CN102515927A - 一种药效型微生物肥料及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种药效型微生物肥料，所述的药效型微生物肥料活性成分按重量份计由复合菌液10-20份、中草药发酵萃取液20-40份、营养成分15-30份、植物源乳化渗透剂10-55份组成；所述复合菌液包括营养菌株和生防促生菌株；所述中草药发酵萃取液是由印楝、苦豆子、除虫菊和/或油茶饼中一种或几种混合并经用复合菌液发酵得到的萃取液；所述植物源乳化渗透剂是由油茶籽和/或无患子混合后的浸提物。该药效型微生物肥料可为液体剂型，用于灌根冲施和叶面喷施，也可用草炭或褐煤等有机物料吸附后制备成粉状剂型用于底肥施用。该药效型微生物肥料能显著提高农作物产量、改善品质并能防治多种农作物病虫害。

Description

一种药效型微生物肥料及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生物肥料技术领域，具体地说，本发明涉及一种药效型微生物肥料及其制备方法和应用。

背景技术

微生物肥料是一类含有活性微生物，并能以其生命活动及其代谢产物导致农作物得到特定肥料效应、生长调节效应、防病虫效应和土壤生物修复等效应的农业资料产品，在改善土壤结构和土壤微生态环境、培肥地力、提高化肥利用率和降低化肥农药施用量、防治土壤连作障碍和提高农作物产量品质等方面可起到其他肥料无法替代的作用。

目前，随着食品安全、环境污染警示下的有机高效农业的兴起，微生物肥料在农业上的应用已被推向了新的高潮，成为新一轮农业绿色革命的鲜明特征和发展低碳农业的必然。

微生物肥料已经历了130多年的历程。最早问世的微生物肥料是可使豆科作物结瘤固氮的根瘤菌制剂。后来随着非豆科自生固氮、联合共生固氮以及钾细菌和磷细菌等的研究进展，自20世纪80年代起，相继出现了多种以单一营养菌为主体的微生物肥料产品。这类肥料称之为第一代微生物肥料(单一营养型微生物肥料)。由于这期间化肥的大量使用，加上人们认为微生物肥料并不能直接为植物提供养分，从而使这项技术发展缓慢。直到90年代，环境污染问题和农业可持续发展问题受到重视后，才诞生了第二代微生物肥料。

第二代微生物肥料是将固氮菌、解磷菌、解钾菌等单一营养型菌剂复合成的养分互补型微生物肥料。这类肥料通过微生物的生命活动，以分解土壤中难溶的磷或钾、固定空气中的氮的方式为植物提供养分。第二代微生物肥料由于其安全环保有效，近20年来得到了长足的发展。目前我国市面上销售的微生物肥料大多属于第二代微生物肥料。第二代微生物肥料对改善土壤生态环境、提高生物安全性有着重要的作用，但是就其单纯提供植物养分的功能上却与化肥的功能重叠，而且微生物肥料的速效性不如化肥好，因此，这些缺憾影响了第二代微生物肥料的进一步发展。另外，农作物连作在农业生产中及其普遍，由此引起的土传病害非常严重，在设施栽培中土传病害尤为突出，而这些问题无法通过化肥或第二代微生物肥料的施用加以克服。

专利CN1490280A公开了一种微生物多抗菌肥及其制备方法和应用。该菌肥含有胶冻样芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、泾阳链霉菌和木霉四种菌株，尽管具有肥药双重作用，但在药效方面作用较弱，更不具备杀灭农作物害虫的功能，有待进一步改进。

因此，在目前长期过量使用化肥和农药引起的土壤连作障碍(重茬病害)极其普遍和严重的情况下，发明一种既有肥效、防病和杀虫的“三效合一”功能，又有速效广谱效果的药效性微生物肥料非常必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种药效型微生物肥料，该肥料具有肥效、防病和杀虫“三效合一”功能。

本发明的另一目的是提供一种药效型微生物肥料的制备方法及其应用。

为实现本发明的目的，本发明提供了以下技术方案：一种药效型微生物肥料，其活性成分按重量份计由如下成分配比而成：

其中，所述复合菌液包括营养菌株和生防促生菌株，其有效菌总含量为12亿-39亿cfu/ml；所述营养菌为0.5亿-1.0亿cfu/ml的胶冻样芽孢杆菌Bacillusmucilaginosus、0.5亿-1.0亿cfu/ml的阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae、0.5亿-1.0亿cfu/ml的木醋杆菌Acetobacter xylinum、0.5亿-1.0亿cfu/ml的酵母菌Saccharomycescerevisiae；所述生防促生菌为5.0亿-20.0亿cfu/ml的地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis、5.0亿-15.0亿cfu/ml的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis；

所述中草药发酵萃取液是由印楝、苦豆子、除虫菊和/或油茶饼中一种或几种混合并经用复合菌液发酵得到的萃取液；上述四种中草药比例优选为印楝∶苦豆子∶除虫菊∶油茶饼是1-3∶1∶1∶1-5；

所述营养成分是白砂糖、尿素、磷酸二氢钾及用氨基酸和/或腐植酸螯合的铁、硼、锌、铜、锰、钼螯合物混合的混合物；上述四种成分比例优选为5∶4∶0.5∶0.5；

所述植物源乳化渗透剂是由油茶籽和/或无患子混合后的浸提物；油茶籽和无患子比例优选为1∶1。

优选的，本发明的一种药效型微生物肥料活性成分按重量份计由如下成分配比组成：

复合菌液         15份，

中草药发酵萃取液 30份

营养成分         20份，

植物源乳化渗透剂 35份。

其中，该复合菌液有效菌总含量为21亿-39亿cfu/ml，其中营养菌株包括0.8亿cfu/ml的胶冻样芽孢杆菌、0.8亿cfu/ml的阴沟肠杆菌、0.7亿cfu/ml的木醋杆菌、0.7亿cfu/ml的酵母菌；其中生防促生菌株包括10.0亿cfu/ml的地衣芽孢杆菌、8.0亿cfu/ml的枯草芽孢杆菌。

所述的药效型微生物肥料，其剂型是液体剂型或固体剂型。

制备所述的药效型微生物肥料的方法包括如下步骤：按照相应重量份配比，将复合菌液、中草药发酵萃取液、营养成分和植物源乳化渗透剂混合搅拌均匀制备得到液体剂；然后用有机物料吸附液体剂，再经常规方法干燥得到固体剂。

所述有机物料为填充剂或吸附剂，优选为草炭和/或褐煤。

其中所述复合菌液制备步骤如下：

(1)好氧菌液制备：

斜面培养：将胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在26-30℃条件下培养36-48小时；

摇床培养：将上述步骤培养的胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种在无菌条件下分别接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为28-32℃条件下，140-160r/min摇床培养32-40小时；

发酵罐培养：将摇床培养后的菌种在无菌条件下分别接种于发酵罐培养基，在pH6.5-7.0、罐压0.5kgf/cm²、温度为28-32℃、通风量1∶0.8-1.1条件下，培养52-60小时后，菌数大于1.0×10⁹/mL，80％菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；按等重量混合，制备成混合发酵液；所述罐压是指发酵在运行中罐内压力高于大气压的压力值。一般是通过压力表读出的。

