CN104813155A - 一次性直接捕获装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种液体样品制备装置，例如一次性、可折叠、柔性的聚合袋，其包含官能化成形聚合纤维床的吸附帘，用于从液体样品直接捕获生物分子。官能化成形聚合纤维床包含纤维、山脊或翼形结构，其大大地增加纤维的表面积，从而当液体样品与官能化成形纤维的吸附帘接触时，包含所关注的生物分子的液体样品的分离、保留和/或纯化得到增强。液体样品包括未澄清的液体供料或其他液体，其包含一种或多种所关注的生物分子，包括但不限于疫苗、重组蛋白、细胞、干细胞、单克隆抗体(mAb)、蛋白、抗体、肽、寡肽、核酸、寡核苷酸、RNA、DNA、低聚糖和多糖。

Description

一次性直接捕获装置

技术领域

本文公开的实施方案涉及一种柔性的一次性样品制备装置，其包含适合于包含所关注的生物分子的液体样品的结合和洗脱纯化的吸附性官能化纤维。

背景技术

目前有许多用于分离、纯化或制备生物学和/或化学液体样品的方法。流化床色谱和分离介质填充的色谱柱已经得到应用，用于从液体样品分离和/或纯化所关注的生物学和/或化学物质，并且在收率、耗时、纯度和成本方面取得了成功。

商业收获单克隆抗体(mAb)的主要模式方法是通过澄清序列(train)然后直接进样至传统的基于珠的结合/洗脱捕获色谱柱来除去可见(浊度)的细胞和细胞碎片。

澄清通常为两步方法。第一步为深层滤器或堆栈(disk-stack)离心。目前，完全一次性的深层滤器并不很好地适用于任何目前的灭菌技术。在不锈钢容器中使用深层滤器允许使用蒸汽进行灭菌，但是这增加硬件设备并且需要清理和清理的验证。深层滤器在实施时对于细胞密度和总批次大小是有限的。使用堆栈离心解除深层滤器对初步澄清的一些性能限制，但是也带来其自身关于清理、无菌操作和使用规模的许多问题。次级澄清通常用深层滤器进行，其存在对于初级澄清所用时相同的无菌问题。次级澄清的性能限制主要是存在高的小颗粒浓度。最终的膜滤器通常用于减少生物负荷并保护容易被剩余的固体污染的下游色谱步骤。

色谱步骤的配体选择通常是A蛋白，有时使用阳离子交换。进行堆砌和操作中试规模和较大的色谱柱所需的硬件的相当多，并且要求仔细的包装和表征。由于树脂和将其包装入有效的床的工作的高成本，通常将柱就地清理并在工艺过程(campaign)中重复使用直至树脂寿命结束。

目前的澄清方法存在实现无菌条件的问题(连续离心、一次性纤维素深层过滤装置)。纤维素装置的蒸汽处理目前仅在随后要求清理的昂贵(capitalintensive)不锈钢容器中是安全的。无菌要求对于疫苗收获或者灰空间(grayspace)加工是更明显的。

此外，目前的澄清方法致力于澄清具有非常多的固体或者高浓度的小颗粒的收获物，并且存在实现良好收率但收获物的滴度不高的问题。

最近，澄清方法在设备中进行，其中与样品液体接触的组分为单次使用的组分。

这样的单次使用组分的优势在于避免清理操作，但是提供所需程度的安全性，具有这样的组分的设备的运行需要进行选择、装配和检查，这是相对复杂的。

因此，期望获得用于处理液体生物学样品和供料的澄清方法和组分，其易于实施、更简单、更廉价，依赖于通过静态结合而对床性质的要求不高的单次使用组分，并且不要求仔细的柱填充和/或表征，也不要求专门的设备和相对昂贵的装置设计。

发明内容

本发明涉及一种柔性、可折叠、一次性、二维或三维形状的装置，其具有由侧壁限定的内隔室、内表面、外表面、用于接受包含所关注的生物分子的液体样品和供料的入口、用于排出加工的液体样品和供料的出口、以及所述装置的内隔室中包含的高表面积吸附元件，所述吸附元件具有第一末端和第二末端，其中所述末端之一或两者连接至所述装置的内表面。

