CN104861054A - 一种褐虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ、编码蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ，编码蛋白，合成的dsRNA及在防治褐飞虱病虫害中的应用；该基因在维持褐飞虱正常的生长发育过程中发挥重要功能，其功能受到抑制会导致褐飞虱若虫生长变缓，体型变小，不能正常发育至成虫而死亡；雌成虫中其功能受到抑制会导致卵巢停止发育，雌虫不能正常产卵；本发明就是利用该基因片段的dsRNA注射和喂养褐飞虱，均可使褐飞虱的死亡率达70％，产卵量为0，为建立利用RNA干扰技术控制害虫的新策略提供序列和数据基础，对褐飞虱具有明显的致死和抑制卵巢发育的效果，说明该基因可作为利用RNAi技术控制害虫的有效靶点。

Description

一种褐虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ、编码蛋白及其应用

(一)技术领域

本发明涉及基于基因沉默技术的褐飞虱蛋白质翻译延伸因子NlEF1γ基因、编码蛋白及其应用。

(二)背景技术

水稻是现在世界上的其中一种最主要的粮食作物，以水稻为主食的人口占世界上人口的一半以上。而同翅目飞虱科褐飞虱(Nilaparvata lμgens)(Brownplanthopper)通过吸食韧皮部的光合产物而直接危害水稻，除此之外还会传播水稻病毒造成间接危害，是对水稻危害最大的害虫之一。因此，有效地控制水稻害虫对水稻增产具有重要意义。

目前，控制褐飞虱致害性的首要方法是化学杀虫剂如吡虫啉、噻嗪酮、仲丁威及异丙威，但随着吡虫啉大范围高频次的使用，稻飞虱对其抗药性快速提高，各地反映其对稻飞虱的效果大不如前。其次是培育抗性水稻品种，但由于褐飞虱的强适应性，化学农药容易导致产生抗药性种群和飞虱的再猖獗，抗性水稻的培育和种植虽对环境友好但也由于能克服寄主抗性的新褐飞虱致害性种群出现，导致其危害越来越严重。

RNA干涉技术(RNA interference，RNAi)是一种广泛存在于动植物中的现象。其原理是将靶基因正义RNA和反义RNA组装成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，dsRNA在双链特异核糖核酸酶的作用下被切割成21-25核苷酸的小干扰RNA(siRNA)，siRNA与某些作用因子结合形成RNA诱导沉默复合物，该复合物在RNA解旋酶、核酸内切酶和外切酶的作用下，可将靶基因的转录产物mRNA特异地降解，进而抑制了目的基因的表达。该技术目前在基因功能验证以及害虫防治中都取得了成功。在植物介导的RNAi中，由于有害生物的基因是通过有目的地选择性插入到植物，所以其对靶标生物的抗虫作用是特异的，同时RNAi介导的抗虫性是依赖于RNA序列的杂交配对，这种作用机制比依赖于蛋白质之间相互作用的要持久，它不会因为少量核苷酸的突变被抑制，因此，昆虫克服这种抗性的可能性比较小。在鳞翅目棉铃虫(Mao et al.，2007)和玉米根萤叶甲(Baum et al.，2007)鞘翅目中通过转基因植株产生dsRNA沉默昆虫基因以达到防治害虫的目的已有报道。虽然如此，但由于缺乏对害虫功能基因的深入了解，目前利用该技术来实现对害虫的控制作用还远不如转Bt基因的植物。要利用表达dsRNA的转基因植物来控制害虫，首选需要筛选出合适的可供转入植物的靶标基因，这种基因在转录水平的降低能致使害虫发育受阻，可导致高的死亡率。同时该基因与目标植物无高度相似的序列。

