CN104837560B - 用于制备生物样品的盒和装置 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于制备生物样品，特别是用于对组织或细胞样品（1）进行染色的盒（100）和相关联的装置（150）。盒（100）包括可由承载样品（1）的基板（140）封闭的反应室（116），其中反应室（116）进一步连接到流体入口系统（113、115）和流体出口系统（123、125）。当基板（140）封闭反应室时，流体入口系统、反应室和流体出口系统构成关于液体交换对环境封闭的流体系统。可例如通过可变形膜（114、124）的致动来促使通过反应室（116）的压力驱动流动。

Description

用于制备生物样品的盒和装置
技术领域
本发明涉及用于制备生物样品，特别是用于对组织样品或细胞集合进行染色的盒。而且，其涉及用于处理这样的盒的装置。
背景技术
US 2012/230886 A1公开了具有底侧上的通道的覆盖设备，其可放置在承载生物样品的显微镜玻片上。通道的端部处的开口允许在一端处试剂进入所述通道内的入口以及在另一端处它们的出口。具有这样的覆盖设备的显微镜玻片可放置在具有由覆盖设备的相应开口接收的入口端口和出口端口的对准夹具内。
发明内容
将有利的是，具有允许利用试剂（例如利用能够在涉及多个试剂的复杂方案之后以均匀方式制备完整样品玻片的染色剂）对生物样品的更鲁棒、简单和/或用户友好的制备的工具。
这些顾虑通过根据权利要求1的盒、根据权利要求11的装置以及根据权利要求14和15的用途来解决。在从属权利要求中公开优选实施例。
根据第一方面，上述顾虑通过用于制备生物样品，例如用于对组织或细胞的样品进行染色以用于显微镜检查的盒来解决。该盒包括具有以下部件的盒体：
a) 具有能够由承载样品（在面向反应室的一侧上）的基板封闭的开口的反应室；
b) 用于提供至少一个试剂流体到上述反应室的流体入口系统；
c) 用于从反应室接收流体的流体出口系统。
上述部件应当被设计为使得流体入口系统、具有封闭其开口的基板的反应室以及流体出口系统（在水动力学上）互连并且关于与环境的液体交换是基本上封闭的。换言之，流体入口系统、反应室和流体出口系统共同构成在基板封闭反应室时对环境封闭（关于液体）的流体系统。
术语“盒”应当指代具有其中可容纳介质以用于储存、运输和/或处理的内部腔的元件或单元。其将通常是对于单个样品仅使用一次的可交换和一次性的部件。优选地，盒是整体式部件和/或（基本上）由单块材料构成。其可例如（基本上）由相互永久附连的一个或多个注塑成型件构成。在概念上，盒可包括基板或不包括基板。在后一情况下，“盒体”一般与“盒”相同。
术语“反应室”应当指代盒中的腔，其中毗连该腔的盒的壁应当在概念上属于反应室。
“流体系统”应当一般指代介质（特别是流体）可通过其运输和路由的任何腔系统（如通道、室、阀等）。
由流体出口系统接收的流体可特别包括之前已经通过流体入口系统引入反应室内的试剂流体。流体出口系统因此可以是或包括废物储存器，其中可储存使用后的试剂和/或其它废物化学制品。
当基板封闭反应室时，即关于流体（液体或气体）的交换封闭时，流体入口系统、反应室和流体出口系统可以可选地对环境完全封闭。优选地，然而，气体介质的一些交换将是可允许的，例如经由到环境的通气连接，其简化设计并且避免反压力累积。
所描述的盒具有以下优点：允许在封闭系统中，即在除盒和样品所提供于的基板之外不包括任何东西的系统中，制备生物样品。该系统关于环境的封闭防止样品被环境污染以及环境被样品污染的任何危险。这显著减轻了对样本的处置。附加优点可以是试剂消耗的减少，由于微通道中增大的对流所致的更快反应，以及通过包括关键试剂的盒的工业制造的更好再现性。