在某些实施方案中，本发明涉及一种柔性的一次性装置，例如袋或包，其用于纯化生物制药液体样品和/或供料以获得生物分子产物，例如疫苗、重组蛋白、细胞、干细胞、单克隆抗体(mAb)、蛋白、抗体、肽、寡肽、核酸、寡核苷酸、RNA、DNA、低聚糖和多糖。

在本发明的某些实施方案中，吸附元件的第一末端牢固地固定、接合(bonding)或以其他方式连接至袋的邻近顶部边缘的内侧壁，并且吸附元件的第二末端牢固地固定、接合或以其他方式连接至袋的邻近底部边缘的内侧壁。

在本发明的某些实施方案中，吸附元件是聚合纤维的帘或壁样结构或其他这样的构型，所述聚合纤维基本上互相平行地组装并且固定至袋的内侧壁。

在本发明的某些实施方案中，吸附元件是聚合纤维的帘或壁样结构、或者成形纤维的床、或者其他这样的构型，所述聚合纤维基本上互相平行地组装，与袋最长的维度基本上平行，并且固定至袋的邻近并沿着顶部边缘和袋的邻近并沿着底部边缘的相对的内侧壁。

在本发明的某些实施方案中，所述装置是可折叠的聚合袋、包、容器(receptacle)等。

在本发明的某些实施方案中，纤维是官能化高表面积熔纺纤维。

在本发明的某些实施方案中，所述装置良好地适合于低成本结合/洗脱纯化，特别是从包含高固体水平和/或低蛋白浓度的原料流体流结合/洗脱纯化(例如，从细胞收获物液体或富集混合物(refold pool)直接捕获)。

在本发明的其他实施方案中，纤维的平行构型以及与流体相比低的初始纤维数量允许引入包含诸如细胞及其碎片的固体的流体并使其与所述纤维接触并搅拌，但不使得固体被机械地包埋在纤维基质中。

在其他实施方案中，本发明提供一种干燥并预灭菌的装置。

在一实施方案中，主体(body)包含二维的枕形袋，其中挤出或以其他方式形成的两个聚合材料的片层以重叠方式放置，并且两个片层在其边缘互相结合以形成内隔室。或者，挤出或以其他方式形成的聚合材料的单个完整片层可以折叠并围绕边缘缝合以形成内隔室。

在其他实施方案中，袋通过初始挤出或以其他方式形成连续管形式的聚合片层而形成，其中将所述管切成一定的长度并且将每个末端密闭缝合以形成二维的枕状袋。在替代性实施方案中，可以将每个末端折叠为纸袋的末端形式，然后密闭缝合以形成三维主体。

在本发明的其他实施方案中，袋包含挤出的聚合材料的单个完整片层，其包含两层或更多层不同材料，由完全同时共挤出的接触层所隔开。

在本发明的其他实施方案中，高表面积官能化成形纤维包含色谱的吸附介质，特别是离子交换色谱。

在本发明的其他实施方案中，官能化成形纤维包含纤维、山脊或翼形结构，其大大地增加纤维的表面积。

在其他实施方案中，本发明包括将表面侧基(pendant)官能团添加至高表面积成形纤维的方法，所述官能团提供阳离子交换或阴离子交换官能性。这种侧基官能性可用于诸如单克隆抗体(mAb)的生物分子的离子交换色谱纯化。

在本发明的其他实施方案中，从样品流体和供料除去不期望的物质和/或污染物，同时维持固体形式的产品(例如，干细胞纯化)。

本发明的其他特征、方面和优势在下文的说明书详述和所附权利要求书中列出。本领域技术人员应当理解，可以进行本发明的许多修饰和变化而不偏离其精神和范围。应当理解，上文的发明概述和下文的发明详述、权利要求书以及附图部分仅仅是示例性和解释性的，意图提供本发明的教导的各种实施方案的解释。本文提供的具体实施方案仅用于示例而不以任何方式进行限制。

