CN104784193A

CN104784193A - 一种原人参二醇型三七皂苷的制药用途

Info

Publication number: CN104784193A
Application number: CN201410019869.0A
Authority: CN
Inventors: 王峥涛; 高波; 吴晓俊; 杨莉; 刘青; 尉小慧; 张二云; 黄玲芳; 何纯勇
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2014-01-16
Filing date: 2014-01-16
Publication date: 2015-07-22
Anticipated expiration: 2034-01-16
Also published as: CN104784193B

Abstract

本发明涉及一种原人参二醇型三七皂苷的制药用途，具体涉及可按本领域常规方法制备含原人参二醇型三七皂苷的药物组合物，通过口服、肌注、静脉、皮肤、呼吸道、舌下、尿道或阴道等途径给药；口服制剂包括片剂、缓释片剂、分散片、口含片、胶囊剂、软胶囊、缓释胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液等；肌注或静脉给药制剂包括注射液、冻干粉等；皮肤给药制剂包括软膏剂、凝胶剂、温敏凝胶、涂膜剂等；呼吸道给药制剂包括气雾剂等。

Description

一种原人参二醇型三七皂苷的制药用途

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是涉及一种原人参二醇型三七皂苷的制药用途。

背景技术

血栓形成(thrombosis)是指在一定条件下血液中的有形成分在血管(多数为小血管)形成栓子，导致血管部分或全部堵塞、相应组织器官血供障碍的病理过程。依其组成成分，血栓可分为：血小板血栓、红细胞血栓、纤维蛋白血栓、混合血栓等四种。按形成血栓的血管种类，血栓又可分为动脉性血栓、静脉性血栓以及毛细血管性血栓。

血栓栓塞(thromboembolism)是指血栓从其形成部位脱落，在随血液流动的过程中部分或全部堵塞某些血管，进而导致相应组织器官缺血、缺氧、坏死(动脉血栓)和/或瘀血水肿(静脉血栓)的病理过程。

以上两种病理过程所引发的疾病，临床上通称为血栓性疾病。本病的病因及发病机制十分复杂，迄今尚未完全明确，但近年的研究表明，血栓性疾病的发生、发展主要与下列两种因素有关：

一、血小板数量增加，活性增强。各种导致血小板数量增加、活性增强的因素，均有诱发、促进血栓性疾病发生的可能性，如血小板增多症、机械、化学、生物及免疫反应等导致的血小板破坏加速等。目前认为，血小板因素在动脉血栓形成(如心肌梗死)的发病中具有更为重要的地位。

二、血液凝固性增高。在多种生理及病理状态下，人体的凝血活性可显著增强，表现为某些凝血因子水平升高或活性增加，如妊娠、高龄及创伤感染等所致的应激反应以及高脂血症、恶性肿瘤等。而血液的高凝状态正是血栓性疾病的发病基础。

三七皂苷Fc(Notoginsenoside Fc)是一种天然的皂苷类化合物，主要存在于三七中。研究发现，三七皂苷具有降血脂、抗肿瘤、抗氧化等作用。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种三七皂苷Fc的新的医药用途。

本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备治疗血管闭塞性缺血的药物组合物上应用。

本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备治疗血管闭塞性下肢缺血的药物组合物上应用。

本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备治疗或预防闭塞性脉管炎的药物组合物的应用

本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备治疗脉管炎的药物组合物上应用。

本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备治疗或预防心肌缺血或心肌梗死的药物组合物的应用。

具体地说，本发明提供了一种三七皂苷Fc在制备血小板聚集抑制剂中的应用。三七皂苷Fc的浓度为0.1-40μM，优选13.5μM。

本发明的第二方面是提供了一种三七皂苷Fc在制备凝血抑制剂中的应用，三七皂苷Fc的浓度为1-240mg/ml，优选，80mg/ml。

本发明的第三方面是提供了一种治疗或预防血栓性疾病的药物组合物，它包含治疗有效量的三七皂苷Fc，三七皂苷Fc的浓度为1-24mg/kg，优选，8.1mg/kg。血栓性疾病是：动脉性血栓、静脉性血栓以及毛细血管性血栓等。