蛋白质翻译延伸因子(translation elongation factor，EF)具有三磷酸鸟苷(GTP)或鸟苷二磷酸(GDP)亲和性，参与肽链的延伸过程。在真核细胞中，主要有eEF1和eEF2。其中eEF1由4个亚基EF-1а(51kDa),EF-1β'(26kDa),EF-1β(33kDa)and EF-1γ(49kDa)组成(Kidou et al.,1998；Ejiri.,2002)。EF-1а由一个多基因家族编码，不同的物种具有不同数量的EF-1а同源基因。且EF-1а高度保守，而EF-1γ基因为单拷贝基因，不同物种间差异比较大。目前在昆虫中仅有报道利用RNAi技术沉默斜纹夜蛾(Spodoptera exigua)的EF-1β'基因，发现沉默后36h时存活率为58.7％显著低于对照(Zhao et al.，2012)。本专利发明是克隆了褐飞虱的EF-1γ基因命名为NlEF1γ，通过比对发现核苷酸序列与Papilio xuthus AY077628.1相似度最高为，蛋白序列与蝗虫(Locusta migratoria)相似度最高为64％。在此基础上合成该基因的dsRNA，体外喂食和注射该基因的dsRNA发现，褐飞虱若虫体内目标基因表达显著表达，死亡率显著增加。雌成虫卵巢停止发育而不能正常产卵。本发明为建立利用RNA干扰技术控制褐飞虱的新策略提供了序列和数据基础。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种从水稻褐飞虱中克隆NlEF1γ基因的cDNA序列，该序列的dsRNA以及蛋白质序列，通过饲喂和注射提供了该基因的dsRNA，达到防治褐飞虱的目的，为抗褐飞虱转基因水稻的研究开发提供了新的基因来源。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种褐虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ，所述延伸因子NlEF1γ的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供一种所述褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ编码的蛋白，所述编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2示。

本发明所述褐虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ克隆方法包括如下步骤：

1)取褐飞虱，提取总RNA，合成cDNA第一条链；

2)以步骤1合成的第一条链为模板，以序列SEQ ID NO.3所示的NlEF1γ-F为上游引物，以SEQ ID NO.4的NlEF1γ-R为下游引物进行RT-PCR扩增；

3)PCR产物经琼脂糖胶电泳分离，回收1324bp处的目标DNA片段；

4)回收片段在T3连接酶作用下插入至2.1载体中，转化到大肠杆菌DH5a，涂于含有X-gal，IPTG和卡那霉素的LB培养基，37℃过夜培养；

5)挑选白色单菌落，用含卡那霉素的LB培养液将阳性克隆扩增，提取克隆质粒pTOP-NlEF1γ；

6)质粒pTOP-NlEF1γ测序，得到SEQ ID NO.1所示NlEF1γ基因片段。

其中RT-PCR扩增体系为：包含3.0μL稀释后的cDNA，上下游引物各20pmol，0.2mM dNTP，1×PCR buffer，2.5units of r-Taq DNA polymerase(Takara)，共25μL。PCR扩增程序为：95℃变性2min；35个循环的95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸90s；最后72℃延伸10min。

本发明涉及由所述褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ合成的dsRNA，所述dsRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.5示，其合成方法包括：

1)根据已验证的NlEF1γ基因片段序列，设计并合成序列为SEQ ID NO.6所示的引物dsNlEF1γ-F和SEQ ID NO.7所示的dsNlEF1γ-R引物。以含NlEF1γ基因的质粒pTOP-NlEF1γ为模板，以序列SEQ ID NO.6为上游引物，以SEQ ID NO.7为下游引物进行PCR扩增，以得到含有T7启动子的NlEF1γ基因片段。

2)回收步骤1获得的PCR产物，以此扩增产物为模板，体外转录合成NlEF1γ的dsRNA。合成体系为：模板约1.5-2ug，2.0μL 10×T7buffer，2.0μL ATP，2.0μL GTP，2.0μL CTP，2.0μL UTP，2.0μL T7enzyme，共20.0μL。37℃保温5小时，72℃灭活5分钟；合成dsRNA经降解去除DNA和单链RNA后，纯化获得dsRNA。

其中质粒PCR扩增体系为：1.0μL质粒DNA，上下游各20pmol，0.2mM dNTP，1×PCR buffer，2.5units of r-Taq DNA polymerase(Takara)，共25μL。PCR扩增程序为：95℃变性2min；35个循环的95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸40s；最后72℃延伸10min。

