CN105916583B - 具有标记的透明显微镜载玻片 - Google Patents

Abstract

本发明涉及透明的目标物载体，其具有在内部压印的标记，涉及诊断设备、优选显微镜，和与之组合的插入用于诊断分析的透明的目标物载体，和涉及方法，包括下述步骤：提供透明的目标物载体，压印标记，其位于载体内部当中，向所述透明的目标物载体供给生物学样品或化学样品，和任选地分割透明的目标物载体和由此产生多个较小的透明的目标物载体，其封闭来自生物学样品或化学样品的物质。

Description

具有标记的透明显微镜载玻片

本发明涉及包含内部压印的标记的透明显微镜载玻片，涉及诊断设备、优选显微镜，和与之组合的引入用于诊断分析的透明显微镜载玻片，和涉及包括下述步骤的方法：提供透明显微镜载玻片；压印标记，所述标记位于载玻片内：向透明显微镜载玻片供给生物学样品或化学样品；和任选地分割透明显微镜载玻片以产生多个更小的透明显微镜载玻片，其包含来自所述生物学样品或化学样品的物质。

实验室诊断检查是现代医学不可或缺的基础。当下存在多种常规可进行的测试，通过这些测试可能在患者不在的情况下从人类或动物来源的样品物质获得涉及目前症状、预后或成功治疗的关键信息。

对于患者的责任提出了对所述检查结果的可靠性和有意义性的最高要求。为此有必要保证严格的身份安全防护，其中在人体或动物体获得样品物质直至作出诊断的情况下可能排除在全部环境下的损失或甚至将数据错误匹配给不同于样品提供者的患者。

同时，基于经济考虑有必要优化工作流程和物质消耗。尤其是存在微型化趋势：诊断和分析反应不再以毫升等级、而是以微升或甚至纳升等级进行。这节省试剂、空间和允许曾经获得的并且可以解冻和再冷冻多次的样品提供用于许多诊断检查的充足原料。还重要的是，在单独诊断试验出于技术原因或因为实施成员的错误而失败的事件中，患者不用经历重复收集样品。

为了身份安全防护，在容器中或在显微镜载玻片上的样品通常采用分配给患者的标记来供给。如果样品位于含量至少数毫升的可商购容器、例如血液收集管中，所述标记与大多数重要的患者数据一起能够打印在粘合剂膜上并粘在所述容器上。

在处理微升等级的样品时，身份安全防护则遭遇大得多的困难，在使用特别制备或甚至定制制备的数毫米尺度的医学装置、更特别的用于样品比如生物芯片的微型化的显微镜载玻片的情况下尤其如此。现有技术中教导针对生物芯片(EP 1 277 055)的大面积粘合标签、可商购条形码、磁条等则出于几何原因而不再可能。

描述于现有技术的常规标记比如雕刻、印记、标签等，例如EP 1 245 395的描述，具有进一步的缺点。首先，它们使用了生物芯片表面上显著量的空间和从而减少了可用生物学样品或化学样品涂覆的面积。

另外，所述标记的可靠性低，原因是它们能够通过下述而除去或变得不可用：表面的机械损伤，显微镜载玻片部分的脱除，在印记标记情况下的洗脱，在标签上标记的情况下从显微镜载玻片的标记的脱除。该问题对于待通过实验室诊断手段检查的样品是特别显著的，原因是已建立的分析方法或诊断方法频繁地预期，在至少一个步骤中，用攻击性化学品比如高反应性酸、很强的溶剂例如二甲苯或者用能够覆盖或弄污标记的浓染料处理样品。

还重要的是，所述常规标记使工作流程复杂化，原因在于在处理例如微观检查期间马上证实身份不是立即可能的。实际上，显微镜载玻片必须首先从显微镜除去并且用适于检测标记的又一设备或通过人眼读取。在该情况下，错配又能够发生，例如在显微镜中观察的场偶然与又一场混合或者含有来自不同患者的样品的生物芯片混合。

因此，本发明的目的是提供含有生物学样品或化学样品的显微镜载玻片，该显微镜载玻片设计为，在施用生物学样品或化学样品期间或在随后步骤期间、更特别在处理或分析样品期间，防止标记的损坏、破坏或外观损伤，所述损坏、破坏或外观损伤是例如作为机械损害的结果、作为染污或染料流动的结果或作为与反应性化学品反应的结果。