本发明的第四方面是提供了一种治疗或预防心肌缺血的药物组合物，它包含治疗有效量的三七皂苷Fc，三七皂苷Fc的浓度为1-36mg/kg，优选12mg/kg。

本发明的第五方面是提供了一种治疗或预防心肌梗死的药物组合物，它包含治疗有效量的三七皂苷Fc，三七皂苷Fc的浓度为1-36mg/kg，优选12mg/kg。

本发明的第五方面是提供了了一种三七皂苷Fc在制备治疗血管闭塞性下肢缺血的药物上应用，三七皂苷Fc的浓度为0.1-240mg/ml，优选，40mg/ml。

本发明的第六方面是提供了三七皂苷Fc片剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，润滑剂1-5％；或缓释片剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-50％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或分散片的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-80％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或口含片的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，粘合剂10-50％，矫味剂1-10％，润滑剂1-5％。

本发明的第七方面是提供了三七皂苷Fc胶囊剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，润滑剂1-5％；或缓释胶囊的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-50％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或软胶囊的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，精制植物油0.1-99.9％，防腐剂1-5％。。

本发明的第八方面是提供了三七皂苷Fc滴丸的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，聚乙二醇4000或聚乙二醇60000.1-99.9％，水0.1-99.9％；或颗粒剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％；或口服液的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，单糖浆10-80％，防腐剂0.1-1％，水0.1-99.9％。

本发明的第九方面是提供了三七皂苷Fc注射液的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，注射用氯化钠或葡萄糖适量，注射用水0.1-99.9％；或冻干粉的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，赋型剂0.1-99.9％，pH调节剂适量。

本发明的第十方面是提供了三七皂苷Fc软膏剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，软膏基质0.1-99.9％，防腐剂0.1-1％；或凝胶剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，凝胶基质0.1-99.9％，防腐剂0.1-1％；或温敏凝胶的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，凝胶基质0.1-99.9％，温度调节剂5-20％，粘合剂0.5-5％，防腐剂0.1-1％，水0.1-99.9％；或涂膜剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，基质30-50％，防腐剂0.1-1％，水30-80％。。

本发明的第十一方面是提供了三七皂苷Fc气雾剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，增溶剂0.1-1％，水0.1-99.9％，抛射剂适量。

附图说明

图1三七皂苷Fc对血小板聚集率的影响

图2三七皂苷Fc对血小板聚集率的量效关系

图3Fc对整体动物血小板聚集率的影响

图4Fc对大鼠断尾凝血时间影响

图5Fc对大鼠活化部分凝血活酶时间的影响

图6Fc对人类凝血四项指标的影响

图7Fc对人类凝血四项指标的影响

图8Fc对大鼠急性心肌梗死面积百分比的影响

图9大鼠心肌梗死手术空白组病理图片

图10大鼠心肌梗死假手术组病理图片

图11大鼠心肌梗死阳性药组(4.1mg/kg)病理图片

图12大鼠心肌梗死给药组(4mg/kg)病理图片

图13大鼠心肌梗死给药组(12mg/kg)病理图片

图14第一天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。

图15第四天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。

图16第八天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。

图17第十六天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。

图18手术后第二十六天后，Fc处理组手术肢已恢复到正常肢的43％。

具体实施方式

本发明的问世部分是基于这样一个意外发现：三七皂苷Fc可以明显抑制大鼠的血小板聚集，延长活化部分凝血活酶时间。因此，三七皂苷Fc有望开发成为一种抑制血小板聚集的物质即血小板聚集抑制剂和/或一种抑制凝血的物质即凝血抑制剂，所述“血小板聚集抑制剂”和“凝血抑制剂”可以是各种形式的物质，包括但不限于：药物、保健品、食品、日用品等等。用三七皂苷Fc制备的这些“血小板聚集抑制剂”和“凝血抑制剂”可用于防治各种血栓性疾病如动脉性血栓、静脉性血栓以及毛细血管性血栓等。

进而，本发明提供了三七皂苷Fc在制备血小板聚集抑制剂中的应用。

本发明还提供了三七皂苷Fc在制备凝血抑制剂中的应用。

本发明还提供了一种治疗血栓性疾病的药物组合物，它包含治疗有效量的三七皂苷Fc。

较优选的，所述血栓性疾病为血小板聚集功能亢进或高凝血症。

本发明还提供了三七皂苷Fc在制备治疗血管闭塞性缺血的药物组合物上应用。

本发明还提供了三七皂苷Fc在制备治疗血管闭塞性下肢缺血的药物组合物上应用。

本发明还提供了三七皂苷Fc在制备治疗脉管炎的药物组合物上应用。

本发明提供了三七皂苷Fc在制备治疗或预防闭塞性脉管炎的药物组合物的应用

本发明的三七皂苷Fc(Notoginsenoside Fc)的分子式为：C₅₈H₉₈O₂₆，分子量为：1210.63，其结构式如下：

R＝Xyl¹-⁶Glc；R₁＝Xyl¹-²Glc¹-²Glc

本发明的三七皂苷Fc可通过商业途径从Sigma化学公司、成都曼斯特生物科技有限公司等处购买获得，或者用本领域的常规方法从三七皂苷中分离获得。其纯度均符合药用标准。

