CN104830761A

CN104830761A - 一种培养心肌细胞的无血清培养基

Info

Publication number: CN104830761A
Application number: CN201510297926.6A
Authority: CN
Inventors: 刘大伟; 朱轶; 高铁良
Original assignee: Rui Shenghui Biotechnology Development Corp Ltd Of Heilongjiang Province
Current assignee: Rui Shenghui Biotechnology Development Corp Ltd Of Heilongjiang Province
Priority date: 2015-06-04
Filing date: 2015-06-04
Publication date: 2015-08-12

Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一种培养心肌细胞的无血清培养基，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。心肌细胞的无血清培养基中添加了血清的主要成分，能减少血清带来的不利因素，使心肌细胞培养的条件更稳定，可简化纯化和鉴定心肌细胞产物的程序，避免病毒污染造成的危害。

Description

一种培养心肌细胞的无血清培养基

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种培养心肌细胞的无血清培养基。

背景技术

细胞培养是细胞，包括单细胞在体外条件下的生长。它在分子生物学、生物工程、生物制品、药物开发、临床等方面应用极广，如今已成为生物学、医学与药学研中最有成效的方法之一。心肌细胞(cardiomyocyte)占心肌组织总细胞数的60％，占重量的90％以上。心肌细胞培养已成为心血管研究的基本方法和手段之一。

体外培养的心肌细胞具有自发节律性和收缩的特征。在培养心肌细胞中，许多成熟心肌的在体特性已被观察到。培养心肌细胞能提供单个细胞的同源集落，在记录腔内可视并容易控制)且培养方便，定量、重复性好，均一性不受神经体液因素影响，可用于非血液动力学因素所致心肌肥厚的调节研究；可用于心肌肥厚的生物力学、凋亡受体下调、缺血预处理、信号通路的研究；可用于心肌收缩活动影响的研究；在分子生物学技术研究成熟心肌细胞，可用于筛选新药和药物安全性评价；并且可以从培养心肌细胞中提取有价值的生物因子；同时，能够弥补目前获取人类心脏组织的困难。

现有技术中体外培养心肌细胞的培养基中通常添加牛血清。但是，细胞培养中使用牛血清存在污染外源病毒和致病因子的风险，由于不同批次牛血清间的生物活性和因子的不一致，导致产品和实验结果的重现性差，制品中残留的牛血清易引起接种者对血清的过敏反应。

发明内容

本发明提供一种培养心肌细胞的无血清培养基，解决现有技术中血清培养心肌细胞存在污染外源病毒和致病因子的风险的技术问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种培养心肌细胞的无血清培养基，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。

通过本发明提供的一种培养心肌细胞的无血清培养基，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。心肌细胞的无血清培养基中添加了血清的主要成分，能减少血清带来的不利因素，使心肌细胞培养的条件更稳定，可简化纯化和鉴定心肌细胞产物的程序，避免病毒污染造成的危害。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中心肌细胞在无血清培养基中生长曲线图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

本发明实施例提供一种培养心肌细胞的无血清培养基，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。

其中，还包括5-溴脱氧核苷0.01mmol/L。加入5-溴脱氧核苷的目的主要是为了抑制其它细胞的增殖，在进行心肌细胞原代培养的时候，可以抑制非心肌细胞的增殖。

培养心肌细胞的无血清培养基必要组分的含量为IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺5mM、碳酸氢钠3.024g/L、人胰岛素10mg/L、牛血清白蛋白5g/L、氨基酸2％、维生素1％、微量元素1％、氨基酸1％。

其中，所述氨基酸包括L-精氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸的混合物；

所述维生素包含泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、内消旋肌醇、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、盐酸硫胺。

所述微量元素为Cu、Zn、Se、Fe、Sn、Ni、Ag、Al、Cr、Ge、Zr、Rb、Co、Cd、Ba、K的混合物。

通过本发明提供的一种培养心肌细胞的无血清培养基，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。心肌细胞的无血清培养基中添加了血清的主要成分，能减少血清带来的不利因素，使心肌细胞培养的条件更稳定，可简化纯化和鉴定心肌细胞产物的程序，避免病毒污染造成的危害。图1为本发明实施例中心肌细胞在无血清培养基中生长曲线图。

通过以上的实施方式的描述，本领域的技术人员可以清楚地了解到本发明可借助软件加必需的硬件平台的方式来实现，当然也可以全部通过硬件来实施，但很多情况下前者是更佳的实施方式。基于这样的理解，本发明的技术方案对背景技术做出贡献的全部或者部分可以以软件产品的形式体现出来，该计算机软件产品可以存储在存储介质中，如ROM/RAM、磁碟、光盘等，包括若干指令用以使得一台计算机设备(可以是个人计算机，服务器，或者网络设备等)执行本发明各个实施例或者实施例的某些部分所述的方法。

以上对本发明进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims

1.一种培养心肌细胞的无血清培养基，其特征在于，必要组分包括：碳酸氢钠液、盐酸液、IMDM、L-谷氨酰胺、氨基酸、维生素、碳水化合物、酚红、成肌细胞、胰岛素、牛血清白蛋白和微量元素，其中，IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、胰岛素1-10mg/L、牛血清白蛋白1-10g/L、氨基酸1-5％、维生素1-5％、微量元素0.1-0.5％、非必需氨基酸1-5％。

2.根据权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于，还包括5-溴脱氧核苷0.01mmol/L。

3.根据权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于，必要组分的含量为IMDM 17.7g/L、L-谷氨酰胺5mM、碳酸氢钠3.024g/L、人胰岛素10mg/L、牛血清白蛋白5g/L、氨基酸2％、维生素1％、微量元素1％、氨基酸1％。