CN104845624A - 一种灭线虫天然植物生物复合营养液及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种灭线虫天然植物生物复合营养液及制备方法，包括按重量配比的枯草芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌、白僵菌和植物万寿菊花、百部、孔雀草、苦参、鱼藤、苦楝以及蛋白液，相比现有技术的有益效果是：可有效防治根结线虫、包囊线虫、茎线虫等土传寄生虫造成的危害；实现了土壤和农作物果实无农药残留，使用方便，无污染，整个生育期用药三次可避免线虫危害，为生产绿色有机食品创造了条件；同时对作物土传病害有良好的防治作用，还能改良土壤、增加土壤团粒结构，防止板结，提高有机质的含量，溶磷解钾固氮，补充作物营养。

Description

一种灭线虫天然植物生物复合营养液及制备方法

技术领域

    本发明涉及一种植物杀虫剂及其生产方法，具体涉及一种灭线虫的、由天然植物和生物复合成的、附有营养成分的液体及制备方法。

背景技术

根结线虫生物防治的早期研究工作主要在法国、美国、英国以及前苏联，他们对食线虫真菌分类学和生态学研究的成果为开展根结线虫和其他植物寄生线虫的生物防治提供了详实的资料。但早期的研究工作在防治植物寄生线虫上收效不大，导致一部分人对控制线虫危害失去了信心，有志于这项研究工作的科学家也难以得到必要的支持。于是，线虫的防治主要依靠化学杀线虫剂的方法，长期使用巨毒化学杀线虫剂给环境带来的危害日渐显露；现在市场上所使用的的杀线剂，90%以上为土壤处理剂，持效期一般为60-90天不等，严格避免在作物生长期使用。北方根结线虫危害大部分大棚反季蔬菜，反季蔬菜在冬前定植和播种，当时低温低于26^OC，根结线虫处于不活动的休眠状态，基本不发生危害，而进入春季以后，地温升高，线虫活动加剧，此时土壤处理时使用的杀线剂效果已经消失，从而造成作物大面积减产，提前结束农业生产。对于南方根结线虫，因为现有的杀线剂不能在作物生长期使用，在南方处理土壤存在困难。尤其对吸芽生产的香蕉，危害极大。现有的杀线剂长期使用对土壤环境造成危害，加大作物农药残留，影响品质；使用时间和方法受限制；药效短，控制效果不理想；不能生产绿色有机食品。

发明内容

为了克服上述技术的不足，本发明提供一种既能杀死线虫又能改良土壤的一种灭线虫天然植物生物复合营养液及制备方法。

本发明所采用的技术方案是：一种灭线虫天然植物生物复合营养液，其特征在于：包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1份、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3份、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1份和植物万寿菊花提取液100份、百部提取液300份、孔雀草提取液100份、苦参提取液100份、鱼藤提取液100份、苦楝提取液200份以及蛋白液100份。

一种灭线虫天然植物生物复合营养液的制备方法，其特征在于：灭线虫天然植物生物复合营养液包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1份、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3份、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1份和植物万寿菊花提取液100份、百部提取液300份、孔雀草提取液100份、苦参提取液100份、鱼藤提取液100份、苦楝提取液200份以及蛋白液100份；其制备方法如下：

（1）以现有技术常规方法制备淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）、枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）；

（2）植物提取液的制备方法：

首先制备万寿菊花、百部根、孔雀草茎叶、苦参根、鱼藤茎叶、苦楝种子的各单种植物提取液，将百部取根切薄片、孔雀草取茎叶破碎、苦参取根切薄片、鱼藤取茎叶破碎、苦楝取种子破碎，按重量配比取单种植物原料1份，放入容器，导入同体积的90%乙醇，浸泡48h；取出浸泡的材料进行压榨，压榨后的汁液进行过滤，去渣，所得液体自然挥发浓缩48h，得第一次汁液；将提取后的残渣加入三倍于愿体积的含10％乙醇和含1%醋酸的水溶液浸泡48h，进行二次压榨，所得汁液过滤去杂，加入到第一次汁液，得混合液体；将混合液体加热收集乙醇，至液体的体积降为原混合液体的1／2时，停止加热，凉至常温，加入小苏打将PH值调至到5-5.5，得单种植物提取液；