以将本发明的三七皂苷Fc制成药物为例。本发明的三七皂苷Fc可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的三七皂苷Fc及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1-99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的三七皂苷Fc。“可药用载体”不会破坏本发明的三七皂苷Fc的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。

所述可药用载体包括但不限于：软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。

其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。

本发明的三七皂苷Fc以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过口服、肌注、静脉、皮肤、呼吸道、舌下、尿道或阴道等途径给药。口服制剂包括片剂、缓释片剂、分散片、口含片、胶囊剂、软胶囊、缓释胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液等；肌注或静脉给药制剂包括注射液、冻干粉等；皮肤给药制剂包括软膏剂、凝胶剂、温敏凝胶、涂膜剂等；呼吸道给药制剂包括气雾剂等。

除了制成药物之外，亦可在本发明的三七皂苷Fc中加入抗氧化剂、色素、酶制剂等各种食品添加剂，按本领域的常规方法制成保健食品。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

实施例1：

本实施例中所用的三七皂苷Fc来源为上海中医药大学中药研究所分离、制备，(氯吡格雷购自中国生物制品检定所)。所用样品的纯度均符合药用标准。

1、实验材料

1.1药材

三七皂苷Fc(分子量1211.38，HPLC纯度≥99％，中药研究所)；氯吡格雷(分子量419.90，HPLC纯度≥98％，购自中国生物制品鉴定所)；人类标准血浆、凝血四项测试试剂(均购自德国SIEMENS公司)；二磷酸腺苷(ADP)(购自Sigma公司)

1.2实验动物

体重230±20g的SD大鼠，由上海中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(沪)2008-0016。置于常规饲养环境，自由进食和饮水。

2、实验方法

2.1Fc对血小板聚集的影响

2.1.1体外血小板聚集实验：抽取的血液加入枸橼酸钠抗凝。100g离心5min，取上清，即得富血小板(PRP)；将所得PRP加入前列腺环素(2μg/ml)，离心5min(700g)；再加入0.9％的生理盐水清洗两次；清洗后将血小板悬浮于Tyrode buffered中，并使其浓度为4*108，备用；按比浊法进行血小板聚集测定：将血小板血浆置于比色管杯中，加入诱聚剂(ADP：5-腺苷二磷酸二钠盐：1×10-4mol/L)。后，用小磁粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，血浆浊度降低，透光度增加。记录此变化，形成血小板聚集的动态曲线。以PRP的聚集率和透光度为0，以悬浮液所测得的聚集率和透光度为100％，用血小板聚集仪进行自动测定、记录、描绘血小板聚集曲线。对抑制或促进聚集的判断，主要观察是否与诱导剂发生协同作用或拮抗作用。发生协同作用即为促进血小板聚集，发生拮抗作用的即为抑制血小板聚集。

2.1.2整体动物血小板聚集实验：动脉血流中的血小板当接触丝线的粗糙表面是粘附与线上，在其表面形成血小板血栓。血小板的粘附聚集功能受到抑制时，血栓重量较轻。因此，从血栓重量可测知血小板粘附聚集功能的情况。

2.1.2整体动物凝血功能评价

2.1.2.1大鼠断尾凝血时间测定：以利剪将大鼠尾尖0.5cm处横断，待血液自行溢出后开始记时，每隔30s用滤纸吸去血滴1次，直至血流自然停止(滤纸吸时无血)为止，即为出血时间。

2.1.2.2凝血四项指标测定：1)凝血四项指标：凝血酶原时间(prothrombin time，PT)：主要反映内源性凝血系统状况，常用于监测肝素用量。增高见于血浆因子VIII、因子IX和因子XI水平减低：如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症；降低见于高凝状态：如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况；活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatintime，APTT)：主要反映内源性凝血系统状况，常用于监测肝素用量。增高见于血浆因子VIII、因子IX和因子XI水平减低：如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症；降低见于高凝状态：如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况；凝血酶时间测定(thrombin time，TT)：主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。增高见于DIC纤溶亢进期，低(无)纤维蛋白原血症，异常血红蛋白血症，血中纤维蛋白(原)降解产物(FDPs)增高；降低无临床意义；纤维蛋白原(Fibrinogen，FIB)：主要反映纤维蛋白原的含量。增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化；