本发明还涉及一种褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ在制备防治褐飞虱药物中的应用，具体所述的应用是通过将NlEF1γ合成的dsRNA显微注射或饲喂褐飞虱达到防治的目的。

dsRNA的褐飞虱饲喂方法，包含如下步骤：

1)将玻璃管一端用封口膜封好，封口膜正中央用移液枪加入含dsRNA的饲料70μL，用一个新的封口膜，将饲料和dsRNA封在两层膜之间；

2)用吸虫器吹入30头2龄褐飞虱若虫，用灭菌纱布将玻璃管另一开口端封好；

3)将玻璃管平放，玻璃管上方盖一层湿润的黑布保湿，有饲料的一端对着光源，饲养温度26℃。每48h换一次饲料。

dsRNA的褐飞虱显微注射方法，包含如下步骤：

1)制作固定褐飞虱的琼脂糖胶凹槽：配制浓度为2.0-2.5wt％的琼脂糖胶，将溶化后的琼脂糖胶倒入直径9cm的培养皿中，琼脂糖胶的高度略高于培养皿，培养皿上方放置4-5根直径0.5-0.8mm的毛细管。待琼脂糖胶冷却后，去掉毛细管，即得到可固定褐飞虱的琼脂糖胶凹槽；

2)将褐飞虱若虫吹入玻璃试管中，用CO₂麻醉1分后，将褐飞虱倒入提前装有琼脂糖凝胶的培养皿中，用软毛笔将褐飞虱整齐的摆放在琼脂糖胶的凹槽中；

3)利用eppendorf显微注射仪(型号TransferMan NK2，上海艾本德公司)，在褐飞虱胸部中足基部柔软的地方每个褐飞虱注射0.1μLdsRNA，dsRNA浓度700ng/μL；

注射后褐飞虱接种于分蘖盛期的水稻品种(Taichung Native 1)TN1上，每个水稻单株用笼罩罩住，每个笼罩中接入30头虫，并将笼罩放置于带水的大水盆中，控制室内温度在25±1℃，湿度80％左右。每日观察褐飞虱的存活率。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：

本发明提供一种褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ，编码蛋白，合成的dsRNA；该基因在维持褐飞虱正常的生长发育过程中发挥重要功能，其功能受到抑制会导致褐飞虱若虫生长变缓，体型变小，不能正常发育至成虫而死亡；雌成虫中其功能受到抑制会导致卵巢停止发育，雌虫不能正常产卵；本发明就是利用该基因片段的dsRNA注射和喂养褐飞虱，均可使褐飞虱的死亡率达70％，产卵量为0，为建立利用RNA干扰技术控制害虫的新策略提供序列和数据基础；本发明利用注射或饲喂的RNAi技术沉默蛋白质合成延伸elongation factor 1gamma基因，对褐飞虱具有明显的致死和抑制卵巢发育的效果，说明该基因可作为利用RNAi技术控制害虫的有效靶点。

(四)附图说明

图1为NlEF1γ基因片段扩增电泳图，泳道M为100bpDNA ladder；泳道1为空白对照，泳道2和3为扩增的NlEF1γ基因片段。

图2为NlEF1γ基因dsRNA合成电泳图，泳道M为100bp DNA ladder；泳道1为NlEF1γ基因dsRNA。

图3为3龄褐飞虱注射dsRNA的死亡率比较，*表示处理与对照有显著差异(p<0.05)，校正死亡率＝(处理死亡率-对照死亡率)/(100-对照死亡率)×100％。

图4为2龄褐飞虱饲喂dsRNA对死亡率的影响，*表示处理与对照有显著差异(p<0.05)，校正死亡率＝(处理死亡率-对照死亡率)/(100-对照死亡率)×100％

图5为5龄褐飞虱注射dsRNA对卵巢发育的影响，A为对照初羽化后10d的卵巢；B为处理初羽化后10d的卵巢。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、NlEF1γ基因的克隆，dsNlEF1γ的合成

