CN104825505A - 抗心肌缺血的对萼猕猴桃叶组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗心肌缺血的中药组合物，所述的中药组合物是以对萼猕猴桃叶为原料制备的中药提取物。本发明还提供包含这种中药组合物的中药制剂及其应用。本发明优点在于：首次发现了以对萼猕猴桃叶作为药效原料的治疗心肌缺血相关病症的组合物，实验结果显示，对萼猕猴桃叶提取物可明显减轻SD大鼠冠状动脉结扎后的心肌缺血损伤程度，具有显著的抗心肌缺血损伤的效果；制备方法具有工艺简便，成本低廉，安全有效，有机溶剂残留低等显著优点；具有广阔的应用前景，蕴藏着巨大的社会效益和经济效益。

Description

抗心肌缺血的对萼猕猴桃叶组合物

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种以对萼猕猴桃叶为原料制备的中药提取物，以及将该提取物用于制备心肌缺血相关病症的药物的应用。

背景技术

心肌缺血是指各种原因引起冠状动脉血流量降低，致使心肌氧等物质供应不足和代谢产物清除减少的临床状态。临床显示，引起心肌缺血最主要、最常见的病因是冠状动脉(偶见肺动脉)狭窄，而引起冠状动脉狭窄的主要原因是动脉粥样硬化，冠状动脉粥样硬化引起的心脏病即为冠心病，因此可以说冠心病是心肌缺血的“罪魁祸首”。心肌缺血对心脏和全身都可能带来许多不利影响。氧是心肌细胞活动必不可少的物质，而氧是通过血液输送给细胞的。缺氧的直接后果是心肌细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律失常、心功能下降。同时，代谢的废物也不能被有效及时地清除，易产生不利影响。缺血、缺氧、缺能量，最终会影响心脏的收缩功能。若有20％～25％的心肌停止收缩，通常会出现左室功能衰竭；若有40％以上的心肌不能收缩，就会有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突然发生，就会出现非常危险的心源性休克。急性心肌梗死就常与这种情况相关。因此治疗抗心肌缺血药物具有非常巨大的临床需求，该类药物研发具有非常好的前景，蕴藏着巨大的经济和社会效益。

对萼猕猴桃(Actinidia valvata Dunn)为猕猴桃科猕猴桃属植物，又名镊合猕猴桃，主要分布于浙江、江西、江苏等华东地区，其根入药即为猫人参，临床用于治疗恶性肿瘤，为华东地区常用抗肿瘤中药，但其叶子未见药用报道。目前，仅见很少的关于猫人参化学成分、药理作用的研究报道[张亚妮,刘岭,凌昌全.猫人参有效部位对小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用及机制探讨.中国中药杂志,2006,36(11):918-920；陆胤,陈绍瑗,吴平,等.药用植物猫人参有效成分研究(I)-无机元素分析.浙江大学学报,2004,30(2):185-188]。而对于对萼猕猴桃叶则无药用记载和研究报道。近年来，发明人长期从事中药学领域的研究，近年来，对萼猕猴桃根(猫人参)[辛海量,吴迎春,徐燕丰,张亚妮,凌昌全.对萼猕猴桃根与茎的比较研究.第二军医大学学报,2008,29(3):298-302]。不仅如此，发明人还结合系统开发思路，充分利用植物资源，对其叶也进行了深入研究[Hai-Liang Xin,Ying-Chun Wu,Yong-Hua Su,Jia-Yu Sheng,Chang-Quan Ling.Novel flavonoids from leaves of Actinidia valvata Dunn:structural elucidation andanti-oxidative activity.Planta medica,2011,77(1):70-73；辛海量,苏永华,凌昌全,吴迎春.对萼猕猴桃叶的高效液相色谱指纹图谱研究.时珍国医国药,2011,22(1)15-17]。在对对萼猕猴桃叶的药理作用进行广泛筛选的过程中，出人意料地发现该植物叶子具有显著地抗心肌缺血作用。并从该植物中提取的新化学成分具有显著的抗心肌缺血作用，并对其化合物结构、用途、制备方法申请3项专利(发明人：辛海量，凌昌全，苏永华，吴迎春，盛佳钰，周俊，黄酮苷类化合物及制备方法和用途，ZL201010138085.1；发明人：辛海量，凌昌全，曲丽萍，苏永华，李同明，对萼猕猴桃苷E、F在制备抗心肌缺血药物中的应用，ZL201110271050.X；发明人：辛海量，凌昌全，曲丽萍，苏永华，从对萼猕猴桃叶中分离制备高纯度黄酮苷类化合物的方法，ZL201210022834.3)。该植物的叶子资源量很大，原本无任何药用记载。但由于单体成分制备成本高，工艺复杂，发明人致力于制备对萼猕猴桃叶提取物，并进行其抗心肌缺血的药理作用研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗心肌缺血的中药组合物。