2.2分组及给药方法

2.2.1血小板聚集实验设计：

空白对照：0.9％生理盐水(NS)。

诱导剂组：二磷酸腺苷(ADP)(10mM)

阳性对照药：氯吡格雷(5mM)。

用药组：每组六只，Fc用双蒸水溶解(56μM)。

2.2.2在体血小板聚集功能实验

空白对照：6只，0.9％生理盐水(NS)。

阳性对照药：6只，氯吡格雷(13.4mg/kg)。

用药组：6只，Fc用双蒸水溶解(8.1mg/kg)。

2.2.3大鼠断尾凝血时间实验设计

空白对照：6只，0.9％生理盐水(NS)。

阳性对照药：6只，氯吡格雷(静注13.4mg/kg)。

用药组：6只，Fc用双蒸水溶解(静注8.1mg/kg)。

2.2.4凝血四项测定实验设计

空白对照：6只，0.9％生理盐水(NS)。

阳性对照药：6只，氯吡格雷(160μg/ml)。

用药组：6只，Fc用双蒸水溶解(80μg/ml)。

2.4统计分析

所有实验数据均重复3次，结果以平均值±标准差表示，采用SPSS13.0统计软件对实验数据采用单向方差分析(One-way ANOVA)及LSD检验，P＜0.05为统计学上差异有显著性。

3、结果

3.1三七皂苷Fc对血小板聚集的抑制作用。

3.1.1Fc对血小板聚集率的影响

图1体现了三七皂苷Fc对血小板聚集率的影响，由图1可见：诱导剂(ADP)单用组聚集率为52.9％，联合引用Fc(给药剂量均为200μM)后聚集率为25.8％，Fc组的聚集率小于诱导剂单用组(*P＜0.05)，并小于阳性药组(*P＜0.05)。这说明Fc拮抗诱导剂诱导的血小板聚集。

3.1.1Fc对血小板聚集率的量效关系

图2体现了三七皂苷Fc对血小板聚集率的量效关系，由图2可见：Fc(0.1μM、10μM、20μM、30μM、40μM、)对血小板聚集抑制作用的量效关系，从0.1μM---40μM的剂量范围内，血小板聚集率逐渐下降。随着剂量的增加，聚集率依次下降。聚集率从最初的47.9％，降至28.1％，降幅达19.8％。其IC₅₀值为13.5μM。

3.1.3Fc对整体动物血小板聚集率的影响

图3体现了Fc对整体动物血小板聚集率的影响，由图3可见：三七皂苷Fc的在体血小板聚集功能的影响。通过对湿重血栓的称重我们发现：Fc在体情况下仍有很强的活性。我们采用静脉注射的方法，给予大鼠Fc：8.1mg/kg。给药五分钟后开始体外侧枝循环，循环十五分钟后即终止循环，取出血栓沉重。空白对照组与Fc给药组差异性显著(**P＜0.01)。

3.2.1Fc对大鼠断尾凝血时间测定

图4体现了Fc对大鼠断尾凝血时间影响，由图4和表1可见：Fc对于大鼠断尾出血时间，有着明显的影响。Fc的血栓重量为28.2mg，；明显小于空白组：37.2mg(**P＜0.01)。

表1Fc对大鼠断尾凝血时间的影响

3.3Fc对大鼠与人类凝血四项指标的影响

图5体现Fc对大鼠活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatin time，APTT)的影响，由图5和表2可见：Fc在5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、80μg/ml、160μg/ml五个剂量组对APTT的量效关系。不同剂量表现出效应的逐渐增强，Fc的剂量5μg/mlAPTT时间为：19秒，240μg/ml为32秒。变化幅度为13秒。

图6和表2体现Fc对人类凝血四项指标的影响，由图6可见：Fc明显延长APTT时间，在80μg/ml剂量水平，APTT时间达到126秒，明显高于空白组(91秒)(**P＜0.01)。Fc在240μg/ml的剂量水平，APTT时间仅为82秒，明显低于空白组(91秒)(**P＜0.01)。

图7和表3体现Fc对人类PT时间的影响：PT也长于空白组(*P＜0.05)；PT时间为17秒，明显低于空白组(20秒)(*P＜0.05)。

表2Fc对大鼠凝血功能的影响

表3Fc对人凝血功能的影响

实施例2：三七皂苷Fc对手术大鼠心肌梗死面积的减少作用、抗心肌缺血的作用

一.实验材料

1.1药材

三七皂苷Fc(分子量1211.38，HPLC纯度≥99％，中药研究所)；氯吡格雷(分子量419.90，HPLC纯度≥98％，购自中国生物制品鉴定所)；

1.2实验动物

体重320±20g的SD大鼠，由上海中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(沪)2008-0016。置于常规饲养环境，自由进食和饮水。