本发明的又一目的是提供含有生物学样品或化学样品的显微镜载玻片，该显微镜载玻片包含内部压印的标记，其中在分析或诊断检查期间、优选在显微步骤期间能够用显微镜观察生物学样品或化学样品和标记，而不改变显微镜载玻片的优选水平位置或含有样品的观察场和/或不采用适于检测标记的额外设备。

本发明的又一目的是提供含有标记的显微镜载玻片，该显微镜载玻片设计为使得样品所用面积与显微镜载玻片总面积的比例是优化的并且进行检查或反应所需的试剂和底物量是优选最小化的。

本发明的又一目的是提供含有标记的显微镜载玻片，该显微镜载玻片允许在检查期间持续的身份安全防护，以及优选必需工作步骤的优化和还更优选显微镜载玻片尺寸最小化。

这些和其他目的通过本申请的主题和特别是所附独立权利要求的主题来实现，而实施方式通过从属权利要求揭示。

在第一方面，本发明的基本目的通过透明显微镜载玻片实现，其包括内部压印的标记，优选在显微镜载玻片完整表面下。

在第一方面的第一实施方式中，显微镜载玻片含有生物学样品或化学样品。

在第一实施方式的第一特定实施方式中，安排生物学样品或化学样品和标记，使得在通过显微镜检查期间，能够在所述标记或所述生物学样品或化学样品上进行聚焦而不改变显微镜载玻片在显微镜下的位置，

其中所述标记的至少一部分、优选整个标记在生物学样品或化学样品上聚焦的情况下是不可见的。

在第一实施方式的第二特定实施方式中，另外安排生物学样品或化学样品和标记，使得在标记上进行聚焦的情况下所述生物学样品或化学样品所占据区域的至少一部分、优选其至少50，75，90％或整个区域是不可见的，优选整个样品。

在第二实施方式中，其是第一实施方式的实施方式，生物学样品或化学样品是经处理的，其中样品优选是经诊断地处理或分析地处理的生物学样品。

在第三实施方式中，其是第一至第二实施方式的实施方式，目的通过支架实现，所述支架包括在各情况下含有生物学样品或化学样品的至少2个透明显微镜载玻片，其中在透明显微镜载玻片中至少2个上的生物学样品或化学样品优选是根据不同方法诊断地处理或分析地处理的。

在第二方面，目的通过诊断设备、优选显微镜来实现，其包括根据本发明的透明显微镜载玻片或包括根据本发明的支架，所述支架包括两个或更多个透明显微镜载玻片。

在第三方面，目的通过包括下述步骤的方法实现：

a)提供透明显微镜载玻片，

b)压印标记，所述标记位于显微镜载玻片内，

c)向透明显微镜载玻片供给生物学样品或化学样品和

d)任选地：在步骤c)之后分割透明显微镜载玻片，产生至少2个透明显微镜载玻片片段，所述片段包含来自生物学样品或化学样品的物质。

在第三方面的第一实施方式中，向透明显微镜载玻片供给多个标记，所述标记以规则间隔安排在显微镜载玻片表面并且安排的密度使得在步骤d)中产生的所述显微镜载玻片片段各自包含至少1个标记。

在第三方面的第二实施方式(其也是第一实施方式的一种实施方式)中，目的通过还包括下述步骤的方法实现：

e)在至少一个显微镜载玻片上处理样品，所述样品优选是经诊断地处理或分析地处理的生物学样品。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法优选实施方式中，标记和生物学样品或化学样品在一个观察场中安排在彼此顶部。这是优选情况：在从上方观察显微镜载玻片的情况下，所述标记在显微镜载玻片上占据区域的至少一部分在轴上，该轴与优选平面的显微镜载玻片平面垂直并且还与生物学样品或化学样品占据的区域相交；优选，该部分占所述标记在显微镜载玻片上占据区域的至少25，50，75或90％。在优选的实施方式中，标记恰好适于其中的最小可能矩形的面积被认为是标记占据的面积。如果显微镜载玻片包含多个分开的标记元素，其各自优选视为是标记。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，标记通过激光加工压印。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，生物学样品或化学样品选自包含细胞、组织切片和生物化学表征的物质的组。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，透明显微镜载玻片由玻璃、矿物材料或塑料组成，优选玻璃。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，标记是条形码或点阵码，优选点阵码。