通常，基板可以是适于承载将制备的生物样品的任何（固态）材料主体。最优选地，基板将具有板状几何形状，例如如果其是显微镜玻片的话。为了允许使用这样的板状基板，盒的反应室的开口优选地被设计为将由（基板的）平坦表面封闭。
存在基板可如何附连到盒体（或基板如何附连到盒体）的几个可能性，其中附连必须足够强以抑制流体流过反应室期间的力的发生。
在一个实施例中，基板可通过粘合和/或胶合，即通过材料结合附连到盒体。
在另一实施例中，在基板和盒体之间提供中间真空室，其中可建立欠压，即环境压力（通常是1bar）以下的压力。环境压力因此将向盒体挤压基板。欠压可例如经由将真空室连接到仪器的管道来施加。真空室通常与反应室不同并且未在水动力学上连接到反应室。
在又一实施例中，基板可通过夹持，例如经由机械弹簧，和/或通过例如由（电）磁体生成的电磁力附连到盒体。
当基板封闭反应室的开口时，反应室的腔的内部几何结构完全确定。在优选实施例中，该几何结构使得基板上方的该反应室腔的高度小于大约200微米，优选地小于100微米，或最优选地小于大约50微米。在基板具有封闭反应室的开口的平坦表面的情况下，得到的腔将具有立方体的几何结构，其中高度根据定义是基板和立方体的相对侧之间的距离。对于反应室腔的更一般几何结构（例如当进入和离开区段将被设计为使得实现定义明确的流型时），高度可被定义为完全适配到所述腔内的最大球体的直径。
小于大约200微米或甚至100微米的反应室的相当小的高度具有以下优点：流过该室的试剂流体将通过流动期间的对流与基板上的样品亲密接触，因此增大了期望的反应（如染色）的速度，同时仅要求小量试剂。
可以可选地将至少一个间隔物元件设置在基板和盒体之间，以便确保这些元件之间的期望距离。间隔物元件可例如包括嵌入软连接材料（例如粘合剂或胶水）内的定义明确的直径的珠。
反应室（在基板上）所覆盖的面积可以高达大约1cm2，优选地高达5cm2，因此允许容纳该尺寸的样品。
盒可优选地包括允许流体路由和/或致动的至少一个控制元件（例如阀）。附加地或替代地，其可包括用于促使流体通过反应室从流体入口系统到流体出口系统的压力驱动流动的至少一个泵送元件。在该上下文中，术语“压力驱动”应当指示在盒中存在至少一个元件或位置（例如泵送元件），在该元件或位置处能够可控地生成定义明确的压力，其中该压力促使流体流动。相应地，控制压力的能力隐含了控制流体流动的能力，特别是在反应室内。该可控性是相对于其它流动机制（例如重力驱动流动）的优点。而且，压力驱动流动具有促使作用于样品上的高剪力(shear)的优点，因此允许流动试剂和样品之间的紧密接触。
上述泵送元件可例如被实现为可移动和/或变形使得其促使流体流动的元件，其中所述泵送元件优选地位于流体入口系统、反应室和/或流体出口系统附近。这样的泵送元件可例如是或包括能够促使流体流动的可变形或可移动膜。该膜可构成流体入口和/或流体出口系统中的壁，其中作用于所述膜上的力引起挠曲，并且因此引起相邻流体系统中的流体的流动。可移动和/或可变形泵送元件提供了用于控制盒中的流体流动而不需要直接接触所述流体的简单工具。类似柔性膜还可作为阀并入以在不同方向路由流动和/或封锁流体系统的某些部分。优选地，可存在所述种类的两个或更多泵送元件（或阀）。而且，泵送元件和/或包括泵送元件的系统可作为促使振荡压力的蠕动泵操作，该振荡压力通过其它部件，特别是（适当受控的）阀转换为单向流体流动。
盒可以可选地包括至少一个试剂储存器，其中提供干燥或润湿形式的试剂以用于在具有样品的基板被附连时的后续使用。该盒可因此被制造为即可使用的，从而使用户不需要处置或接触（潜在地敏感和/或有毒的）试剂。试剂储存器优选地是关于其所设置于的腔（例如反应室）密封的或可密封的。