二.方法：

模型制作方法：SD大鼠30只(上海中医药大学动物实验中心提供)，体重：320-370g。大鼠戊巴比妥(35mg/kg)麻醉，仰卧固定；颈部正中切开，分离气管，行气管切开术，插入呼吸管，调节好呼吸机的频率与潮气量；经胸骨正中切口开胸(3-4肋间)，细手术针，六号线，从左心耳处入针，肺动脉圆锥处出针结扎。判断缝扎前降支成功的

标准采用肉眼观察(前降支供血区变暗或苍白)，便迅速关胸。假手术组只穿线绕过左冠状动脉前降支而不结扎，余同手术组。

TTC染色：-20℃冻存，至心脏冻硬取出，沿左室长轴将心脏切为5～6片，每片厚3～4mm。然后置于0.5％TTC溶液中，37℃孵育15min，取出心肌片于4％甲醛溶液中固定。

指标采集：心肌片呈两种不同的颜色，红色为正常心肌组织；白色或灰黑色为坏死心肌组织。将心肌按两种不同的颜色分别剪下用滤纸吸干水分，称取重量。按如下公式计算：心肌缺血面积(％)＝心脏总重÷梗死心肌重量×100％。同时，采集部分心脏进行病理切片分析。

三.实验设计

2.2.5大鼠急性心肌梗死实验设计

手术空白组：6只，手术后给予0.9％生理盐水(NS)。

假手术组：6只，开胸，穿线但不结扎。

阳性药组：6只，手术后给予替卡格雷(4.1mg/kg)。

4mg/kg Fc给药组：6只，手术后给予Fc(4mg/kg)。

12mg/kg Fc给药组：6只，手术后给予Fc(12mg/kg).

四.结论：

图8和表4表明：Fc具有明显减少手术大鼠心肌梗死面积百分比的作用。并且，4mg/kg给药组与12mg/kg给药组具有明显的量效关系(P＜0.001)。12mg/kg给药组疗效优于阳性药组(4.1mg/kg)(P＜0.01)。各给药组与control组比较均有显著性差异。

图9：手术空白组表明：心肌细胞排列紊乱，细胞胞浆浓染嗜酸性，部分细胞胞浆少，部分细胞胞浆增多，细胞核分布不均匀，局部可见多核细胞形成，间质可见明显空泡变性，炎症细胞少见。

图10：假手术组表面：心肌细胞排列正常，细胞胞浆较丰富嗜酸性，细胞核大小较一致，均匀分布，间质未见炎症细胞。

图11：阳性药组表明：心肌细胞排列局部紊乱，胞浆嗜酸性，较丰富，核大小较一致，分布不均匀，可见多核细胞，间质空泡变性明显，炎症细胞较少见。

图12：给药4mg/kg组表明：心肌细胞排列大致正常，细胞胞浆嗜酸性，局部细胞核聚集，间质可见少量炎细胞浸润，空泡变性较明显。

图13：给药12mg/kg组表明：心肌细胞排列大致正常，局部细胞胞浆断裂，细胞胞浆较丰富，可见细胞核增大，间质空泡变性减轻，炎症细胞浸润较明显。

表4Fc对大鼠急性心肌梗死的影响

实施例3：三七皂苷Fc对小鼠血管闭塞性下肢缺血的治疗作用

一.实验材料

1.1药材

三七皂苷Fc(分子量1211.38，HPLC纯度≥99％，中药研究所)；阳性药(氯吡格雷：分子量419.90，HPLC纯度≥98％，购自中国生物制品鉴定所)；三七总皂苷(来源于中药所)；

1.2实验动物

体重20±5g的C57小鼠，由上海中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(沪)2008-0016。置于常规饲养环境，自由进食和饮水。