本发明的第二个目的是，提供一种抗心肌缺血的中药制剂。

本发明的第三个目的是，提供所述的中药组合物或中药制剂的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种抗心肌缺血的中药组合物，所述的中药组合物是以对萼猕猴桃叶为原料制备的中药提取物，所述的中药提取物是对萼猕猴桃叶的醇提物或水提物。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种抗心肌缺血的中药制剂，所述的中药制剂由所述的中药组合物和药学上可接受的药用辅料混合制成。

所述的中药制剂的制备方法包括以下步骤：

(A)提取：将对萼猕猴桃叶药材原料以乙醇或甲醇水溶液作为提取溶剂提取，合并，过滤，即得提取液，所述的乙醇或甲醇水溶液为低于80％(V/V)的乙醇或甲醇水溶液；

(B)浓缩：将上述提取液回收至无醇味，即得浓缩液，所述的浓缩方式采用40-100℃减压浓缩、烘干浓缩以及其他药学上可接受的浓缩方式；

(C)调配：将上述洗脱液浓缩、干燥、粉碎，即得干浸膏，将此干浸膏与药用辅料混合得到所述的中药制剂，或直接将步骤(B)获得的浓缩液与药学上可接受的药用辅料混合得到所述的中药制剂。

优选的，所述的步骤(A)中的提取溶剂为40％乙醇水溶液。

优选的，所述的步骤(B)中的浓缩温度为50-75℃。

所述的药用辅料为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂或甜味剂。

所述的中药制剂为片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、酏剂、注射用溶液、水或油性悬浮剂。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：所述的中药组合物或中药制剂在制备抗心肌缺血相关病症药物中的应用。

优选的，所述的心肌缺血相关病症为急性心肌梗塞、心绞痛、冠心病。

优选的，所述的心肌缺血相关病症为急性心肌梗塞。

本发明优点在于：

1、本发明首次发现了以对萼猕猴桃叶作为药效原料的治疗心肌缺血相关病症的组合物，实验结果显示，对萼猕猴桃叶提取物可明显减轻SD大鼠冠状动脉结扎后的心肌缺血损伤程度，具有显著的抗心肌缺血损伤的效果；

2、本发明组合物的制备方法具有工艺简便，成本低廉，安全有效，有机溶剂残留低等显著优点，完全可以作为标准提取物的制备工艺；

3、鉴于在现代社会中，心肌缺血相关病症发病率居高不下，危害巨大，缺乏理想、有效的治疗药物，本发明的组合物具有广阔的应用前景，蕴藏着巨大的社会效益和经济效益。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

本发明提供一种抗心肌缺血的中药组合物，所述的中药组合物是以对萼猕猴桃叶为原料制备的中药提取物，以及将该提取物用于制备心肌缺血相关病症的药物的应用。所述的中药提取物是对萼猕猴桃叶的醇提物，其制备方法包括以下步骤：

(A)提取

将对萼猕猴桃叶药材原料以各种浓度的乙醇或甲醇水溶液作为提取溶剂提取，合并，过滤，即得提取液。本步骤制备提取液所用的溶剂优选低于80％(V/V)乙醇或甲醇水溶液，更优选低于60％(V/V)乙醇或甲醇水溶液，最优选40％乙醇或甲醇水溶液。当然，考虑到有机溶剂残留、生产中的安全因素以及生产成本因素，乙醇水溶液更为常用。

本步骤提取方式可以选择常规热回流提取、渗漉提取或浸泡提取，以及其他药学上可接受的提取方式。如热回流提取可以选择12倍、10倍、10倍，1.5小时、1小时、1小时，也可选择其他可接受的提取溶剂用量、提取次数、提取时间。渗漉提取、浸泡提取可以选择5-100倍溶剂，选用过多或过少的溶剂，尽管也可部分或全部实现本专利所述的提取物，但并不能对本发明构成实质性改变。