在优选实施例中，上述试剂储存器包括用于制备生物样品的至少一个染色剂和/或固定剂。该盒然后可用于制备生物样品以用于显微镜检查。
基板可以在概念上被认为属于盒或是与盒分离的元件。一般地，不具有基板的盒将是可与基板组合的其自身的部件，该基板单独地制作并且也可用于其它目的（例如如果基板是显微镜玻片的话）。在任何情况下，基板可以是透明的以便允许在反应室中或之后对样品的视觉检查。优选地，这样的透明基板具有小于大约0.2mm的小厚度，因此便于利用显微镜以高分辨率的直接视觉检查。
在另一实施例中，基板可以承载至少一个标记物，例如打印或蚀刻到其表面上的符号（如十字），其中所述标记物可通过任何外部检测器来定位。这允许提供在基板上的样品关于盒或另一装置的精确定位和/或对准。可在基板上存在帮助控制封闭后的反应室的高度的特征。
根据另外的实施例，盒包括可通过外部检测器识别的至少一个标识符。在该上下文中，术语“标识符”应当指代表示包含关于基板和/或基板所承载的样品的身份和/或属性的信息的标志或代码的元件。标识符可例如是包含关于盒和试剂、样品的类型（组织类型、患者名字等）的数据的RFID标签或2D条形码。
在另一可选实施例中，盒可包括用于指示流体入口系统、反应室和/或流体出口系统中的反应和/或试剂的状态的至少一个指示符。该指示符可例如是取决于参数（如温度或pH值）改变其颜色的传感器或染料。同样地，使用盒的仪器也可包含通过监测例如光在试剂储存器或反应室中的透射或反射来监测盒内的反应的进度的工具。
根据本发明的另一方面，关于现有技术的顾虑通过包括以下部件的处理装置来解决：
a) 上述种类的盒（即具有可由基板封闭的反应室、流体入口系统和流体出口系统的盒，其中具有基板的所述室和所述系统关于与环境的液体交换是封闭的）能够耦合到的接口；
b) 用于在盒耦合到上述接口时控制盒中的样品的处理的至少一个致动器。
根据本发明的该实施例的盒提供了围绕整个样品以及用于制备样品的必要试剂的封闭系统。在样品的制备要求比起仅将它暴露给适当试剂更多的操纵的情况下，可在上述处理装置的（多个）致动器的帮助下执行这些步骤。
盒和处理装置可被设计为使得盒的流体系统（具有反应室、流体入口系统和流体出口系统）能可逆地连接到装置中的流体系统。然后，可由该装置经由这些可逆互连向盒提供某些试剂。
盒和装置是相同创新概念（即通过承载样品的基板的附连封闭的系统中的样品的制备）的不同实现。因此提供用于这些实现之一的解释和定义对于另一实现也是有效的。
处理装置的（多个）致动器可例如包括用于在盒附连到接口时控制盒的反应室中的温度的至少一个热控制器。温度的控制通常是有用的或甚至是必要的，以便使得能够实现（生物）化学反应和/或保护样品以防损坏或使其稳定。可经由与预设温度的元件接触和/或经由通过辐射的热传递来实现热控制。
附加地或替代地，（多个）致动器可包括用于控制附连到装置的接口的盒中的流体流动的至少一个压力控制器。压力控制器可例如包括作用于如上所述的盒的可移动和/或可变形泵送元件的元件。最优选地，存在一个或多个这样的致动器，其协作性控制流体入口系统和流体出口系统中的压力，因此允许中间反应室中的定义明确的流动状况。
根据另一实施例，处理装置可包括一个或多个光学调查工具，例如光学窗口，以用于表征盒中的样品和/或允许耦合到装置的接口的盒的反应室的检查。因此可实时监测盒中所发生的反应。此外，这样的窗口允许在染色反应之后对样品的细查而会从盒移除样品。
本发明进一步涉及上述种类的盒或装置用于组织病理学、细胞病理学、免疫组织化学和原位杂交中的样品制备和/或特定染色的用途，特别是用于基于癌细胞中的分子改变的识别对患者分层的肿瘤学应用的用途。制备可特别包括样品的脱蜡、再水化、抗原修复、变性、染色和/或固定。样品可包括组织截片（鲜冻、福尔马林固定、福尔马林固定-嵌入石蜡）和/或细胞凝聚（自旋减慢、压印或以其它方式固定化和固定）。