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，生物学样品或化学样品和标记安排在一个观察场中，使得聚焦能够在所述标记或所述生物学样品或化学样品上进行而不改变显微镜载玻片在显微镜下的位置

在根据本发明的显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，透明显微镜载玻片由均质材料组成。

在根据本发明的透明显微镜载玻片或方法的优选实施方式中，标记含有显微小的、视觉上可辨认的数字。

在根据本发明方法的优选实施方式中，方法包括步骤d)和在步骤d)之后的各显微镜载玻片片段含有至少1个标记，所述标记使得可能将特定的显微镜载玻片片段分配给在步骤a)中的透明显微镜载玻片，优选经由作为标记一部分的编码进行分配，该编码能够特别地分配给在步骤a)中的透明显微镜载玻片。

在优选实施方式中，根据本发明的方法包括步骤d)和全部显微镜载玻片片段的标记包含作为标记一部分的相同编码。

本发明提供含有生物学样品或化学样品的透明显微镜载玻片。样品能够具有任何性质。例如，样品能够是待检查的组织切片，其施用至透明显微镜载玻片和然后在水溶液中用试剂检查，所述试剂呈荧光标记的对组织切片上的抗原的抗体形式。同样，样品能够是液体样品比如血液样品，其用以包衣形式施用至显微镜载玻片的固定化剂检查。

显微镜载玻片的性质是：其适于例如通过包衣容纳样品、特别是化学样品或生物学样品，和具有适当形状、例如具有凹槽，和/或化学/物理特性，例如能够吸附的表面或能够反应的化学基团。另外，所述载玻片的性质是：其能够分割为片段。在优选的实施方式中，样品以包衣形式或通过共价或非共价键与其化学键合而连接至显微镜载玻片表面。适宜的显微镜载玻片描述于现有技术，例如DE 20 2011 005 278中。

例如，显微镜载玻片能够是完全或主要是玻璃、透明塑料等的载物片，至少在需要透明性的位置是玻璃、透明塑料等的载物片，以便观察样品和标记。在特别优选的实施方式中，显微镜载玻片是由透明玻璃构成的可商购显微镜载玻片，例如描述于DE 20 2011 005278。可能的材料包括玻璃，透明矿物材料和透明塑料。彼此相容的各种透明材料的混合物也是可能的。透明显微镜载玻片的厚度优选是0.05至20mm，更优选0.1至1.5mm，还更优选0.1至0.3mm。透明显微镜载玻片一般地具有的尺度允许在典型实验室空间中以高通量规模分析。优选，显微镜载玻片的面积是1mm²至100cm²，最优选4cm²至20cm²。在优选的实施方式中，显微镜载玻片是硼硅酸盐玻璃构成的可商购盖玻片，具有76mm x 26mm x 0.15mm的尺度。

术语"观察场"如本文所用优选理解为意指显微镜载玻片的部分，其包含生物学样品或化学样品，在所述观察者检查在显微镜下显微镜载玻片时供观察者的观察。

关于其光学特性，透明显微镜载玻片使得可能在显微镜观察生物学样品或化学样品时立即或经由少许调节焦点而观察到标记。在优选的实施方式中，标记能够用肉眼读取。在优选的实施方式中术语"透明"如本文所用，意指显微镜载玻片的材料，尽管封闭着标记，允许标记的视觉或设备辅助检测，设备辅助检测的类型取决于所述标记的性质。优选，透明性允许样品在显微镜载玻片上与标记一起进行光显微技术或荧光显微技术分析。

在优选的实施方式中，显微镜载玻片是整个透明的；在优选的实施方式中，所述载玻片至少在其表面包含生物学样品或化学样品的那些位置是透明的，使得可能检测内部掺入的标记。在还更优选的实施方式中，显微镜载玻片在其包含样品的位置是不透明的，但在标记的位置是透明的。还存在的可能性是，显微镜载玻片在其表面不包含任意样品的位置是不透明的，以便将观察者的注意力集中到样品和标记上和/或增加对比度。在这样的位置，显微镜载玻片能够由不透明材料组成，或通过与有色、优选深色、最优选黑色的膜或包衣层压使其不透明。样品本身是透明的或足够薄而不会在聚焦适当变化时可察觉地损伤标记的可检测性和可辨认性。

