CN104789531A - 一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 - Google Patents
一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104789531A CN104789531A CN201510140095.1A CN201510140095A CN104789531A CN 104789531 A CN104789531 A CN 104789531A CN 201510140095 A CN201510140095 A CN 201510140095A CN 104789531 A CN104789531 A CN 104789531A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cells
- umbilical cord
- mesenchymal stem
- cord mesenchymal
- nutrient solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 57
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 title claims abstract description 48
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 title claims abstract description 13
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 40
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 33
- -1 glycoside compound Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 28
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 18
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 15
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 15
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 15
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 15
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 9
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Natural products CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims description 9
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 8
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 claims description 6
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 claims description 5
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 abstract 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 230000007831 electrophysiology Effects 0.000 description 4
- 238000002001 electrophysiology Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037680 Fibroblast growth factor 8 Human genes 0.000 description 3
- 101001027382 Homo sapiens Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 3
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 3
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 3
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 3
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102100021796 Sonic hedgehog protein Human genes 0.000 description 2
- 101710113849 Sonic hedgehog protein Proteins 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N Chloroacetyl chloride Chemical compound ClCC(Cl)=O VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N Dopamine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N Salidroside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001964 calcium overload Effects 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- CVKFXBUVLBFHGO-UHFFFAOYSA-N cobalt 5,10,15,20-tetraphenyl-21,23-dihydroporphyrin Chemical compound [Co].c1cc2nc1c(-c1ccccc1)c1ccc([nH]1)c(-c1ccccc1)c1ccc(n1)c(-c1ccccc1)c1ccc([nH]1)c2-c1ccccc1 CVKFXBUVLBFHGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 125000006575 electron-withdrawing group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- ZBHDTYQJAQDBIH-UHFFFAOYSA-N fluoroacetyl chloride Chemical compound FCC(Cl)=O ZBHDTYQJAQDBIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 1
