CN107466974A - 一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法，包括以下步骤：收集新鲜稻飞虱卵；按照卵头尾一致依序排列完成并转移到粘着有双面胶的玻片上，干燥2‑3min，随后立即用水饱和的油覆盖蚊卵，防止蚊卵进一步干燥失水；进行显微注射，完毕，保留注射过的稻飞虱卵，和双面胶一起放入纯水中，培养2‑3d；当稻飞虱卵进入红眼期时，将稻飞虱卵轻轻挑出放到湿润滤纸上，2d后，在解剖镜下观察是否有幼虫孵化，然后将孵化的幼虫转移到水稻苗的嫩芽上。本发明采用自然不感染wolbachia褐飞虱卵为显微注射受体，提高感染率为5％‑20％，经卵传代效率也达到80％‑100％。
Description
技术领域
本发明属于病虫防害领域，具体地是涉及一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法。
背景技术
稻飞虱，属于同翅目(Homoptera)飞虱科(Delphacidae)，俗称蠓子虫、火蠓虫、响虫。以刺吸植株汁液危害水稻等作物。我国为害水稻的飞虱主要有三种：褐飞虱(Nilaparvata lugens Stal)、白背飞虱(Sogatella furcifera(Horvath))和灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallén)，其中以褐飞虱发生和为害最重，白背飞虱次之。其主要有以下危害：
(1)成、若虫刺吸危害。田间受害稻丛常由点、片开始，远望比正常稻株黄矮，俗称“冒穿”、“黄塘”或“塌圈”等。
(2)雌虫产卵为害。
(3)排泄物常招致霉菌滋生，影响水稻的光合作用和呼吸。
(4)传播植物病毒病。褐飞虱能传播水稻丛矮缩病等；白背飞虱能传播水稻黑条矮缩病等；灰飞虱能传播水稻条纹叶枯病等
目前，防治稻飞虱主要采用的是化学防治，但长期大量使用化学农药导致农药残留污染环境、害虫抗药性与再猖獗产生和天敌昆虫伤害等一系列问题。稻飞虱生物防治近年来逐渐被重视，保护和利用稻飞虱自然天敌是控制稻飞虱的持续有效且环保方式。
为了对稻飞虱进行研究，本领域技术人员一般选用新鲜的稻苗作为饲养殖株，将稻飞虱和稻苗放入到同一空间内，即养虫笼中，让稻飞虱自行成长，从而人工培育稻飞虱。
稻飞虱的发育是属于不完全变态发育，幼虫和成虫的形态结构、生活习性相似，只是大小、翅膀有无、生殖器官等发育成度不同。不完全变态发育经历卵、若虫、成虫三个时期。目前，稻飞虱的显微注射目前都是采用若虫注射，在解剖镜下固定若虫，将所需注射的液体通过显微注射针，注射到若虫腹部。这种方法传代不稳定，感染率低。
发明内容
本发明的目的是提供种一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法，该方法可以提高稻飞虱的感染率和代效率。
实现上述目的的技术方案如下。
一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法，该方法包括以下步骤：
(1)收集新鲜稻飞虱卵；
(2)将在蚊卵排列完成转移到双面胶上，干燥2-3min，随后立即用水饱和的油覆盖蚊卵，防止蚊卵进一步干燥失水；
(3)进行显微注射，完毕，保留注射过的稻飞虱卵，和双面胶一起放入纯水中，培养2-3d；
(4)当稻飞虱卵进入红眼期时，将稻飞虱卵轻轻挑出放到湿润滤纸上，2d后，在解剖镜下观察是否有幼虫孵化，然后将孵化的幼虫转移到水稻苗的嫩芽上。
优选地，所述收集新鲜飞虱卵的方法为：每收集20只产卵期的雌性稻飞虱，放入3-5根新鲜水稻苗中，产卵4-5h，即得。
优选地，在蚊卵排列完成转移到双面胶上时，用镊子的背部轻轻滑过玻片，从而使蚊卵能够粘着在双面胶上。
优选地，2d—5d内，将孵化的幼虫转移到水稻苗的嫩芽上。