本发明进一步涉及上述种类的盒或装置用于组织病理学、细胞病理学、免疫组织化学和原位杂交中的生物样品的组合式样品制备和显微镜分析的用途。
附图说明
根据下文描述的实施例，本发明的这些和其它方面将变得清楚，并且将参考下文描述的实施例来阐明本发明的这些和其它方面。
在图中：
图1示出根据本发明的实施例的附连到装置的盒；
图2示出将基板固定到盒的实施例。
具体实施方式
患者材料（例如组织和细胞）的病理学诊断调查是很多治疗决策的基础，特别是在肿瘤学中。将来自活检(biopsy)的标准、薄切片呈现在显微镜玻片上并且根据某些方案进行染色以使组织的形态可视化，例如通过苏木精-伊红（H&E）。而且，基于抗体到存在于组织上的蛋白质的特定结合，所谓的免疫组织化学（IHC），和核苷酸的设计序列到染色体或基因的部分，或信使-RNA（原位杂交，ISH）的杂交，疾病特定的生物标记物的原位染色可用于靶向药物的伴随诊断。评估一般与明视场或荧光显微镜或数字扫描仪一起进行。在调查之后，玻片需要作为备份储存长时间段，以防需要重新评估诊断。
可通过从嵌入石蜡的活检切下大约2-8微米的薄截片来获得组织样品。将所谓的削片(coupes)在水膜上放置于显微镜玻璃玻片上以从超薄切片应力松弛并且然后使其变干。存在可用于不同应用的若干染色方案。可以在工作台上通过在包含试剂的不同溶液中浸泡具有削片的玻片来手动执行染色方案（典型的方案在下文列出）。染色方案一般花费至少2.5个小时；在一些情况下要求过夜潜伏(incubation)。可通过限制控制和流动速率的（半）开放系统中的界面力和引力来驱动试剂的流动。
根据现有技术的染色方案常常遭受以下缺点：
- 由于成批操作所致的器具的低效使用。
- 由于低使用率下的储存试剂的有限贮藏寿命所致的试剂的低效使用。
- 由于对试剂和方案的开放访问所致的失败的风险。
- 由于开放系统所致的液体界面和污染的高维护努力。
- 对流体流动的有限控制，从而导致长化验时间和染色的不均匀性。
- 标准化/外部认可的缺乏。
为了解决这些问题，提出了执行组织学和细胞学染色方案的新方式。根据该途径的实施例，将样品放置在作为盒的部分的基板上，在引入样品之后密闭地封闭盒。封闭的“反应室”被创建有大约50微米量级的窄间隙。盒可以可选地放置在优选地经由气动接口控制反应室的温度和试剂的流动的装置或仪器上。可通过封闭通道中的压力驱动流动来将试剂泵送到反应室中和样品之上。这允许对流动状况的精确控制，限制试剂的量，并且改进清洗和试剂更换步骤。这引起方案的快得多的执行和更可再现的结果。可将试剂放置在盒里。该盒可以是一次性的。由于样品室中所存在的光学窗口，可以可选地在不从盒移除的情况下检查样品。利用落射式荧光，可通过基板（如果透明的话）检查样品；对于明视场，窗口还必须存在于基板的相对侧上以允许透射测量。
图1示意性示出根据上述原理的实施例的附连到处理装置150的接口（平面顶表面）的盒100的截面侧视图。
盒100优选地包括可例如通过注塑成型制成的整体式盒体110（例如包括相互永久附连的两个或更多部分）。盒在其底侧（在图中）上具有腔，其在下文被称为“反应室”116并且具有小于大约100微米的高度h的基本上平坦的、立方体形几何结构。反应室在x、y平面中的面积可以高达几cm2。反应室116的侧壁由终止于共同平面中的突起或边缘117形成，因此定义在所述平面中围绕反应室的底开口的封闭曲线。反应室116的该底开口在所示示例中通过基板140封闭和密封。盒体110和基板140之间的附连可例如通过边缘117顶部上的粘合剂或胶水来实现（关于图2讨论替代可能性）。