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 1
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N salidroside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000001644 umbilical artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
公开了一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法。该方法采用预诱导和诱导二步结合法，并配制了优化的预诱导培养液和诱导培养液，其中通过加入结构改进的苷类化合物作为诱导物，成功诱导脐带间充质干细胞分化成多巴胺能神经，并且分化比例较高。
Description
技术领域
本发明涉及神经生物学领域，特别涉及一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，本发明还涉及培养得到的神经细胞。
背景技术
自2000年Erices等报道脐带血中含有丰富的造血干细胞和间充质干细胞以来，因脐带血间充质干细胞的多向分化潜能，免疫调节作用和无伦理问题等优点，备受研究者的关注。随后，有学者分别报道了脐带血间充质干细胞在体外可诱导表达神经元标志物和神经胶质细胞标志物。目前人们已经可以成功地体外分离培养脐带血间充质干细胞，并且对其生物学特性、表面标志和免疫原性有了进一步的了解。近年来成功地诱导脐带血间充质干细胞分化为骨、脂肪、软骨、肝脏及神经等成体细胞，展示了脐带血间充质干细胞的无限分化潜能和广阔的应用前景，从而为体外诱导脐带血间充质干细胞分化各种成体细胞和各种疾病的治疗提供了新的思路。
脐带间充质干细胞(MSC)是中胚层起源的，能够进行自我更新，并具备向成骨、软骨和脂肪三种中胚层系细胞分化潜能的一种成体干细胞。近年来研究发现MSC在中胚层之外，还可以跨胚层进行转分化，如分化成外胚层系的神经细胞和上皮细胞以及内胚层系的肝细胞和胰腺细胞。因为MSC来源广泛，易于分离培养，免疫原性较低，且不存在胚胎干细胞所面临的伦理学问题，这使其在再生医学方面的应用具备了其他干细胞所没有的优势。中枢神经系统的神经退行性疾病如帕金森氏综合征以及外部创伤造成的神经损伤等长期困扰人类的问题也因此将有更为现实可行的解决之道。
CN104004713A公开了一种将脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法，采用预诱导和诱导二步结合法，并配制了优化的预诱导培养液和诱导培养液，通过该诱导方式，诱导周期短、细胞分化均一度高，而且电生理检测发现该神经细胞具有诱导放电功能，成功得到诱导的神经细胞。
CN103585177A公开了间充质干细胞和基因修饰的间充质干细胞的用途，特别是间充质干细胞和基因修饰的间充质干细胞在制备用于治疗牙周病、修复牙周骨组织或软组织缺损和/或促进牙周组织再生的产品中的用途，还涉及包含间充质干细胞和/或基因修饰的间充质干细胞的组合物和细胞膜片。
CN103695369A公开了一种脐带间充质干细胞体外培养和扩增方法，其步骤如下：先将清洗液清洗脐带并破碎，然后加入等体积的0.05w/v%胶原酶于37℃消化后，清洗3次以上，而得脐带间充质细胞。用不含血清的α-MEM培养基重悬细胞，加入经纯化的CD271一抗，避光孵育，之后用磷酸缓冲液清洗，继续用不含血清的α-MEM培养基重悬细胞，加入二抗并孵育，再次用磷酸缓冲液液洗，并用不含血清的α-MEM培养基重悬细胞，以流式细胞仪无菌分选，将所得到CD271+亚群细胞接种，加入浓度10v/v%的自体脐带血血清，于37℃、5%CO2扩增培养6天。
CN103031275A公开了一种脐带间充质干细胞(UC-MSCs)分化为神经干细胞的诱导方法，所述诱导方法包括如下步骤：UC-MSCs的分离、原代培养，UC-MSCs的传代培养与扩增，UC-MSCs体外诱导转化为神经干细胞，神经干细胞的分化培养以及免疫荧光法检测，该诱导方法应用全反式维甲酸联合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)诱导脐带间充质干细胞分化为神经干细胞，经分裂增殖多次传代后仍然保持较强的活力。
CN102250829A公开了一种人脐带间充质干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法，包括以细胞爬片技术提取人脐带间充质干细胞进行分离培养，并加入表皮生长因子、地塞米松、肝细胞生长因子、抑瘤素将所述细胞分阶段定向诱导分化为肝细胞。
CN101914493A公开了一种脐带间充质干细胞分化为神经细胞的诱导方法，其特征是采用以下步骤：(1)将脐带间充质干细胞在MSC培养基中培养至铺满培养皿；(2)取稳定传代的间充质干细胞在铺有胞外基质的培养皿中以MSC培养基培养至70％汇合；(3)70％汇合的间充质干细胞依次经过添加有如下因子的四种诱导培养基培养，第一种诱导培养基：添加5-氮胞苷和三酰叠氮脂蛋白，第二种诱导培养基：添加碱性成纤维细胞生长因子和Noggin蛋白，第三种诱导培养基：添加碱性成纤维细胞生长因子、维甲酸、成纤维细胞生长因子8和Wnt3a蛋白，第四种诱导培养基：添加骨成形蛋白4、Shh蛋白、维甲酸、神经生长因子和脑源性神经营养因子。