附图说明

图1是某些实施方案的液体样品制备装置的照片图。

图2是某些其他实施方案的液体样品制备装置的照片图。

图3是某些其他实施方案的包含样品液体的液体样品制备装置的照片图。

图4是某些其他实施方案的包含样品液体的液体样品制备装置的剖面照片图。

图5是某些其他实施方案的包含样品液体的液体样品制备装置的剖面照片图。

图6示出某些其他实施方案的进样、洗涤和洗脱液体样品制备装置的示意图。

图7为示出利用某些其他实施方案的液体样品制备装置的包含细胞的液体样品的加工体积的浊度比稀释的图。

图8A和8B为利用某些其他实施方案的液体样品制备装置的供料和流通量(flow-thru)的散点图。

图9为利用某些其他实施方案的液体样品制备装置的洗脱的散点图。

具体实施方式

对于本说明书和所附权利要求书的目的，除非另外指明，说明书和权利要求书中所用的表示成分的量、材料的百分比或比例、反应条件以及其他数值的所有数字应当理解为在所有的情况下都由术语“约”所修饰。

因此，除非相反地指出，以下说明书和所附权利要求书中列出的数值参数为近似值，其可以根据本发明意图获得的期望性质而变化。至少，并且不意图限制权利要求范围的等同原则的应用，每个数值参数应当至少根据报道的有效数字加以理解，并使用通常的舍入原则。

虽然限定本发明的宽范围的数值范围和参数为近似值，但是具体实施例中所列的数值尽可能精确地报道。然而，任何数值固有地包含必然得自其各自的测试测量中存在的标准偏差的某些误差。而且，本文公开的所有范围应当理解为涵盖其中的所有亚范围。

成形纤维

纤维可以为连续长度的形式，例如不定长度的线或单丝，或者它们可以形成为较短的单独纤维如无纺或编织织物，将连续长度的纤维切成单独的部分，通过晶体生长方法形成等。

优选地，纤维由热塑性聚合物制成。热塑性聚合物包括聚烯烃；聚丙烯；聚酰胺；包覆(sheathed)聚乙烯/聚丙烯纤维；聚砜；聚醚砜；聚芳砜；聚苯砜；聚氯乙烯液晶聚合物；聚酯，如聚对苯二甲酸乙二醇酯，包括超高分子量聚乙烯、聚对苯二甲酸丁二醇酯、共聚酯等；以及热塑性弹性体；聚偏氟乙烯(PVDF)，包括但不限于热塑性聚氨酯弹性体(TPU)，例如聚醚、聚醚酯和PBAX和弹性体烯烃；以及丙烯酸酯，如聚甲基丙烯酸甲酯；苯乙烯聚合物；以及上述物质的混合物。

在某些实施方案中，纤维横截面通常为翼形，主体区域基本上限定纵轴，并且多个突起物放射状地从所述主体区域向外延伸。突起物形成共线(co-linear)通道的阵列，所述通道沿着纤维的长度延伸，通常每个纤维20-30个这样的通道，并且突起物的长度小于主体区域的长度。

突起物之间合适的通道宽度为约200纳米-约1000纳米。合适的纤维公开于Tanaka et al.的名为“复合纤维”的Tanaka美国专利号6,811,874B2；Chappas的名为“具有高表面积纤维的复合滤器介质”的美国专利公开号2008/0105612；以及Yavorsky et al.的名为“色谱介质和方法”的美国专利公开号2012/0029176，其中每个这些公开援引加入本文。

纤维可以是湿或干灭菌的色谱介质。在优选的方面，湿或干色谱介质是无菌的。袋可以通过用辐射、高压蒸汽或化学消毒剂处理来灭菌。γ辐射是特别有效的。较温和的处理也可以用于减少介质中存在的微生物负荷或者诸如细菌和真菌的微生物的总数。