二.方法：

模型制作方法：术前高压灭菌器消毒手术器械。利用异氟醚或其他麻醉剂麻醉老鼠，直到它是对外界刺激的反应迟钝。

然后仰卧位放置在上手术台前。使用电动剃须刀和脱毛膏彻底清除发毛。鼠仰卧位放置在手术台上(最好有加热垫使昏睡的老鼠保温)，用胶带固定后脚，用碘和酒精擦洗皮肤。用细镊子和手术剪，使皮肤切口，约1厘米长，从膝盖向大腿内侧。使用PBS浸湿棉签的细尖，轻轻地刷了皮下脂肪。接下来，应用烧灼或钝针拨开软组织，暴露了潜在的股动脉。用拉钩拉开伤口，更好的暴露下肢血管。轻轻剥离暴露的神经血管束。然后，使用一个精细镊子和PBS浸湿棉签的细尖，解剖和分离股动脉，股静脉和神经。剥离后，在腹股沟附近的位置，用7-0丝线手术节扎股动脉，附近位置再次节扎；靠近膝盖的位置，做同样动作。用5-0丝线仔细节扎，所有与股动脉相连接的动脉(大概三到四处)。切除从股静脉到靠近膝盖的股动脉。取出拉钩，用5-0缝线关闭切口。老鼠放置在加热垫的顶部的动物和不断监视，直到清醒。

指标采集：采用moorLDLS激光多普勒，采集小鼠术后，不同时间段的血流变化数据。

三.实验设计

手术空白组：6只，手术后腹腔注射(ip)0.9％生理盐水(NS)。

阳性药组：6只，手术后腹腔注射氯吡格雷(ip)(10mg/kg)。

Fc给药组：6只，手术后腹腔注射(ip)三七皂苷Fc(40mg/kg)。

三七总皂苷(PNS)：6只，手术后腹腔注射(ip)PNS(50mg/kg)

四.结论：

图14第一天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。由于血管被截断血流很小。

图15第四天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。血流量多于第一天的流量。

图16第八天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。血流量已明显多于第一天的流量。

无血流区减少，缺血肢血流进一步恢复。

图17第十六天手术后，Fc处理组激光多普勒血流变化图。缺血肢血流已明显恢复。

图18手术后第二十六天后(见表5)，Fc处理组手术肢已恢复到正常肢的43％，明显优于model组的25％(P＜0.05)，优于阳性药的27％(P＜0.05)，且优于目前广泛使用的三七总皂苷(PNS)(23％)(P＜0.05)。

表5Fc对闭塞性脉管炎治疗作用

实施例4：三七皂苷Fc片剂

处方A：

三七皂苷Fc 10g 淀粉 87g

硬脂酸镁 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 20g 淀粉 47g

乳糖 30g 硬脂酸镁 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。

处方C：

三七皂苷Fc 50g 淀粉 25g

糊精 20g 滑石粉 5g

实施例5：三七皂苷Fc缓释片剂

处方A：

三七皂苷Fc 10g 淀粉 20g

乳糖 34g 羟丙基甲基纤维素 34g

硬脂酸镁 2g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、乳糖、羟丙基甲基纤维素混合均匀，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，压片，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 20g 乳糖 38g

乙基纤维素 36g 8％PVP无水乙醇溶液50g

山榆酸甘油酯 2g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加乳糖、乙基甲基纤维素、山榆酸甘油酯混合均匀，用8％PVP无水乙醇溶制成颗粒，干燥，压片，即得。

实施例6：三七皂苷Fc分散片

处方A：

三七皂苷Fc 10g 微晶纤维素 82g

羧甲基淀粉钠 5g 4％PVP无水乙醇溶液 50g

硬脂酸镁 1g

制备工艺：取三七皂苷Fc、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠分别过100目筛，按等量递增法混匀，加入4％PVP无水乙醇溶液，制粒，干燥，加入硬脂酸镁，压片，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 50g 乳糖 38g

交联聚乙烯吡咯烷酮 10g 2％PVP无水乙醇溶液 50g

硬脂酸镁 1g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，乳糖、交联聚乙烯吡咯烷酮过80目筛，按等量递增法混匀，加入2％PVP无水乙醇溶液，制粒，干燥，加入硬脂酸镁，压片，即得。

实施例7：三七皂苷Fc口含片

处方A：

三七皂苷Fc 10g 乳糖 84g

柠檬酸 2g 4％羟丙基纤维素水溶液 50g

硬脂酸镁 2g

制备工艺：取三七皂苷Fc、乳糖分别过100目筛，按等量递增法混匀，将柠檬酸溶于4％羟丙基纤维素水溶液作粘合剂，制软材，制粒，干燥，加入硬脂酸镁，压片，即得。

处方B：

制备工艺：取三七皂苷Fc、微晶纤维素、木糖醇、淀粉分别过80目筛，按等量递增法混匀，将柠檬酸溶于6％羟丙基纤维素水溶液作粘合剂，制软材，制粒，干燥，加入硬脂酸镁，压片，即得。