CN101831401A公开了一种体外诱导间充质干细胞分化为神经干细胞的方法，在添加了bFGF、成纤维细胞生长因子FGF8、SHH和白血病抑制因子LIF的DMEM/DF-12培养体系中预诱导间充质干细胞；在添加了bFGF、FGF8和SHH的无血清neurobasal-medium培养体系中将预诱导的细胞定向分化为神经干细胞。
CN103146642A公开了一种定向诱导干细胞分化的方法，包括如下步骤：将离体的诱导细胞接种并吸附于聚碳酸酯膜的下表面，将离体的间充质干细胞接种至所述聚碳酸酯膜的上表面，然后将所述诱导细胞和所述间充质干细胞共培养，促使所述间充质干细胞分化为目标细胞；所述间充质干细胞和所述诱导细胞均不能通过所述聚碳酸酯膜的孔径。
CN102191217A公开了一种诱导脐带间充质干细胞分化为类神经细胞的方法，该方法将脐带间充质干细胞与许旺细胞用0.4μm孔径的Transwell小室隔离共培养,所用培养液为许旺细胞培养液；每三天全量或者半量换一次液，培养两周即可得到类神经细胞。
MSC定向诱导分化为神经细胞的实验研究有少数研究机构正在进行，而且现有报道的诱导分化方法诱导周期长，得到的神经细胞分化效率低、细胞分化均一度低。在上述现有技术中，CN104004713A公开的方法通过该诱导方式，诱导周期短、细胞分化均一度高，而且电生理检测发现该神经细胞具有诱导放电功能，成功得到诱导的神经细胞，是一种可行性比较高的方法。然而，该专利文献没有公开如何有效地将MSC定向诱导分化为多巴胺能神经元，并且如何将MSC有效地定向诱导分化为多巴胺能神经元的研究在其它现有技术中也非常少。
发明内容
为克服现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，本发明还涉及培养得到的神经细胞。
为此，本发明提供了如下方法，该方法包括如下步骤：
(1)、脐带间充质干细胞的培养和扩增：获得脐带间充质干细胞单体，将脐带间充质干细胞单体按1-5×105/ml接种于脐带间充质干细胞培养液中，每3-8天换液传代一次，得到培养的细胞；
所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12基本培养基，2％B27（重量），2-4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸（重量），EGF 20-40ng/ml，bFGF 20-30ng/ml，80-90U/ml青霉素，60-70μg/ml链霉素；
(2)、预诱导分化：将步骤(1)得到的培养细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养3天后更换预诱导培养液进行培养，3天后半量换液，第3-4天时终止诱导；其中在该步骤的培养过程中，在培养液中添加苷类诱导物，并且保持培养液中所述诱导物的浓度为5-10μg/mL；
所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nM～50nM的维生素C，10-20U/ml人白细胞抑制因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素，所述预诱导培养液另外含有0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）。
所述苷类诱导物为抗氧化剂类物质，该类物质具有耐缺氧、清除自由基、抑制细胞内钙超载的作用，可在体外可促进脐带间充质干细胞向神经元细胞分化，其通过作用于干细胞激活了与神经细胞定向分化相关的信号通路Wnt /β-cantine、BMPs /Smad 和Nother 等，促进干细胞向神经细胞分化，或者可促进干细胞表达与神经生长、分化有关的如NGF、NT-3 和BDNF 等细胞因子，这些细胞因子能诱导干细胞向神经细胞定向分化。
在一个最优选的实施方式中，为了进一步促进脐带间充质干细胞向神经元细胞分化的有效性例如分化效率和选择性，本发明人在一些天然苷类物质的基础上，进行了结构改进，使得脐带间充质干细胞向神经元细胞分化的效率和选择性得到明显提高。本发明人经过大量试验和复杂的结构分析，设计出具有如下结构式（I）～（IV）任一种所示的苷类物质：
（I）
（II）
（III）
（IV）
所述化合物的使用，与一般天然苷类物质相比，可以非常有效地促进脐带间充质干细胞向多巴胺神经元细胞分化的有效性例如分化效率和选择性。例如，所述诱导物结构中的酯基在0.01M磷酸盐缓冲液所维持的pH（7.1-7.7）能够缓慢水解成有效的活性苷类物质，这使得在一方面能够避免预诱导分化初期诱导物浓度过高，导致分化选择性过低，在另一方面还可以使诱导物的浓度稳定在一定水平，使得分化效率得到保证。进一步地，对于具有结构式（II）～（III）的物质，由于吸电子基团Cl和F的引入，增强了诱导物的诱导分化能力。另外，特别地，对于具有结构式（IV）的物质，由于邻位羟基的引入，增强了其清除自由基的能力，促进细胞有效合成多巴胺。应指出的是，苷类化合物的结构对所述分化影响的报导或技术启示在现有技术中没有任何记载，也不是本领域技术人员容易想到的。
具有结构式（I）～（III）的物质可以通过如下方法合成：将天然红景天苷与乙酰氯、氯代乙酰氯或氟代乙酰氯以1:1～1.2的摩尔比加入到环己烷溶剂中，然后加入铁改性的HZSM-5分子筛这样的选择性催化剂，使用苯作为带水剂，反应温度为60-100℃，反应时间为2-6小时，即可制得所述物质。其中，铁改性的HZSM-5分子筛可以通过将HZSM-5分子筛用FeCl3溶液浸渍来制备。
具有结构式（IV）的物质可以通过如下方法合成：将具有结构式（I）的物质在作为催化剂的四苯基钴卟啉（Co-TPP）存在下，使用三氯甲烷或DMF为溶剂，通入空气或分子氧，反应物温度为30-90℃，优选70℃，反应时间为1-3小时，反应完成后将反应物浓缩结晶即可获得具有结构式（IV）的物质。
当然，在本发明中，具有上述结构式的苷类物质可以按两种或更多种的混合物使用。
优选地，所述方法还包括步骤(3)诱导分化：将步骤(2)得到的细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行诱导培养，3天后半量换液，第3-6天时终止诱导，得到神经细胞；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nmol～50nmol的维生素C，30nM～40nM的维生素B1，0.01-0.02％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10-20U/ml人白细胞抑制因子，10-30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素。