官能化的成形纤维

本发明提供官能化这样的纤维表面的化学处理方法以使得能够基于吸附相互作用进行生物分子和生物学分离。基于离子、亲和力或疏水相互作用或者这些相互作用的组合，化学处理方法可以向这样的纤维赋予各种表面化学官能性。纤维制备和简单的表面化学处理方法的组合经济获得生物制药以及疫苗生产的纯化操作的廉价且容易扩展的技术。

高表面积成形纤维的表面官能化可以通过两步方法完成。如Yavorskyet al.的美国专利公开号2012/0029176所提供的，合适的官能化方法是接枝聚合。官能化以通过在氢氧化钠水溶液的存在下于50℃下用烯丙基缩水甘油醚处理纤维12小时来将侧基烯丙基连接至尼龙6纤维表面开始。侧基烯丙基充当纤维表面上的锚定位点，作为侧基丙烯酰胺聚合物官能性的连接点。提供丙烯酰胺单体的溶液聚合的条件，并且纤维表面上的侧基烯丙基连接至溶液中生长的聚合物链。因此，随后用2-丙烯酰亚胺基-2-甲基-1-丙磺酸、N,N-二甲基丙酰烯亚胺和过硫酸铵的水溶液于80℃下处理烯丙基官能化的纤维4小时。加热到80℃时，过硫酸盐分解引发丙烯酸单体的自由基聚合。在这些条件下，纤维表面上的侧基烯丙基充当侧基丙烯酸聚合物官能性的连接点。以这种方式，丙烯酸聚合物共价连接至纤维表面。

在某些实施方案中，丙烯酰胺聚合物可以分别制备，然后作为表面涂层施用到尼龙纤维。所得的表面涂覆的纤维证实与烯丙基接枝的材料相当的IgG结合能力。

根据某些实施方案，官能化以将羟丙基丙烯酸酯(HPA)和N,N'-亚甲基双(丙烯酰胺)(MBAm)的交联涂层沉积到高表面积纤维的表面上开始。这个步骤为丙烯酰胺单体随后的铈离子引发的氧化还原聚合提供反应性羟基烷基官能性。

HPS/MBAm处理的纤维与2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸钠盐、硝酸铈(IV)铵和HNO₃的水溶液于35℃下在氮气气氛下反应。在这些条件下，纤维表面上交联的羟基烷基(羟丙基丙烯酸酯)官能性的铈氧化在纤维表面上产生自由基并引发2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸单体的表面接枝聚合。在这样的条件下，表面引发的聚合过程产生聚合的(2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸)单体的聚合“触角(tentacle)”。以这种方式，丙烯酰胺聚合物共价连接至纤维表面。这样的过程称为接枝聚合。

化学基团(结合和/或配体基团)负责吸引并保留期望捕获的实体。或者，聚合物具有化学基团，其可容易地修饰以并入结合基团。涂层或覆盖物是可渗透的，从而可以将杂质捕获入涂层或覆盖物的深层，增加吸附能力。优选的聚合物是聚合伯胺。合适的聚合伯胺的实例包括聚烯丙胺、聚乙烯胺、聚丁胺、聚赖氨酸、它们互相之间以及与其他聚合物的共聚物，以及它们各自的质子化形式。合适的共聚物包括乙烯醇-乙烯胺共聚物、丙烯酰胺-烯丙胺共聚物、乙二醇-烯丙胺共聚物以及烯丙胺-N-异丙基丙烯酰胺共聚物。据发现由聚烯丙胺(和/或其质子化形式，例如盐酸聚烯丙胺(PAH))制成的涂层或覆盖物特别有用。各种分子量的PAA是可商购的(NittoBoseki)，通常为1,000-150,000的范围，并且这些PAA可以用于产生膜吸附剂。PAA和PAH易溶于水。PAA的水溶液的pH为约10-12，而PAH的水溶液的pH为3-5。PAA和PAH可以互换地使用，但是必须监控最终溶液的pH，并且若需要调节至高于10的值，从而对于与交联剂的反应存在非质子化的氨基。