上述基板140可例如是显微镜玻片，通过显微镜玻片可提供将处理或制备的生物样品1。样品1位于基板140的顶侧上并且因此面向反应室116的内部。基板140可以在概念上被认为属于盒100或作为其自身的单独元件。在另一优选实施例中，基板由非晶聚合物制成，可选地提供有涂层以用于组织粘合的期望表面属性和/或阻挡属性和/或抗反射属性。在优选实施例中，基板是可经由铰链永久连接到盒的盒的一体部分。
盒100还包括在水动力学上耦合到反应室的流体入口系统。在所示示例中，流体入口系统包括试剂储存器113，其中储存处理样品1所需的试剂（例如染色剂）。试剂储存器113通过通道115连接到反应室116的第一端。试剂储存器113的一个侧壁由用作试剂储存器113的可移动壁的可变形膜112形成，从而允许容积改变（由于试剂的流出）同时保持流体系统关于环境是封闭的。膜112可利用弹性张力悬浮，或其可提供有充足面积以在试剂储存器113的填充和空余状态下是松弛的。
另一膜114设置在通道115的一个壁处。该膜114的外侧经由导管111连接到盒100的底侧。
盒100还包括连接到反应室的第二端（与第一端相对）的流体出口系统。流体出口系统包括废物室123和将所述室连接到反应室116的第二端的通道125。废物室123的一个壁可选地由可变形膜122构成。类似于试剂室113中的膜112，该可变形膜122允许改变废物室123的填充水平同时保持流体系统与环境隔离。此外，另一柔性膜124可设置在出口通道125中，所述膜的外侧通过导管121连接到盒的底侧。
当具有样品1的基板140附连到盒的反应室116的开口时，开口的边缘117以密封方式紧密接触基板（例如通过胶合附连），因此形成围绕样品1的封闭流体系统。该流体系统包括流体入口系统、反应室和流体出口系统，并且允许试剂流体通过反应室116从试剂储存器113到废物室123内的可控、压力驱动流动。
为了允许对上述流体流动的控制，具有基板140的盒100在所述装置的接口处耦合到处理装置或仪器150。在所示实施例中，所述接口是基本上平坦的表面，在该表面上可放置基板140和盒100。
当盒100处于仪器上时，基板位于装置150的热控制器152上方，通过热控制器152可控制反应室116中的温度。而且，分别通向流体入口系统和流体出口系统的膜114和124的导管111、121位于气动控制器151和153上方。当装置150的右手侧上的气动控制器153生成过压时，该压力通过导管111传递到膜114，膜114向内鼓起到入口通道115内，因此创建向着反应室116的试剂流动。优选地，膜114是蠕动泵的部分，蠕动泵包括附加元件，例如阀（未示出），以便将振荡压力转换为指向反应室的流体流动。膜因此是取决于致动器的一侧与另一侧之间的压力差而在一个或另一个方向上挠曲的致动器。通过施加欠压（一般是0.1-0.2bar），膜在低压侧的方向上挠曲，通过施加过压（一般是1.5到2.0bar），膜在相反方向上挠曲。
类似地，装置150的左手侧上的气动控制器151可经由导管121作用于膜124上，这促使（废物）流体到废物室123内的（蠕动）流动。
膜114和124因此用作泵送元件，利用其可在反应室116中生成流体的良好控制的压力驱动流动。
应当注意，试剂储存器113和废物室123中的膜112和122分别固定在不同位置处并且因此最初（没有外部压力）处于不同状态中：试剂储存器113的膜112远离通道115固定，使得试剂流体在膜的初始状态下可完全填充试剂储存器113。与此相反，废物室123中的膜122固定在通道124的入口处，使得废物室在膜的初始状态下基本上是空的。
而且，流体入口系统可以可选地包括可独立地清空到反应室中的几个试剂储存器。