另外地或优选地，所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12，2％B27，4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸，EGF20ng/ml，bFGF20ng/ml90U/ml青霉素，70μg/ml链霉素；所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，20U/ml人白细胞抑制因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，80U/ml青霉素，80μg/ml链霉素；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，30nmol的维生素B1，0.01％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10U/ml人白细胞抑制因子，30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素。
在一个特别优选的实施方式中，在所述步骤(2)中，培养液的pH维持在7.1-7.7。
本发明所用培养液可在常用的细胞基本培养基的基础上补充一种或多种成分而得到。可用于本发明的细胞基本培养基可以包括但不仅限于：DMEM，DMEM/F12，2％B27。这些培养基的配方是本领域所公知的，不仅在普通教科书和实验手册中有详细描述，而且还可以直接以成品的形式从公司购买获得。
作为补充物的成分可以是任何维持或促进细胞生长的成分。它们可以包括但不限于：氨基酸、维生素、蛋白、激素、金属离子、微量元素、脂肪酸、糖等等。
本发明所用的所有试剂均可通过商业途径购买得到。
本发明所述方法获得的神经细胞至少具有如下特征之一：
(a)具有典型的细胞体、轴突和树突等细胞结构；
(b)至少表达蛋白：β-tublin III；
(c)神经细胞占诱导细胞群体86-91％左右；
(d)对外界刺激具有放电功能。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：相比现有技术中使用的诱导物相比，脐带间充质干细胞向神经元细胞分化的效率和选择性（细胞分化均一度）大大提高，诱导周期缩短8-12天，细胞分化均一度高达90%以上，并且电生理检测发现该神经细胞具有诱导放电功能。
具体实施方式
实施例1：脐带间充质干细胞获取和培养
使用经产妇同意授权的新生儿脐带作为间充质干细胞的来源。
将新生儿脐带在含1％双抗的生理盐水中洗涤三次，去除表面的血污，然后剪成约1厘米长的小段。用眼科剪将脐带沿血管平行方向纵向剖开，将2根脐动脉和1根脐静脉血管从脐带中剥离干净。剥掉表面羊膜，华通胶部分用含1％双抗的生理盐水充分洗涤3次，剪碎至约1mm3大小。将剪碎的组织块均匀的平铺在75cm2培养瓶内，室温放置5-10min，使组织块贴紧。加入5ml培养基，培养基含DMEM/F12，2％B27，4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油(MTG)，1％非必需氨基酸，EGF20ng/ml，bFGF20ng/ml，90U/ml青霉素，70μg/ml链霉素，37℃5％CO2孵箱培养。每隔三天更换一次培养基，细胞生长至铺满培养皿后传代培养。
也可以使用市售或商售的合法来源的脐带间充质干细胞通过实施例1的方法直接进行培养。
实施例2：脐带间充质干细胞体外定向诱导分化
新鲜传代的P3-6代脐带间充质干细胞以5×104/ml接种于放置有包被多聚赖氨酸盖玻片的24孔板内，1ml/孔，贴壁培养3天后更换预诱导培养液进行培养，3天后半量换液，第3天时终止诱导。
预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，此基础上还含有50nmol的维生素C，20U/ml人白细胞抑制因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油(MTG)，80U/ml青霉素，80μg/ml链霉素。
将预诱导培养得到的细胞按5×104/ml的细胞密度接种进行单层贴壁诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行诱导培养，3天后半量换液，第3天时终止诱导，在培养液中不添加诱导物、添加红景天苷（市售获得）、添加上文结构式（I）～（IV）所示的苷类诱导物分别进行试验，并且在如果加入诱导物时，在培养过程中，保持培养液中所述诱导物的浓度为8μg/mL，得到多巴胺神经细胞；
诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，30nmol的维生素B1，0.01％的DMSO，0.1mM2-β-巯基乙醇，10U/ml人白细胞抑制因子，30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油(MTG)，100U/ml青霉素，80μg/ml链霉素。
采用免疫荧光化学染色法、流式细胞分析和电生理检测进行结果分析，结果表明上述诱导培养均产生了多巴胺能神经细胞，其中实施例2中各种方法获得的多巴胺能神经细胞的分化比例（即诱导细胞中多巴胺能神经细胞比例）经测定，结果如下表1所示：
表1：诱导结果对照
| 序号 | 诱导方式 | 分化比例 |
| 1（对照） | 不加入诱导物 | 22.15% |
| 2（对照） | 加入红景天苷 | 82.26% |
| 3（根据本发明） | 加入式I所示化合物 | 90.07% |
| 4（根据本发明） | 加入式II所示化合物 | 90.32% |
| 5（根据本发明） | 加入式III所示化合物 | 91.66% |
| 6（根据本发明） | 加入式IV所示化合物 | 93.79% |
通过上述对比结果清楚地可知，苷类物质的加入明显可以诱导脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元，根据本发明的苷类化合物与红景天苷相比，诱导效果明显提高，其中当使用式IV所示化合物作为诱导物时，分化比例高达93.79%，这样的效果是本领域技术人员所预料不到的。