样品制备装置的结构

图1-6示出一次性的柔性样品制备装置20，其包含柔性的可折叠主体30，其具有由无孔侧壁34限定的内隔室32并且具有内表面36、外表面38、终止于顶部边缘62的第一末端60、终止于底部边缘72的第二末端70、用于接受液体样品的入口52和用于排出处理的液体的出口54以及所述主体的内隔室中包含的高表面积吸附聚合元件40，所述吸附聚合元件具有第一末端42和第二末端44，其中所述第一和第二末端连接至所述主体的内表面。

所述装置的主体30包含柔性、不透水的无孔材料如聚乙烯或其他聚合片层，其厚度为约0.1mm-约5mm，并且约0.2mm-约2mm更常见。也可以使用其他厚度。

图4和5示出装置20的剖面图，显示某些实施方案的高表面积吸附聚合元件40如何固定或通过延长的聚合带48接合至袋20的相对的边缘侧壁。

样品制备装置的制造

材料可以包含单层材料或者可以包含两层或更多层，其密封在一起或者分离以形成双壁容器。当层密封在一起时，材料可以包含层压或挤出材料。层压材料包含两个或更多个分别形成的层，其随后被粘合剂固定在一起。

挤出的材料可以包含单个完整片层，其包含被完全同时共挤出的接触层所隔离的不同材料的两层或更多层。

在一实施方案中，主体30包含二维枕形袋，其中材料的两个片层以重叠方式放置，并且两个片层在其边缘互相结合以形成内隔室32。或者，材料的单个片层可以被折叠并围绕边缘缝合以形成内隔室32。

虽然主体30在图1-6中显示为具有二维基本上枕形的构型，但是应当理解，实际上主体30可以制备为具有任何期望的大小、形状和构型。

例如，主体30可以形成为内隔室32的大小能装入100ml、500ml、1升、10升或其他期望的量。然而，在任何实施方案中，期望主体30放置在任选存在的容器中(未显示)，当填充包含所关注的生物分子的液体样品时，其通常提供主体30至少均匀的支持以通过施加于所述主体的液压力来排除主体30的异常。

三维主体(未显示)包含多个(即通常为三个或更多个)分离的面板。主体包含4个面板，即顶面板、前面板、后面板和底面板(未显示)。每个面板优选具有基本上正方形或矩形的中心部分。顶面板和底面板包含从中心部分相对的两端突出的第一末端部分和相对的第二末端部分。末端部分的每一个具有基本上梯形的构型，其具有相对的坡形板边。前面板和后面板各自包含从中心部分相对的两端突出的三角形的第一末端部分和相对的三角形的第二末端部分(未显示)。

每个面板的对应的外周边缘被缝合在一起从而形成基本上盒型的主体(未显示)。将面板利用本领域已知的方法缝合在一起，例如热能、RF能、超声、其他密封能量、粘合剂或其他常规方法。应当理解，通过改变一些或全部面板的大小和构型，可以形成具有各种不同大小和构型的主体。还应当理解，可以使用任何数目的面板来调节主体的大小和构型。

在另一实施方案中，管的长度可以是平砌(laid flat)的，从而形成两个相对的折叠边缘。然后将两个折叠的边缘向内反转，从而在每端上形成皱褶。然后将管的相对末端密闭缝合。最后，形成穿过每个拐角的角缝，从而当膨胀时形成三维的袋。

应当理解，上述技术可以混合并与一种或多种聚合片层匹配，并且仍然有多种其他方式可以形成具有二维或三维构型的主体。

然后将管和/或容器偶联(未显示)至端口52和54中的至少一个，以递送溶液和移出溶液至样品制备袋装配20的内隔室32。

图1-6示出袋可以具有的端口的数目和性质的实例。本领域技术人员应当了解特定的细胞培养的要求，并且可以容易地提供特定的应用所需的端口。

色谱系统

在一些实施方案中，本发明提供一种用于从液体样品和/或供料分离所关注的生物分子的系统，其中使所述样品与官能化成形纤维的吸附帘接触。液体样品包括未澄清的液体供料和样品，其包含一种或多种所关注的生物分子，包括细胞、干细胞、单克隆抗体(mAb)、蛋白、抗体、肽、寡肽、核酸、寡核苷酸、RNA、DNA、低聚糖和多糖。