透明显微镜载玻片能够包含一种样品或多于一种样品，和在后者情况下，样品能够来自不同物质和/或来自不同来源。在优选的实施方式中，样品是施用至显微镜载玻片的组织切片，特别优选来自人类或动物患者，随后在特别优选的实施方式中将显微镜载玻片切割，产生许多更小的显微镜载玻片片段，其包含来自相同患者的样品物质。在多于一种样品的情况下，样品能够分开地或以共局部化(kolokalisiert)的方式存在于显微镜载玻片上。

在优选的实施方式中，术语"样品"如本文所用理解为意指待检查其特性的生物学样品或待检查其特性的化学物质或物质混合物。

例如，生物学样品能够选自包含下述的组：组织、优选组织切片或组织活体检查例如冷冻切片或石蜡切片，生物学细胞比如真核或原核细胞或其产品，病毒，纯化、分离或合成的分子比如核酸、多肽、脂质或碳水化合物。优选，生物学样品是人类或动物来源的。优选，样品具有至少0.1μl，更优选1μl，甚至更优选10μl，甚至更优选100μl，甚至更优选1ml的体积。优选，样品具有至少10ng，更优选100ng，更优选1mg，甚至更优选10mg的质量。

例如，化学样品能够选自包含下述的组：小分子，生物学大分子比如核酸、多肽、脂质或碳水化合物，天然产物，人工聚合物和无机物质。优选，化学样品是核酸，其是特别优选固定化的。

优选，根据本发明的透明显微镜载玻片期望用于诊断方法，但是其也适于多种非诊断应用。例如，透明显微镜载玻片能够用物质文库包覆，能够以高通量方法检查或筛选其生物学或药理学活性或特别的物理特性例如物质特性比如断裂韧度。在显微镜载玻片表面上的凹槽中能够检查化学反应物的反应性，例如用适宜设备通过显微技术或监测反应来分析产品或中间体产品。

根据本发明的透明显微镜载玻片优选在基础表面是平面的，但是能够包括特定的区域或凹槽，例如通过升高或凹陷允许空间限制的液体覆盖而无其可能的不受控分布的那些。这些凹槽能够形成小反应器，其中化学反应和生物学相互作用能够在显微镜载玻片上在适宜溶剂中彼此独立地进行，例如抗体与抗原的结合。许多形式描述于现有技术，例如微量滴定板，具有沟槽(US20100124750)、隆凸(DE 10 2013 017 802)等的温育容器。

根据本发明的显微镜载玻片能够额外地含有用于控制液体在特定区域蓄积的包衣。例如，疏水表面不能被润湿，而亲水表面可容易地湿润。

根据本发明，预期的是能够处理生物学样品或化学样品。在优选的实施方式中，术语"处理"如本文所用理解为意指样品不再以其所获得的和/或施用至透明显微镜载玻片的状态、优选获自人类或动物者状态存在，而是以经处理的状态存在。一般地，处理涵盖样品的物理处理例如加热、染色、干燥等，或化学处理例如通过化学键固定化、还原样品、加入酶抑制剂等。处理或制备还能够涵盖保藏，例如防止样品脱水，例如用甘油溶液或溶于有机溶剂的树脂类物质覆盖。

在特别优选的实施方式中，样品经诊断地处理或分析地处理。在优选的实施方式中，术语"诊断地处理或分析地处理"如本文所用理解为意指样品已用诊断方法和/或试剂处理，从而其状态(任选地在进一步处理步骤之后)允许进行分析且有助于诊断。可能性是例如实验室医学，细胞学，形态学微观，生物化学，(免疫)化学，特别是免疫组织化学或酶组织化学，分子生物学，组织学，血清学，病理学，化学或物理分析方法。在特别优选的实施方式中，样品是已固定在福尔马林溶液中和/或石蜡化的生物学样品。在特别优选的实施方式中，组织切片用染料或标记的抗体、优选荧光标记的抗体染色，并且显微检查其中所含细胞的形态学。示范性分子生物学方法涵盖原位杂交比如荧光原位杂交。示范性病理学方法涵盖染色比如在肌肉活体检查上的ATP酶，NADH，苏木精和曙红，Gomori三色，PAS和油红色染色。处理样品的适宜试剂、软件和设备是可商购的，例如购自公司EUROIMMUN AGMedizinische Labordiagnostika，Lübeck。