本书面描述使用实例来公开本发明，包括最佳模式，且还使本领域技术人员能够制造和使用本发明。本发明的可授予专利的范围由权利要求书限定，且可以包括本领域技术人员想到的其它实例。如果这种其它实例具有不异于权利要求书的字面语言的结构元素，或者如果这种其它实例包括与权利要求书的字面语言无实质性差异的等效结构元素，则这种其它实例旨在处于权利要求书的范围之内。在不会造成不一致的程度下，通过参考将本文中参考的所有引用之处并入本文中。
Claims (5)
1.一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1) 脐带间充质干细胞的培养和扩增：获得脐带间充质干细胞单体，将脐带间充质干细胞单体按1-5×105/ml接种于脐带间充质干细胞培养液中，每3-8天换液传代一次，得到培养的细胞；其中所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12基本培养基，2％B27，2-4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸，EGF 20-40ng/ml，bFGF 20-30ng/ml，80-90U/ml青霉素，60-70μg/ml链霉素； 和
(2) 预诱导分化：将步骤(1)得到的培养细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养3天后更换预诱导培养液进行培养，3天后半量换液，第3-4天时终止诱导；其中在该步骤的培养过程中，在培养液中添加苷类诱导物，并且保持培养液中所述诱导物的浓度为5-10μg/mL； 并且，其中所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nM～50nM的维生素C，10-20U/ml人白细胞抑制因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素，所述预诱导培养液另外含有0.01M磷酸盐缓冲液。
2.根据权利要求1所述的将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，其特征在于：还包括步骤(3)诱导分化：将步骤(2)得到的细胞按1～5×104/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行诱导培养，3天后半量换液，第3-6天时终止诱导，得到神经细胞；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nmol～50nmol的维生素C，30nM～40nM的维生素B1，0.01-0.02％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10-20U/ml人白细胞抑制因子，10-30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素。
3.根据权利要求1或2所述的将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，其特征在于：所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12，2％B27，4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸，EGF20ng/ml，bFGF20ng/ml90U/ml青霉素，70μg/ml链霉素；所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，20U/ml人白细胞抑制因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，80U/ml青霉素，80μg/ml链霉素；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，30nmol的维生素B1，0.01％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10U/ml人白细胞抑制因子，30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素。
4.根据权利要求1或2所述的将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法，其特征在于：在所述步骤(2)中，培养液的pH维持在7.1-7.7。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法培养得到的神经细胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510140095.1A CN104789531B (zh) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | 一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510140095.1A CN104789531B (zh) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | 一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104789531A true CN104789531A (zh) | 2015-07-22 |
| CN104789531B CN104789531B (zh) | 2017-10-27 |
Family
ID=53554726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510140095.1A Expired - Fee Related CN104789531B (zh) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | 一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104789531B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105062970A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-18 | 北京瑞思德生物医学研究院 | 一种将间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导剂及诱导分化完全培养基 |