(2)兼厌氧菌液制备：

斜面培养：将木醋杆菌、酵母菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在26-30℃条件下培养36-48小时；

兼厌氧发酵培养：将上述步骤培养的木醋杆菌、酵母菌在无菌条件下混合接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为28-32℃条件下，兼厌氧培养120-168小时，制备成混合发酵液；

(3)将上述好氧和兼厌氧制得的发酵液按重量份计1∶0.5比例混合，制备成复合菌液，有效菌总含量为12-39亿cfu/ml。

所述中草药发酵萃取液制备步骤如下：按1-3∶1∶1∶1-5比例取印楝、苦豆子、除虫菊和油茶饼混合并粉碎，用复合菌液进行兼厌氧堆置发酵数天后，用甲醇萃取并浓缩，制备成中草药发酵萃取液。发酵天数优选30天。

所述植物源乳化渗透剂制备步骤如下：上述比例油茶籽和无患子粉碎后，用甲醇萃取并浓缩，制备成植物源乳化渗透剂。

所述甲醇优选浓度为75％的甲醇。

一种药效型微生物肥料在农作物栽培中的应用。尤其是在防治农作物病虫害和提高农作物产量和改善品质中的应用。

所述农作物优选水稻、玉米、棉花、马铃薯、油菜、辣椒、西红柿、茄子、黄瓜、苹果、葡萄或枣树。

该药效型微生物肥料为液体剂型，可在田间或设施农业中通过灌根冲施或叶面喷雾施用，也可用草炭或褐煤等有机物料吸附后制备成粉状剂型做底肥用。

本发明首次提出第三代微生物肥料概念。第三代微生物肥料是把具有“营养、调理、保健”功能的优良菌种有机组合在一起的药肥兼效型微生物肥料。这类肥料十分注重生物防治和刺激生长的作用，在实际应用上，显示出了强劲的发展势头。这类肥料的特征是将微生物的肥料效应、防治病害效应和杀灭虫害效应聚合成“三效合一”，在农作物栽培中应用后，既能固氮解磷解钾、转化土壤中的潜在肥源、促进农作物对养分的吸收和利用，从而减少化肥使用量和提高肥料利用率，又能不用或少用化学农药就能达到有效的抗逆和植保效果。第三代微生物肥料是低碳绿色环保型产品，在持续供给养分、增多土壤有机质、改善土壤结构和提高土壤肥力，尤其在控制和克服因长期过量使用高碳化肥和农药引起的土壤连作障碍(重茬病害)方面具有独特的效果。

如何将微生物肥料的“肥效、防病和杀虫”功能聚合成“三效合一”，是第三代微生物肥料的核心关键，也是本发明的最大创新点。本发明经过多年的研究实践表明，不是仅有单纯的营养生防促生菌种组合，就能使微生物肥料具有第三代微生物肥料的特性和功能，而是要依据微生物与中草药双向发酵后能产生新的化感物质和诱导农作物打开次生代谢途径后，使其产生化感物质获得自主免疫力的双重防病杀虫机理，选择营养生防促生菌种与特定的中草药材双向发酵，然后再将其发酵萃取液与具有营养生防促生作用的菌种、络合的微量元素等混配，成为“三效合一”的药肥兼效性微生物肥料，而且在田间应用中要表现出像化肥和化学农药那样的速效、广谱防病虫效果。

本发明的优点：

1、本发明根据微生物肥料的发展进程和不同时期微生物肥料的特征，首次从理论上提出第三代微生物肥料概念。第一代微生物肥料为营养单一型；第二代为养分互补型；第三代为药肥兼效型。微生物肥料的科技创新就是要使第三代微生物肥料的特征不断地、更加明显地显现。

2、本发明根据第三代微生物肥料的理念，不加入任何化学农药，而是加入微生物和微生物与中草药双向发酵后的化感物质以及协同利用植物营养元素来调动植物体内产生化感物质，从而使上述药效型微生物肥料，能集微生物的肥料效应、防治病害效应和杀灭虫害效应为一体，达到一喷三效和速效广谱的田间应用效果。

3、本发明的有效菌制备方法先进科学，简便可行，孢子数含量高，存活时间长。有效菌与中药材双向发酵后能提高萜烯多肽、细胞分裂素和脱落酸等有效成分的含量和活性。加入植物源乳化渗透剂能使孢子在水中的分散性好，在叶片上的粘着性强。加入营养成分能使孢子快速萌发和诱导农作物打开次生代谢途径后获得较强的免疫力。

4、本发明的药效型微生物肥料为液体剂型，可灌根冲施和人工叶面喷施以及滴灌和飞机航化作业，也可用草炭或褐煤等有机物料吸附后制备成粉状剂型做底肥用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明选择的六个菌种分别如下：

1)胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC 10013；

2)阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC10523；

3)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC10118；

4)地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC11080。

5)木醋杆菌(Acetobacter xylinum)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC10403；

6)酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心ACCC20065。

实施例1药效型微生物肥料的构成

复合菌液          10份，

中草药发酵萃取液  20份

营养成分          15份，

植物源乳化渗透剂  55份，

所述复合菌液的构成

所述复合菌液包括如下步骤制备得到：

好氧菌液制备：

1)斜面培养：将胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在28±2℃条件下培养48小时；

2)摇床培养：将上述步骤1)培养的胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种在无菌条件下分别接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为30℃条件下，140-160r/min摇床培养36小时；

3)发酵罐培养：将上述步骤2培养的菌种在无菌条件下分别接种于发酵罐培养基，在pH6.5-7.0、罐压0.5kg f/cm²、温度为30℃、通风量1∶0.8-1.1条件下，培养48-56小时后，菌数大于1.0×10⁹/mL，80％菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；按等重量混合，制备成混合发酵液；

在好氧菌液的制备中，选用的斜面培养基的配方为：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏1g、水1000mL、琼脂15g。

摇床培养基配方为：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、K₂HPO₄0.5g、MgSO₄0.2g、水1000mL。

发酵罐培养基配方为：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg、加水至600kg。

兼厌氧菌液制备：

1)斜面培养：将木醋杆菌、酵母菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在28±2℃条件下培养36小时；

2)兼厌氧发酵培养：将上述步骤1)培养的木醋杆菌、酵母菌在无菌条件下混合接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为30℃条件下，兼厌氧培养120-168小时，制备成混合发酵液；