1)NlEF1γ基因的克隆

利用Qiagen公司的RNeasy Mini kit(74106)提取5-10头褐飞虱整虫RNA，用Toyobo公司的ReverTra AceqPCR RT Kit试剂盒合成cDNA序列，10μL合成体系含1ng RNA，2.0μL 5xRT buffer，0.5μL primer mix，0.5μL RT enzyme mix。37℃保温45分钟，98℃5分钟灭活逆转录酶，cDNA稀释10倍后作为目标基因cDNA扩增的模板。

从褐飞虱EST数据库中NLEB4403的序列和本实验室的转录组数据库匹配序列组装获得褐飞虱NlEF1γ基因的序列片段，根据NCBI primer blast设计上游引物NlEF1γ-F1324：ATTTCGATCGTGCTCTCTCTCT(SEQ ID NO.3)，下游引物NlEF1γ-R1324：GCCTTTCTCAACCCGTTCCC(SEQ ID NO.4)。

PCR扩增体系25μL：包含3.0μL稀释后的cDNA，上下游引物各20pmol，0.2mM dNTP，1×PCR buffer，2.5units of r-Taq DNA polymerase(Takara)，共2次重复。PCR扩增程序为：95℃变性2min；35个循环的95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸90s；最后72℃延伸10min。扩增产物经2.0％琼脂糖电泳(见图1)。

利用天根公司的DNA纯化回收试剂盒(DP214-02)回收PCR产物。50μL PCR产物中加入50μL PC溶液混匀，将混合液转移入已经用平衡液处理过的过滤柱中，室温放置1min；12000rpm离心1min，弃去收集管中滤液，加入700μLwash buffer(已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃去收集管中滤液，加入500μLwash buffer(已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃去收集管中滤液；不加液体，12000rpm离心2min后，将过滤柱转移到1.5mL离心管中，加入40μL Nuclease-free水，室温放置2min，12000rpm离心2min，收集得到PCR产物。

取4.0μL回收产物用英俊公司生产的连接试剂盒将PCR产物连接到2.1载体(购自Invitrogen公司)中，连接体系10μL：含1.0μL 10×Ligation Buffer，2.0μL2.1vector(25ng/μL)，2.0μL水和1.0μL T4DNA Ligase。16℃连接12h。取6.0μL连接产物转入100μL大肠杆菌DH5а感受态细胞中，冰浴30min，42℃热激45s，然后冰上放2min后，加入200μL预热到37℃的SOC培养基，100rpm，37℃复苏1h后均匀的涂板于含有50mg/mL卡那霉素，0.2g/mL IPTG，0.02g/mL X-gal的LB固体培养基上(含15g/L琼脂粉)，37℃过夜培养。SOC培养基组成为(胰蛋白胨20g/L，酵母粉5g/L，NaCl 0.5g/L，KCl 0.185g/L，MgCl₂ 0.95g/L，MgSO₄ 1.2g/L，葡萄糖3.6g/L，溶剂为去离子水，pH自然)。LB培养基组成为(胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 10g/L，溶剂为去离子水，pH自然)。

随机挑取5个白色阳性克隆至3.0mL含50mg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，200rpm，37℃摇菌10h，将阳性克隆进行扩增验证，依照罗氏公司的质粒提取试剂盒(11754785001)说明书提取质粒。菌液转入2.0mL离心管中12000rpm离心1min，弃去上清液，菌体沉淀中加入250μL含RNase酶的Suspension buffer，振荡混匀后加入250μL Lysis buffer，颠倒混匀3-6次。室温放置5min。加入350μL冰上预冷的Bindingbuffer，颠倒混匀3-6次，此时溶液变混浊，冰上放5min后12000rpm离心10min。上清液转入过滤柱中，全速离心1min。将收集管中液体倒掉，在过滤柱中加入700μLWash bufferII，全速离心1min。将收集管中液体倒掉，再重复洗涤一次，倒掉收集管中液体，过滤柱不加液体全速离心2min。将过滤柱转移到1.5mL离心管中，加入100μLElution buffer，室温放置2min，12000rpm离心2min，收集得到质粒pTOP-NlEF1γ。