| CN107254443A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-10-17 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种促进骨髓间充质干细胞向神经元分化的诱导培养基和诱导方法 |
| CN109266610A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-01-25 | 宁波金未生物科技有限公司 | 一种促进间充质干细胞分化为神经元的方法 |
| CN110885787A (zh) * | 2018-09-10 | 2020-03-17 | 安胜军 | 脐带间充质干细胞向多巴胺能神经元分化的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101117625A (zh) * | 2007-07-12 | 2008-02-06 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 诱导间充质干细胞和脂肪干细胞分化为神经元的方法及其专用培养基 |
| CN101914493A (zh) * | 2010-07-16 | 2010-12-15 | 山东省齐鲁干细胞工程有限公司 | 脐带间充质干细胞分化为神经细胞的诱导方法 |
| US20130108589A1 (en) * | 2010-07-22 | 2013-05-02 | Affiliated Hospital Of Ningxia Medical University | Method of Producing Neurons from Stem Cells, the Neurons and Uses Thereof |
| CN104004713A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-08-27 | 安沂华 | 脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法 |
-
2015
- 2015-03-27 CN CN201510140095.1A patent/CN104789531B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101117625A (zh) * | 2007-07-12 | 2008-02-06 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 诱导间充质干细胞和脂肪干细胞分化为神经元的方法及其专用培养基 |
| CN101914493A (zh) * | 2010-07-16 | 2010-12-15 | 山东省齐鲁干细胞工程有限公司 | 脐带间充质干细胞分化为神经细胞的诱导方法 |
| US20130108589A1 (en) * | 2010-07-22 | 2013-05-02 | Affiliated Hospital Of Ningxia Medical University | Method of Producing Neurons from Stem Cells, the Neurons and Uses Thereof |
| CN104004713A (zh) * | 2014-05-14 | 2014-08-27 | 安沂华 | 脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| WEI JIN等: "Epidermal growth factor promotes the differentiation of stem cells derived from human umbilical cord blood into neuron-like cells via taurine induction in vitro", 《IN VITRO CELL.DEV.BIOL.—ANIMAL》 * |
| 张明等: "红景天苷诱导间充质干细胞向多巴胺神经分化", 《中华神经外科疾病研究杂志》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105062970A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-18 | 北京瑞思德生物医学研究院 | 一种将间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导剂及诱导分化完全培养基 |
| CN105062970B (zh) * | 2015-08-25 | 2017-12-29 | 青岛瑞思科生物科技有限公司 | 一种将间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导剂及诱导分化完全培养基 |
| CN107254443A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-10-17 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种促进骨髓间充质干细胞向神经元分化的诱导培养基和诱导方法 |
| CN107254443B (zh) * | 2017-07-28 | 2020-03-13 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种促进骨髓间充质干细胞向神经元分化的诱导培养基和诱导方法 |
| CN110885787A (zh) * | 2018-09-10 | 2020-03-17 | 安胜军 | 脐带间充质干细胞向多巴胺能神经元分化的方法 |
| CN109266610A (zh) * | 2018-09-19 | 2019-01-25 | 宁波金未生物科技有限公司 | 一种促进间充质干细胞分化为神经元的方法 |
| CN109266610B (zh) * | 2018-09-19 | 2021-06-25 | 宁波金未生物科技有限公司 | 一种促进间充质干细胞分化为神经元的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104789531B (zh) | 2017-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104774808B (zh) | 将脐带间充质干细胞诱导分化成γ-氨基丁酸能神经元的方法 | |