(B)浓缩

将上述提取液回收至无醇味，即得浓缩液。浓缩方式可以采用40-100℃减压浓缩、烘干浓缩以及其他药学上可接受的浓缩方式。当然，顾忌过高温度可能对提取物中化学成分稳定性造成不良影响，选用50-75℃温度浓缩更为可行。

(C)调配

可以将上述洗脱液浓缩、干燥、粉碎，即得干浸膏，可将此干浸膏与药用辅料混合制剂。还可直接将步骤(B)获得浓缩液与药学上可接受的药用辅料混合得到所述的中药制剂。

本步骤所述的药用辅料是指药学领域常规的药物载体或其他辅剂，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明首次发现对萼猕猴桃叶具有抗心肌缺血的作用，通过提取其有效成分与药用辅料做成适宜制剂，通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式，施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆剂、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、包衣片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液。

本发明组合物的制备方法具有工艺简便，成本低廉，安全有效，有机溶剂残留低等显著优点，完全可以作为标准提取物的制备工艺。鉴于在现代社会中，心肌缺血相关病症发病率居高不下，危害巨大，缺乏理想、有效的治疗药物，因此该组合物具有广阔的应用前景，蕴藏着巨大的社会效益和经济效益。

实施例1制备片剂

对萼猕猴桃叶药材5kg，分别以15倍、10倍、10倍的40％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别1.5小时、1小时、1小时，提取液趁热过滤，合并提取液，减压回收至近干，60℃烘干过夜，粉碎，得干浸膏粉。称取干浸膏粉200g，加入羟丙基甲基纤维素50g，微晶纤维素100g、交联羧甲基纤维素钠20g，混匀，加入适量60％乙醇制成软材，过24目筛制粒，50℃干燥2小时，干燥颗粒过30目筛整粒，加入硬脂酸镁2.5g，混匀，压成2000片，即得。

实施例2制备胶囊剂

对萼猕猴桃叶药材5kg，分别以12倍、10倍、10倍的60％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别1.5小时、1小时、1小时，提取液趁热过滤，合并提取液，减压回收至近干，60℃烘干过夜，粉碎，得干浸膏粉。称取干浸膏粉200g，加入40％～60％淀粉、糊精、羧甲基淀粉、磷酸氢钙等填充剂、0.5％～10％崩解剂羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素，加入适量60％乙醇制粒，干燥，并加入助流剂硬脂酸镁、微粉硅胶，使之干燥，装入胶囊，即得。

实施例3制备口服液

对萼猕猴桃叶药材5kg，分别以15倍、10倍、10倍的40％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别1.5小时、1小时、1小时，提取液趁热过滤，合并提取液，浓缩，静置12-36小时，滤过，灌封、灭菌，即得。

实施例4制备颗粒剂

对萼猕猴桃叶药材5kg，分别以15倍、10倍、10倍的40％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别1.5小时、1小时、1小时，提取液趁热过滤，合并提取液，浓缩至相对密度1.3-1.4的清膏，加入适量糊精，用3％聚维酮K30的90％乙醇溶液制成湿颗粒，干燥，分装，即得。

实施例5制备片剂

提取溶剂采用水，其余同实施例1，制备片剂。

实施例6制备颗粒剂

提取溶剂采用80％乙醇，其余同实施例4，制备颗粒剂。

实施例7制备口服液

提取方法采用50倍60％乙醇渗漉提取，其余同实施例3，制备口服液。

实施例8药理实验

(一)灌胃给药对大鼠急性心肌缺血的保护作用

1、试验目的

通过本试验观察对萼猕猴桃叶提取物灌胃给药1周，对大鼠急性心肌梗死的保护作用。

2、实验时间：开始给药时间：2013年7月18日，手术时间：2013年7月24日。

3、受试药物

溶媒DMSO，分析纯，购自国药集团。

普萘洛尔(Propranolol,Prop)，由上江苏省金坛市江南化工厂生产，生产批号：20021011，白色粉末，3mg/kg。

按实施例1、2、6方法制备的对萼猕猴桃叶干浸膏粉，分别编号为浸膏A、B、C。

以上药物均在固定时间给药1周，第7天，冠状动脉结扎前30分钟，灌胃给药。给药容积均为2ml/kg，使用DMSO配制。

4、实验动物

健康SD雄性大鼠(由第二军医大学实验动物中心提供)96只，体重180－220g，随机分为6组，如表1所示。

表1 实验分组情况及给药剂量

注：各组给药容积与溶媒组DMSO相同，2ml/kg/d，均灌胃给药。

5、手术器械

(1)冠状动脉结扎手术：一把剃毛电推剪、一把手术直剪、两把弯镊、两把大止血弯钳、一把持针器、一根带线缝合针(5-0号医用锦纶单丝线，上海浦东金环医疗用品有限公司)。