在兼厌氧菌液的制备中，选用的斜面培养基的配方为：葡萄糖15g、、酵母膏1g、水1000mL、琼脂15g。

发酵培养基配方为：白糖10g、淀粉10g、鱼蛋白胨5g、牛肉膏0.1g、酵母粉1g、加水至1000g。

将上述好氧和兼厌氧制得的发酵液按重量份计1∶0.5比例混合，制备成复合菌液；

所述中草药发酵萃取液是按照下述方法制备：

将1∶1∶1∶1印楝、苦豆子、除虫菊和油茶饼混合并粉碎，用上述制得的复合菌液进行兼厌氧堆置发酵30天后，用75％甲醇萃取并浓缩，制备成中草药发酵萃取液。

所述营养成分是按照下述方法制备：

将白砂糖、尿素、磷酸二氢钾及用氨基酸和/或腐植酸螯合的铁、硼、锌、铜、锰、钼螯合物，按照5∶4∶0.5∶0.5的比例混合均匀制得。

所述植物源乳化渗透剂是按照下述方法制备：

将1∶1油茶籽和无患子粉碎后，用甲醇萃取并浓缩，制备成植物源乳化渗透剂。

所述一种药效型微生物肥料按照下述方法制备：

将按照重量份计的10份复合菌液、20份中草药发酵萃取液、15份营养成分和55份植物源乳化渗透剂混合搅拌均匀制备得到液体剂；用草炭和/或褐煤等有机物料吸附液体剂，并经常规方法干燥得到固体剂。

实施例2药效型微生物肥料的构成

复合菌液         15份，

中草药发酵萃取液 30份

营养成分         20份，

植物源乳化渗透剂 35份，

所述复合菌液的构成

上述实施例2中制备复合菌液时各个步骤所用的培养基和实施例1相应步骤所用的培养基相同，产品的配制方法和比例相同；所述营养成分、中草药发酵萃取液、植物源乳化渗透剂的制备方法和比例同实施例1；药肥的液体制剂及固体制剂的配制方法和比例同实施例1。

实施例3、药效型微生物肥料的构成

复合菌液          20份，

中草药发酵萃取液  40份

营养成分          30份，

植物源乳化渗透剂  10份，

所述复合菌液的构成

上述实施例3中制备复合菌液时各个步骤所用的培养基和实施例1相应步骤所用的培养基相同，产品的配制方法和比例相同；所述营养成分、中草药发酵萃取液、植物源乳化渗透剂的制备方法和比例同实施例1；药肥的液体制剂及固体制剂的配制方法和比例同实施例1。

实验例1、药效型微生物肥料主要活性成分的测定结果

1、试验目的：检测中的有效菌含量、营养成分和其他化学成分。

2、检测样品：按上述实施例2制备的药效型微生物肥料样品。

3、检测方法：按照微生物肥料的国家标准(GB20287-2006)检测。

4、检测结果：

1)有效菌含量，结果见下表1。

2)其他活性成分，结果见表2。

表1主要指标测定结果

表2其他活性成分测定结果

5、结论：

经检测，本发明的药效型微生物肥料符合微生物肥料国家标准，同时，还含有多种对农作物有益的营养元素。此外，产品中的萜烯多肽(皂苷、酚酸和氨基酸的复合物)对农作物病原菌和害虫有较强的化感作用和杀灭效果；细胞分裂素(玉米素)能增强光合效率和促进生长；脱落酸能增强农作物的抗逆性；微量元素和萜烯多肽协同作用能开启农作物的次生代谢途径。

实验例2、药效型微生物肥料对真菌病害的抑制作用

1、试验目的：通过在室内离体条件下，采用钢圈扩散法和菌丝生长抑制法，检测该产品对农作物真菌病害的抑制作用。

2、检测样品：按上述实施例2制备的药效型微生物肥料样品。

3、测定方法与步骤：

3.1钢圈扩散测定法

一支试管的病原真菌用5ml无菌水刮下孢子和菌丝，倒入冷却至45℃以下的100ml土豆培养基中摇匀，每个培养皿中加入12.5ml带菌培养基，待凝固后放入不锈钢圈，加入检测稀释样品，根据不同菌的生长速度量取抑菌圈大小。

3.2菌丝生长抑制法

在室内采用菌丝生长抑制法检测对10种病原真菌的抑制作用，将样品稀释成10、20、40、60倍，每一平皿内加入1ml稀释样品和9ml土豆培养基摇匀，再把培养好的病原菌用直径5mm的打孔器打成菌落块放入上述平皿中央，以不加药剂的为对照，每一浓度重复3次，放入26-28℃恒温箱培养66-70hr，计算菌丝生长抑制率。

4、结果

4.1钢圈扩散测定法结果见表3。

表3对供试病原真菌的抑制作用

4.2菌丝生长抑制法结果见表4。

表4对供试病原真菌的抑制作用

5、结论

供试样品用钢圈法测定，稀释600-800倍对苹果腐烂病、番茄灰霉病有较好的抑制作用，稀释200-400倍对油菜菌核病、稻瘟病、苹果轮纹病有较好的抑制作用；用菌丝生长抑制法测定，分别稀释100、200、400和600倍对水稻稻瘟病、苹果腐烂病和苹果轮纹病抑制率达100％，稀释200-400倍对小麦纹枯病和小麦根腐病抑制率达100％，对水稻纹枯病、油菜菌核病、棉花立枯病、黄瓜炭疽病和小麦赤霉病抑制率达70-80％以上；该产品作为一种生物源杀菌剂对防治上述作物真菌病害有潜在的应用前景。

实验例3、药效型微生物肥料对大棚辣椒的抗病增产效果

1、试验目的：了解药效型微生物肥料对大棚辣椒的抗病增产效果，为该产品大面积推广应用提供科学依据。

2、试验材料：

2.1供试样品：上述实施例2制备的药效型微生物肥料样品。

2.2对照药剂：生多素为美国生多素公司产品

3、试验方法：

3.1试验设2个处理：处理为药效型微生物肥料，对照为生多素。

3.2小区设置：处理设600倍，800倍，1000倍，共3个不同的稀释倍数。生多素分别以相对应的用量为对照。试验设3个重复，田间分3组，每组6个小区共18个小区，随机区组排列，每小区面积为10m2。采用南北行向双行定植，每区植苗64株。大棚加地膜覆盖栽培。

3.3施药时间和方法：于开花期开始叶面喷施，每隔10天喷一次，共喷四次。用手动压缩喷雾器均匀喷雾，以叶片滴水为度。

3.4调查时间和方法：定植后，确定对应位置的4个处理小区共24株，每小区分别定株，叶面喷施后定时5天观测记载株高、茎粗、分枝数、挂果数、开展度以及小区产量、单株产量一次。田间肥、水、病、虫及温度管理与生产相同。试验从2010年3月27日定植到7月9日结束。

4、试验结果与分析

由表5可以看出，3种不同的喷施水平、药效型微生物肥料折合亩产量比生多素平均增产15.7％，平均亩产增加产值达313.06元，最高超过460元，这表明药效型微生物肥料肥效高于生多素，增产增值效果明显。

表5小区辣椒产量统计分析表

药效型微生物肥料不同用量之间，无论是产量还是营养体生长，反映不出依次递增的结果。但表现最突出的是800倍，产量及总产量都最高。平均单株挂果率也高达46％，位居各处理之首。对此，我们认为800倍投入和产出比最理想(表5)。从药效型微生物肥料在辣椒上的试验情况来看，药效型微生物肥料对辣椒的疫病和枯萎病有良好的防治效果。对感染的病株也有一定的治疗效果。