实施例8：三七皂苷Fc胶囊

处方A：

三七皂苷Fc 10g 淀粉 87g

硬脂酸镁 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 20g 淀粉 47g

乳糖 30g 硬脂酸镁 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。

处方C：

三七皂苷Fc 50g 淀粉 25g

糊精 20g 滑石粉 5g

实施例9：三七皂苷Fc软胶囊

处方A：

三七皂苷Fc 10g 大豆卵磷脂 90g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加大豆软磷脂，用胶体磨混匀，抽真空脱气，送入软胶囊包装机压制。

处方B：

三七皂苷Fc 20g 精制植物油(棕榈油或大豆油) 20g

山梨酸 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加精制植物油、山梨酸，用胶体磨混匀，抽真空脱气，送入软胶囊包装机压制。

实施例10：三七皂苷Fc缓释胶囊

处方A：

三七皂苷Fc 10g 淀粉 20g

乳糖 34g 羟丙基甲基纤维素 34g

硬脂酸镁 2g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加淀粉、乳糖、羟丙基甲基纤维素混合均匀，制成颗粒，干燥，加入硬脂酸镁，装胶囊，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 20g 乳糖 38g

乙基纤维素 36g 8％PVP无水乙醇溶液 50g

山榆酸甘油酯 2g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加乳糖、乙基甲基纤维素、山榆酸甘油酯混合均匀，用8％PVP无水乙醇溶制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。

实施例11：三七皂苷Fc滴丸

处方A：

三七皂苷Fc 20g 聚乙二醇-6000 80g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，与聚乙二醇-6000混合均匀，加热至温度80-90度，化料，用滴丸机制备滴丸，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 50g 聚乙二醇-4000 50g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，与聚乙二醇-4000混合均匀，加热至温度80-90度，化料，用滴丸机制备滴丸，即得。

实施例12：三七皂苷Fc颗粒

三七皂苷Fc 200g 葡萄糖 300g

蔗糖 300g 糊精 200g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，与葡萄糖、蔗糖、糊精混合均匀，制备颗粒，分装，即得。

实施例13：三七皂苷Fc口服液(口服糖浆)

三七皂苷Fc 100g 单糖浆 500ml

苯甲酸钠2g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，与单糖浆、苯甲酸钠混合均匀，加水至1000ml，冷藏，滤过，分装，灭菌，即得。

实施例14：三七皂苷Fc注射液

三七皂苷Fc 100g 注射用氯化钠 7g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加适量注射用水溶解，加入注射用氯化钠至等渗，调节pH值至6～7，滤过，冷藏24小时，加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例15：三七皂苷Fc葡萄糖滴注液

三七皂苷Fc 200g 葡萄糖 50g

制备工艺：取三七皂苷Fc过100目筛，加适量注射用水溶解，加入葡萄糖，调节pH值至6-7，滤过，冷藏24小时，加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。

实施例16：注射用三七皂苷Fc(冻干)

处方A：

三七皂苷Fc 100g

制备工艺：取三七皂苷Fc，用注射用水适量溶解，加针用活性炭脱色，滤过，加注射用水至1000ml，调节pH值至6-7，滤过，冷冻干燥，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 100g 甘露醇 5g

制备工艺：取三七皂苷Fc，甘露醇，用注射用水适量溶解，加针用活性炭脱色，滤过，加注射用水至1000ml，调节pH值至6-7，滤过，冷冻干燥，即得。

实施例17：三七皂苷Fc软膏剂

处方A：

三七皂苷Fc 200g 无水羊毛脂 200g

凡士林 600g 羟苯乙酯0.3g

制备工艺：取三七皂苷Fc，过100目筛，加入羟苯乙酯、羊毛脂与凡士林，混匀，制成1000g，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 100g 聚乙二醇300 500ml

聚乙二醇4000 600g 鲸蜡醇 3g

制备工艺：取三七皂苷Fc，用聚乙二醇300溶解。另取聚乙二醇4000加热熔化，等温下加入药物，搅拌至冷凝，即得。

实施例18：三七皂苷Fc凝胶剂

处方A：

三七皂苷Fc 100g 羟丙基甲基纤维素 300g

尼泊金甲酯 2g 无水乙醇 200ml

制备工艺：取三七皂苷Fc，过100目筛，加入尼泊金甲酯，用无水乙醇溶解。另取羟丙基甲基纤维素，加水溶胀，与药物混合均匀，加水至1000g，搅匀，使成均匀透明状凝胶，即得。