(2)心肌梗死范围测定

一把圆头小剪刀、一把组织切片刀。

6、仪器设备

数码相机(COOLPIX-P6000，日本Nikon)、电子称(精确到1mg，HANGPINGJA2003，上海天平仪器厂)、电热恒温水温箱(上海医疗器械厂)。

7、其他试剂和材料

(1)冠状动脉结扎手术

乙醚、结扎线(5-0号医用锦纶单丝线)、手术缝合线(3-0号)、牛皮筋、鼠板、玻璃密封罐。

(2)心肌梗死范围测定

用冰预冷的生理盐水500ml、0.1％氯化硝基四氮唑蓝(NBT，购自上海浩然生物有限公司，用0.2M磷酸盐缓冲液配制)、6、24孔细胞培养板，滤纸。

8、实验方法

给药6天后，第7天，手术前30分钟灌胃给予以上药物。动物称重后以乙醚麻醉动物，手术区剃毛，消毒，快速开胸，剪断第3、4肋骨暴露心脏。撕开心包将心脏轻轻挤出，在左心耳下1mm，肺动脉圆锥旁开0.5mm处用微创缝合针穿过冠状动脉前降支将其结扎，轻轻提拉切口皮肤将心脏送回胸腔，缝合切口。手术后3分钟内腹腔注射给予各组药物。手术后5小时，脱臼处死动物，迅速取心脏，生理盐水冲洗，滤纸吸干，称全心室重量，然后并将全心室沿着心脏纵轴相隔2mm切成5片，置37℃0.1％NBT液染色。10-20分钟后立即用生理盐水冲去多余染料。梗死心肌不着色，非梗死心肌被染成着黑色，拍照，然后剪去着色部分，将未着色的梗死区称重。

9、观察指标

心肌梗死程度：

梗死区(g)：即NBT染色未着色心肌

梗死率(％)：梗死心肌重量/全心室重量×100％。

10、统计分析

试验结果以表示，采用非配对t检验法统计，P<0.05为具有显著性统计学差异。

11、试验结果

(1)对大鼠急性心肌梗死范围的影响

手术后，根据染色情况，最后分析结果见表2，可以看出对萼猕猴桃叶浸膏可显著地降低动物的心肌梗死重量，并降低心肌梗死率。

表2.对萼猕猴桃提取物对SD大鼠急性心肌梗死模型心肌梗死范围的影响

注：*P<0.05vs.溶媒对照组。

12、实验结论

对萼猕猴桃叶浸膏灌胃给药治疗7天，可明显减轻SD大鼠冠状动脉结扎后的心肌缺血损伤程度。

(二)腹腔注射给药对大鼠急性心肌缺血的保护作用

1、试验目的

通过本试验观察对萼猕猴桃苷E、F腹腔注射给药，对大鼠急性心肌梗死的保护作用。

2、实验时间

开始给药时间：2013年8月10日。手术时间：2013年8月14日。

3、受试药物

溶媒DMSO，分析纯，购自国药集团。

对萼猕猴桃叶提取物1、2、3、4分别为采用实施1、2、3、4制备。

硝酸异山梨醇酯(Isosorbide mononitrate,IM)，由鲁南贝特制药有限公司生产。批号：090201。

以上药物均在固定时间给药3天后，第4天，冠状动脉结扎前15分钟内，经腹腔注射给药。给药容积：2ml/kg，DMSO配制。

4、实验动物

健康SD雄性大鼠(由第二军医大学实验动物中心提供)96只，体重180－220g，随机分为4组，如表3所示。

表3 实验分组情况及给药剂量

注：各组给药容积与溶媒组DMSO相同，2ml/kg/d，均为腹腔注射给药。

5、手术器械

(1)冠状动脉结扎手术：一把剃毛电推剪、一把手术直剪、两把弯镊、两把大止血弯钳、一把持针器、一根带线缝合针(5-0号医用锦纶单丝线，上海浦东金环医疗用品有限公司)。