表6小区辣椒疫病发生调查结果表

5、小结

药效型微生物肥料能显著提高大棚辣椒产量及抗病能力，且对大棚辣椒安全，抗病增产效果明显优于对照生多素。

实验例4药效型微生物肥料防治甘蓝菜青虫的田间药效实验

1、试验目的

通过药效型微生物肥料防治十字花科蔬菜菜青虫的田间药效试验，评价其防治十字花科蔬菜菜青虫的速效效果和持续期，对其他生物的影响，以及对十字花科蔬菜的增产效果，明确施用适期、最佳用量及用肥次数。评价中药发酵萃取液和微量元素对药效型微生物肥料防治十字花科蔬菜菜青虫的的作用。

2、试验对象和条件

试验对象菜青虫(piersrape linnaeus)；

试验作物甘蓝，品种名称中甘21号；

试验地点选在北京市北七家甘蓝田进行，所选试验地块地势平坦，肥水管理条件一般，甘蓝产量4000公斤/亩左右，甘蓝移栽时期为6月6日，施药时甘蓝正处于结球期，菜青虫中等发生。

3、试验设计和安排

3.1供试样品

3.1.1试验样品

3.1.1.1药效型微生物肥料，按本发明实施例2制备。编号为处理1。

未加中药发酵液的药效型微生物肥料。按本发明实施例2制备时，用水代替中药发酵液，其他都相同。编号为处理2。

未加微量元素的药效型微生物肥料。按本发明实施例2制备时，用水代替微量元素，其他都相同。编号为处理3。

中药发酵液。编号为处理4。

3.1.2对照样品

4.5％高效氯氰聚酯乳油，生产厂家红太阳集团南京第一农药厂，市场购得；编号为农药对照。空白对照为水；编号为空白对照。

3.2试验小区安排

试验共8个处理，即处理1A(200倍稀释)，处理1B(400倍稀释)，处理1C(800倍稀释)，处理2(200倍稀释)，处理3(200倍稀释)，处理4(200倍稀释)，农药对照(1000倍稀释)，空白对照。每个小区面积30平方米。设3次重复共24个小区。试验前试验地未曾用过农药防治菜青虫，试验地块试验期间对其他病虫害也未进行防治。

3.3施药方法

试验采用常规喷雾，施药器械为常规喷雾器(15公斤水/桶)，施药时做到了整个甘蓝植株着药均匀。于7月8日甘蓝结球期，菜青虫2-3龄期进行常规喷药一次。试验地实际用药液量为45公斤/亩。

4、调查、纪录和测量方法

施药当天为微风晴天。试验地块土壤类型为沙壤土，肥力中等，土壤有机质含量2.0％，试验地块田间无杂草。

于施药前当天，逐株调查各固定株虫口基数，药后1天、3天、7天分别调查残虫量。

试验田间调查采取每小区5点取样，每点固定5株甘蓝，共调查25株。计算方法：防治效果(％)＝(1-CK₀×PT₁/CK₁×PT₀)×100％

式中：PT₀——药剂处理区药前虫数PT₁——药剂处理区药后虫数

CK₀——空白对照区药前虫数CK₁——空白对照区药后虫数

5、结果与分析

试验结果见表7。由表7可见，喷药后1天，处理1的药效型微生物肥料稀释200倍、400倍和800倍喷施的各个处理区的平均校正防效分别是93.3％、92.5％和53.7％；处理3和处理4平均校正防效是93.1％和58.7％；农药对照的平均校正防效是95.3％；处理2与空白对照一样无杀虫效果。经生物统计方差分析，处理1A、处理1B和处理3与农药对照相比其平均校正防效，在5％水平上无显著差异；处理1C和处理4与农药对照相比有极显著差异。药后3天、7天与药后1天的结果基本一致，只是处理3的防效降低。由于试验区域内菜青虫无明显抗药性，导致试验样品各剂量防效均高。

表7药效型微生物肥料防治甘蓝菜青虫试验结果

注：上表中的防效(％)为各重复平均值。生物统计分析方法为最小显著差异法(简称LSR法)。

表7结果表明，药效型微生物肥料处理1B在稀释400倍范围内，防治甘蓝菜青虫的效果与化学农药相当，并且具有速效性和持效性。未加中药发酵萃取液的处理2，没有杀虫效果，这说明单纯的复合微生物菌剂不具备速效杀虫能力。未加微量元素的处理3，速效杀虫效果与化学农药相当，但持效性降低，这说明微量元素与复合微生物和中药发酵萃取液配合后有协助作用，这可能与微量元素能开启农作物次生代谢途径，增强了免疫力有关，还尚需进一步研究。中药发酵萃取液有较强的杀虫能力，当与复合菌剂和微量元素配合后，杀虫效果极显著增加。

6、结论

通过试验可知，药效型微生物肥料可有效控制十字花科蔬菜菜青虫的发生与危害，而且速效性好、防效显著，持续期长。喷施后甘蓝生长好，同时还防治甘蓝上的蚜虫和螨虫。试验还说明，本发明的药效型微生物肥料中的中药发酵萃取液对于提高其杀虫速效效果，营养成分对于提高其杀虫持效效果具有必不可少的作用。

药效型微生物肥料的施用浓度为稀释400倍，施用适期为菜青虫幼虫3龄前。由于药效型微生物肥料没有化学农药那样的强的内吸性和渗透性，所以，施用时必须做到植株叶片喷雾均匀。

实验例5药效型微生物肥料防治水稻病虫害的田间实验

我们于2009年在红旗岭农场的水田气候条件下，进行了药效型微生物肥料防治水稻病虫害和促进水稻生长增产的田间试验。

1、材料与方法

1.1试验地概况

试验地设在红旗岭农场第一管理区第九作业站一号1区。供试土壤类型为草甸黑土，肥力水平中等，有机质含量3.5％，PH值6.9，前作水稻。

1.2耕作栽培管理

去秋耕翻，春打浆，于5月23日机插，插秧规格9寸x3寸。管理按“三化栽培，叶龄诊断”要求进行，插前7天封闭灭草惠尔+30％莎稗磷。

1.3施肥状况

1.3.1底肥

试验小区亩施六国二铵10kg，22％美牛牌氯化钾8kg，尿素3kg，基施旺5kg。结合水耙地一次性全层施肥。

1.3.2追肥

试验小区施追肥3次。亩施返青肥黑道白道5kg，6月3日施分蘖肥尿素6kg和除草剂丙草胺60ml及吡嘧黄隆30g。7月7日施穗肥尿素2.3kg和美牛钾肥4.7kg。