按重量配比取上述制备的万寿菊花提取液1份、百部提取液3份、孔雀草提取液1份、苦参提取液1份、鱼藤提取液1份、苦楝提取液2份混合得植物提取液；根据重量配比放大制备植物提取液900份；

（3）蛋白液的制备方法：按重量配比取蛋白胨粉10份，加水90份搅拌溶解，制得100份蛋白液；

（4）取制备的淡紫拟青霉菌3份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养玉米糊培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当孢子形成率达95% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达95% 以上得含淡紫拟青霉菌的菌悬液；

（5）取制备的白僵菌1份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份；置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于牛肉浸膏培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当两种孢子形成率达90% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达90% 以上得含白僵菌的菌悬液；

（6）取制备的枯草芽孢杆菌1份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当三种孢子形成率达80% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述芽孢形成率达80% 以上得含枯草芽孢杆菌的菌悬液；

（7）将上述制备的3种菌悬液混合，用搅拌机打碎菌块，使成均匀的菌悬液；或者将菌悬液加热至45℃24h，使菌块分散；

（8）用200目无菌纱布过滤菌悬液，清除其中的凝块和不溶物；

（9）将过滤后的菌悬液，置无菌离心机内，以3000 r/min 速度离心；取清液，吹吸使菌体重新悬浮；再离心和重新悬浮清洗，先后共3遍；

（10）在洗净的菌悬液中加入蛋白液100份，加入小苏打将PH值调至到5-5.5；

（11）将菌液加温至70℃20min，以杀灭残余的繁殖活体，冷至室温，得灭线虫天然植物生物复合营养液。

本发明相比现有技术的有益效果是：可有效防治根结线虫、包囊线虫、茎线虫等土传寄生虫造成的危害；实现了土壤和农作物果实无农药残留，使用方便，无污染，整个生育期用药三次可避免线虫危害，为生产绿色有机食品创造了条件；同时对作物土传病害有良好的防治作用，还能改良土壤、增加土壤团粒结构，防止板结，提高有机质的含量，溶磷解钾固氮，补充作物营养。

具体实施方式

一种灭线虫天然植物生物复合营养液，其特征在于：包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1公斤、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3公斤、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1公斤和植物万寿菊花提取液100公斤、百部提取液300公斤、孔雀草提取液100公斤、苦参提取液100公斤、鱼藤提取液100公斤、苦楝提取液200公斤以及蛋白液100公斤。

一种灭线虫天然植物生物复合营养液的制备方法，其特征在于：灭线虫天然植物生物复合营养液包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1公斤、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3公斤、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1公斤和植物万寿菊花提取液100公斤、百部提取液300公斤、孔雀草提取液100公斤、苦参提取液100公斤、鱼藤提取液100公斤、苦楝提取液200公斤以及蛋白液100公斤；其制备方法如下：

（1）以现有技术常规方法制备淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）、枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）；

（2）植物提取液的制备方法：

首先制备万寿菊花、百部根、孔雀草茎叶、苦参根、鱼藤茎叶、苦楝种子的各单种植物提取液，将百部取根切薄片、孔雀草取茎叶破碎、苦参取根切薄片、鱼藤取茎叶破碎、苦楝取种子破碎，按重量配比取单种植物原料1份，放入容器，导入同体积的90%乙醇，浸泡48h；取出浸泡的材料进行压榨，压榨后的汁液进行过滤，去渣，所得液体自然挥发浓缩48h，得第一次汁液；将提取后的残渣加入三倍于愿体积的含10％乙醇和含1%醋酸的水溶液浸泡48h，进行二次压榨，所得汁液过滤去杂，加入到第一次汁液，得混合液体；将混合液体加热收集乙醇，至液体的体积降为原混合液体的1／2时，停止加热，凉至常温，加入小苏打将PH值调至到5-5.5，得单种植物提取液；