处方B：

三七皂苷Fc 150g 卡波姆934 350g

尼泊金甲酯3g 无水乙醇 250ml

制备工艺：取三七皂苷Fc，过100目筛，加入尼泊金甲酯，用无水乙醇溶解。另取卡波姆934，加水溶胀，与药物混合均匀，加水至1000g，搅匀，使成均匀透明状凝胶，即得。

实施例19：三七皂苷Fc温敏凝胶

处方A：

三七皂苷Fc 100g 普罗沙姆P407 180g

普罗沙姆 P188 40g 羟丙基甲基纤维素 5g

苯扎溴铵 2g

制备工艺：按处方量取三七皂苷Fc、羟丙基甲基纤维素、普罗沙姆P188和苯扎溴铵加入到一定量水中，搅拌使其全部润湿，然后取普罗沙姆P407加入到上如溶液中，搅拌使其分散均匀，于4度冰箱放置24h以上，使其充分溶胀后，得到澄清，透明溶液，加水至1000ml，调节pH6-7，即得。

实施例20：三七皂苷Fc涂膜剂

三七皂苷Fc 100g 聚乙烯醇124 200g

羧甲基纤维素钠 50g 山梨酸钾 3g

苯扎溴铵 2g

制备工艺：按处方量取聚乙烯醇124和羧甲基纤维素钠，加适量水，置水浴加热溶解，溶胀过夜，使其充分膨胀，将三七皂苷Fc等量递增法加入基质中，加入山梨酸钾，加乙醇和水至1000ml，分装，即得。

实施例21：三七皂苷Fc气雾剂

三七皂苷Fc 100g 吐温80 4ml

乙醇 50ml

制备工艺：将三七皂苷Fc用乙醇溶解，加吐温80混匀，加水至1000ml，混匀，滤过，滤液灌封于特制瓶中，压入抛射剂，即得。

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。

Claims

1.一种原人参二醇型三七皂苷在制药中的用途。

2.一种三七皂苷Fc在制备血小板聚集抑制剂，或制备凝血抑制剂，或制备治疗、预防血栓性疾病的药物组合物，或制备治疗或预防心肌缺血或心肌梗死的药物组合物，或制备治疗血管闭塞性缺血的药物组合物，或制备治疗血管闭塞性下肢缺血的药物组合物，或制备治疗脉管炎的药物组合物中的应用。

3.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过口服、肌注、静脉、皮肤、呼吸道、舌下、尿道或阴道等途径给药；口服制剂包括片剂、缓释片剂、分散片、口含片、胶囊剂、软胶囊、缓释胶囊、滴丸、颗粒剂、口服液等；肌注或静脉给药制剂包括注射液、冻干粉等；皮肤给药制剂包括软膏剂、凝胶剂、温敏凝胶、涂膜剂等；呼吸道给药制剂包括气雾剂等。

4.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：片剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，润滑剂1-5％；或缓释片剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-50％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或分散片的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-80％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或口含片的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，粘合剂10-50％，矫味剂1-10％，润滑剂1-5％。

5.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：胶囊剂的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，润滑剂1-5％；或缓释胶囊的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％，崩解剂10-50％，粘合剂10-50％，润滑剂1-5％；或软胶囊的组分是三七皂苷Fc0.1-99.9％，精制植物油0.1-99.9％，防腐剂1-5％。

6.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：滴丸的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，聚乙二醇4000或聚乙二醇60000.1-99.9％，水0.1-99.9％；或颗粒剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，填充剂0.1-99.9％；或口服液的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，单糖浆10-80％，防腐剂0.1-1％，水0.1-99.9％。

7.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：注射液的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，注射用氯化钠或葡萄糖适量，注射用水0.1-99.9％；或冻干粉的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，赋型剂0.1-99.9％，pH调节剂适量。

8.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：软膏剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，软膏基质0.1-99.9％，防腐剂0.1-1％；或凝胶剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，凝胶基质0.1-99.9％，防腐剂0.1-1％；或温敏凝胶的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，凝胶基质0.1-99.9％，温度调节剂5-20％，粘合剂0.5-5％，防腐剂0.1-1％，水0.1-99.9％；或涂膜剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，基质30-50％，防腐剂0.1-1％，水30-80％。

9.根据权利要求1-2的三七皂苷Fc的制备药物组合物的应用，其特征在于：气雾剂的组成是三七皂苷Fc0.1-99.9％，增溶剂0.1-1％，水0.1-99.9％，抛射剂适量。