图2以示意性侧视图图示了用于将基板240（例如显微镜玻片）附连到盒体210的替代途径。盒200中的流体系统的细节可以与图1中类似并且因此为了清楚而在图中省略。
在所示实施例中，基板240到盒体210的附连通过提供基板240和盒体210之间的真空室219来实现。通过（例如粘性的或胶合的）同心脊217将该真空室219限定在样品1周围。可以可选地通过引入精确限定的直径的间隔物（例如玻璃珠）（如果使用胶水，则这些可以是胶水的部分）来控制基板240和盒体210之间的间隙高度h。
而且，在盒体210中提供吸入通道218，其将真空室219连接到盒的外部和/或压力控制器（未示出）。因此，可以向真空室219施加例如大约0.1-0.2bar的欠压，这生成基板240到盒体210的紧密附连。
基板和盒体之间的附连的强度必须高于反应室中的压力驱动流动所施加的力。在使用真空的情况下，这意味着真空部分中的表面积和压力的乘积必须等于反应室中的乘积，假定基板和盒是坚硬的话。对于胶水，胶水的强度乘以胶水脊的接触表面必须等于反应室中的液体的力。
基板到盒体的夹紧是又一选项。这可通过弹簧加载或通过可为在其中处理盒的仪器（图1中的150）的部分的（电）磁体来完成。
所述实施例的本质特征是以下事实：样品被引入具有仅一个微流体入口和出口端口（两者都垂直于保持样品（例如组织或细胞学材料）的基板（在其平面外））的封闭室中。通过允许比半开放系统中更高的剪切率的压力驱动流动来将试剂泵送到样品之上。增大的剪切率允许试剂的更快供应和穿透以及更高效的清洗，这引起减小的时间下的改进的染色质量。
存在可以为该途径的部分的大量（可选）特征，例如：
- 可将样品呈现在单独的平坦基板上，如显微镜玻片或替代地塑料基板上。样品的尺寸一般是大约1cm2到2cm2的量级。
- 基板厚度可以等于常规玻片的厚度（1mm）以与现有解决方案兼容，或优选地薄得多（例如小于大约0.2mm）以使得能够以高分辨率通过基板进行检查并且淘汰盖玻片。
- 基板可包含允许样品的精确和可再现放置以便于染色之后的光学检查的特征（例如“标记物”）。在图1中，示意性指示一个这样的标记物141。
- 如所示出的，基板可以是单独部分，其在引入盒中之后例如通过胶合或夹紧附连。替代地，基板可以是盒的一体部分。可以存在盒开口或盖子，其允许样品的引入并且在样品引入之后可封闭。可在处理之后从盒的其余部分移除具有样品的基板以用于高效存储。
- 可在单独的密封舱中以润湿和/或干燥形式将试剂储存在盒上，特别是化验特定的、昂贵的染色剂以及可选地环境有害的物质。可将单独的试剂容器附连到盒以允许后勤方面和储存条件中的更多灵活性。
- 可在盒里收集试剂的废物，从而在装置上不发生润湿污染并且不必要清洁。废物容器可以被设计为可拆卸实体以便于抛弃。
- 盒中可存在一个或多个附加窗口，例如与基板相对，以使得能够在透射模式中对样品进行光学检查，或通过额外窗口而不是基板进行检查。
- 可在最后步骤中引入固定剂来保存样品以实现检查期间改进的稳定性和对比度。
- 可以经由作用于盒内的膜的气动致动器来完成流体驱动。以该方式，仪器不直接接触液体是可能的。
- 盒可包含一个或多个识别工具，如辨识类型和/或试剂的存在的条形码或RFID芯片。此外，在将样品引入单独的基板上的情况下，基板上可以存在ID。
- 盒可包含用于试剂的状态和反应的状态的指示符。
- 盒和装置可被设计为还允许装置上具有试剂储存（例如用于简单缓冲），其中所述试剂可经由可封闭互连（未示出）转移到盒内。
示例