关于标记，根据本发明必需的是所述标记位于透明显微镜载玻片内。这是优选的情况：标记无任何部分直接接触显微镜载玻片以完整状态所浸入的液体。在进一步优选的实施方式中，标记主要地或优选完全地位于显微镜载玻片表面之下或于显微镜载玻片各侧表面封闭的三维空间以内。在优选的实施方式中，术语"压印"涵盖导致具有内部标记的显微镜载玻片的制备的全部方法。优选，术语"压印"在此方面宽泛地理解，意味着其涵盖通过全部可获得的适宜技术掺入标记并且术语"压印"和"掺入"特别优选是同义的。

在优选的实施方式中，标记通过激光加工压印至透明显微镜载玻片内。术语"激光加工"涵盖本领域技术人员可获得的用于通过使用激光将标记压印入透明显微镜载玻片的全部方法。用于激光处理透明物体的适宜方法描述于WO 2008/151616。简言之，其通过施用激光脉冲实现，所述激光脉冲具有适当的光线特征，适当的激光波长、优选范围是300至1000nm，脉冲长度、优选范围是250至1000，甚至更优选300至1000nm，脉冲长度、优选范围是10fs至20ns，甚至更优选300ps至20ns，和辐照度。优选标记显微地小，即其用肉眼不能读取、甚至更优选完全不能检测到。

另选地，标记能够引入显微镜载玻片内部：将所述标记，例如以固体的、印刷的小尺寸塑料条等形式，引入反应性单体的可固化混合物，其然后固化并包住所述标记，获得透明的例如由聚甲基丙烯酸甲酯构成的聚合物，充当显微镜载玻片。最后，标记还能够通过由各种、依次粘附结合的层组成的显微镜载玻片压印，所述层中一个或多于一个内层具有一个表面上的标记。然而，特别优选的是标记通过激光加工压印在以均质形式存在的透明显微镜载玻片内。

特别优选，标记位于否则均质的透明显微镜载玻片内。在优选的实施方式中，术语"均质"如本文所用理解为意指根据本发明的透明显微镜载玻片，除标记外，完全由一块材料组成而无任何内部边界并且不是例如由已粘在一起的材料或各种材料的各种层或片组成。

在标记的情况下，位于透明显微镜载玻片内但是从外侧可检测和可读取的任何标记都是可能的。在优选的实施方式中，标记是光学上可检测的和可读取的标记，甚至更优选机械可读取的标记，最优选条形码，例如一、二或三维条形码或点阵码，更特别是点阵码。另选地，能够使用字母和/或数字序列。其它类型的标记和检测也是可预想的。例如，标记可能经由其吸收、例如在UV/可视范围内的吸收，经由荧光或放射性而可检测。标记还能够以图样、形状或掺入显微镜载玻片的小物体或空洞的形式构造，其具有特征的形状、数量、密度、颜色和/或安排。

特别优选的是透明显微镜载玻片，特别是在步骤a)中，包含多个逻辑上安排的标记，例如以数字和/或字母顺序的形式，并且其从而可能基于标记将步骤d)的各显微镜载玻片片段分配于透明显微镜载玻片在分割之前所位于的位置。标记能够含有不仅显微镜载玻片片段在显微镜载玻片上的位置，而且还含进一步信息，例如有关样品类型或特别优选有关从其获得样品的患者身份。

在根据本发明的诊断设备的情况下，所述设备能够是适于检查样品和/或标记的任何设备或设备的任何组合。其涵盖例如显微技术的全部变型，更特别是光和荧光显微技术，另外涵盖用于样品光谱检查的装置，例如UV/可见光谱仪或荧光分光镜、闪烁计数器、照相机及其组合。优选的是显微镜。装备所述显微镜，使得通过升高和降低显微镜的载物台或物镜使含有样品的表面相对显微镜前透镜相对运动而定位显微镜载玻片。

