保持10-30min，进行灭酶处理；
(5)将灭酶后的酶解混合物过50-150目的振动筛，将鱼骨粉(被截留)从酶解混合物中分离出来，收集滤过液；
(6)将滤过液离心在6500-7500rpm下离心10-30min，收集上清液，进行超滤，收集滤过液，真空浓缩至滤过液体积的1/3-2/3，喷雾干燥，得到小肽蛋白。
将得到的鱼小肽蛋白进行纯度和分子量大小测定，结果显示：83％分子量<1万Dalton、6％分子量5000～1000Dalton、7％分子量1000～500Dalton、21％分子量<500Dalton。与现有技术相比，本发明具有以下显著优点和有益效果：
(1)本发明鱼小肽蛋白的制备方法简单可控，可操作性强，重复性好，得到的小肽蛋白纯度高，成分和含量相对稳定，且生物活性物质种类和含量丰富；
(2)本发明得到的鱼小肽蛋白具有较高的可消化率，适用于用作动物添加饲料，可快速补充营养，促进增重、改善饲料报酬，促进幼龄动物肠道发育，增强动物抗病和抗应激能力，减少发病，提高成活率，改善群体均匀度，具有良好的诱食性，提高采食量，经试验验证可部分替代小猪饲料中抗生素的使用。
附图说明
图1所示的是本发明实施例4中不同饲料对断奶后猪仔生长影响的结果图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
实施例1：
(1)取非洲沙丁鱼为原材料，去除表面鱼鳞、内脏，并用水清洗干净后，切片、蒸熟(去除油脂)、压榨、粉碎，得到鱼粉；
(2)在鱼粉加入水，鱼粉与水的质量比为1︰6，搅拌均匀，得到鱼粉溶液；
(3)在鱼粉溶液中加入0.25％(重量百分比)的复合酶进行酶解，所述复合酶由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按1︰1.5的质量比混合而成，酶解温度保持在50-60℃，先调PH值至7.5，酶解1h后再调PH值至7.5，继续酶解4-6h，得到含小肽蛋白的酶解混合物；
(4)酶解完成后升高温度至90℃，保持20min进行灭酶处理；
(5)将灭酶后的酶解混合物过80目的振动筛，将鱼骨粉(被截留)从酶解混合物中分离出来，收集滤过液；
(6)将滤过液离心在7000rpm下离心20min，收集上清液，进行超滤，超滤孔径为5万Dalton，收集滤过液，真空浓缩至滤过液体积的1/3-2/3，喷雾干燥，得到小肽蛋白。
实施例2：
1、对实施例1得到的小肽蛋白采用高效液相色谱的方法进行纯度和分子量大小测定，结果如下：83％分子量<1万Dalton、6％分子量5000～1000Dalton、7％分子量1000～500Dalton、21％分子量<500Dalton。可见，采用本发明方法从沙丁鱼中制备的小肽蛋白纯度高，小肽蛋白分子量低，小肽含量丰富。
2、对实施例1得到的小肽蛋白进行各种理化指标检测，结果如下表1所示。
表1：小肽蛋白理化指标检测
3、对实施例1得到的小肽蛋白进一步进行营养指标检测，结果如下表2所示。
表2：小肽蛋白营养指标检测
从表1、表2可以看出，本发明得到的鱼小肽蛋白活性物质损失少，氨基酸种类和含量丰富，具有低生物胺、低组胺、低盐分的特性，具有完全可溶和可分散特性，适用于作为动物添加饲料。
实施例3：本发明小肽蛋白对大西洋鳕鱼生长性能的影响
实验选用同一母本大西洋鳕鱼为实验对象，实验前，先用自制的对照组饲料饲喂两周，使其适应养殖环境和饲料的硬度、粒径。实验采用自然光，在养殖水桶(水体体积120L)内养殖，养殖海水为深井海水，采用流水养殖模式，流速5L/min，水温15±0.5℃，溶氧高于7mg/L，盐度32‰，pH7.5-8.0。
实验开始前，停食24h，选择大小均匀、体格健壮且体表无病的大西洋鳕鱼幼鱼。随机将鱼分于15个养殖桶内(3个处理组，每个处理5个重复)，每桶25尾；每天人工饱食投喂两次(6:30和16:30)，投饲结束30min后，对每个桶内的残饵计数，根据每100粒残饵的平均重量，来计算未摄食的残饵重量。
在喂养时分别按下列比例添加到普通鱼饲料中进行喂养：
对照组：鱼粉21.8％；A组：鱼粉14.3％、FH(市面上鱼水解物)5.9％；B组：鱼粉17％、实施例1得到的小肽蛋白3.4％。养殖实验共计68天，饲养时分别对鱼的采食量、饲料效率(增重/饲料)、死亡率进行记录。结果如表3所示。
表3
实施例4：本发明小肽蛋白对断奶后猪仔生长的影响
本试验采用单因子试验设计，选用125头初始体重为(7.97±0.22)kg的健康断奶仔猪，随机分为6个处理，每个处理5个重复，每个重复5头猪，分别饲喂对照日粮(基础日粮为玉米-豆粕)以及分别添加血浆蛋白、本发明小肽蛋白(优美饲料，YMT)，添加比例见下表4，待试验猪体重约100kg时结束试验。在此期间每天对猪的体重进行称量，分别计算出猪的日增重量，结果如图1所示。
表4
实验编号 饲料
1 对照
2 +4％血浆(PP)
3 +2％优美饲料(YMT)
4 +3％PP&+1％YMT
5 +1％PP&+3％YMT
6 +0％PP&+4％YMT
本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为符合生物制品和生物技术加工的市售产品。
以上所述，仅为本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的核心技术的前提下，还可以做出改进和润饰，这些改进和润饰也应属于本发明的专利保护范围。与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (1)

1.一种沙丁鱼小肽蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取非洲沙丁鱼为原材料，去除表面鱼鳞、内脏，并用水清洗干净后，切片、蒸熟、压榨、粉碎，得到鱼粉；
(2)在鱼粉加入水，鱼粉与水的质量比为1︰(3-8)，搅拌均匀，得到鱼粉溶液；
(3)在鱼粉溶液中加入0.05-0.5％的复合酶进行酶解，所述复合酶由碱性蛋白酶和胰蛋白酶按1︰(1-5)的质量比混合而成，酶解温度保持在30-70℃，先调PH值至7-8，酶解1h后再调PH值至7-8，继续酶解3-10h，得到含小肽蛋白的酶解混合物；
(4)酶解完成后升高温度至70-100℃，保持10-30min，进行灭酶处理；
(5)将灭酶后的酶解混合物过50-150目的振动筛，将鱼骨粉从酶解混合物中分离出来，收集滤过液；
(6)将滤过液在6500-7500rpm下离心10-20min，收集上清液，进行超滤，收集滤过液，真空浓缩至滤过液体积的1/3-2/3，喷雾干燥，得到小肽蛋白。
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