在下文中，将更详细地描述示例性染色流程。在该流程中，使用Kreatech方案（Kreatech Diagnostics，阿姆斯特丹）在原型盒上执行FISH（荧光原位杂交），其中具有50微米间隙反应室和3.5小时的潜伏时间（以使一天两个方案是可能的）。为了核查这是否将引起成功的FISH，还执行使用相同潜伏时间的手动方案。
来自SKBR3细胞系的细胞被离心涂片在玻片上并且在-80℃下储存。玻片上的细胞集合如下处置：
- 在4%甲醛中固定10分钟；
- 在PBS中清洗；
- 在demi H2O中清洗；
- 在显微镜玻片上完全干燥；
- 向盒施加带；
- 向该带施加显微镜玻片。
以下表1总结了第一天在所实现的盒设置上执行的步骤（温度由仪器设定）：
表1
步骤 温度 (°C) 时间 (s) 泵送/潜伏 试剂
1 RT 30 泵送 (MES) 缓冲剂
2 94 480* 潜伏 (MES) 缓冲剂
3 38 30** 泵送 (MES) 缓冲剂
4 38 直到 t=~38°C 潜伏 (MES) 缓冲剂
5 38 30 泵送 2 x SSC / 0.5% igepal
6 38 900 潜伏 2 x SSC / 0.5% igepal
7 RT 30 泵送 70% 乙醇
8 RT 30 泵送 85% 乙醇
9 RT 30 泵送 100% 乙醇
10 RT 30 潜伏 100% 乙醇
11 RT 空气干燥 空气干燥 空气
13 RT 3.5 (2个泵送冲程) 泵送 探针混合
14 83 450 潜伏 探针混合
15 38 86400 (24h) 潜伏 探针混合
16 38 30 泵送 0.4 x SSC / 0.3% igepal
17 75 240*** 潜伏 0.4 x SSC / 0.3% igepal
18 RT 15 泵送 2 x SSC / 0.1% igepal
19 RT 30 泵送 70% 乙醇
20 RT 30 泵送 85% 乙醇
21 RT 30 泵送 100% 乙醇
22 RT 30 潜伏 100% 乙醇
23 RT 直到干燥 空气干燥 空气
（* - 其花费大约180s以到达94℃）
（** - 泵送以使反应室更快冷却，移除气泡）
（*** - 其花费大约2分钟以达到该温度）
（RT = 室温）。
在此之后，执行以下步骤：
- 从盒移除显微镜玻片；
- 从显微镜玻片移除带；
- 确保样品和玻璃完全干燥；
- 施加包含封藏液(mounting fluid)的小滴（10-20μl）DAPI；
- 施加盖玻片；
- 10分钟之后，对样品进行成像。
实验证明得到的荧光图像示出FISH信号。
总之，描述了新设备的实施例，其允许来自患者的生物样品，特别是组织截片的自动染色。可以以鲜冻或福尔马林固定、嵌入石蜡的活检的薄片截片形式或者作为旋转减慢的细胞悬浮引入样品。在引入之后，封闭盒使得围绕样品限定完全封闭的舱，其具有良好控制的窄间隙。舱的一侧通过薄透明基板确定以允许在封闭状态中对样品的光学检查。经由舱中的进入和离开端口提供对流体的访问。可通过将试剂和清洗溶液主动泵送到舱中的样品之上来执行不同处置方案。在优选实施例中，将试剂储存在盒里并且气动地致动流体。气动致动器优选地位于舱旁边以允许平坦且低成本的设计。盒可以包括注塑成型和/或真空形成的塑料件和柔性膜的组合并且可选地具有金属元件和玻璃基板元件。可调节特定光学属性以实现例如对敏感化学制品的保护，可存在有机和/或无机阻挡层以实现盒和试剂的必要贮藏寿命，可引入热吸收和/或传导元件。
本发明可应用于组织病理学和细胞病理学中以用于执行免疫组织化学、邻位结扎化验、挂锁探针化验和对DNA和/或RNA的原位杂交，或用于组织截片和/或细胞凝聚（旋转减慢）的明视场和/或基于荧光的检查的其它生物化验；特别是用于基于癌细胞中的分子改变的识别对患者分层的肿瘤学应用和伴随诊断。