(2)心肌梗死范围测定

一把圆头小剪刀、一把组织切片刀。

6、仪器设备

数码相机(COOLPIX-P6000，日本Nikon)、电子称(精确到1mg，HANGPINGJA2003，上海天平仪器厂)、电热恒温水温箱(上海医疗器械厂)。

7、其他试剂和材料

(1)冠状动脉结扎手术

乙醚、结扎线(5-0号医用锦纶单丝线)、手术缝合线(3-0号)、牛皮筋、鼠板、玻璃密封罐。

(2)心肌梗死范围测定

用冰预冷的生理盐水500ml、0.1％氯化硝基四氮唑蓝(NBT，购自上海浩然生物有限公司，用0.2M磷酸盐缓冲液配制)、6、24孔细胞培养板，滤纸。

8、实验方法

给药3天后，第4天，手术前15分钟再次腹腔注射给予药物。动物称重后以乙醚麻醉动物，手术区剃毛，消毒，快速开胸，剪断第3、4肋骨暴露心脏。撕开心包将心脏轻轻挤出，在左心耳下1mm，肺动脉圆锥旁开0.5mm处用微创缝合针穿过冠状动脉前降支将其结扎，轻轻提拉切口皮肤将心脏送回胸腔，缝合切口。手术后3分钟内腹腔注射给予各组药物。手术后5小时，脱臼处死动物，迅速取心脏，生理盐水冲洗，滤纸吸干，称全心室重量，然后并将全心室沿着心脏纵轴相隔2mm切成5片，置37℃0.1％NBT液染色。10-20分钟后立即用生理盐水冲去多余染料。梗死心肌不着色，非梗死心肌被染成着黑色，拍照，然后剪去着色部分，将未着色的梗死区称重。

9、观察指标

心肌梗死程度：

梗死区(g)：即NBT染色未着色心肌

梗死率(％)：梗死心肌重量/全心室重量×100％。

10、统计分析

试验结果以表示，采用非配对t检验法统计，P<0.05为具有显著性统计学差异。

11、试验结果

对萼猕猴桃苷E腹腔注射对大鼠急性心肌梗死范围的影响

手术后，根据染色情况，最后分析结果见表4，可以看出对萼猕猴桃叶浸膏可显著地降低动物的心肌梗死重量，并降低心肌梗死率。

表4.对萼猕猴桃提取物对SD大鼠急性心肌梗死模型心肌梗死范围的影响

注：*P<0.05vs.溶媒对照组。

12、实验结论

对萼猕猴桃叶浸膏物腹腔注射给药4天，可明显减轻SD大鼠冠状动脉结扎后的心肌缺血损伤程度。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种抗心肌缺血的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物是以对萼猕猴桃叶为原料制备的中药提取物，所述的中药提取物是对萼猕猴桃叶的醇提物或水提物。

2.一种抗心肌缺血的中药制剂，其特征在于，所述的中药制剂由权利要求1所述的中药组合物和药学上可接受的药用辅料混合制成。

3.根据权利要求2所述的中药制剂，其特征在于，所述的中药制剂的制备方法包括以下步骤：

(A)提取：将对萼猕猴桃叶药材原料以乙醇或甲醇水溶液作为提取溶剂提取，合并，过滤，即得提取液，所述的乙醇或甲醇水溶液为低于80％(V/V)的乙醇或甲醇水溶液；

(B)浓缩：将上述提取液回收至无醇味，即得浓缩液，所述的浓缩方式采用40-100℃减压浓缩、烘干浓缩以及其他药学上可接受的浓缩方式；

(C)调配：将上述洗脱液浓缩、干燥、粉碎，即得干浸膏，将此干浸膏与药用辅料混合得到所述的中药制剂，或直接将步骤(B)获得的浓缩液与药学上可接受的药用辅料混合得到所述的中药制剂。

4.根据权利要求3所述的中药制剂，其特征在于，所述的步骤(A)中的提取溶剂为40％乙醇水溶液。

5.根据权利要求3所述的中药制剂，其特征在于，所述的步骤(B)中的浓缩温度为50-75℃。

6.根据权利要求2所述的中药制剂，其特征在于，所述的药用辅料为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂或甜味剂。

7.根据权利要求2所述的中药制剂，其特征在于，所述的中药制剂为片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、酏剂、注射用溶液、水或油性悬浮剂。

8.权利要求1所述的中药组合物或权利要求2-7任一所述的中药制剂在制备抗心肌缺血相关病症药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的心肌缺血相关病症为急性心肌梗塞、心绞痛、冠心病。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的心肌缺血相关病症为急性心肌梗塞。