1.4供试材料

水稻，品种为绥梗4。

上述实施例2制备的肥料

对照(CK)用常规化学农药：氧化乐果，速克毙和稻瘟灵。

水稻叶面喷施药效型微生物肥料和化学农药，比较对潜叶蝇、负泥虫、稻蝗、稻螟和稻瘟病、胡麻叶斑病的防治效果。

1.5实验设计与方法

1.5.1试验设计

采用大区对比试验，设2个处理不设重复，每区面积667m2，一个自然池。

1.5.2微生物药肥和化学药剂处理

药效型微生物肥料和化学农药用量和使用次数按表8进行。

表8水稻全生育期用量和次数

1.5.3施药时间

药效型微生物肥料处理的第一次施药时间6月3日，第二次施药时间7月8日。

化学药剂对照CK的第一次施药时间6月3日，第二次施药时间7月8日，第三次施药时间7月28日。

1.5.4使用器械和施药方法

器械：山东产卫士牌手动喷雾器

施药方法：人工手动喷雾器施药。

1.6调查方法和时间

植株生长和产量：按常规方法进行田间观察和室内考钟。

药效调查方法和时间：施药后7天、15天、30天分别调查防虫防病的药效。

2、结果与分析

2.1对水稻生育期和生长的影响

在水稻返青分蘖期和孕穗期喷施药效型微生物肥料，可以促进水稻生长发育。处理与对照相比，在分蘖期和孕穗期没有明显区别，但进入抽穗期处理表现比对照好，可使抽穗期、成熟期提前。处理比对照抽穗期提前3天，成熟期提前5天。详见表9。

表9水稻生育期调查表

2.2对水稻产量的影响

从水稻田间对比试验结果看出，施用药效型微生物肥料，具有明显的促进水稻生长和增加粒数提高产量的效果。由表10可见，施用药效型微生物肥料与施用化学农药相比，株高增高3cm，稻穗增长0.7cm，每穴有效穗数增加0.8个，穗粒数增多4.7粒，千粒重增加1.1克，亩增产94.08公斤，增产幅度为14.79％。2009年本农场水稻航化作业中，全场30万亩水稻喷施2遍药效型微生物肥料，不仅水稻长势而且产量性状都很好，本农场水稻秕粒率不到5％，出米率达到72％，农垦总局在本农场召开了全总局的水稻现场会，水稻获得了大面积丰收。

表10水稻产量性状

2.3对水稻防病虫害的效果

本农场水稻上的主要病虫害是稻瘟病、潜叶蝇、负泥虫和稻蝗虫等。本研究的处理是用药效型微生物肥料防治病虫害，对照是用化学农药稻瘟灵防治稻瘟病，氧化乐果防治潜叶蝇，速克毙防治负泥虫和稻蝗虫等。试验结果表明，药效型微生物肥料与化学农药的防效相当(表11)，但防效期比对照长，省工省时成本低，尤其是喷药效型微生物肥料的处理植株，稻蝗啮嚼叶片少而伤小尤为剑叶，从成效看处理较对照好。处理比对照的植株颜色绿，茎秆粗壮，抗倒伏，促早熟。本试验的处理区和对照区均未发生稻瘟病，大田水稻仅个别田块有轻微稻瘟病害，因此，药效型微生物肥料对稻瘟病的防效尚需进一步试验证实。

表11防治水稻虫害效果

3、结论

通过一个生产周期试验田间直观调查和室内考种不难看出药效型微生物肥料具有生物抗病防病、驱灭害虫和提供植物营养的三重功效，在水稻拔节和孕穗期进行2次叶面喷施，可代替微肥和减少农药用量，提高肥料利用率，防治稻田病虫害，显著提高千粒重和出米率，抗倒伏、促早熟、改善品质，增产10％以上，经济效益、生态效益和社会效益显著。

实验例6药效型微生物肥料对棉花防病增产的盆栽和田间小区对比实验

本试验的目的是通过盆栽试验和田间小区对比试验，检验药效型微生物肥料对棉花枯黄萎病害和棉花虫害的防治效果和增产效果。

1、材料和方法

1.1盆栽试验

1.1.1供试材料

棉种采用“鄂抗三号”。试验用盆为直径32厘米的红土瓦盆；供试土壤取非种棉大田耕作层土壤(黄棕壤土)；药效型微生物肥料(以下简称粉状药肥和液体药肥)由中国农科院农业资源与农业区划研究所、中微聚丰科技(北京)有限公司提供，药肥中有效活菌数大于2×10⁸个/克；棉枯萎病原菌为尖镰孢萎蔫专化型真菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfecfum以下简称F.o)，棉花黄萎病原菌为大丽花轮枝菌(Verficillium dahliac以下简称V.d)，由中国农科院植保所提供。

1.1.2试验方法

供试土壤风干过筛灭菌，每盆装4.5公斤。设置6个处理，重复5次，分别为：(1)对照1(CK1)为不接种病原菌；(2)对照2(CK2)为枯萎病菌块(F.o)接种；(3)对照3(CK3)为黄萎病菌块(V.d)接种；(4)处理1为F.o菌块接种+粉状菌肥拌种+液体药肥浇灌；(5)处理2为V.d菌块接种+粉状菌肥拌种+液体药肥浇灌：(6)处理3为(F.o+V.d)混合菌块接种+菌肥拌种+液体药肥浇灌。

病原菌在PDA平板上(厚度2毫米)培养10天(F.o在28±2℃，V.d在26±2℃条件下培养)后，分成10×2×0.5cm方块作为接种物。

对照(CK2和CK3)和接种(处理1和处理2)处理中每盆中央均放1块病原菌块，处理3盆中各放1块病原菌快。处理1、处理2和处理3，在栽种棉籽后，每盆按1∶500倍浇灌液体药肥500克。

每盆种10粒棉籽后，将土盆随机按5×6长方阵排列。以后每星期随机重排一次盆栽的位置，其它水肥管理一致。

1.1.3测定方法

播种14天计出苗率后每盆定苗4棵，35天取样后每盆定苗2株，45天取样后每盆留1株。按常规方法观察、测定有关指标和进行生物统计(8)。因试验后期病害对照处理中出现有整株死亡现象，故试验仅进行75天后结束。

1.2小区对比试验

在河北省棉区进行了田间小区对比试验，品种为“鄂抗三号”，土壤类型为黄棕壤。试验设2个处理，采用三次重复，随机区组设计，小区面积为50m²，营养钵育苗后移栽。即：(1)CK为不拌种和不施药肥，(2)处理为用粉状肥按200克/亩拌种，同时，按肥∶土1∶1000比例混匀制成营养钵，育苗后移栽。在苗期和打顶前喷施3次液体药肥，打顶后喷施1次液体药肥。前期调查不同处理的成苗素质及病情，后期考察产量及品质性状。试验各小区按100公斤/亩施棉花专用肥。追施铃肥(尿素)0.25Kg/50m²。其它田间管理一致。对照区喷施4次阿维菌素和辛硫磷。

2、结果和分析

2.1药效型微生物肥料对棉花生长的影响

盆栽试验结果表明(表12)，棉花枯黄萎病原菌对棉花出苗率没有影响，而用药肥处理的成苗率都比对照显著增加。药肥处理比CK1出苗率高的结果还说明，药肥中的有效菌可以促进棉籽发芽和成苗。