本发明采用稻飞虱卵为显微注射受体，提高感染率为5％-20％，经卵传代效率也达到80％-100％。
而且，注射前收集短时间内新鲜飞虱卵，注射后将注射过的飞虱卵放入纯水中保湿，进一步提高卵的孵化率为8％-30％。
本发明采用自然携带wolbachia的灰飞虱卵作为供体，注射到自然不感染wolbachia的褐飞虱卵中。最初采用现有的技术，共注射1427个卵，孵化得到89个幼虫，孵化率为6.24％，羽化得到74只注射飞虱，经PCR检测有3只阳性感染蚊，感染率为4.05％，G1代感染率70％。本发明进行改进创新后，共注射1357个卵，孵化得到293只幼虫，孵化率为21.6％；羽化得到247只注射飞虱，经PCR检测有26只阳性感染飞虱，感染率为10.5％，G1代感染率达到100％。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
实施例1：
一种稻飞虱卵处理方法，该方法包括以下步骤：
(1)收集20只产卵期的雌性稻飞虱，放入4根新鲜水稻苗中，产卵4-5h，即收集新鲜飞虱卵；
(2)先准备好粘着有双面胶的玻片，将收集到的新鲜飞虱卵按照头尾一致顺序排列在厚滤纸上，翻转粘着双面胶的玻片，将排列好的飞虱卵转移到双面胶上，用镊子的背部轻轻滑过玻片，从而使蚊卵能够粘着在双面胶上，干燥2-3min，随后立即用水饱和的油覆盖蚊卵，防止蚊卵进一步干燥失水；
(3)进行显微注射，完毕，保留注射过的稻飞虱卵，和双面胶一起放入纯水中，培养2-3d；
(4)观察稻飞虱卵进入红眼期，将稻飞虱卵轻轻挑出放到湿润滤纸上，2d后，在解剖镜下观察是否有幼虫孵化，将孵化的幼虫转移到水稻苗的最嫩的芽上。
稻飞虱卵一般在红眼期后2-5d内孵化，需定时观察是否有幼虫孵化并及时转移到水稻苗中。
本发明采用自然携带wolbachia的灰飞虱卵作为供体，注射到自然不感染wolbachia的褐飞虱卵中。最初采用现有的技术，共注射1427个卵，孵化得到89个幼虫，孵化率为6.24％，羽化得到74只注射飞虱，经PCR检测有3只阳性感染蚊，感染率为4.05％，G1代感染率70％。然后通过本发明进行改进后的稻飞虱卵处理方法，共注射1357个卵，孵化得到293只幼虫，孵化率为21.6％；羽化得到247只注射飞虱，经PCR检测有26只阳性感染飞虱，感染率为10.5％，G1代感染率达到100％。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.一种用于显微注射的稻飞虱卵处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)收集新鲜稻飞虱卵；
(2)将在蚊卵排列完成转移到双面胶上，干燥2-3min，随后立即用水饱和的油覆盖蚊卵，防止蚊卵进一步干燥失水；
(3)进行显微注射，完毕，保留注射过的稻飞虱卵，和双面胶一起放入纯水中，培养2-3d；
(4)当稻飞虱卵进入红眼期时，将稻飞虱卵轻轻挑出放到湿润滤纸上，2d后，在解剖镜下观察是否有幼虫孵化，然后将孵化的幼虫转移到水稻苗的嫩芽上。
2.根据权利要求1所述的稻飞虱卵处理方法，其特征在于，所述收集新鲜飞虱卵的方法为：每收集20只产卵期的雌性稻飞虱，放入3-5根新鲜水稻苗中，产卵4-5h，即得。
3.根据权利要求1所述的稻飞虱卵处理方法，其特征在于，步骤(2)中，将在蚊卵排列完成转移到双面胶上为：按照卵头尾一致依序排列完成并转移到粘着有双面胶的玻片上。
4.根据权利要求3所述的稻飞虱卵处理方法，其特征在于，在蚊卵排列完成转移到双面胶上时，用镊子的背部轻轻滑过承载双面胶的玻片，从而使蚊卵能够粘着在双面胶上。
5.根据权利要求1-4任一项所述的稻飞虱卵处理方法，其特征在于，步骤(4)中，2d—5d内，将孵化的幼虫转移到水稻苗的嫩芽上。
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