在一些实施方案中，本发明提供的系统包括所述装置、适合放置所述装置的容器、一个或多个泵和/或压缩装置以促进混合物流向或流出所述装置。

合适的泵包括蠕动泵、脉冲泵和/或变容真空泵。

所述系统可以包括一个或多个器件以检测官能化成形纤维的吸附帘的洗脱物的含量。检测器可以是基于光的检测器，其依赖于多波长检测或单波长检测。合适的检测器包括能够检测可见波长的光的分光光度计、UV吸收检测器、荧光检测器。检测器可以是依赖于激光源的光散射检测器或者电化学检测器，其响应于可氧化或可还原的物质，并且电输出是发生在电极表面的反应产生的电流。

所述系统还可以包含一个或多个打印机以提供来自色谱介质的洗脱材料的色谱图。所述系统还可以包括一个或多个个人电脑。个人电脑可以适合于记录数据，例如洗脱部分的吸光度或荧光。此外，电脑可以配备有合适的软件以计算洗脱部分中靶分子的浓度。

使用方法

在某些实施方案中，本发明提供装置以及使用所述装置的方法和制造所述装置的方法，其中一旦官能性成形纤维已经吸附所关注的物质，则从所述装置清空包含剩余固体的流体。

利用一种或多种官能化成形纤维的吸附聚合帘样结构来结合/捕获所关注的物质，液体样品中存在的所关注的生物分子或期望除去的污染颗粒(即，不期望的物质)，本发明可以用于从液体样品和供料过滤、分离、制备、鉴定、富集、检测、洗脱、结合和/或纯化所关注的分析物、生物分子、蛋白、mAb等。

所述装置的替代性应用包括从流体除去不期望的物质，同时将要作为产物收集的固体(如干细胞纯化)保留在渗透物中。

图6示出使用装置20的某些实施方案的示意图。

装置20装有含有略微少量蛋白的原始未澄清的供料，并且使用用于接合的纤维的能力。

漂洗/洗涤：将含有液体样品的装置20(参见图3，其示出装载的袋20)振荡一定的停留时间后，将所述装置清空。

用于清空袋20的可能方法包括使用重力、泵、真空、机械挤压等，以有效地清空所述装置，从而最小化废物并最大化高浓度产物回收。

在每个步骤，当装置20被清空时，通过真空或其他方法压缩成形纤维床以实现最大的流体清除效率。平行构型也有助于以最小的力实现高床压缩，从而实现有效的清空和实际操作。

在活化装置的压缩的许多可能方式中，从一个末端向出口端口工作的方法会使得纤维床在大部分流期间保持最小的压缩。例如，袋可以在旋转核心处用压轮保持密闭(未显示)。

洗脱

向空的袋装置20添加洗脱缓冲液(足够完全湿润)。

除去产物饱和流体，并且重复几次以实现目标回收％而无需过度稀释产物。

利用真空实现2mL液体/g纤维的残留。随后的漂洗和洗脱步骤用类似的循环步骤进行操作。实际上，对于固体清除，有效的残留为约10mL液体/g纤维。

一旦除去液体样品，制备袋20，样品制备袋可以容易地弃去或再循环。然后将新的样品制备袋20用于新批次的液体样品。由此，不同的批次之间无需罐或混合器清理，并且交叉污染的风险很低。