在进行根据本发明的方法时，优选使其适于制备含有至少一种样品和内部压印的标记的至少一个显微镜载玻片，透明显微镜载玻片在步骤a)中提供。在步骤b)中，将标记压印于透明显微镜载玻片内。另外，在步骤c)中向显微镜载玻片供给生物学样品或化学样品。在此方面，步骤b)和c)的顺序并不重要。也存在的可能性是：首先向显微镜载玻片供给样品然后压印标记。在施用标记之前，在步骤e)中显微镜载玻片的至少部分处理也是可能的。各种方法步骤还能够同时进行或至少以重叠的方式进行。处理一般包括用化学试剂或诊断试剂处理。适宜的试剂涵盖例如抗体，染料，氧化剂或还原剂，防腐剂，蛋白酶抑制剂，抗生素等。在所述处理之前或在所述处理之后或在多个处理步骤之间，可以必需的是洗涤和/或干燥显微镜载玻片。如果芯片用于诊断方法，则随后进行牵涉读取标记、优选在分析样品之前读取标记的其它步骤，以便允许分配给患者。取决于标记的性质，有必要使用与其相适宜的方法，任选地使用适当的额外设备。在最简单的情况下，读数完全视觉地完成，任选地借助显微镜、优选光学显微镜。在标记通过激光加工插入的情况，也可能使用其它技术比如光学相干层析成像。在步骤e)之后能够进行样品分析，其在微观分析的情况下包括聚焦于样品和/或标记上，任选地随后进行各种发现的专家检查。

下文中基于示范性实施方式参照附图阐明本发明。所描述的实施方式仅是在各方面示范性的并且不应理解为是限制性的，并且所提及特征的各种组合涵盖在本发明范围内。

图1显示根据本发明的透明显微镜载玻片(1)，含有生物学样品或化学样品(2)，内部标记(3)和-任选地-透明显微镜载玻片的表面部分上的未被生物学样品或化学样品覆盖的疏水包衣(4)。块状箭头显示在分析显微镜载玻片上的样品期间观察者的观察方向。

图2a显示根据本发明的示范性方法，其中在步骤a)中提供透明显微镜载玻片(1)，然后在步骤b)中将标记(3)压印在透明显微镜载玻片内，然后在步骤c)中供给多个生物学样品或化学样品(2)和最后在步骤d)中切割以产生切割线(5)，产生两个或多于两个更小的透明显微镜载玻片，各自包含来自化学样品或生物学样品(2)的物质。

图2b显示图2a描述的根据本发明的示范性方法的修饰。在该情况中，在步骤c)中并非施用多个样品，而是覆盖含有多个标记的区域的仅单个样品例如组织切片。作为结果，所述方法产生更小的透明显微镜载玻片，其全部包含相同化学样品或生物学样品的部分。

图3a(从侧面观察，按照图1)和图3b(从上方观察)举例说明一个样品(2)和一个内部标记(3)，其中标记区域的至少一部分(在该情况为左侧一半)和样品彼此重叠安排，所述部分更确切地说是50％的标记面积。两个大括号标出标记所占据区域的两半。

Claims (5)

1.一种制备显微镜载玻片的方法，包括下述步骤：

a)提供透明显微镜载玻片，

b)压印逻辑上安排的多个标记，所述标记位于显微镜载玻片内部，

c)向透明显微镜载玻片供给生物学样品或化学样品和

d)在步骤c)之后切割所述透明显微镜载玻片，产生至少两个更小的透明显微镜载玻片，在各情况下所述更小的透明显微镜载玻片包含来自生物学样品或化学样品的物质，

其中所述多个标记以规则间隔安排在显微镜载玻片区域并且安排的密度使得在步骤d)中产生的所述更小的透明显微镜载玻片各自包含至少1个标记，

并且其中所述标记是逻辑上安排的，从而可能基于标记将步骤d)的各显微镜载玻片片段分配于透明显微镜载玻片在分割之前所位于的位置。

2.如权利要求1所要求保护的方法，其中所述标记是以数字和/或字母顺序的形式安排的。

3.如权利要求1所要求保护的方法，还包括下述步骤：

e)在至少一个透明显微镜载玻片上处理样品，所述样品是经诊断地处理或分析地处理的生物学样品。

4.如权利要求1至3中任一项所要求保护的方法，

其中所述方法包括步骤d)，

和其中在步骤d)之后的各显微镜载玻片片段含有至少1个标记，所述标记使得可能将特定的显微镜载玻片片段分配给在步骤a)中的透明显微镜载玻片。

5.如权利要求4所要求保护的方法，其中所述分配经由作为标记一部分的编码进行，该编码能够分配给在步骤a)中的透明显微镜载玻片。