按重量配比取上述制备的万寿菊花提取液1份、百部提取液3份、孔雀草提取液1份、苦参提取液1份、鱼藤提取液1份、苦楝提取液2份混合得植物提取液；根据重量配比放大制备植物提取液900公斤；

（3）蛋白液的制备方法：按重量配比取蛋白胨粉10公斤，加水90公斤搅拌溶解，制得100公斤蛋白液；

（4）取制备的淡紫拟青霉菌3公斤，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300公斤，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养玉米糊培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当孢子形成率达95% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达95% 以上得含淡紫拟青霉菌的菌悬液；

（5）取制备的白僵菌1公斤，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300公斤；置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于牛肉浸膏培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当两种孢子形成率达90% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达90% 以上得含白僵菌的菌悬液；

（6）取制备的枯草芽孢杆菌1公斤，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300公斤，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当三种孢子形成率达80% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述芽孢形成率达80% 以上得含枯草芽孢杆菌的菌悬液；

（7）将上述制备的3种菌悬液混合，用搅拌机打碎菌块，使成均匀的菌悬液；或者将菌悬液加热至45℃24h，使菌块分散；

（8）用200目无菌纱布过滤菌悬液，清除其中的凝块和不溶物；

（9）将过滤后的菌悬液，置无菌离心机内，以3000 r/min 速度离心；取清液，吹吸使菌体重新悬浮；再离心和重新悬浮清洗，先后共3遍；

（10）在洗净的菌悬液中加入蛋白液100公斤，加入小苏打将PH值调至到5-5.5；

（11）将菌液加温至70℃20min，以杀灭残余的繁殖活体，冷至室温，得灭线虫天然植物生物复合营养液。

上述实施例制备的灭线虫天然植物生物复合营养液的使用方法及效果实例：

1、取上述实施例制备的灭线虫天然植物生物复合营养液10公斤与1吨有机质有机肥混合，混合后以160公斤／亩数量基施处理土壤，使用效果：抑制根结线虫的发生85%以上，有效期为一个生长周期。

2、用上述实施例制备的灭线虫天然植物生物复合营养液，在一个生长周期分3次冲施处理土壤，每次冲施数量20公斤／亩，使用效果：抑制根结线虫的发生90%以上。

实验数据：

上述实施例制备的灭线虫天然植物生物复合营养液用无菌水稀释至 1:25、1:50、1:75、1:100、1:150、及 1:200 6个浓度与无菌水进行对照，分别在12h、24h、48h、72h、96h、144h进行观察。

试验结果表明，不同稀释度表现的抑孵活性不同；低于100倍稀释度时根结线虫卵未孵化率较高，稀释150倍以上抑孵活性开始降低； 抑制效果理想的稀释度在75倍与100倍之间，在低于100倍稀释度时，24h后刚刚孵化的二龄幼虫存活率几乎为零。在同一稀释倍数下，抑制活性随着时间的延长逐渐增加。100倍稀释度以上不同稀释浓度对北方根结线虫、花生根结线虫、南方根结线虫、爪哇根结线虫的2龄幼虫均有抑制作用，随着稀释倍数的增加，抑制作用减小。稀释浓度为150倍处理72h时，北方根结线虫、花生根结线虫、南方根结线虫、爪哇根结线虫的校正死亡率分别为86.1%、88.4%、87.2%和82.5%。

本发明可有效防治根结线虫、包囊线虫、茎线虫等土传寄生虫造成的危害；实现了土壤和农作物果实无农药残留，使用方便，无污染，为生产绿色有机食品创造了条件；同时对作物土传病害有良好的防治作用，还能改良土壤、增加土壤团粒结构，防止板结，提高有机质的含量，溶磷解钾固氮，补充作物营养。