在某些实施方案中，本发明包括对将液体流移出纤维床的纤维床的筛(未显示)。

      实施例

实施例1

利用装置20的固体清除

进行实验以证实利用本发明的某些实施方案的从液体样品清除诸如细胞/碎片的固体。

将未改变的细胞培养收获物以100mL/g纤维进样至装置20，随后用PBS缓冲液进行循环以代表洗涤和洗脱步骤。

在每个步骤进行浊度监测，并且10NTU为将产物送至下游进行进一步纯化之前的灭菌等级膜滤器的合理挑战。

通过建立浊度比稀释的校准曲线，经计算发现99.5质量％的固体在灭菌过滤之前被除去(参见图7)。

利用装置20的蛋白分离(参见图8A和8B)

利用相同的缓冲液体积，进行20mM MES+0.1M NaCl pH 6缓冲液的蛋白分离，其中掺有0.17mg/mL mAb04和1mg/mL BSA。

将不含蛋白的相同缓冲液用于洗涤。

洗脱缓冲液为20mM MES+0.5M NaCl pH 6(参见图9)

收率：>90％的结合的mAb被回收。

装置中留下的残留液体(mAb)＝1％

纯度：

洗脱混合物中3.7％的原始BSA(0.09mg/mL)(LRV＝1.2)

纯化因子＝5

试剂盒

本发明还提供试剂盒，其可以用于从液体样品分离、捕获、纯化或者以其他方式处理所关注的生物分子分析物。试剂盒可以包含例如，一个或多个袋以及一个或多个容器，所述袋中具有本发明的一种或多种成形纤维的吸附聚合帘样结构。试剂盒可以包含一种或多种对照或者所关注的样品分析物，并且可以任选地包含用于本发明的方法的各种缓冲液。作为实例，试剂盒可以包含缓冲液，用于除去试剂或者非特异性保留或结合的材料的洗涤缓冲液可以任选地包含在试剂盒中。其他任选存在的试剂盒试剂包括用于从一种或多种成形纤维的吸附聚合帘样结构洗脱结合的靶核酸的洗脱缓冲液。

每种缓冲液可以作为溶液提供于分离的容器中。或者，缓冲液可以干燥形式或者作为粉末提供，并且可以根据使用者期望的应用制成溶液。在这种情况下，缓冲液可以在小包中提供。当装置是自动化的时候，试剂盒可以提供能源以及用于提供外力的器件，如真空泵、压缩装置等。试剂盒还可以包含使用装置和/或进样一种或多种成形纤维的吸附聚合帘样结构和/或制备适合用于本发明的装置和方法的试剂的说明书。还可以包括任选存在的用于记录和分析实施本发明的方法或使用本发明的装置时获得的数据的软件。

术语“试剂盒”包括例如组合在单个包装中的每种组分，单独地包装并一起销售的组分，或者一起列于目录中的组分(例如，目录中的相同页或展开的双叶)。

本发明通过意图示例本发明的实施例进一步阐明。

详细描述本发明的优选实施方案后，本领域技术人员应当了解，可以对本发明进行许多修饰而不偏离所附权利要求书中限定的本发明的范围。

本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利全部援引加入本文，如同每篇参考文献单独且特别地整体援引加入本文。

除非本文另外指明或者上下文明显冲突，描述本发明的上下文中(特别是在所附权利要求书的上下文中)所用的术语“一个(a)”、“一个(an)”和“这个(the)”以及类似的指代应当解释为包括单数和复数形式。除非本文另外指明，本文中值的范围的引用仅意图充当落入该范围的每个单独值的简写方法，并且每个单独值并入本说明书中，如同其单独地在本文中列出。除非本文另外指明或者上下文明显冲突，本文描述的所有方法可以任何合适的顺序进行。除非另外指明，本文中任何和所有实例或者示例性语言(如“例如”)的使用仅意图更好地阐述本发明并且不构成对本发明的范围的限制。说明书中的语言都不应理解为表示任何未要求保护的元件对实施本发明是关键的。

