CN104789541A - 一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法 - Google Patents

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黄威权
赵锋
朱秋融
任敏
吕葆真
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

本发明公开了一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，包括如下步骤：将新鲜蛋清加2～3倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在80～100℃加热1～2分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；用膜截留分子量为5000～7000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液，置于30～40℃温箱烘干，得成品。本发明联合使用等电点和热处理法沉淀除去杂蛋白，方法简便高效；用超滤法浓缩酶溶液，用烘干法得到成品，高效、快速、不损害酶活力并能获得较高产量。

Description

一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法
技术领域
本发明涉及溶菌酶提取制备领域，具体涉及一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法。
背景技术
从蛋清中提取溶菌酶的方法有
1、盐沉淀法，因盐浓度过高，损害酶的活性；
2、树脂吸附洗脱法，程序较复杂，不易工业化生产。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，联合使用等电点和热处理法沉淀除去杂蛋白，方法简便高效；用超滤法浓缩酶溶液，用烘干法得到成品，高效、快速、不损害酶活力并能获得较高产量。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜蛋清加2～3倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；
S2、取步骤S1所得的滤液，缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在80～100℃加热1～2分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；
S3、将步骤S2所得的上清液用膜截留分子量为5000～7000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液，所述超滤膜由下列质量份数的原料组成：丙烯腈30份、乙酸乙酯30份、松节油衍生物65份、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸钠15份；
S4、将步骤S3所得的浓缩酶溶液置于30～40℃温箱烘干，得成品。
本发明具有以下有益效果：
联合使用等电点和热处理法沉淀除去杂蛋白，方法简便、快速、生产周期短(1～2天)；采用的超滤膜表层孔径细小，截留性能优异，下层孔径稍大，保证高截留率过滤膜的通量和过滤速度，且采用无毒无害的植物源有机溶剂，减少了有毒有害物质的残留；提取过程酶的活力得到较好保护；可以获得较高产量(达3％左右)和较高的酶比活力(达19000u/mg左右)。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本实施例中超滤膜的制备方法为：将丙烯腈与乙酸乙酯按1∶1的比例混合，搅拌均匀得到共聚物；将上述共聚物完全溶解于松节油衍生物溶液中得到铸膜液；向上述铸膜液中加入表面活性剂，均匀搅拌，放置2天熟化；将熟化后的铸膜液在25℃下流延成膜，待溶液挥发凝固后得到成品。
实施例1
一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜蛋清加2倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；
S2、取步骤S1所得的滤液，缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在80℃加热2分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；
S3、将步骤S2所得的上清液用膜截留分子量为5000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液；
S4、将步骤S3所得的浓缩酶溶液置于30℃温箱烘干，得成品。
实施例2
一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜蛋清加3倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；
S2、取步骤S1所得的滤液，缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在100℃加热1分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；
S3、将步骤S2所得的上清液用膜截留分子量为7000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液；
S4、将步骤S3所得的浓缩酶溶液置于40℃温箱烘干，得成品。
实施例3
一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜蛋清加2.5倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；
S2、取步骤S1所得的滤液，缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在90℃加热1.5分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；
S3、将步骤S2所得的上清液用膜截留分子量为6000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液；
S4、将步骤S3所得的浓缩酶溶液置于35℃温箱烘干，得成品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将新鲜蛋清加2～3倍蒸馏水，搅拌均匀后纱布过滤，取滤液；
S2、取步骤S1所得的滤液，缓慢加入2mol/L的盐酸溶液，调节pH＝4.6；然后在80～100℃加热1～2分钟使杂蛋白沉淀，离心，取上清液；
S3、将步骤S2所得的上清液用膜截留分子量为5000～7000道尔顿的超滤膜装置超滤浓缩酶溶液，所述超滤膜由下列质量份数的原料组成：丙烯腈30份、乙酸乙酯30份、松节油衍生物65份、脂肪醇聚氧乙烯醚磺酸钠15份；
S4、将步骤S3所得的浓缩酶溶液置于30～40℃温箱烘干，得成品。
2.根据权利要求1所述的一种从蛋清提取溶菌酶的简便方法，其特征在于，所述松节油衍生物为蒎烯的异构、歧化产物。
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