本发明并不局限于实施例中所描述的配方及方法，基于本技术领域人员依据本发明变化、重组、调整含量配比等得到的与本发明相关的技术及产品，都在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种灭线虫天然植物生物复合营养液，其特征在于：包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1份、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3份、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1份和植物万寿菊花提取液100份、百部提取液300份、孔雀草提取液100份、苦参提取液100份、鱼藤提取液100份、苦楝提取液200份以及蛋白液100份。

2.一种灭线虫天然植物生物复合营养液的制备方法，其特征在于：灭线虫天然植物生物复合营养液包括按重量配比的枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）1份、淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）3份、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）1份和植物万寿菊花提取液100份、百部提取液300份、孔雀草提取液100份、苦参提取液100份、鱼藤提取液100份、苦楝提取液200份以及蛋白液100份；其制备方法如下：

（1）以现有技术常规方法制备淡紫拟青霉菌（菌种孢子含量为2.0×10⁹个/g）、白僵菌（菌种孢子含量为1.2×10¹¹个/g）、枯草芽孢杆菌（菌种孢子含量为1.0×10¹⁰个/g）；

（2）植物提取液的制备方法：

首先制备万寿菊花、百部根、孔雀草茎叶、苦参根、鱼藤茎叶、苦楝种子的各单种植物提取液，将百部取根切薄片、孔雀草取茎叶破碎、苦参取根切薄片、鱼藤取茎叶破碎、苦楝取种子破碎，按重量配比取单种植物原料1份，放入容器，导入同体积的90%乙醇，浸泡48h；取出浸泡的材料进行压榨，压榨后的汁液进行过滤，去渣，所得液体自然挥发浓缩48h，得第一次汁液；将提取后的残渣加入三倍于愿体积的含10％乙醇和含1%醋酸的水溶液浸泡48h，进行二次压榨，所得汁液过滤去杂，加入到第一次汁液，得混合液体；将混合液体加热收集乙醇，至液体的体积降为原混合液体的1／2时，停止加热，凉至常温，加入小苏打将PH值调至到5-5.5，得单种植物提取液；

按重量配比取上述制备的万寿菊花提取液1份、百部提取液3份、孔雀草提取液1份、苦参提取液1份、鱼藤提取液1份、苦楝提取液2份混合得植物提取液；根据重量配比放大制备植物提取液900份；

（3）蛋白液的制备方法：按重量配比取蛋白胨粉10份，加水90份搅拌溶解，制得100份蛋白液；

（4）取制备的淡紫拟青霉菌3份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养玉米糊培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当孢子形成率达95% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达95% 以上得含淡紫拟青霉菌的菌悬液；

（5）取制备的白僵菌1份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份；置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于牛肉浸膏培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当两种孢子形成率达90% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述孢子形成率达90% 以上得含白僵菌的菌悬液；

（6）取制备的枯草芽孢杆菌1份，在无菌操作环境下打开，以吸管吸加适量植物提取液，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散，然后加入植物提取液300份，置35℃培养18h～24h；用接种环取培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于35℃培养18h～24h；用接种环分别取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检；当三种孢子形成率达80% 以上时即可，否则，应继续在室温下放置一段时间，直至达到上述芽孢形成率达80% 以上得含枯草芽孢杆菌的菌悬液；

（7）将上述制备的3种菌悬液混合，用搅拌机打碎菌块，使成均匀的菌悬液；或者将菌悬液加热至45℃24h，使菌块分散；

（8）用200目无菌纱布过滤菌悬液，清除其中的凝块和不溶物；

（9）将过滤后的菌悬液，置无菌离心机内，以3000 r/min 速度离心；取清液，吹吸使菌体重新悬浮；再离心和重新悬浮清洗，先后共3遍；

（10）在洗净的菌悬液中加入蛋白液100份，加入小苏打将PH值调至到5-5.5；

（11）将菌液加温至70℃20min，以杀灭残余的繁殖活体，冷至室温，得灭线虫天然植物生物复合营养液。