上文的公开可以涵盖具有独立的应用的多个不同发明。虽然每个这些发明以其优选实施方案公开，包括本发明人已知的用于实施本发明的最优模式，但是公开和示例的其具体实施方案并不理解为限制的含义，因为许多变体是可能的，并且对本领域技术人员阅读前述说明书后会是明显的。本发明人预期本领域技术人员会合理地使用这样的变体，并且本发明人预期本发明以除了本文具体描述之外的其他方式实施。本发明的主题包括本文公开的各种元件、特征、功能和/或性质的所有具有新颖性和创造性的组合及亚组合。因此，本发明包括可行的专利法所允许的所附权利要求书主题的所有修饰和等同。所附的权利要求书特别地指出某些组合和亚组合具有新颖性和创造性。特征、功能、元件和/或性质的其他组合和亚组合中体现的发明可以在要求本申请或相关申请的优先权的申请中要求保护。这样的权利要求，是否涉及不同或相同的发明，以及相对于原始权利要求的范围是否更宽、更窄、相同或不同，都理解为包含在本公开的发明的主题内。

Claims (13)

1.一种柔性的一次性液体样品制备装置20，其包括：

可折叠的主体30，其具有由侧壁34限定的内隔室32、内表面36、外表面38、入口52、出口54以及所述内隔室中包含的高表面积吸附聚合元件40，所述吸附聚合元件具有第一末端42和第二末端44，其中所述第一末端和所述第二末端连接至所述侧壁的内表面。

2.权利要求1的装置，其中所述主体为二维枕型袋。

3.权利要求1的装置，其中所述吸附聚合元件包括聚合成形纤维床的帘样结构。

4.权利要求3的装置，其中所述聚合成形纤维床包含连续的聚合成形单丝纤维。

5.权利要求3的装置，其中所述成形纤维还包含表面侧基官能团，所述侧基官能团提供阳离子交换或阴离子交换官能性。

6.权利要求3的装置，其中所述成形纤维为熔纺纤维。

7.权利要求3的装置，其中所述成形纤维具有翼形横截面，其中中间区域包含沿所述纤维的中心延伸的纵轴，并且具有从所述中间区域向外放射状延伸的多个突起物。

8.权利要求3的装置，其中所述成形纤维包含聚烯烃；热塑性聚合物；聚丙烯；聚酯；聚乙烯；聚酰胺；共聚酯；液晶聚合物；和热塑性弹性体、热塑性聚氨酯弹性体、聚醚、聚醚酯和PBAX以及弹性体烯烃。

9.权利要求3的装置，其中所述成形纤维以基本上互相平行的环的形式组装。

10.一种制备柔性的一次性枕形液体样品制备装置(20)的方法，其包括：

a.提供两个聚合片层，每个片层具有外边缘；

b.提供高表面积吸附聚合元件(40)，其连接至至少一个吸附聚合物接合元件(46或48)，所述接合元件具有第一和第二末端；

c.将所述吸附聚合元件和接合元件置于所述两个聚合片层之间，从而所述两个片层的外边缘互相重叠，并且所述接合元件的第一和第二末端夹在相对的重叠外边缘之间；

d.使所述两个聚合片层在重叠的外边缘处与所述接合元件的第一和第二末端接合在一起，从而形成枕形装置，其具有用于放置所述吸附聚合元件的内隔室，所述吸附聚合元件固定地连接至所述两个聚合片层的相对的外边缘。

11.权利要求10的方法，其中出口和入口固定地连接至所述枕形装置。

12.一种制备柔性的一次性枕形液体样品制备装置的方法，其包括：

a.提供一个聚合片层，其具有外边缘；

b.提供高表面积吸附聚合元件，其连接至至少一个吸附聚合物接合元件，所述接合元件具有第一和第二末端；

c.将所述吸附聚合元件和接合元件放置在所述聚合片层上；

d.将所述聚合片层折叠，从而所述片层的外边缘重叠，并且所述接合元件的第一和第二末端夹在相对的重叠外边缘之间；

e.使所述聚合片层在重叠的外边缘处和所述接合元件的第一和第二末端处接合；

f.形成枕形装置，其具有用于放置所述吸附元件的内隔室，所述吸附元件固定地连接至所述聚合片层的相对的外边缘。

13.权利要求12的方法，其中出口和入口固定地连接至所述枕形装置。