质粒pTOP-NlEF1γ进行测序(由上海英潍捷基公司完成)，比对确认得到SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的NlEF1γ基因片段。该序列全长1324碱基，含1239碱基的开发阅读框，在褐飞虱基因组进行比对发现只有个拷贝。编码SEQ ID NO.2所示的含412个氨基酸的蛋白序列，分子量约为47.10kDa。该基因DNA序列和蛋白序列与其他昆虫进行同源性比对，发现核苷酸序列与柑橘凤蝶(Papilio xuthus)一致性最高为77.0％，覆盖度33.0％。蛋白序列与蝗虫(Locusta migratoria)一致度最高为64％。

2)dsNlEF1γ的合成和纯化、回收

根据以已经验证的NlEF1γ基因片段序列，用NCBI primer blast设计并合成dsNlEF1γ-F上游引物，dsNlEF1γ-R下游引物，在上下游引物5′端加入T7启动子序列TAATACGACTCACTATAGGG。

dsNlEF1γ-F上游引物：

TAATACGACTCACTATAGGGCTTCCCCTGTCTCGGCATTA(SEQ ID NO.6)，

dsNlEF1γ-R下游引物：

TAATACGACTCACTATAGGG GCAGACTGAGGCAAACGAGA(SEQ ID NO.7)。

以含NlEF1γ基因的质粒pTOP-NlEF1γ为模板，PCR体系为：1.0μL质粒DNA，上下游引物各20pmol，0.2mM dNTP，1×PCR buffer，2.5units of r-Taq DNApolymerase(Takara)，共25μL，重复10次。PCR扩增程序为：95℃变性2min；35个循环的95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸40s；最后72℃延伸10min。PCR产物经2.0％浓度的琼脂糖胶电泳分离，其序列见SEQ ID NO.5。

采用天根公司的DNA纯化回收试剂盒回收10次重复的PCR产物，以回收的PCR产物为模板，利用life technology公司的RNAi合成试剂盒合成dsRNA。合成体系为：模板约1.5-2μg，2.0μL 10×T7buffer，2.0μL ATP，2.0μL GTP，2.0μL CTP，2.0μL UTP，2.0μL T7enzyme，共20.0μL。37℃保温5小时，72℃灭活5分钟；合成dsRNA 20.0μL中加入21.0μLNuclease-free水，5.0μL 10xdigestion buffer，2.0μL DNase，2.0μL RNase。37℃保温45min以降解去除DNA和单链RNA。

在上步50.0μL的含dsRNA的产物中加入150.0μL Nuclease-free水，50.0μL 10xbinding buffer，250.0μL100％乙醇，混匀后转移过滤柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，弃去收集管中滤液，过滤柱加入500μL washing buffer，12000rpm离心2min，不加液体，12000rpm离心2min后，将过滤柱转移到1.5mL离心管中，加入50μL预热到95.0℃的Elution buffer，室温放置2min，12000rpm离心2min，收集得到纯化的dsRNA，2.0％琼脂糖胶电泳见图2。-80.0℃保存备用。

实施例2、dsNlEF1γ对3龄褐飞虱的注射实验

制作固定褐飞虱的琼脂糖胶凹槽：配制质量浓度为2.0-2.5％的琼脂糖胶，将溶化后的琼脂糖胶倒入直径9cm的培养皿中，琼脂糖胶的高度略高于培养皿，培养皿上方放置4-5根直径0.5-0.8mm的毛细管。待琼脂糖胶冷却后，去掉毛细管，即得到可固定褐飞虱的琼脂糖胶凹槽；选取3-4龄褐飞虱若虫吹入玻璃试管中，用CO₂麻醉2分后，将褐飞虱倒入提前装有琼脂糖凝胶的培养皿中，用软毛笔将褐飞虱整齐的摆放在琼脂糖胶的凹槽中。

利用eppendorf显微注射仪(型号TransferMan NK2，上海艾本德公司)，在褐飞虱胸部中足基部柔软的地方每个褐飞虱注射0.1μLdsRNA，dsRNA浓度700ng/μL。注射后褐飞虱接种于苗期的水稻品种(Taichung Native 1)TN1上，24h内剔除因注射操作造成的死虫。将活虫分笼罩饲养，即每个水稻单株用笼罩罩住，每个笼罩内饲养30头，4次重复。将笼罩放置于带水的大水盆中，控制室内温度在25±1℃，湿度80％左右。每天剔除死虫，记录活虫数。注射dsRNA的处理组从注射后第4天开始死亡率达13.8％(校正死亡率12.0％)与对照间有显著差异，第10天时校正死亡率达69.5％(见图3)。