表12药效型微生物肥料对棉花生长和致病的影响

由表12可见，棉花枯黄萎病原菌明显地影响棉花生长，植株矮、弱，由于枯黄萎病菌的影响，使苗期和初铃期的地上干重比不接种的对照(CK1)都要低。药效型微生物肥料处理都显著地促进棉花生长。尤其棉花苗期株高和干重都比对照高，与对照相比，受影响的单株个体达到80％以上，这表明，该菌肥能显著提高棉花成苗素质，促进棉花壮苗早发。

2.2药效型微生物肥料对棉花产铃的影响

由表12可见，用菌肥处理明显增加棉花的有效铃数、单铃重和总铃重。单用枯萎或黄萎病原菌的对照(CK1或CK2)明显减少有效铃数及铃重。它们的总铃重比CK1减少95-100％，甚至有整株死亡现象。田间小区的结果与盆栽试验结果一致(表2-4)。

2.3药效型微生物肥料对棉花产量的影响

田间小区试验的结果表明(表13-15)，棉花使用药效型微生物肥料有显著的增产效果，比对照增产12.2％。由表13-15可见，施用药效型微生物肥料可提高棉花的单株铃数、铃重和衣分，从而改善棉花的纤维品质，提高棉花的经济性状。

表13棉花伏前桃调查表(7月16日)

表14棉花伏桃调查表(8月15日)

表15棉花秋桃调查表(9月10日)

2.4药效型微生物肥料对棉花枯萎病和黄萎病的影响

在盆栽试验中，对照(CK1)没有出现枯黄萎病症，病害对照(CK2，CK3)从苗期就有致病特征出现，而在铃期的表现尤为明显，这说明本试验所用的病原菌经离体培养后并没有丧失其致病能力，用菌肥同病原菌混合处理后都不致病，说明它们对枯黄病原菌有抑制或杀灭作用(表12)。在田间小区对比试验中，对照区在苗期就零星出现枯黄萎病症，在铃期黄萎病较为严重。整个生育期间，棉花枯黄萎病的发病率为36.7％，处理区为13.5％。这些结果表明，药效型微生物肥料不仅能有效防治病害，而且还表现出显著的增产效果(表15)。另外，药效型微生物肥料对枯萎或黄萎病原菌的单一侵染和两种病原菌的混合侵染，都表现出较强的防治能力(表12)，这说明药效型微生物肥料不论是在枯萎及黄萎单一感染种棉区或混染种棉区应用都是有效的防治措施之一。

2.5药效型微生物肥料对棉花害虫的影响

对照区采用阿维菌素和辛硫磷防治棉花蚜虫、螨虫和棉铃虫，防效达到95％以上。处理区未用化学农药，基本上没有虫害，这结果说明，药效型微生物肥料具有较好的防虫效果，防效与阿维菌素和辛硫磷相当。

3、结论

3.1利用拮抗菌防治土传病害，国外已有商品，产品称为“Soilgard”和“Mycostop”等。文献报道，这些产品的抗病增产效果明显，在无公害农产品的生产中发挥了积极的作用。我们在药效型微生物肥料中复配组合了多种拮抗菌和促生菌。这些生防促生菌属于广谱拮抗菌，对枯萎病、黄萎病、立枯病和G-细菌等土传病原菌的拮抗性很强，其中的放线菌对细菌性病原菌无拮抗作用，属于专性抗真菌性拮抗菌。盆栽试验结果表明，产品中的拮抗菌在植物根际适应性较强。我们还在根际数量对比试验中观察到，它们能在农作物根表和根际土壤中生存和繁殖，而且对病原菌有很强的抑制能力。由表12结果可知，在用棉花枯萎病原菌(F.O)或黄萎病原菌(V.D)与棉种拌种处理后，棉株在生长过程中均得病死亡，而用药效型微生物肥料处理后无一棵棉株得病，这说明产品中有效菌完全能够抑制病原菌生长。在棉花小区对比试验中，施用了药效型微生物肥料的处理比不施用的对照，棉花皮棉产量增加，枯萎病和黄萎病的发病率降低。尽管防病效果没有盆栽试验显著，但也充分说明了药效型微生物肥料的田间效果。

3.2对于药效型微生物肥料的作用机理，我们的初步研究结果表明：该药肥施入土壤后，有效菌在合适条件下迅速萌发并在根际定殖，在生命活动过程中抑制有害菌的发展，并改善土壤微生态环境，提高土壤肥力。其中，植物营养菌能固氮、解磷、解钾，分解有机物质，生防促生菌能抑制和杀死引起枯萎病、黄萎病等多种土传病害的病原真菌和病原细菌，使植物根际处于一个保健的生存空间，避免病原菌的危害，同时还能产生生长激素类物质，从而促进植物生长，抗病增产；该药肥喷施棉花植株后，产品中的化感物质能调整株型，增强光合作用，使得茎秆粗壮，叶片绿厚，成桃早，坐果率高，提高产量和改善品质。防病虫的效果表明，产品中的有效成分能像化学农药那样速效杀灭棉花害虫和诱导开启棉花次生代谢途径，导致棉花体内产生萜烯类化感物质，增强自主免疫力，从而长效预防棉花病虫害。

3.3 综上所述，药效型微生物肥料是一种能有效防治棉花枯黄萎病和棉花虫害的生物制品。它不仅能防治病虫害，而且还能促进生长，提高产量和改善品质。不论是在枯萎病或黄萎病单一发病区，还是在枯黄萎病混发区施用药效型微生物肥料都是一种很好的生防措施，甚至在无病区使用也有增加产量和收益的效果，因此，该肥是一种很有发展前景的药肥兼效性微生物肥料。

实验例7药效型微生物肥料对番茄根结线虫防治的田间实验

根结线虫(Metoidgyne spp.Chitwood)是一种植物根系土传定居型内寄生线虫。由于其寄主范围广，传播途径多、繁殖效率高、抗逆能力强(卵、卵囊)，又同时伴随多种土传病害发生，因此防治十分困难。据报道，近年来瓜菜根结线虫病在大棚、温室和老菜地、重茬地发病日趋严重，已成为瓜菜的毁灭性病害，轻者减产10-30％，重者减产60～70％，甚至造成全大棚，温室绝收。目前生产上对根结线虫的控制主要依赖化学防治，而化学杀线剂大多属于高毒、高残留农药，大量使用造成地下水污染，食品中残留，带来人畜中毒、环境污染及生态破坏等严重问题。因而在生产中急需安全、高效、实用的替代药剂及其应用技术。

本研究以北京市郊区发生较严重的蕃茄根结线虫为研究对象，系统研究了药效型微生物肥料对番茄根结线虫的毒杀活性和田间防治效果.