| CN101864395B (zh) | 脐带间充质干细胞体外诱导分化为组织工程皮肤种子细胞 | |
| KR20100065338A (ko) | 인간 또는 동물 배아에서 중간엽 줄기세포를 추출 및 그 분비물을 추출하는 방법 | |
| CN103142447B (zh) | 一种表皮干细胞活性成分及含有该活性成分的美容制剂 | |
| SI2086332T1 (en) | From the bone marrow, mesenchymal stem cells are obtained as a source of neural precursors | |
| CN104726406A (zh) | 一种诱导牙髓间充质干细胞分化为神经细胞的方法 | |
| CN106754668A (zh) | 一种干细胞培养液及注射液 | |
| CN104789531B (zh) | 一种将脐带间充质干细胞诱导分化成多巴胺能神经元的方法 | |
| CN104004713A (zh) | 脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法 | |
| CN107002035A (zh) | 干细胞组合物和生产用于治疗应用的干细胞的方法 | |
| CN102559593A (zh) | 一种从人胚胎干细胞分化成神经细胞的方法 | |
| CN101294146B (zh) | 诱导神经干细胞分化的系统及诱导方法 | |
| Wu et al. | hMSCs possess the potential to differentiate into DP cells in vivo and in vitro | |
| KR101896803B1 (ko) | 인간 만능줄기세포로부터 중간엽 줄기세포로의 분화 유도 생산율을 증가시키는 방법 및 이에 의해 생성된 중간엽 줄기세포 | |
| KR20160002248A (ko) | 다공성 막을 가진 세포배양 삽입체를 이용한 배아줄기세포로부터 다분화능 신경능 줄기세포의 분리 방법 | |
| CN105087475B (zh) | 一种细胞培养液及其应用以及诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化的方法 | |
| CN115125192B (zh) | 一种骨髓上清液及其在细胞培养中的应用 | |
| CN107164325B (zh) | MSCs来源的少突胶质细胞的制备方法及试剂盒 | |
| JP2011211956A (ja) | 幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤 | |
| CN104774807B (zh) | 将脐带间充质干细胞诱导分化成少突胶质细胞的方法 | |
| CN111718898B (zh) | 提高滑膜间充质干细胞逆境耐受性的方法及其试剂 | |
| CN110628712B (zh) | 基于诱导多能干细胞的治疗级间充质干细胞制备方法及应用 | |
| CN103361310A (zh) | 培养基、试剂盒及其用途 | |
| CN107056895A (zh) | 诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的人工多肽及其生物制品 | |
| WO2019221477A1 (ko) | 전구세포 배양액 및 다층 그래핀 필름을 포함하는 줄기세포 분화 촉진용 조성물 및 이의 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180717 Address after: 100041 401, four floor, 11 Shixing street, Shijingshan District, Beijing. Patentee after: BEIJING CHANGQINGTENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 100039 No. 9 unit 9, Yongding Road, Haidian District, Beijing 703 Patentee before: An Yihua |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210512 Address after: 100041 room 2598, 2 / F, 11 Shixing East Street, Shijingshan District, Beijing Patentee after: Beijing Warner Zhongkang Technology Development Co.,Ltd. Address before: 100041 401, four floor, 11 Shixing street, Shijingshan District, Beijing. Patentee before: BEIJING CHANGQINGTENG BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20211009 Address after: No. 69, Yongding Road, Haidian District, Beijing 100039 Patentee after: Third Medical Center, General Hospital of the Chinese PLA Address before: Room 2598, floor 2, No. 11, Shixing East Street, Shijingshan District, Beijing 100041 Patentee before: Beijing Warner Zhongkang Technology Development Co.,Ltd. |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171027 |