实施例3：dsNlEF1γ对2龄褐飞虱的饲喂实验

将两端开口的玻璃管(15cm×2.5cm)竖立放置在超净工作台台面上，上端用正方形的封口膜均匀向两侧拉，封好上端开口端，用移液器吸取人工饲料70.0μL滴在封口膜中央，对照只加人工饲料(配方见表1)，处理组在人工饲料中加入dsRNA(终浓度50ng/μL)，用一新的封口膜，贴纸面朝下，均匀拉伸贴在加有饲料的封口膜上方，将饲料和dsRNA封在两层封口膜之间。

用吸虫器吸取30头2龄褐飞虱轻轻从玻璃管开口端吹入玻璃管内，用灭菌后纱布将开口端封好；每个处理重复10次；将加好饲料和吹入褐飞虱的玻璃管平放在养虫架上，玻璃管上方盖一层湿润黑布保湿。玻璃管饲料端给予光照，饲养温度26℃，利用其趋光性使其取食饲料，每48h统计一次存活率、换一次饲料和dsRNA。连续喂食11天。结果见图4，可见喂食NlEF1γ的dsRNA 5天时校正死亡率达33.3％，11天时可达84.9％。与对照组有显著差异，饲喂NlEF1的dsRNA对褐飞虱具有明显的致死效果。

表1全纯人工饲料成分

氨基酸类	mg/100ml	维生素类	mg/100ml	无机盐类	mg/100ml
						甘氨酸	30	生物素	0.05	氯化钙	3.115
丙氨酸	130	泛酸钙	5	氯化铜	0.268
						精氨酸	175	氯化胆碱	60	氯化铁	2.228
天冬酰胺	230	叶酸	2.5	氯化锰	0.793
						天冬氨酸	100	肌醇	50	氯化锌	0.396
半胱氨酸	80	烟酸	15	氯化镁	200
						胱氨酸	20	盐酸吡哆醇	2.5	磷酸二氢钾	500
氨基丁酸	10	核黄素	2	蔗糖	9000
						谷氨酸	250	硫胺素	2.5
谷氨酰胺	240	抗坏血酸	100
						组氨酸	80
甲硫氨酸	70
						异亮氨酸	100

亮氨酸	240
						普氨酸	100
赖氨酸	200
						苯丙氨酸	200
丝氨酸	400
						苏氨酸	130
色氨酸	105
						酪氨酸	10
缬氨酸	300

配置好饲料后调节pH为6.8，过滤灭菌。

实施例4、注射dsNlEF1γ对5龄褐飞虱的影响

选取5龄褐飞虱若虫，利用eppendorf显微注射仪，在飞虱胸部第2-3足之间进行显微注射，每个褐飞虱注射0.1μL浓度为700ng/μL的dsRNA，对照注射无菌水。注射后褐飞虱接种于水稻品种TN1上，24h内剔除因注射操作造成的死虫。待活虫初羽化为成虫后，分雌雄虫配对饲养。每个水稻单株用笼罩罩住，每一个笼罩内饲养一对成虫，共成功配对20对。将笼罩放置于带水的大水盆中，控制室内温度在25±1℃，湿度80％左右。10天后统计孵化出的若虫，并取出活的雌虫解剖其卵巢进行显微观察。结果发现处理组10天无若虫孵出，雌虫卵巢发育停止(见图5)，解剖水稻苗显微观察无产卵痕。

Claims (4)

1.一种褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ，其特征在于所述延伸因子NlEF1γ的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ编码的蛋白，其特征在于所述编码蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.2示。

3.一种由权利要求1所述褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ合成的dsRNA，其特征在于dsRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO.5示。

4.一种权利要求1所述褐飞虱蛋白翻译延伸因子NlEF1γ在防治褐飞虱病虫害中的应用。