1、材料与方法

1.1材料

(1)本申请药效型微生物肥料粉剂和水剂。(2)供试1.8％％阿维菌素(Abamectin)乳油由河北威远生物化工股份有限公司生产，市场购买。(3)供试番茄品种为早冠30，市场购买。(4)供试25％丁硫克百威乳油由浙江化工研究院生产，市场购买。(5)供试线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)，采自北京市顺义区无公害大棚蔬菜基地，经鉴定为南方根结线虫，选取单卵囊纯化，在室内繁殖保存。

1.2室内试验方法

1.2.1根结线虫卵囊的获得

取已产生大量根结的番茄根系，自来水轻轻冲洗干净，用镊子轻轻挑取病根上的乳白色至黄褐色卵囊备用。当需要大量的卵囊时，取番茄根系洗去根表土后放入白磁盘中，上铺两层湿纱布，盖上磁盘盖，于27℃培养箱中培养1～2d，即可在病根上肉眼看到许多胶质的卵囊，然后用镊子直接挑取备用。

1.2.2根结线虫卵悬浮液的制备

采用次氯酸钠法，制备卵悬浮液。将具有根结的植物材料轻轻洗去根表土，剪成1cm长根段，放入500mL三角瓶中，倒入200mL 0.5％NaClO溶液，消毒3min，然后用无菌水冲洗数次，以便冲洗干净NaClO溶液，与适量水一起放入组织捣碎机中，同时加入2～3滴土温-100(减少搅拌过程中泡沫产生)，搅拌20～30s，并将搅拌器中根碎片同溶液一并倒入60目-200目-500目组筛内，用无菌水冲洗200目网筛上的根碎片，以便尽可能在500目网筛上收回线虫卵。卵悬浮液收集于250m1烧杯中，用移液枪移取0.1mL卵悬浮液于培养皿中，在倒置显微镜记录卵数，1000枚/mL为宜，并置4℃冰箱中，以备用。

1.2.3根结线虫二龄幼虫悬浮液的制备

将经消毒后的卵囊放入垫有2层尼仑网的线虫分离器中，在27℃孵化3～4d，收集二龄幼虫并加入一定量的无菌水将其配置成一定浓度(大约1000条/mL左右)的悬浮液备用。1.2.4克线一冲灵对南方根结线虫卵囊孵化的影响

参考刘霆等方法，略加修改：在每个经高温灭菌的培养皿(直径6.0cm)中放入3个表面消毒发育较一致的卵囊，分别加入2ml、4ml、6ml药效型微生物肥料(450倍)，以加入2ml无菌水、1.8％阿维菌素乳油(1000倍)为2组对照。处理和对照各重复3次，将各处理培养皿用封口膜封严，以减少液体的蒸发。置27℃条件下恒温培养。7d后在倒置显微镜下镜检各处理二龄幼虫孵化数。计算不同浓度对卵囊孵化的相对抑制率。

1.2.5药效型微生物肥料对南方根结线虫二龄幼虫的影响

取经灭菌的24孔细胞培养板，在每一孔内加入1mL 500头/mL左右新孵化的南方根结线虫二龄幼虫悬浮液，在不同的孔中分别设对照组和处理组，其中对照组中加入2mL无菌水、2mL 1.8％阿维菌素(1000倍)，处理组中分别加入2ml、4ml、6ml药效型微生物肥料(450倍)，每组处理和对照各重复3次。置于27℃恒温培养箱中培养，分别于处理后24h、48h在倒置显微镜下检查线虫的致死情况，统计死亡数，计算死亡率。死亡率和校正死亡率的计算公式如(1)、(2)所示：

线虫死活的鉴别采用NaCl检测法，用细挑针挑取僵直的线虫，置于2.0％NaCl中5min后，僵直的假死的线虫虫体弯曲并开始运动，死亡的线虫虫体仍然保持僵直并不运动。对于很难辨别的虫体，采用高锰酸钾染色法，将线虫放入0.5％--1.0％的高锰酸钾液中染色1--2min，在倒置显微镜下观察，死线虫染成棕红色，活虫仍然是半透明的，不易染色。

1.3田间试验方法

1.3.1试验处理

药效型微生物肥料处理如下：药效型微生物肥料(固体)7公斤/亩，药效型微生物肥料(液体)1000ml/亩。

1.8％阿维菌素1000ml/亩。

25％丁硫克百威乳油1000ml/亩。

空白对照

1.3.2试验设计：

试验共4个处理，每处理3次重复，每小区20m²，小区设置按照随机区组排列。小区之间设隔离区。供试大棚前茬是伊丽莎白瓜，基本上每株都有根结线虫病，而且相当严重，减产80％。

1.3.3施药时间与方法：

在大棚整地施底肥时，按每亩7公斤药效型微生物肥料复合肥混合好施入供试土壤中，然后起垄。在2007年7月6日，再按每亩2公斤药效型微生物肥料与适量细土混匀穴施并直播番茄种子。在出苗后2周(7月20日)灌施药效型微生物肥料(1000ml/亩)。对照药剂按同样方法处理。

1.3.4试验调查：

施药前调查土壤中的二龄幼虫数，然后，分别在番茄出苗施药后一个月和二个月调查土壤中的虫口密度和根结指数，土样采集为每小区取5个点，每点采土约100克，然后混均，取其中的100克进行分离，土样分离采用改进的贝曼漏斗法，计100克土壤中的虫量；根结指数的计算按每小区取10株番茄，进行分级计数。

0级：根系健康无根结；       1级：根结数占根系的1-25％；

3级：根结数占根系的26-50％；5级：根结数占根系的51-75％；

7级：根结数根系的76-100％

1.3.5计算公式：

2、结果与分析

2.1药效型微生物肥料对根结线虫卵囊孵化的抑制效果

本研究在室内离体条件下，测定了药效型微生物肥料的水剂对番茄根结线虫卵囊孵化的毒力，结果见表16。从表16可知，药效型微生物肥料能明显抑制南方根结线虫卵囊的孵化，卵囊孵化抑制率显著高于对照药剂阿维菌素，且复加的浓度越高效果越好。

表16药效型微生物肥料不同浓度对南方根结线虫卵囊孵化的抑制效果

2.2药效型微生物肥料对根结线虫二龄幼虫的毒杀效果

本研究在室内离体条件下，测定了药效型微生物肥料水剂对番茄根结线虫二龄幼虫的毒杀效果，从表17可以看出，药效型微生物肥料对南方根结线虫二令幼虫具有较好的毒杀作用，不同使用剂量的药剂毒杀效果不同。在48h时，4ml和6ml剂量的药效型微生物肥料对南方根结线虫二龄幼虫的毒杀校正死亡率分别达到95％和98％。

表17药效型微生物肥料对南方根结线虫二龄幼虫的毒杀效果

2.3药效型微生物肥料对土壤中二龄幼虫的影响

药效型微生物肥料对控制土壤中二龄幼虫的数量有良好的效果。施药30天(8月20)调查对线虫的防效为79％，对照药剂阿维菌素为66％、25％丁硫克百威乳油的防效为72％，药后二个月(9月20日)调查，药效型微生物肥料对根结线虫的防效仍达到74％，对照药剂阿维菌素和25％丁硫克百威的防效分别为63％和73％(见表18)。两次调查结果的方差分析都表明，药效型微生物肥料防效都显著高于阿维菌素药剂的防效，与25％丁硫克百威乳油防效相当(表19)。