尽管已经在各图和前述描述中详细图示和描述了本发明，但是这样的图示和描述应当被认为是说明性或示例性而非限制性的；本发明不限于公开的实施例。本领域技术人员根据对各图、公开文本和所附权利要求的研究，在实践要求保护的发明时能够理解和实现公开实施例的其它变型。在权利要求中，词语“包括”不排除其它元件或步骤，并且不定冠词“一”或“一个”不排除多个。单个处理器或其它单元可履行在权利要求中记载的几个项的功能。在相互不同的从属权利要求中记载某些措施的简单事实不表明这些措施的组合不能被用于改进。计算机程序可存储/分布在适当介质上，例如与其它硬件一起供应或作为其它硬件的部分的光学存储介质或固态介质上，但也可以其它形式分布，例如经由互联网或其它有线或无线电信系统。权利要求中的任何参考符号不应当被解释为限制范围。

Claims (12)

1.一种用于处理生物样品（1）的盒（100、200），包括具有以下的盒体（110、210）：
a) 具有能够由承载样品（1）的基板（140、240）封闭的开口的反应室（116）；
b) 用于向所述反应室（116）提供至少一个试剂流体的流体入口系统（113、115）；
c) 用于从所述反应室（116）接收流体的流体出口系统（123、125）；
其中所述流体入口系统、具有封闭其开口的基板（140、240）的反应室和流体出口系统关于与环境的液体交换是封闭的。
2.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，所述反应室（116）的开口被设计为由所述基板（140、240）的平坦表面封闭。
3.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，所述基板（140、240）能够通过粘合、胶合、其中能够建立欠压的中间真空室（219）、夹紧和/或电磁力附连到所述盒体（110、210）。
4.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，所述反应室（116）在封闭其开口的基板（140、240）上方的高度（h）小于200微米。
5.根据权利要求4的盒（100、200），
特征在于，所述高度（h）小于50微米。
6.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，在所述基板（140、240）和盒体（110、210）之间设置至少一个间隔物元件。
7.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，其包括用于流体路由的控制元件和/或用于促使通过所述反应室（116）从所述流体入口系统（113、115）到所述流体出口系统（123、125）的压力驱动流体流动的泵送元件（114、124）。
8.根据权利要求7的盒（100、200），
特征在于，所述泵送元件（114、124）能够移动和/或变形以促使流体流动。
9.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，其包括填充有试剂的至少一个试剂储存器（113）。
10.根据权利要求9的盒（100、200），
特征在于，所述储存器被密封。
11.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，其包括能够通过外部检测器定位的至少一个标记物和/或能够通过外部检测器识别的至少一个标识符。
12.根据权利要求1的盒（100、200），
特征在于，其包括用于试剂和/或反应的状态的至少一个指示符。
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