表18药效型微生物肥料对土壤中二龄幼虫的影响

表19药效型微生物肥料对番茄根结线虫防效的方差分析表

2.4药效型微生物肥料对番茄根结线虫病发病程度的影响

药效型微生物肥料对番茄根结线虫病有一定的防效，施药后使根结指数有明显的下降，药后30天(9月20日)调查病指防效达72％(表20)。对照药剂阿维菌素和25％丁硫克百威的防效分别为61％和69％。药后二个月的防效略低于药后一个月的防效。

方差分析的结果表明(表21)，药效型微生物肥料对番茄根结线虫病的防效显著高于对照药剂阿维菌素的防效，与对照药剂25％丁硫克百威乳油的防效相当。

表20药效型微生物肥料对番茄根结线虫病发病程度的影响

表21药效型微生物肥料对番茄根结线虫病防效的方差分析表

2.5药效型微生物肥料对番茄生长发育的影响

供试大棚前茬栽种的是伊丽莎白瓜，根结线虫病极其严重。由于连年重茬，病害越来越重，已达到不可控制的地步，农户计划在大棚倒茬种玉米。因此，本实验在大棚施底肥整地时，将药效型微生物肥料的粉剂与复合肥混匀施入土壤，以降低土壤中的虫口密度。在下种时，除空白对照外，所有处理均按每亩2Kg的药效型微生物肥料的剂量进行穴施，并直播番茄种子。结果表明，处理后的番茄出苗齐，苗壮，根白根多，不死苗。空白对照的死苗率多达20％，并在7-10天，开始出现根结线虫病害，到三叶一心期，病害大发生。在处理区也出现零星病株。此时，按本试验设计灌施药效型微生物肥料水剂和对照药剂。在施用药效型微生物肥料的第二天，就发现土中的蚯蚓、蝼蛄和地老虎都死掉了。番茄病株恢复了长势，根系发达，新根侧根多，与未使用药效型微生物肥料的对照相比，差异特别明显。从开花到头三穗果期间，番茄秧苗长得特别旺，根系多，茎粗叶片厚，浓绿，花多，结果率高，没有病虫害。在第二次取土样后，整个试验地用药效型微生物肥料，并配合冲施药效型微生物肥料3次。后期番茄长势不衰，果大口感好。虽然根部还有根结，但根结较小，没有造成危害，增产25％以上。这些结果表明，药效型微生物肥料对番茄安全无药害，能促进植株生长发育，尤其是发新根和防病，能替代化学药剂防治根结线虫病害。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种药效型微生物肥料，其活性成分按重量份计由如下成分配比而成：

其中，所述复合菌液包括营养菌株和生防促生菌株，其有效菌总含量为12亿-39亿cfu/ml；所述营养菌为0.5亿-1.0亿cfu/ml的胶冻样芽孢杆菌Bacillusmucilaginosus、0.5亿-1.0亿cfu/ml的阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae、0.5亿-1.0亿cfu/ml的木醋杆菌Acetobacter xylinum、0.5亿-1.0亿cfu/ml的酵母菌Saccharomycescerevisiae；所述生防促生菌为5.0亿-20.0亿cfu/ml的地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis、5.0亿-15.0亿cfu/ml的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis；

所述中草药发酵萃取液是由印楝、苦豆子、除虫菊和/或油茶饼中一种或几种混合并经用复合菌液发酵得到的萃取液；

所述营养成分是白砂糖、尿素、磷酸二氢钾及用氨基酸和/或腐植酸螯合的铁、硼、锌、铜、锰、钼螯合物混合的混合物；

所述植物源乳化渗透剂是由油茶籽和/或无患子混合后的浸提物。

2.如权利要求1所述的微生物肥料，其特征在于，其活性成分按重量份计由如下成分配比而成：

其中，该复合菌液有效菌总含量为21亿-39亿cfu/ml，其中营养菌株包括0.8亿cfu/ml的胶冻样芽孢杆菌、0.8亿cfu/ml的阴沟肠杆菌、0.7亿cfu/ml的木醋杆菌、0.7亿cfu/ml的酵母菌；生防促生菌株包括10.0亿cfu/ml的地衣芽孢杆菌、8.0亿cfu/ml的枯草芽孢杆菌。

3.如权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，其剂型是液体或固体。

4.制备如权利要求1-3任意一项所述的微生物肥料的方法，其包括如下步骤：按照相应重量份配比，将复合菌液、中草药发酵萃取液、营养成分和植物源乳化渗透剂混合搅拌均匀制备得到液体剂，即为液体微生物肥料；所述液体剂用有机物料吸附，经常规方法干燥得到固体微生物肥料。

5.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述复合菌液制备步骤如下：

(1)好氧菌液制备：

斜面培养：将胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在26-30℃条件下培养36-48小时；

摇床培养：将上述步骤培养的胶冻样芽孢杆菌、阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌种在无菌条件下分别接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为28-32℃条件下，140-160r/min摇床培养32-40小时；

发酵罐培养：将摇床培养后的菌种在无菌条件下分别接种于发酵罐培养基，在pH6.5-7.0、罐压0.5kgf/cm²、温度为28-32℃、通风量1∶0.8-1.1条件下，培养52-60小时后，菌数大于1.0×10⁹/mL，80％菌体转成芽孢时下罐，得到发酵液；按等重量混合，制备成混合发酵液；

(2)兼厌氧菌液制备：

斜面培养：将木醋杆菌、酵母菌的原始菌种在无菌条件下分别接种于斜面培养基上，在26-30℃条件下培养36-48小时；

兼厌氧发酵培养：将上述步骤培养的木醋杆菌、酵母菌在无菌条件下混合接种于培养基，在pH6.5-7.0、温度为28-32℃条件下，兼厌氧培养120-168小时，制备成混合发酵液；

(3)将上述好氧和兼厌氧制得的发酵液按重量份计1∶0.5比例混合，制备成复合菌液。

6.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述中草药发酵萃取液制备步骤如下：按1-3∶1∶1∶1-5比例取印楝、苦豆子、除虫菊和油茶饼混合并粉碎，用复合菌液进行兼厌氧堆置发酵数天后，用甲醇萃取并浓缩，制备成中草药发酵萃取液。

7.如权利要求4所述方法，其特征在于，所述植物源乳化渗透剂制备步骤如下：将1∶1的油茶籽和无患子混合并粉碎后，用甲醇萃取并浓缩，制备成植物源乳化渗透剂。

8.如权利要求6或7所述方法，其特征在于，所述甲醇为浓度75％的甲醇。

9.如权利要求1-3任意一项所述微生物肥料和权利要求4-8任意一项所述方法在农作物栽培中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的农作物为水稻、玉米、棉花、马铃薯、油菜、辣椒、西红柿、茄子、黄瓜、苹果、葡萄或枣树。